Name: immunophenotyping of orthotopic homograft (syngeneic) of murine primary kpc pancreatic ductal adenocarcinoma by flow cytometry
Uploaded: 2018-10-09T12:30:00
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Gli autori vorrei ringraziare Dr. Jody Barbeau - per la lettura critica e di editing del manoscritto e grazie Ralph Manuel per la progettazione di opere d'arte. Gli autori vorrei anche ringraziare il team corona Bioscience oncologia Immuno-Oncology Biomarker e oncologia In Vivo , per i loro grandi sforzi tecnici.

Tutti i protocolli e integrazioni o procedure che coinvolgono la cura e l'uso di animali saranno riesaminate e approvate dalla corona Bioscience istituzionale animale cura ed uso Committee (IACUC) prima lo svolgimento degli studi. La cura e l'uso degli animali sarà solitamente condotta conformemente alle linee guida internazionali AAALAC (associazione per la valutazione e l'accreditamento di laboratorio Animal Care) come riportato nella Guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio, ricerca nazionale Consiglio (20...

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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+Antibodies+to+Its+Cytoplasmic+Domain+Most+Clearly+Delineate+Cell+Membranes+in+Immunohistochemical+Staining+of+Tumor+Cells.">PD-L1 Antibodies to Its Cytoplasmic Domain Most Clearly Delineate Cell Membranes in Immunohistochemical Staining of Tumor Cells.</a> Cancer Immunol. 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Sebbene più facilmente vengono condotti studi utilizzando i tumori SC, orthotopically impiantati tumori modelli possono essere potenzialmente più rilevanti per gli studi di farmacologia preclinica (in particolare le indagini di I/O) per fornire una maggiore traducibilità. Questo rapporto mira ad aiutare i lettori/pubblico interessato di essere in grado di visualizzare direttamente le procedure tecniche che possono essere utilizzate nelle loro rispettive ricerche. Nostri protocolli dimostrano che orthotopic l'impianto ...

