Name: protein digestion, ultrafiltration, and size exclusion chromatography to optimize the isolation of exosomes from human blood plasma and serum
Uploaded: 2018-04-13T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Protein Digestion, Ultrafiltration, and Size Exclusion Chromatography to Optimize the Isolation of Exosomes from Human Blood Plasma and Serum at JoVE.com

Это исследование было поддержано внутренних средств от CSU (чтобы КМД), ATCC контракт #2016-0550-0002 (субподряда NIAID HHSN272201600013C) и Фонд Билла и Мелинды Гейтс (OPP1039688) (КМД/НКГ). Мы благодарим NSF исследовательский опыт для студентов (REU) летняя программа в университете штата Колорадо для дополнительной поддержки.

Эта работа преисполнено решимости не быть человеческого субъекта исследования по итогам первоначального рассмотрения из университета штата Колорадо институционального обзора (КИБ), как все человеческие образцы были получены как обезличенных образцов от Bioreclamation IVT biorepository и были собр...

<ol>
	<li>Stoorvogel, W., Kleijmeer, M. J., Geuze, H. J., Raposo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biogenesis+and+functions+of+exosomes.">The biogenesis and functions of exosomes.</a> Traffic. 3 (5), 321-330 (2002).</li><li>Raposo, G., Stoorvogel, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles:+exosomes,+microvesicles,+and+friends.">Extracellular vesicles: exosomes, microvesicles, and friends.</a> J Cell Biol. 200 (4), 373-383 (2013).</li><li>Schorey, J. S., Harding, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+and+infectious+diseases:+new+complexity+to+an+old+story.">Extracellular vesicles and infectious diseases: new complexity to an old story.</a> J Clin Invest. 126 (4), 1181-1189 (2016).</li><li>Taylor, D. D., Gercel-Taylor, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosome+platform+for+diagnosis+and+monitoring+of+traumatic+brain+injury.">Exosome platform for diagnosis and monitoring of traumatic brain injury.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 369 (1652), (2014).</li><li>Nilsson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostate+cancer-derived+urine+exosomes:+a+novel+approach+to+biomarkers+for+prostate+cancer.">Prostate cancer-derived urine exosomes: a novel approach to biomarkers for prostate cancer.</a> Br J Cancer. 100 (10), 1603-1607 (2009).</li><li>Linares, R., Tan, S., Gounou, C., Arraud, N., Brisson, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-speed+centrifugation+induces+aggregation+of+extracellular+vesicles.">High-speed centrifugation induces aggregation of extracellular vesicles.</a> J Extracell Vesicles. 4, 29509 (2015).</li><li>Lobb, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+exosome+isolation+protocol+for+cell+culture+supernatant+and+human+plasma.">Optimized exosome isolation protocol for cell culture supernatant and human plasma.</a> J Extracell Vesicles. 4, 27031 (2015).</li><li>Vergauwen, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confounding+factors+of+ultrafiltration+and+protein+analysis+in+extracellular+vesicle+research.">Confounding factors of ultrafiltration and protein analysis in extracellular vesicle research.</a> Scientific Reports. 7 (1), 2704 (2017).</li><li>Welton, J. L., Webber, J. P., Botos, L. A., Jones, M., Clayton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ready-made+chromatography+columns+for+extracellular+vesicle+isolation+from+plasma.">Ready-made chromatography columns for extracellular vesicle isolation from plasma.</a> J Extracell Vesicles. 4, 27269 (2015).</li><li>S&#243;dar, B. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-density+lipoprotein+mimics+blood+plasma-derived+exosomes+and+microvesicles+during+isolation+and+detection.">Low-density lipoprotein mimics blood plasma-derived exosomes and microvesicles during isolation and detection.</a> Sci Rep. 6, 24316 (2016).</li><li>de Menezes-Neto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size-exclusion+chromatography+as+a+stand-alone+methodology+identifies+novel+markers+in+mass+spectrometry+analyses+of+plasma-derived+vesicles+from+healthy+individuals.">Size-exclusion chromatography as a stand-alone methodology identifies novel markers in mass spectrometry analyses of plasma-derived vesicles from healthy individuals.</a> J Extracell Vesicles. 4, 27378 (2015).</li><li>Corso, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproducible+and+scalable+purification+of+extracellular+vesicles+using+combined+bind-elute+and+size+exclusion+chromatography.">Reproducible and scalable purification of extracellular vesicles using combined bind-elute and size exclusion chromatography.</a> Scientific Reports. 7 (1), 11561 (2017).</li><li>Diaz, G., Wolfe, L. M., Kruh-Garcia, N. A., Dobos, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+Membrane-Associated+Proteins+of+Exosomes+Released+from+Human+Macrophages+after+Mycobacterium+tuberculosis+Infection.">Changes in the Membrane-Associated Proteins of Exosomes Released from Human Macrophages after Mycobacterium tuberculosis Infection.</a> Sci Rep. 6, 37975 (2016).</li><li>Yuana, Y., Levels, J., Grootemaat, A., Sturk, A., Nieuwland, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-isolation+of+extracellular+vesicles+and+high-density+lipoproteins+using+density+gradient+ultracentrifugation.">Co-isolation of extracellular vesicles and high-density lipoproteins using density gradient ultracentrifugation.</a> J Extracell Vesicles. 3, (2014).</li><li>Th&#233;ry, C., Amigorena, S., Raposo, G., Clayton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+exosomes+from+cell+culture+supernatants+and+biological+fluids.">Isolation and characterization of exosomes from cell culture supernatants and biological fluids.</a> Curr Protoc Cell Biol. , (2006).</li><li>Muller, L., Hong, C. S., Stolz, D. B., Watkins, S. C., Whiteside, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+biologically-active+exosomes+from+human+plasma.">Isolation of biologically-active exosomes from human plasma.</a> J Immunol Methods. 411, 55-65 (2014).</li><li>B&#246;ing, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-step+isolation+of+extracellular+vesicles+by+size-exclusion+chromatography.">Single-step isolation of extracellular vesicles by size-exclusion chromatography.</a> J Extracell Vesicles. 3, (2014).</li><li>Sweeney, P. J., Walker, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteinase+K+(EC+3.4.21.14).">Proteinase K (EC 3.4.21.14).</a> Methods Mol Biol. 16, 305-311 (1993).</li><li>Baranyai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Exosomes+from+Blood+Plasma:+Qualitative+and+Quantitative+Comparison+of+Ultracentrifugation+and+Size+Exclusion+Chromatography+Methods.">Isolation of Exosomes from Blood Plasma: Qualitative and Quantitative Comparison of Ultracentrifugation and Size Exclusion Chromatography Methods.</a> PLoS One. 10 (12), e0145686 (2015).</li></ol>

