Name: protein digestion, ultrafiltration, and size exclusion chromatography to optimize the isolation of exosomes from human blood plasma and serum
Uploaded: 2018-04-13T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Protein Digestion, Ultrafiltration, and Size Exclusion Chromatography to Optimize the Isolation of Exosomes from Human Blood Plasma and Serum at JoVE.com

इस शोध को CSU (to KMD), ATCC कॉन्ट्रैक्ट #2016-0550-0002 (NIAID HHSN272201600013C का एक उपठेका), और बिल एण्ड मेलिंडा गेट्स फाउंडेशन (OPP1039688) (KMD/NKG) से आंतरिक निधियों द्वारा समर्थित किया गया । हम अतिरिक्त सहायता के लिए कोलोराडो राज्य विश्वविद्यालय में स्नातक (रीउ) ग्रीष्मकालीन कार्यक्रम के लिए NSF अनुसंधान अनुभव का शुक्र है ।

यह काम कोलोराडो राज्य विश्वविद्यालय के संस्थागत समीक्षा बोर्ड (आईआरबी) से प्रारंभिक समीक्षा पर मानव विषय अनुसंधान नहीं होना निर्धारित किया गया था, के रूप में सभी मानव नमूनों Bioreclamation IVT से de-पहचान के नमूनो?...

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	<li>Stoorvogel, W., Kleijmeer, M. J., Geuze, H. J., Raposo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biogenesis+and+functions+of+exosomes.">The biogenesis and functions of exosomes.</a> Traffic. 3 (5), 321-330 (2002).</li><li>Raposo, G., Stoorvogel, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles:+exosomes,+microvesicles,+and+friends.">Extracellular vesicles: exosomes, microvesicles, and friends.</a> J Cell Biol. 200 (4), 373-383 (2013).</li><li>Schorey, J. S., Harding, C. 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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+exosome+isolation+protocol+for+cell+culture+supernatant+and+human+plasma.">Optimized exosome isolation protocol for cell culture supernatant and human plasma.</a> J Extracell Vesicles. 4, 27031 (2015).</li><li>Vergauwen, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confounding+factors+of+ultrafiltration+and+protein+analysis+in+extracellular+vesicle+research.">Confounding factors of ultrafiltration and protein analysis in extracellular vesicle research.</a> Scientific Reports. 7 (1), 2704 (2017).</li><li>Welton, J. L., Webber, J. P., Botos, L. A., Jones, M., Clayton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ready-made+chromatography+columns+for+extracellular+vesicle+isolation+from+plasma.">Ready-made chromatography columns for extracellular vesicle isolation from plasma.</a> J Extracell Vesicles. 4, 27269 (2015).</li><li>S&#243;dar, B. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-density+lipoprotein+mimics+blood+plasma-derived+exosomes+and+microvesicles+during+isolation+and+detection.">Low-density lipoprotein mimics blood plasma-derived exosomes and microvesicles during isolation and detection.</a> Sci Rep. 6, 24316 (2016).</li><li>de Menezes-Neto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size-exclusion+chromatography+as+a+stand-alone+methodology+identifies+novel+markers+in+mass+spectrometry+analyses+of+plasma-derived+vesicles+from+healthy+individuals.">Size-exclusion chromatography as a stand-alone methodology identifies novel markers in mass spectrometry analyses of plasma-derived vesicles from healthy individuals.</a> J Extracell Vesicles. 4, 27378 (2015).</li><li>Corso, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproducible+and+scalable+purification+of+extracellular+vesicles+using+combined+bind-elute+and+size+exclusion+chromatography.">Reproducible and scalable purification of extracellular vesicles using combined bind-elute and size exclusion chromatography.</a> Scientific Reports. 7 (1), 11561 (2017).</li><li>Diaz, G., Wolfe, L. M., Kruh-Garcia, N. A., Dobos, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+Membrane-Associated+Proteins+of+Exosomes+Released+from+Human+Macrophages+after+Mycobacterium+tuberculosis+Infection.">Changes in the Membrane-Associated Proteins of Exosomes Released from Human Macrophages after Mycobacterium tuberculosis Infection.</a> Sci Rep. 6, 37975 (2016).</li><li>Yuana, Y., Levels, J., Grootemaat, A., Sturk, A., Nieuwland, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-isolation+of+extracellular+vesicles+and+high-density+lipoproteins+using+density+gradient+ultracentrifugation.">Co-isolation of extracellular vesicles and high-density lipoproteins using density gradient ultracentrifugation.</a> J Extracell Vesicles. 3, (2014).</li><li>Th&#233;ry, C., Amigorena, S., Raposo, G., Clayton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+exosomes+from+cell+culture+supernatants+and+biological+fluids.">Isolation and characterization of exosomes from cell culture supernatants and biological fluids.</a> Curr Protoc Cell Biol. , (2006).</li><li>Muller, L., Hong, C. S., Stolz, D. B., Watkins, S. C., Whiteside, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+biologically-active+exosomes+from+human+plasma.">Isolation of biologically-active exosomes from human plasma.</a> J Immunol Methods. 411, 55-65 (2014).</li><li>B&#246;ing, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-step+isolation+of+extracellular+vesicles+by+size-exclusion+chromatography.">Single-step isolation of extracellular vesicles by size-exclusion chromatography.</a> J Extracell Vesicles. 3, (2014).</li><li>Sweeney, P. J., Walker, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteinase+K+(EC+3.4.21.14).">Proteinase K (EC 3.4.21.14).</a> Methods Mol Biol. 16, 305-311 (1993).</li><li>Baranyai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Exosomes+from+Blood+Plasma:+Qualitative+and+Quantitative+Comparison+of+Ultracentrifugation+and+Size+Exclusion+Chromatography+Methods.">Isolation of Exosomes from Blood Plasma: Qualitative and Quantitative Comparison of Ultracentrifugation and Size Exclusion Chromatography Methods.</a> PLoS One. 10 (12), e0145686 (2015).</li></ol>