L'adenocarcinoma duttale pancreatico (PDAC) fa sì che quasi la metà un milione mortalità universalmente ogni anno, uno dei top 5 cancro killer. Ci sono poche opzioni terapeutiche efficaci e nessun immunoterapie approvati; di conseguenza, nuovi trattamenti sono disperatamente necessari. I cancri sempre più stanno riconoscendi come malattie immunologiche, tra cui PDAC, oltre le malattie genetiche come la conosciamo oggi. Fattori immunologici e genetici probabilmente sarebbero determinare prognosi della malattia così come il trattamento dei risultati. I tumori eludere la sorveglianza immunitaria ospite e finalmente avanzano per causare la morte. Molti di questi processi immunitari si verificano all'interno del microambiente tumorale (TME)1,2,3,4 dove diversi tipi di cellule immunitarie interagiscono con le cellule del tumore, con l'altro e con altri del tumore componenti stromal, direttamente o indirettamente tramite citochine che determinano l'esito della malattia. Di conseguenza, caratterizzazione dei componenti immunitarie tumore della TME o tumore immunophenotyping, tra cui la definizione di sottotipo, la numerazione e la localizzazione degli stirpi differenti delle cellule immuni, è fondamentale per comprendere l'immunità anti-tumorale. Nel caso di PDAC, è stato proposto che elevati di tumore-infiltrazione di macrofagi soppressivi (TAM) e cellule di B hanno portato alla prevenzione di infiltrazione a cellula T e/o attivazione e alti livelli di fibrosi5,6.
L'approccio comune per indagare sperimentalmente TMEs immuni sarebbe utilizzando modelli animali preclinici di surrogato del tumore, il tumore del mouse principalmente i modelli7, particolarmente del mouse syngeneic (omotrapianto) o modelli murini geneticamente (GEMM) di cancri, sulla presunta somiglianza di mouse e umani per tumori e immunità8,9. È inteso in realtà che ci sono differenze intrinseche tra le due specie10,11.
Tumori trapiantati del topo hanno notevoli vantaggi operativi rispetto tumori spontanei7, vale a dire lo sviluppo del tumore sincronizzata, in contrasto con lo sviluppo di tumore spontaneo GEMM parentale. Gli omotrapianti di tumori murini spontanei sono considerati tumori primari non essendo mai stato manipolato in vitroe tumore del mirroring del mouse originale histo- / molecolare patologia7, nonché possibili profili immuni. Questi omotrapianti murini sono spesso considerati "una versione del mouse degli xenotrapianti paziente-derivati (PDXs)". Hanno quindi probabilmente una migliore traducibilità rispetto convenzionale delle cellule syngeneic del mouse linea-derivato tumori12. In particolare, molti gli omotrapianti sono derivati da GEMM specifici dove meccanismi di malattia umana specifica, ad esempio mutazioni oncogeniche driver, sono progettati e questi omotrapianti dovrebbero quindi avere vantaggi per la loro rilevanza clinica. In particolare, KPC GEMM sviluppano mouse PDAC entro 15-20 settimane di età, che ricapitola morfologicamente malattia umana con prevalentemente bene - a-differenziato moderatamente architettura ghiandolare e altamente arricchito lo stroma. Questo modello inoltre ricapitola le caratteristiche genetiche più comuni del PDAC umana, vale a dire Kras attivazione mutazione e P53 perdita di funzione, che si presentano nel 90% e 75% di umano PDAC, rispettivamente5,6.
Siti di trapianto sono stati suggeriti anche a svolgere un ruolo in traducibilità modello. Ambiente specifico per il tessuto circostante, ad esempio un ambiente di orthotopic corrispondente, potrebbe essere una nicchia per tumori specifici per ambienti di progresso, in contrasto con l'uniforme sottocutanea (SC) per i tumori comunemente trapiantati. Sarebbe di particolare interesse se, e/o, che differenza esiste tra i due siti di trapianto, in termini di immunitario-microambiente e la rilevanza di cancro umano, ad es. nel caso di PDAC.
Uno degli aspetti più importanti di profilazione immuni, o immunophenotyping, consiste nel determinare il tumore-infiltrazione di cellule immuni di stirpi differenti, i numeri, percentuale relativa all'interno dei tumori, così come loro Stati di attivazione e luoghi. Questo include il tumore-infiltratrating lymphoctyes (TILs, sia T - e B-), tumore-infiltrazione macrofagi (TAMs), tumore-infiltrazione di cellule di assassino naturali (NKs) e tumore-residente dendritiche cellule3,13,14 , 15 , 16 , 17e la localizzazione subcellulare di determinate cellule18,19,20, ecc. Fluorescenza attivato Cell Sorting (FACS) o flusso cytometry è una tecnologia di rilevamento a cella singola che è comunemente usata per misurare i parametri specifici di una cella. Multi-colore flusso cytometry misure marcatori multipli in una singola cella3,4,21 ed è il metodo più comunemente utilizzato per determinare i numeri e la percentuale relativa delle diverse sottopopolazioni di cellule immunitarie, compresi quelli all'interno dei tumori.
Questo rapporto descrive le procedure per la profilatura di tumore-infiltrazione di cellule immuni: 1) l'impianto di orthotopic PDAC topo tumore gli omotrapianti, insieme con l'impianto di SC; 2) tumore del tessuto raccolto e preparazione di singola cellula tramite dissociazione del tumore; 3) analisi di citometria a flusso di tutte le cellule derivate da tumori come una linea di base; 4) confronto dei profili di linea di base di entrambi gli approcci di trapianto.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anesthesia machine</td>
			<td>\</td>
			<td>SAS3119</td>
			<td>\</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trocar 20</td>
			<td>\</td>
			<td>\</td>
			<td>2mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>\</td>
			<td>\</td>
			<td>20mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100x antibiotic and antimycotic</td>
			<td>\</td>
			<td>\</td>