Оптимизированный метод для повышения чистоты и доходность exosomes из крови будет увеличить способность точно шахта внеклеточного везикулы как источник биомаркеров для ряда заболеваний. Стандартные методы в настоящее время используется для изоляции exosomes, в частности, ultracentrifugation и методы...

Exosomes являются nanovesicles (размером от 30 Нм до 150 Нм) выпустила почти всех клеток в организме человека для облегчения связи в ячейке обрабатывает1,2. Интересно, что состав exosomes изменяется в зависимости от клетки происхождения, а также состояние здоровья отдельных3,4,5. Кроме того, exosomes могут быть получены из нескольких биологических жидкостей, таких как: слюна, моча и крови2. Из-за этих особенностей exosomes считаются хорошим источником болезни биомаркеров. К сожалению это не стандартный метод для изоляции exosomes. Некоторые лаборатории считают многоступенчатое центрифугирования, с последним высокоскоростной шагом на 100,000 x g с помощью градиентов плотности как метод золотой стандарт для exosome изоляции. Однако недавние исследования показали, что ultracentrifugation индуцирует агрегацию exosomes с растворимые белки и другие exosomes, в дополнение к затрагивающим целостность exosome, оба из которых могут препятствовать нисходящие приложения6,7 . Другие распространенные методы изоляции exosome включают, но не ограничиваются: количество осадков в коммерческих полиэтиленгликоля (PEG) на основе реагентов, центробежные ультрафильтрации и размер-гель-проникающей хроматографии (SEC). Коммерческих реактивов, с помощью полиэтиленгликоля (PEG) полимеров обогатить exosomes, заставляя их осадка и форма гранул. Ограничения, используя этот полимер являются загрязнение с остаточной PEG полимера и обилие растворимых не exosomal белков в конечный продукт. Ультрафильтрация использует центрифугирования для очищения и сконцентрировать пузырьки с помощью мембраны целлюлозы; exosomes сохраняются выше фильтр, в то время как меньше примесей и другие белки проходят через мембрану7,8. Так же, как другие методы центробежные ультрафильтрации имеет ограниченные возможности для очистки exosomes из-за сохранения высокого уровня не exosomal белков, белковых комплексов и агрегатов. Наконец SEC очистки использует пористых смолы для разделения молекул по размеру. SEC показал многообещающие результаты, преодоление большую часть проблем, возникших с другими методами, захватив часть загрязнений белков и сохранения целостности exosomal, так как изоляция основан на гравитации или низкого давления системы7, 9. Однако, Сопредседатель изоляции больше белка агрегатов и липопротеинов10 во время SEC влияет на чистоту подготовки окончательного exosome. Хотя некоторые методы были протестированы для exosome очистки от supernatants культуры клеток и плазмы7или только плазмы9,11, нет никакой информации о производительности методов прямого сопоставления крови плазмы и сыворотки от того же лица.
Здесь мы сосредоточены на очищение крови exosomes путем сравнения различных рабочих процессов, чтобы определить, если методы обогащения везикул переводимых между плазмой и сыворотки. Наночастицы, отслеживания, анализа и Западная помарка были использованы для количественного определения различий в составе концентрации, чистоты и белка exosome в конечных продуктах. Последний метод, подробно изложены в настоящем Протоколе, увеличение числа везикул и уменьшает уровни белка не exosomal. Важно отметить, что свидетельствует резкое сокращение общего совместного осаждения белков, включая альбумин и аполипопротеинов. Высокое обилие этих двух белков в крови и частота, с которой они совместно очищают с exosomes причины несоответствия между «очищенного» образцы, наклон вниз по течению анализы. Этот протокол включает в себя использование коммерчески доступных SEC смолы; смола состоит из пористых бусы, в которых меньше чем 700 кДа белками можно ввести бисер. Раз внутри, белки удерживаются octylamine лиганда. Элюата состоит из exosomes и больше чем 700 кДа12молекул. Кроме того для того, чтобы уменьшить белка агрегатов и аполипопротеинов, который уклониться от шарик треппинга, мы включать протеазы пищеварение шаг в рабочем процессе. В настоящее время не способен ни один метод максимального exosome доходности при одновременном снижении совместно очистки белков не exosomal. Это исследование показывает, что протокол очистки, который сочетает в себе протеазы пищеварение предварительной обработки с нескольких методов очистки и восстановления может использоваться для увеличения урожайности exosome и чистоты из сыворотки крови и плазмы.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="676">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Nanosight</td>