एक अनुकूलित विधि को शुद्धता और रक्त से exosomes की उपज बढ़ाने के लिए कई रोगों के लिए एक स्रोत के रूप में सही extracellular बुलबुले की क्षमता में वृद्धि होगी । मानक वर्तमान में exosomes को अलग करने के लिए इस्तेमाल किया तरीको?...

Exosomes है nanovesicles (आकार में 30 एनएम से १५० एनएम के लिए) में लगभग सभी कोशिकाओं द्वारा जारी मानव शरीर में सेल की सुविधा के लिए सेल संचार प्रक्रियाओं1,2। दिलचस्प है, exosomes परिवर्तन की संरचना के रूप में अच्छी तरह के रूप में व्यक्तिगत3,4,5के स्वास्थ्य की स्थिति के रूप में मूल की कोशिकाओं पर निर्भर करता है । इसके अतिरिक्त, exosomes जैसे कई जैविक तरल पदार्थ से प्राप्त किया जा सकता है: लार, मूत्र, और रक्त2। इन सुविधाओं के कारण exosomes को रोग प्रतिरोधकों का अच्छा स्रोत माना जाता है । दुर्भाग्य से, वहां exosomes के अलगाव के लिए कोई मानक विधि है । कुछ प्रयोगशालाओं multistep केंद्रापसारक पर विचार, एक अंतिम उच्च गति १००,००० x g पर कदम exosome अलगाव के लिए सोने के मानक विधि के रूप में घनत्व ढाल का उपयोग कर के साथ । हालांकि, हाल के अध्ययनों से पता चला है कि ultracentrifugation घुलनशील प्रोटीन और अंय exosomes के साथ exosomes के एकत्रीकरण लाती है, exosome अखंडता को प्रभावित करने के अलावा, जो दोनों के बहाव अनुप्रयोगों में बाधा हो सकती है6,7 . exosome अलगाव के अन्य आम तरीकों में शामिल हैं, लेकिन करने के लिए सीमित नहीं हैं: वाणिज्यिक पॉलीथीन ग्लाइकोल (खूंटी) आधारित रिएजेंट, केंद्रापसारक ultrafiltration, और आकार अपवर्जन क्रोमैटोग्राफी (एसईसी) द्वारा वर्षा । सुरक्षात्मक ग्लाइकोल (खूंटी) पॉलिमर का उपयोग कर उन्हें हाला और एक गोली के रूप में पैदा करके exosomes को समृद्ध । सीमाएं इस बहुलक का उपयोग अवशिष्ट खूंटी बहुलक और अंतिम उत्पाद में घुलनशील गैर exosomal प्रोटीन की एक बहुतायत के साथ संदूषण हैं । Ultrafiltration एक फाइबर झिल्ली का उपयोग कर बुलबुले को शुद्ध और ध्यान केंद्रित करने के लिए उपयोग करता है; exosomes फिल्टर के ऊपर बने हुए हैं, जबकि छोटे अशुद्धियों और अन्य प्रोटीन झिल्ली7,8के माध्यम से गुजरती हैं । बस अन्य तरीकों की तरह, केंद्रापसारक ultrafiltration प्रोटीन परिसरों और समुच्चय सहित गैर exosomal प्रोटीन के उच्च स्तर की अवधारण के कारण exosomes को शुद्ध करने के लिए एक सीमित क्षमता है । अंत में, एसईसी शुद्धि के आकार से अणुओं को अलग करने के लिए असुरक्षित राल का उपयोग करता है । एसईसी आशाजनक परिणाम दिखाया गया है, contaminant प्रोटीन और exosomal अखंडता के संरक्षण के बहुमत पर कब्जा करके अंय तरीकों के साथ अनुभवी समस्याओं के सबसे काबू पाने, अलगाव के बाद से गुरुत्वाकर्षण या कम दबाव प्रणालियों पर आधारित है7, 9. हालांकि, एसईसी के दौरान बड़ा प्रोटीन समुच्चय और लिपो10 के सह अलगाव अंतिम exosome तैयारी की पवित्रता को प्रभावित करता है । जबकि कुछ तरीकों सेल संस्कृति supernatants और प्लाज्मा7, या केवल प्लाज्मा9,11से exosome शोधन के लिए परीक्षण किया गया है, वहां तरीकों के प्रदर्शन के बारे में कोई जानकारी नहीं है सीधे रक्त की तुलना एक ही व्यक्ति से प्लाज्मा और सीरम ।
यहाँ, हम पुटिका संवर्धन तकनीक प्लाज्मा और सीरम के बीच अनुवाद कर रहे हैं, तो यह निर्धारित करने के लिए कार्यप्रवाह की एक किस्म की तुलना करके रक्त exosomes की शुद्धि पर ध्यान केंद्रित. Nanoparticle ट्रैकिंग विश्लेषण और पश्चिमी दाग exosome एकाग्रता, पवित्रता, और अंत उत्पादों में प्रोटीन संरचना में मतभेदों को यों तो इस्तेमाल किया गया । अंतिम विधि, इस प्रोटोकॉल में विस्तृत, पुटिका संख्या बढ़ जाती है और गैर exosomal प्रोटीन के स्तर को कम कर देता है । महत्वपूर्ण रूप से, एल्ब्युमिन और apolipoproteins सहित आम सह-हाला प्रोटीन की एक भारी कमी का प्रदर्शन किया है । रक्त में इन दो प्रोटीन और आवृत्ति जिस पर वे सह exosomes के साथ शुद्ध "शुद्ध" नमूनों के बीच विसंगतियों का कारण बनता है, बहाव का विश्लेषण विषम के उच्च बहुतायत । इस प्रोटोकॉल एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध एसईसी राल का उपयोग भी शामिल है; राल छिद्रित मोतियों से बना है जिसमें प्रोटीन से छोटे ७०० केडीए मोतियों में प्रवेश कर सकता है. एक बार अंदर, प्रोटीन एक octylamine ligand द्वारा बनाए रखे हैं । eluate exosomes और ७०० केडीए12से बड़ा अणुओं से बना है. इसके अतिरिक्त, आदेश में प्रोटीन समुच्चय और apolipoproteins जो मनका फंसाने से बचने को कम करने के लिए, हम कार्यप्रवाह में एक तंग पाचन कदम शामिल हैं । वर्तमान में, वहां कोई भी exosome उपज को अधिकतम करने में सक्षम तकनीक है, जबकि सह शुद्ध गैर exosomal प्रोटीन । इस अध्ययन से पता चलता है कि एक शुद्धि प्रोटोकॉल है कि एकाधिक वसूली और शोधन विधियों के साथ एक तंग पाचन उपचार को जोड़ती है exosome उपज और रक्त सीरम और प्लाज्मा से शुद्धता बढ़ाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="676">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Nanosight</td>
			<td style="width:149px;">Malvern</td>