			<td>\</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophor swabs</td>
			<td>\</td>
			<td>\</td>
			<td>Daily pharmacy purchase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol swabs</td>
			<td>\</td>
			<td>\</td>
			<td>Daily pharmacy purchase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid nitrogen</td>
			<td>Air chemical</td>
			<td>\</td>
			<td>\</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosafety hood</td>
			<td>AIRTECH</td>
			<td>BSC-1300IIA2</td>
			<td>\</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS machine LSRFortessa X-20</td>
			<td>BD</td>
			<td>LSR Fortessa</td>
			<td>\</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>antibodies</td>
			<td>BD</td>
			<td>\</td>
			<td>\</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trevigen MD or BD Matrigel Basement Membrane Matrix High concentration</td>
			<td>BD</td>
			<td>354248</td>
			<td>\</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS buffers</td>
			<td>BD</td>
			<td>554656</td>
			<td>Mincing buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Staining Buffer</td>
			<td>BD</td>
			<td>563794</td>
			<td>\</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse BD Fc Block</td>
			<td>BD</td>
			<td>553142</td>
			<td>\</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cell filters</td>
			<td>BD-Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td>70&#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>routine blood tube</td>
			<td>BD-Vacutainer</td>
			<td>365974</td>
			<td>2mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kaluza</td>
			<td>Beckman</td>
			<td></td>
			<td>vs 1.5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3516</td>
			<td>\</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foxp3 Fix/Perm kit</td>
			<td>ebioscience</td>
			<td>00-5523-00</td>
			<td>\</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraComp eBeads</td>
			<td>ebioscience</td>
			<td>01-2222-42</td>
			<td>\</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>5810R,5920R</td>
			<td>\</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo software</td>
			<td>FlowJo LLC</td>
			<td>\</td>
			<td>vs 10.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30256.01</td>
			<td>50mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30809.01</td>
			<td>\</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable, sterile scalpels</td>
			<td>Jin zhong</td>
			<td>J12100</td>
			<td>11#</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>knife handle</td>
			<td>Jin zhong</td>
			<td>J11010</td>
			<td>\</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eye scissors and tweezers</td>
			<td>Jin zhong</td>
			<td>Y00030</td>
			<td>Eye scissors 10cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eye scissors and tweezers</td>
			<td>Jin zhong</td>
			<td>JD1060</td>
			<td>Eye tweezers 10cm with teeth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable liquid nitrogen tank</td>
			<td>Jinfeng</td>
			<td>YDS-175-216</td>
			<td>\</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic balance</td>
			<td>Metter Toledo</td>
			<td>AL204</td>
			<td>0-100g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Miltenyi C-tubes</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-096-334</td>
			<td>\</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Miltenyi Gentle MACS with heater blocks</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>120-018-306</td>
			<td>\</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tumor Dissociation Kit</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-096-730</td>
			<td>\</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counter</td>
			<td>Nexcelom</td>
			<td>Cellometer</td>
			<td>Cellometer Auto T4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cryopreservation tube</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>375418</td>
			<td>1.8ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cultrex High Protein Concentration (HC20+) BME</td>
			<td>PathClear</td>
			<td>3442-005-01</td>
			<td>\</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>syringes</td>
			<td>Shanghai MIWA medical industry</td>
			<td>\</td>
			<td>1-5mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Studylog software</td>
			<td>Studylog</td>
			<td>\</td>
			<td>software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Studylog-Balance and supporting USB</td>
			<td>OHAUS</td>
			<td>SE601F</td>
			<td>Balance and supporting USB</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Studylog-Data line of vernier calipers</td>
			<td>Sylvac</td>
			<td>926.6721</td>
			<td>Data line of vernier calipers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caliper</td>
			<td>Sylvac</td>
			<td>910.1502.10</td>
			<td>Sylvac S-Cal pro</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterilized centrifuge tubes</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>339653</td>
			<td>50mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterilized centrifuge tubes</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>339651</td>
			<td>15mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice bucket</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>KLCS-288</td>
			<td>4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice bucket</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>PLF-276</td>
			<td>&#8212;20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice bucket</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>DW-862626</td>
			<td>&#8212;80&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAlater</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>am7021</td>
			<td>\</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