			<td style="width:149px;">Malvern</td>
			<td style="width:123px;">NS300</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Benchtop microcentrifuge&#160;</td>
			<td style="width:149px;">Thermo</td>
			<td style="width:123px;">Legend Mico21</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Benchtop centrifuge&#160;</td>
			<td style="width:149px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:123px;">Allegra 6R</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Waterbath&#160;</td>
			<td style="width:149px;">Benchmark</td>
			<td style="width:123px;">B2000-4</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Microplate reader</td>
			<td style="width:149px;">BIOTEK</td>
			<td style="width:123px;">Epoch</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Pierce BCA Protein Assay Kit</td>
			<td style="width:149px;">THERMO</td>
			<td style="width:123px;">23227</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Micro BCA Protein Assay Kit</td>
			<td style="width:149px;">THERMO</td>
			<td style="width:123px;">23235</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:149px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">21-040-CV</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">96 well plate</td>
			<td style="width:149px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">15705-066</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:281px;">Amicon Ultra-0.5 Centrifugal Filter Unit with Ultracel-100 membrane</td>
			<td style="width:149px;">EMD-Millipore</td>
			<td style="width:123px;">UFC510096</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Amicon Ultra-4 Centrifugal Filter Units</td>
			<td style="width:149px;">EMD-Millipore</td>
			<td style="width:123px;">UFC800324</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Capto Core 700</td>
			<td style="width:149px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:123px;">17548103</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Poly-Prep&#160;Chromatography Columns</td>
			<td style="width:149px;">BIORAD</td>
			<td style="width:123px;">7311550</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">NuPAGE 4-12% Bis-Tris Protein Gels</td>
			<td style="width:149px;">THERMO</td>
			<td style="width:123px;">NP0323BOX</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Nitrocellulose Membrane, Roll, 0.2 &#181;m</td>
			<td style="width:149px;">BIORAD</td>
			<td style="width:123px;">1620112</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Proteinase K,&#160;Tritirachium album</td>
			<td style="width:149px;">EMD-Millipore</td>
			<td style="width:123px;">539480</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">SimplyBlue SafeStain</td>
			<td style="width:149px;">THERMO</td>
			<td style="width:123px;">LC6065</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">SIGMAFAST&#160;BCIP/NBT</td>
			<td style="width:149px;">Millipore-SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">B5655</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">4-Chloro-1-naphthol</td>
			<td style="width:149px;">Millipore-SIGMA</td>
			<td style="width:123px;">C6788</td>
			<td style="width:124px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:281px;">Anti-CD63 Antibody (rabbit anti-human) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody</td>
			<td style="width:149px;">SYSTEM BIOSCIENCES</td>
			<td style="width:123px;">EXOAB-CD63A-1</td>
			<td style="width:124px;">Primary and secondary antibodies</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:281px;">ALB Antibody (F-10)</td>
			<td style="width:149px;">SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY, INC.</td>
			<td style="width:123px;">sc-271605</td>
			<td style="width:124px;">Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:281px;">apoB Antibody (C1.4)</td>
			<td style="width:149px;">SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY, INC.</td>
			<td style="width:123px;">sc-13538</td>
			<td style="width:124px;">Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:42px;width:281px;">apoA-I Antibody (B-10)</td>
			<td style="width:149px;">SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY, INC.</td>
			<td style="width:123px;">sc-376818</td>
			<td style="width:124px;">Primary antibody</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protein digestion, ultrafiltration, and size exclusion chromatography to optimize the isolation of exosomes from human blood plasma and serum