			<td style="width:123px;">NS300</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Benchtop microcentrifuge&#160;</td>
			<td style="width:149px;">Thermo</td>
			<td style="width:123px;">Legend Mico21</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Benchtop centrifuge&#160;</td>
			<td style="width:149px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:123px;">Allegra 6R</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Waterbath&#160;</td>
			<td style="width:149px;">Benchmark</td>
			<td style="width:123px;">B2000-4</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Microplate reader</td>
			<td style="width:149px;">BIOTEK</td>
			<td style="width:123px;">Epoch</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Pierce BCA Protein Assay Kit</td>
			<td style="width:149px;">THERMO</td>
			<td style="width:123px;">23227</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Micro BCA Protein Assay Kit</td>
			<td style="width:149px;">THERMO</td>
			<td style="width:123px;">23235</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:149px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">21-040-CV</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">96 well plate</td>
			<td style="width:149px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">15705-066</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:281px;">Amicon Ultra-0.5 Centrifugal Filter Unit with Ultracel-100 membrane</td>
			<td style="width:149px;">EMD-Millipore</td>
			<td style="width:123px;">UFC510096</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Amicon Ultra-4 Centrifugal Filter Units</td>
			<td style="width:149px;">EMD-Millipore</td>
			<td style="width:123px;">UFC800324</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Capto Core 700</td>
			<td style="width:149px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:123px;">17548103</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Poly-Prep&#160;Chromatography Columns</td>
			<td style="width:149px;">BIORAD</td>
			<td style="width:123px;">7311550</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">NuPAGE 4-12% Bis-Tris Protein Gels</td>
			<td style="width:149px;">THERMO</td>
			<td style="width:123px;">NP0323BOX</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Nitrocellulose Membrane, Roll, 0.2 &#181;m</td>
			<td style="width:149px;">BIORAD</td>
			<td style="width:123px;">1620112</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Proteinase K,&#160;Tritirachium album</td>
			<td style="width:149px;">EMD-Millipore</td>
			<td style="width:123px;">539480</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">SimplyBlue SafeStain</td>
			<td style="width:149px;">THERMO</td>
			<td style="width:123px;">LC6065</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">SIGMAFAST&#160;BCIP/NBT</td>
			<td style="width:149px;">Millipore-SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">B5655</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">4-Chloro-1-naphthol</td>
			<td style="width:149px;">Millipore-SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">C6788</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:281px;">Anti-CD63 Antibody (rabbit anti-human) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody</td>
			<td style="width:149px;">SYSTEM BIOSCIENCES</td>
			<td style="width:123px;">EXOAB-CD63A-1</td>
			<td style="width:124px;">Primary and secondary antibodies</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:281px;">ALB Antibody (F-10)</td>
			<td style="width:149px;">SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY, INC.</td>
			<td style="width:123px;">sc-271605</td>
			<td style="width:124px;">Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:281px;">apoB Antibody (C1.4)</td>
			<td style="width:149px;">SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY, INC.</td>
			<td style="width:123px;">sc-13538</td>
			<td style="width:124px;">Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:42px;width:281px;">apoA-I Antibody (B-10)</td>
			<td style="width:149px;">SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY, INC.</td>
			<td style="width:123px;">sc-376818</td>
			<td style="width:124px;">Primary antibody</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protein digestion, ultrafiltration, and size exclusion chromatography to optimize the isolation of exosomes from human blood plasma and serum