immunophenotyping of orthotopic homograft (syngeneic) of murine primary kpc pancreatic ductal adenocarcinoma by flow cytometry

Omotrapianto (syngeneic) tumori sono il cavallo di battaglia di ricerca preclinica di immuno-Oncologia (i/o) di oggi. Il microambiente tumorale (TME), in particolare sua immunitario-componenti, è di vitale importanza per la prognosi e la previsione di risultati di trattamento, specialmente quelli di immunoterapia. TME immunitario-componenti sono composte di diverse sottopopolazioni di cellule immunitarie tumore-infiltrazione valutabile da FACS multi-colore. L'adenocarcinoma duttale pancreatico (PDAC) è tra i più letali malignances mancano opzioni di buon trattamento, così un'esigenza medica urgente e insoddisfatta. Una ragione importante per la sua non-risposta alle varie terapie (chemio-, mirati, I/O) è stata la sua abbondante TME, composto da fibroblasti e leucociti che proteggono le cellule del tumore da queste terapie. Orthotopically PDAC impiantato è creduto per più accuratamente riconquistare la TME di cancri del pancreas umani rispetto ai modelli convenzionali sottocutanei (SC).
Tumori dell'omotrapianto (KPC) sono trapianti di mouse spontanea PDAC originari da KPC-topi geneticamente ingegnerizzati (ras diKG12D / +/P53- / -/Pdx1-Cre) (KPC-GEMM). Il tessuto del tumore primario è tagliato in piccoli frammenti (~ 2 mm3) e trapiantato per via sottocutanea (SC) ai destinatari syngeneic (C57BL/6, 7 – 9 settimane di età). Gli omotrapianti erano quindi chirurgicamente orthotopically trapiantato sul pancreas dei topi C57BL/6 nuovi, insieme a SC-impianto, che ha raggiunto volumi del tumore di 300 – 1.000 mm3 da 17 giorni. Solo i tumori di 400 – 600 mm3 sono state raccolte per la procedura di analisi approvati e puliti per rimuovere i tessuti non tumorali adiacenti. Essi fossero dissociati per protocollo utilizzando un dissociatore di tessuto in sospensioni unicellulari, seguite dalla macchiatura con pannelli designati di anticorpi fluorescente-etichetta per i vari indicatori di diverse cellule immunitarie (linfoidi, mieloidi e NK, DCs). I macchiato campioni sono stati analizzati utilizzando multi-colore FACS per determinare i numeri delle cellule immuni di stirpi differenti, come pure la loro percentuale relativa all'interno dei tumori. I profili immuni di orthotopic tumori poi sono stati confrontati a quelli dei tumori SC. I dati preliminari hanno dimostrato significativamente elevata infiltrazione TILs/TAMs nei tumori sopra pancreas e infiltrazione della B-cellula superiore orthotopic piuttosto che i tumori SC.

Impianto di orthotopic del PDAC ha provocato sviluppo veloce del tumore simile a quello visto per l'impianto di SC. Dopo i frammenti di tumore donatore sono stati impiantati in topi destinatari, sia per via sottocutanea e orthotopically secondo i protocolli descritto ai punti 2.1 e 2.2, i tumori di omotrapianto KPC impiantati dimostrato a rapida crescita come mostrato in figura 1A . Tumori dell'omotrapianto KPC raccolti in diversi momenti sono mostrati in <st...

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Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

La procedura sperimentale su immunophenotyping di omotrapianti PDAC murino ortotopico mira a profilatura immuno-microambiente tumorale. I tumori sono orthotopically impiantato tramite intervento chirurgico. Tumori di 200 – 600 mm3 dimensioni sono state raccolte e dissociati per preparare sospensioni unicellulari, seguite da analisi dell'indicatore multi-immuni FACS usando diversi anticorpi fluorescente etichettati.

Immunophenotyping di Orthotopic omotrapianto (Syngeneic) dell'Adenocarcinoma Ductal pancreatico murino primario KPC tramite flusso Cytometry