Exosomes, тип nanovesicle, освобожден от всех типов клеток, могут быть изолированы от любых телесных жидкости. Содержание exosomes, в том числе белков и РНК, являются уникальными для клетки, от которых они наследуются и может использоваться как показатели заболевания. Несколько общих протоколов обогащения, включая ultracentrifugation, выход exosomes, нагруженные белковых загрязнений. Конкретно мы нашли что самые обильные белков в крови часто совместно очищают с exosomes и может посрамить течению протеомических исследований, срыве выявление низкой изобилие биомаркера кандидатов. Дополнительную обеспокоенность является невоспроизводимость exosome белка количественной оценки из-за несовместимых представление уровня белка не exosomal. Чтобы удалить не exosomal белки, которые совместно очищают наряду с exosomes, добавление строгость в процессе очистки exosome был разработан протокол, подробно здесь. Пять методов были сопоставлены с помощью парных плазмы крови и сыворотки из пяти доноров. С помощью наночастиц, отслеживания, анализа и микро bicinchoninic кислоты белка пробирного анализа показали, что сводный протокол, используя ультрафильтрации и размер гель-проникающей хроматографии принесли оптимальный везикул обогащения и удаления растворимого белка. Западный blotting использовался для проверки, что ожидаемые обильные крови белков, в том числе альбумина и аполипопротеинов, были истощены.

Представленные ниже данные были получены с помощью парных проб плазмы и сыворотки из пяти крови здоровых доноров. Чтобы определить влияние каждого шага обработки, были проведены пять вариантов представленных протокола, и удаления белка exosome восстановления и не exosome б?...

Watch this Scientific Journal Video about Protein Digestion, Ultrafiltration, and Size Exclusion Chromatography to Optimize the Isolation of Exosomes from Human Blood Plasma and Serum at JoVE.com

Protein Digestion, Ultrafiltration, and Size Exclusion Chromatography to Optimize the Isolation of Exosomes from Human Blood Plasma and Serum

Здесь мы представляем протокол для очистки exosomes из плазмы и сыворотки с сокращением Сопредседатель очистки белков крови не exosomal. Оптимизированный протокол включает ультрафильтрации, лечение протеазы и размер гель-проникающей хроматографии. Расширение очистки exosomes преимущества течению анализов, включая более точной количественной оценки везикулы и протеомных характеристика.

Переваривание белков, ультрафильтрации и гель-проникающей хроматографии размер для оптимизации изоляции Exosomes из человеческой плазмы крови и сыворотки

Exosomes, a type of nanovesicle released from all cell types, can be isolated from any bodily fluid. The contents of exosomes, including proteins and ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Online Size-exclusion and Ion-exchange Chromatography on a SAXS Beamline

Интернет эксклюзионной и ионообменной хроматографии на МУРР пучкового

Biological small angle X-ray scattering (BioSAXS) is a powerful technique in molecular and structural biology used to determine solution structure, ...

Human Peripheral Blood Neutrophil Isolation for Interrogating the Parkinson's Associated LRRK2 Kinase Pathway by Assessing Rab10 Phosphorylation

Человеческая периферическая кровь Нейтрофилов Изоляция для допроса Паркинсона Связанные LRRK2 Киназы Путь путем оценки Rab10 фосфорилирования

The leucine rich repeat kinase 2 (LRRK2) is the most frequently mutated gene in hereditary Parkinson&#8217; disease (PD) and all pathogenic LRRK2 ...

Ion Exchange Chromatography (IEX) Coupled to Multi-angle Light Scattering (MALS) for Protein Separation and Characterization

Ion Exchange Chromatography IEX Coupled to Multi-angle Light Scattering MALS for Protein Separation and Characterization

Ионообменной хроматографии (IEX) в сочетании с мульти-угол рассеяния света (MALS) для разделения белков и характеристика

Ion-exchange chromatography with multi-angle light scattering (IEX-MALS) is a powerful method for protein separation and characterization. The combination ...

Characterization of Proteins by Size-Exclusion Chromatography Coupled to Multi-Angle Light Scattering (SEC-MALS)

Characterization of Proteins by Size-Exclusion Chromatography Coupled to Multi-Angle Light Scattering SEC-MALS

Характеристика белков по размеру-исключение хроматографии в сочетании с многоугловой рассеяния света (SEC-MALS)

Analytical size-exclusion chromatography (SEC), commonly used for the determination of the molecular weight of proteins and protein-protein complexes in ...

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Перевод Рибосома Сроднистого Очищения (TRAP) для изоляции РНК от эндотелиальных клеток In vivo

Many studies have been limited to using in vitro cellular assays and whole tissues or isolating of specific cell types from animals for in vitro analysis ...

Evaluation of Protein&#8211;Protein Interactions using an On-Membrane Digestion Technique

Evaluation of ProteinÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬Å“Protein Interactions using an On-Membrane Digestion Technique

Оценка взаимодействия белкови-белков с использованием метода пищеварения On-Membrane

Numerous intracellular proteins physically interact in accordance with their intracellular and extracellular circumstances. Indeed, cellular functions ...

Paper-Based Preconcentration and Isolation of Microvesicles and Exosomes

Предконцентрация и изоляция микровесикул и экзосом на бумажной основе

Microvesicles and exosomes are small membranous vesicles released to the extracellular environment and circulated throughout the body. Because they ...

Analysis and Specification of Starch Granule Size Distributions

Анализ и спецификация распределения размера крахмала гранул

Starch from all plant sources are made up of granules in a range of sizes and shapes having different occurrence frequencies, i.e., exhibiting a size and ...

Isolation and Analysis of Plasma Lipoproteins by Ultracentrifugation

Изоляция и анализ плазменных липопротеинов с помощью ультрацентрифугации

Analysis of plasma lipoproteins and apolipoproteins is an essential part for the diagnosis of dyslipidemia and studies of lipid metabolism and ...

Rapid Assessment of Membrane Protein Quality by Fluorescent Size Exclusion Chromatography

Экспресс-оценка качества мембранного белка методом флуоресцентной эксклюзионной хроматографии

During membrane protein structural elucidation and biophysical characterization, it is common to trial numerous protein constructs containing different ...