Exosomes, सभी प्रकार के सेल से जारी nanovesicle का एक प्रकार, किसी भी शारीरिक तरल पदार्थ से अलग किया जा सकता है । exosomes की सामग्री, प्रोटीन और RNAs सहित, कोशिकाओं है जिसमें से वे प्राप्त कर रहे है और रोग के संकेतकों के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है के लिए अद्वितीय हैं । कई आम संवर्धन प्रोटोकॉल, ultracentrifugation सहित, घुलनशील प्रोटीन संदूषण के साथ लादेन exosomes उपज । विशेष रूप से, हमने पाया है कि रक्त के भीतर सबसे प्रचुर मात्रा में प्रोटीन अक्सर सह exosomes के साथ शुद्ध और बहाव proteomic अध्ययन पाया, कम बहुतायत के अगोचर उंमीदवारों की पहचान को विफल कर सकते हैं । अतिरिक्त चिंता का irreproducibility exosome प्रोटीन ठहराव के गैर-exosomal प्रोटीन के स्तर के असंगत प्रतिनिधित्व के कारण है । यहां विस्तृत प्रोटोकॉल को हटाने के लिए गैर exosomal प्रोटीन है कि सह exosomes के साथ शुद्ध, exosome शोधन प्रक्रिया के लिए कठोरता जोड़ने विकसित किया गया था । पांच तरीकों से पांच दाताओं से जोड़ा रक्त प्लाज्मा और सीरम का उपयोग कर की तुलना में थे । विश्लेषण nanoparticle ट्रैकिंग विश्लेषण और सूक्ष्म bicinchoninic एसिड प्रोटीन परख का उपयोग कर पता चला कि एक संयुक्त ultrafiltration और आकार अपवर्जन क्रोमैटोग्राफी उपयोग प्रोटोकॉल इष्टतम पुटिका संवर्धन और घुलनशील प्रोटीन हटाने झुकेंगे । पश्चिमी सोख्ता सत्यापित करने के लिए इस्तेमाल किया गया था कि एल्ब्युमिन और apolipoproteins सहित अपेक्षित प्रचुर मात्रा में रक्त प्रोटीन, समाप्त कर रहे थे ।

नीचे प्रस्तुत डेटा पांच स्वस्थ रक्त दाताओं से युग्मित प्लाज्मा और सीरम नमूने का उपयोग कर प्राप्त किया गया । प्रत्येक प्रसंस्करण कदम के प्रभाव का निर्धारण करने के लिए, प्रस्तुत प्रोटोकॉल ?...

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Protein Digestion, Ultrafiltration, and Size Exclusion Chromatography to Optimize the Isolation of Exosomes from Human Blood Plasma and Serum

यहां, हम दोनों प्लाज्मा और सीरम कम सह के साथ exosomes शुद्ध करने के लिए एक प्रोटोकॉल मौजूद गैर exosomal रक्त प्रोटीन की शुद्धि । अनुकूलित प्रोटोकॉल ultrafiltration, चिढ़ा उपचार, और आकार अपवर्जन क्रोमैटोग्राफी भी शामिल है । exosomes लाभों का बढ़ाया शुद्धिकरण बुलबुले और proteomic लक्षण वर्णन के अधिक सटीक ठहराव सहित अनुप्रवाह विश्लेषण, ।

प्रोटीन पाचन, Ultrafiltration, और आकार अपवर्जन क्रोमैटोग्राफी मानव रक्त प्लाज्मा और सीरम से Exosomes के अलगाव का अनुकूलन करने के लिए

Exosomes, a type of nanovesicle released from all cell types, can be isolated from any bodily fluid. The contents of exosomes, including proteins and ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Online Size-exclusion and Ion-exchange Chromatography on a SAXS Beamline

ऑनलाइन आकार अपवर्जन और एक SAXS Beamline पर आयन एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी

Biological small angle X-ray scattering (BioSAXS) is a powerful technique in molecular and structural biology used to determine solution structure, ...

Human Peripheral Blood Neutrophil Isolation for Interrogating the Parkinson's Associated LRRK2 Kinase Pathway by Assessing Rab10 Phosphorylation

रै10 फॉस्फोरिलेशन का आकलन करके पार्किंसंस के एसोसिएटेड LRRK2 Kinase पाथवे से पूछताछ के लिए मानव परिधीय रक्त न्यूट्रोफिल अलगाव

The leucine rich repeat kinase 2 (LRRK2) is the most frequently mutated gene in hereditary Parkinson&#8217; disease (PD) and all pathogenic LRRK2 ...

Ion Exchange Chromatography (IEX) Coupled to Multi-angle Light Scattering (MALS) for Protein Separation and Characterization

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आयन एक्सचेंज क्रोटोग्राफी (आईईईईएक्स) में प्रोटीन पृथक्करण और विशेषीकरण के लिए मल्टी-एंगल लाइट कैटरिंग (मलों) को युग्मित

Ion-exchange chromatography with multi-angle light scattering (IEX-MALS) is a powerful method for protein separation and characterization. The combination ...

Characterization of Proteins by Size-Exclusion Chromatography Coupled to Multi-Angle Light Scattering (SEC-MALS)

Characterization of Proteins by Size-Exclusion Chromatography Coupled to Multi-Angle Light Scattering SEC-MALS

आकार-निष्कर्ष क्रोमैटोग्राफी द्वारा प्रोटीन की विशेषता मल्टी-एंगल लाइट स्कैटरिंग (एसईसी-मेल्स) के लिए जोड़ा गया

Analytical size-exclusion chromatography (SEC), commonly used for the determination of the molecular weight of proteins and protein-protein complexes in ...

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

वीवो में एंडोथेलियल सेल से आरएनए अलगाव के लिए रिबोसोम एफ़िनिटी शुद्धि (टीआरईआरई) का अनुवाद

Many studies have been limited to using in vitro cellular assays and whole tissues or isolating of specific cell types from animals for in vitro analysis ...

Evaluation of Protein&#8211;Protein Interactions using an On-Membrane Digestion Technique

Evaluation of ProteinÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬Å“Protein Interactions using an On-Membrane Digestion Technique

एक पर झिल्ली पाचन तकनीक का उपयोग कर प्रोटीन-प्रोटीन इंटरेक्शन का मूल्यांकन

Numerous intracellular proteins physically interact in accordance with their intracellular and extracellular circumstances. Indeed, cellular functions ...

Paper-Based Preconcentration and Isolation of Microvesicles and Exosomes

पेपर-आधारित प्रीकंसेंट्रेशन और माइक्रोवेसिकल्स और एक्सोसोम्स का अलगाव

Microvesicles and exosomes are small membranous vesicles released to the extracellular environment and circulated throughout the body. Because they ...

Analysis and Specification of Starch Granule Size Distributions

स्टार्च ग्रेन्यूल आकार वितरण का विश्लेषण और विशिष्टता

Starch from all plant sources are made up of granules in a range of sizes and shapes having different occurrence frequencies, i.e., exhibiting a size and ...

Isolation and Analysis of Plasma Lipoproteins by Ultracentrifugation

अल्ट्रासेंट्रफ्यूगेशन द्वारा प्लाज्मा लिपोप्रोटीन का अलगाव और विश्लेषण

Analysis of plasma lipoproteins and apolipoproteins is an essential part for the diagnosis of dyslipidemia and studies of lipid metabolism and ...

Rapid Assessment of Membrane Protein Quality by Fluorescent Size Exclusion Chromatography

फ्लोरोसेंट आकार बहिष्करण क्रोमैटोग्राफी द्वारा झिल्ली प्रोटीन गुणवत्ता का तेजी से मूल्यांकन

During membrane protein structural elucidation and biophysical characterization, it is common to trial numerous protein constructs containing different ...