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Questo messaggio può aiutare a rispondere alle domande chiave nell'immunofenotipizzazione nei modelli Murine, come i marcatori utilizzati per identificare diversi lignaggi di immunità e strategie di invecchiamento. Il principale vantaggio di questa tecnica è che il marcatore e le stategie di invecchiamento, durante l'immunofenotipizzazione, possono essere applicati a una varietà di modelli murini. Monitorare il peso corporeo dei topi C57 Black 6 utilizzando un equilibrio.Inoltre, monitorare il volume tumorale del tumore variando i topi donatori per misura del calibro. Dopo l'eutanasia dell'animale in un cappuccio a rischio biologico secondo il protocollo, sterilizzare la pelle intorno al tumore usando tamponi Iodophor. Dopo aver rimosso chirurgicamente il tumore come descritto nel protocollo di testo, posizionare il tumore in una piastra di Petri contenente 20 millilitri di PBS che è stato pre-refrigerato a 4 gradi Celsius.Se c'è sangue contaminante, trasferire il tumore in un'altra piastra di Petri e lavare il tumore con PBS. Taglia il tumore a metà. Rimuovere la pelle, i vasi, la calcificazione e la necrosi extra.Scegli solo pezzi intatti di tumore e mettili in un tubo di centrifuga sterile da 50 millilitri. Aggiungere 20 millilitri di PBS prima di trasportare il tubo in una stanza separata per gli studi farmacologici. Per prepararsi all'impianto ortotopico, fissare un mouse completamente anestetizzato su una scheda di esperimento nella giusta posizione laterale.Disinfettare la pelle intorno alla milza con idodina e poi de-iodinato con alcool etilico al 75%. Trova il punto mediano della milza e fai un'incisione verticale di 1 centimetro sull'addome per esporre la milza. Delicatamente, estraggono parte del tessuto del pancreas sotto la milza usando una pinzetta a punta piatta.E il tumore dell'omoinnesto del topo sutro dal topo C al pancreas del topo ricevente per sutura chirurgica bsorbibile 9-O. Chiudi l'addome con una sutura di seta 6-O con doppia cucitura. Ottenere l'omeostasi per compressione.Dopo aver terminato l'impianto tumorale, tenere l'animale in una gabbia calda finché non si verifica sanguinamento o perdite di tessuto tumorale. Monitorare l'animale fino a quando non riacquistano sufficiente coscienza per mantenere la rimo clemenza sternale. Riportare l'animale nella stanza degli animali dopo il pieno recupero dall'anestesia.Monitorare il tumore variando i topi palpando l'addome vicino alla milza e selezionare i topi che portano tumori ortotopici. Per ogni tumore, preparare un tubo C con tampone di digestione tumorale. Utilizzare 3 millilitri di tampone di digestione per frammenti tumorali inferiori a 0,8 grammi per garantire che il tumore sia completamente digerito.Etichettare il tumore con il codice di studio, il tumore, l'ID mouse, il gruppo di trattamento e il peso del tumore. Raccogli il tumore dal topo. Lavare il tumore in PBS freddo e pulire il tessuto attaccato al tumore.Posizionare il tumore nei mezzi di digestione in un pozzo di una piastra sterile a 6 po '. Tenere il tumore in posizione con pinzette sterili o pinze e affettare con un bisturi. Affettare il tumore abbastanza bene da rompersi in pezzi più piccoli.Ora, riposizionare i pezzi tumorali nel tubo C e utilizzare il tampone di digestione rimanente per lavare la piastra. Trasferire il fluido nel tubo C e posizionare sul ghiaccio fino alla digestione. Quindi accendere il dissociatore con riscaldatori.Posizionare il tubo C di dissociazione tumorale capovolto nella manica della posizione vacante. Regola lo stato della posizione del tubo da Libero a Selezionato. Scegliere un programma di dissociazione seguito dalla selezione della cartella richiesta in cui viene visualizzato l'elenco dei programmi.Dopo la chiusura del programma, togliere il tubo C dal dissociatore e girare brevemente per pallettizzazione del campione. Ora, sospendete i campioni e metteteli in un colino cellulare sopra un tubo da 50 millilitri. Lavare la cella attraverso il filtro cellulare con 10 millilitri di tampone di lavaggio per fornire una sospensione a cella singola.Dopo aver centrifugato il tubo a 300 G per 5 minuti, scartare il supernatante e sospendere di nuovo le celle con 5 millilitri di tampone di lavaggio. Contare le cellule vitali e regolare la concentrazione cellulare a 1 milione di cellule per tubo o per campione. Eseguire il design del pannello immunitario, l'immunostaining e la fluorescenza meno un controllo come dettaglio nel protocollo di testo.Preparare le perline UltraComp mentre gli strumenti di flusso si stanno riscaldando in vortice prima dell'uso. Etichettare un tubo campione separato di 12 x 75 millimetri per ogni anticorpo coniugato fluorocromi. Aggiungere 100 microliter di tampone di colorazione a ciascun tubo seguito da una goccia completa delle perline.Aggiungere anticorpi ed eseguire la procedura di colorazione come descritto nel protocollo di testo. Quindi aggiungere 0,5 millilitri di tampone di colorazione a ogni pellet di perline e sospendere completamente tramite vortice. Ora, impostare la tensione PMT della citometria di flusso per tessuto bersaglio per l'esperimento dato.Eseguire il campione attraverso il campione attraverso la citometria Flow per l'acquisizione dei dati guadagnando sulla popolazione di perline singoletta per dispersione in avanti e letture a dispersione laterale. Impostare la portata da 200 a 300 eventi al secondo. Impostare la compensazione appropriata per un determinato anticorpo di coniugazione FITC fluoresceina utilizzando un grafico a punti FL1 contro FL1.Posizionare un cancello del quadrante in modo che le perline negative si trovano all'interno del quadrante in basso a sinistra e le perline positive si trovano all'interno del quadrante superiore o inferiore destro. Regolare i valori di compensazione fino a quando l'intensità mediana della fluoresceina di ogni popolazione è approssimativamente uguale. Ripetere questi passaggi per tutti i tubi.Ora, procedi all'acquisizione di campioni di macchie reali. Eseguire la Creazione guidata retribuzione e salvare l'impostazione con il formato:data, esperimento e le iniziali. L'impianto ortotopico dell'adenocarcinoma duttale pancreatico ha portato a una rapida crescita tumorale simile a quella osservata nell'impianto sottocutaneo.Vengono mostrate immagini rappresentative di colorazione di ematossilina ed eosina e dimostrano una crescita simile di impianti sottocutanei e ortotopici. Le rese delle cellule vitali ragionevolmente elevate sono state ottenite dal campione tumorale di entrambi i tipi di impianto. La piattaforma rappresentante FACS mostra cellule vitali dal tumore separate dalle cellule morte e dai detriti cellulari.Mostrato qui, è un tumore che si infiltra in un confronto del profilo immunitario della popolazione cellulare maggiore e numeratore di diversi sottoinsiemi chiave delle cellule immunitarie tumorali. Vengono mostrati omologhi sottocutanei contro ortotopici del cancro al pancreas. I dati mostrano chiaramente che il tumore ha aumentato significativamente l'infiltrazione delle cellule immunitarie rispetto al pancreas di topi sani.Inoltre, diverse percentuali di sottogrumi di cellule immunitarie infiltrate nel tumore sono state trovate negli omoinnesti ortotopici rispetto a quelli sottocutanei. Ad esempio, ci sono molto più cellule B in ortotopico che sottocutanee. Durante il tentativo di questa procedura è importante ricordare di preparare in anticipo tutti i materiali e i reagenti associati.Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come eseguire l'analisi FACS per i modelli murini.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Fluorescente ortotopico modello murino di cancro al pancreas

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Ricerca

Ricerca sul cancro

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

Un modello murino di fatica indotta da irradiazione Peripheral

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

Un modello murino di cancro del pancreas Syngeneic per studiare gli effetti dell'elettroporazione irreversibile

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

Un modello murino Syngeneic Orthotopic bioluminescenti e fluorescente di carcinoma della prostata androgeno-dipendente e castrazione-resistente

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

Trapianto orthotopic delle cellule dell'Adenocarcinoma del polmone Syngeneic studiare espressione PD-L1

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

Mimicking and Manipulating Pancreatic Acinar-to-Ductal Metaplasia in 3-dimensional Cell Culture

Che imita e manipolare Metaplasia acinoso--Ductal pancreatico nella coltura cellulare 3-dimensionale

The differentiation of acinar cells to ductal cells during pancreatitis and in the early development of pancreatic cancer is a key process that requires ...

Isolation and Characterization of Patient-derived Pancreatic Ductal Adenocarcinoma Organoid Models

Isolamento e caratterizzazione dei modelli organoidi dell'adenocarcinoma duttale pancreatico derivato dal paziente

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is amongst the most lethal malignancies. Recently, next-generation organoid culture methods enabling the ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

Impianto ortotopico a ultrasuoni dell'adenocarcinoma dugalese Murine

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

Isolation of Proximal Fluids to Investigate the Tumor Microenvironment of Pancreatic Adenocarcinoma

Isolamento di fluidi prossimali per studiare il microambiente tumorale dell'adenocarcinoma pancreatico

Pancreatic adenocarcinoma (PDAC) is the fourth leading cause of cancer-related death, and soon to become the second. There is an urgent need of variables ...

An Orthotopic Resectional Mouse Model of Pancreatic Cancer

Un modello ortotopico di topo resezionale del cancro al pancreas

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer ...