Name: simple and effective administration and visualization of microparticles in the circulatory system of small fishes using kidney injection
Uploaded: 2018-06-17T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Simple and Effective Administration and Visualization of Microparticles in the Circulatory System of Small Fishes Using Kidney Injection at JoVE.com

Autores grandemente reconhecem a ajuda de Bogdan Osadchiy e Evgenii Protasov (Universidade Estatal de Irkutsk, Rússia) em preparação do protocolo de vídeo. Esta pesquisa foi apoiada pela Fundação de ciência russo (#15-14-10008) e a Fundação russo de pesquisa básica (#15-29-01003).

Todos os procedimentos experimentais foram realizados em conformidade com a directiva da União Europeia 2010/63/UE para experiências em animais e foram aprovados do Animal temas pesquisa Comissão do Instituto de biologia na Universidade Estatal de Irkutsk.
1. fabricação de microcápsulas
Nota: Microcápsulas carregando uma tintura fluorescente são preparadas usando um conjunto de camada por camada de polieletrolitos oposta carregado7...

<ol>
	<li>Rivas-Aravena, A., Sandino, A. M., Spencer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticles+and+microparticles+of+polymers+and+polysaccharides+to+administer+fish+vaccines.">Nanoparticles and microparticles of polymers and polysaccharides to administer fish vaccines.</a> Biol. Res. 46 (4), 407-419 (2013).</li><li>Yashchenok, A. M., Jose, J., Trochet, P., Sukhorukov, G. B., Gorin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multifunctional+polyelectrolyte+microcapsules+as+a+contrast+agent+for+photoacoustic+imaging+in+blood.">Multifunctional polyelectrolyte microcapsules as a contrast agent for photoacoustic imaging in blood.</a> J. Biophotonics. 9 (8), 792-799 (2016).</li><li>Pugach, E. K., Li, P., White, R., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retro-orbital+injection+in+adult+zebrafish.">Retro-orbital injection in adult zebrafish.</a> J. Vis. Exp. (34), e1645 (2009).</li><li>Gurkov, A., Shchapova, &. #. 1. 0. 4. 5. ;., Bedulina, D., Baduev, B., Borvinskaya, E., Timofeyev, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remote+in+vivo+stress+assessment+of+aquatic+animals+with+microencapsulated+biomarkers+for+environmental+monitoring.">Remote in vivo stress assessment of aquatic animals with microencapsulated biomarkers for environmental monitoring.</a> Sci. Rep. 6, e36427 (2016).</li><li>Borvinskaya, E., Gurkov, A., Shchapova, E., Baduev, B., Shatilina, Z., Sadovoy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parallel+in+vivo+monitoring+of+pH+in+gill+capillaries+and+muscles+of+fishes+using+microencapsulated+biomarkers.">Parallel in vivo monitoring of pH in gill capillaries and muscles of fishes using microencapsulated biomarkers.</a> Biol. Open. 6 (5), 673-677 (2017).</li><li>Diep, C. Q., Davidson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+cells+directly+into+the+kidney+of+adult+zebrafish.">Transplantation of cells directly into the kidney of adult zebrafish.</a> J. Vis. Exp. (51), e2725 (2011).</li><li>Kreft, O., Javier, A. M., Sukhorukov, G. B., Parak, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymer+microcapsules+as+mobile+local+pH-sensors.">Polymer microcapsules as mobile local pH-sensors.</a> J. Mater. Chem. 17 (42), 4471-4476 (2007).</li><li>Sadovoy, A., Teh, C., Korzh, V., Escobar, M., Meglinski, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microencapsulated+bio-markers+for+assessment+of+stress+conditions+in+aquatic+organisms+in+vivo.">Microencapsulated bio-markers for assessment of stress conditions in aquatic organisms in vivo.</a> Laser Phys. Lett. 9 (7), 542-546 (2012).</li><li>Ferreira, T., Rasband, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ImageJ User Guide - Version 1.44. , (2012).</li><li>Poland, R. S., Bull, C., Syed, W. A., Bowers, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+brain+microinjection+to+study+molecular+substrates+of+motivated+behavior.">Rodent brain microinjection to study molecular substrates of motivated behavior.</a> J. Vis. Exp. (103), e53018 (2015).</li><li>Liu, L., Duff, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+serial+collection+of+cerebrospinal+fluid+from+the+cisterna+magna+in+mouse.">A technique for serial collection of cerebrospinal fluid from the cisterna magna in mouse.</a> J. Vis. Exp. (21), e960 (2008).</li><li>Johnston, L., Ball, R. E., Acuff, S., Gaudet, J., Sornborger, A., Lauderdale, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+recording+in+the+brain+of+intact+adult+zebrafish.">Electrophysiological recording in the brain of intact adult zebrafish.</a> J. Vis. Exp. (81), e51065 (2013).</li><li>Gerlach, G. F., Schrader, L. N., Wingert, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+the+adult+zebrafish+kidney.">Dissection of the adult zebrafish kidney.</a> J. Vis. Exp. (54), e2839 (2011).</li><li>McKee, R. A., Wingert, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+renal+pathology:+Emerging+models+of+acute+kidney+injury.">Zebrafish renal pathology: Emerging models of acute kidney injury.</a> Curr Pathobiol Rep. 3 (2), 171-181 (2015).</li><li>Donath, E., Sukhorukov, G. B., Caruso, F., Davi, S. A., M&#246;hwald, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+hollow+polymer+shells+by+colloid-templated+assembly+of+polyelectrolytes.">Novel hollow polymer shells by colloid-templated assembly of polyelectrolytes.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 37 (17), 2201-2205 (1998).</li><li>Antipov, A. A., Shchukin, D., Fedutik, Y., Petrov, A. I., Sukhorukov, G. B., M&#246;hwald, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbonate+microparticles+for+hollow+polyelectrolyte+capsules+fabrication.">Carbonate microparticles for hollow polyelectrolyte capsules fabrication.</a> Colloids Surf. A. 224, 175-183 (2003).</li><li>Gaponik, N., Radtchenko, I. L., Gerstenberger, M. R., Fedutik, Y. A., Sukhorukov, G. B., Rogach, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Labeling+of+biocompatible+polymer+microcapsules+with+near-infrared+emitting+nanocrystals.">Labeling of biocompatible polymer microcapsules with near-infrared emitting nanocrystals.</a> Nano Lett. 3 (3), 369-372 (2003).</li><li>Volodkin, D. V., Larionova, N. I., Sukhorukov, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+encapsulation+via+porous+CaCO3+microparticles+templating.">Protein encapsulation via porous CaCO3 microparticles templating.</a> Biomacromolecules. 5 (5), 1962-1972 (2004).</li><li>Tzaneva, V., Perry, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Time+differential+staining+technique+coupled+with+full+bilateral+gill+denervation+to+study+ionocytes+in+fish.">A Time differential staining technique coupled with full bilateral gill denervation to study ionocytes in fish.</a> J. Vis. Exp. (97), e52548 (2015).</li></ol>

Para demonstrar a injeção de micropartículas no rim zebrafish, usamos semi-permeável microcápsulas carregadas com um corante indicador. Assim, o protocolo contém instruções para a preparação das microcápsulas usando o assembly de camada por camada de polieletrolitos oposta carregado7,8,15,16,17 ,18 (<strong class=...

A administração de microtamanho de partículas em um organismo animal é uma tarefa importante em áreas como a droga e vacina entrega1, vasculatura visualização2, implantação de célula transgénicos3e implantação minúsculo sensor óptico 4 , 5. no entanto, o procedimento de implantação para microescala partículas dentro do sistema vascular dos animais de laboratório pequeno é difícil, especialmente para os organismos aquáticos delicados. Para amostras de pesquisa populares como zebrafish, aconselha-se que estes procedimentos ser esclarecido usando protocolos de vídeo.
Microinjeções intracardíacos e capilares exigem microcirurgia únicas instalações e pessoal treinado para a entrega de microobjects em sangue de zebrafish. Anteriormente, uma retro-orbital injeção manual3 foi sugerido como um método fácil e eficaz para a administração de células toda. No entanto, em nossa experiência, por causa da pequena área da rede capilar de olho, é preciso muita prática para alcançar o resultado desejado desta técnica.
Aqui, descrevemos um método para implantação de micropartículas robusta e eficiente para o sistema circulatório por injeção manual diretamente no tecido renal de zebrafish adulto, que é rica em capilares e vasos renais. Esta técnica baseia-se no protocolo de vídeo para transplante de células para o zebrafish rim6, mas foram eliminados os passos microcirúrgicos traumáticos e demorados. O método proposto é caracterizado por baixa mortalidade (0-20%) e alta eficiência (70-90% de sucesso) e é fácil de instituir utilizando equipamentos comumente disponíveis.
Uma parte importante do protocolo proposto é a visualização das implantado micropartículas (se eles são colorida ou fluorescente) nos capilares de gill, que permite a verificação da qualidade da injeção, uma áspera avaliação relativa do número de injetados de partículas e a deteção do sinal espectral para medições fisiológicas diretamente do sangue circulante. Como um exemplo das possíveis aplicações da técnica descrita, demonstramos o protocolo para medições em vivo do pH do sangue zebrafish usando uma sonda fluorescente microencapsulada, SNARF-1, originalmente sugerido em Borvinskaya et al. 20175.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>SNARF-1-dextran, 70000 MW</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>D3304</td>
			<td>Fluorescent probe. Any other appropriate polymer-bound fluorescent dye can be used as a microcapsule filler</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin-fluorescein isothiocyanate conjugate (FITC-BSA)</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>A9771</td>
			<td>Fluorescent probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhodamine B isothiocyanate-Dextran (RITC-dextran)</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>R9379</td>
			<td>Fluorescent probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>C1016</td>
			<td>CaCO3 templates formation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium carbonate</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>S7795</td>
			<td>CaCO3 templates formation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly(allylamine hydrochloride), MW 50000 (PAH)</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>283215</td>
			<td>Cationic polymer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly(sodium 4-styrenesulfonate), MW 70000 (PSS)</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>243051</td>
			<td>Anionic polymer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine [20 kDa] grafted with polyethylene glycol [5 kDa], g = 3.0 to 4.5 (PLL-g-PEG)</td>
			<td>SuSoS</td>
			<td>PLL(20)-g[3.5]-PEG(5)</td>
			<td>Final polymer to increase the biocompatibility of microcapsules</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>S8776</td>
			<td>To dissolve applied polymers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water Purification System</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SIMSV0000</td>
			<td>To prepare deionized water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic stirrer</td>
			<td>Stegler</td>
			<td></td>
			<td>For CaCO3 templates formation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf&#160;Research&#160;plus pipette, 1000 &#181;L</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td>Dosing solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf&#160;Research&#160;plus pipette, 10 &#181;L</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td>Dosing solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips, volume range 200 to 1000 &#181;L</td>
			<td>F.L. Medical</td>
			<td>28093</td>
			<td>Dosing solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips, volume range 0.1-10&#160;&#956;L</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Z640069</td>
			<td>Dosing solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-centrifuge Microspin 12, High-speed</td>
			<td>BioSan</td>
			<td></td>
			<td>For microcapsule centrifugation-washing procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes, 2 mL</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Z666513</td>
			<td>Microcapsule synthesis and storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaker Intelli-mixer RM-1L</td>
			<td>ELMY Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>To reduce microcapsule aggregation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleaner</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>To reduce microcapsule aggregation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Head phones&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>To protect ears from ultrasound</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>EDS</td>
			<td>To dissolve the CaCO3 templates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monosodium phosphate</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>S9638</td>
			<td>Preparation of pH buffers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium phosphate</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>S9390</td>
			<td>Preparation of pH buffers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>S8045</td>
			<td>To adjust the pH of the EDTA solution and buffers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermostat chamber</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>To dry microcapsules on glass slide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer blood cell count chamber</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>To investigate the size distribution and concentration of the prepared microcapsules</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent microscope Mikmed 2</td>
			<td>LOMO</td>
			<td></td>
			<td>In vivo visualization of microcapsules in fish blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Set of fluorescent filters for SNARF-1 (should be chosen depending on the microscope model; example is provided)</td>
			<td>Chroma</td>
			<td>79010</td>
			<td>Visualization of microcapsules with fluorescent probes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber spectrometer QE Pro</td>
			<td>Ocean Optics</td>
			<td></td>
			<td>Calibration of microcapsules under microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical fiber QP400-2-VIS NIR, 400 &#956;m, 2 m</td>
			<td>Ocean Optics</td>
			<td></td>
			<td>To connect spectrometer with microscope port</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collimator F280SMA-A</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td></td>
			<td>To connect spectrometer with microscope port</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass microscope slide</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-550-A3</td>
			<td>Calibration of microcapsules under microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips, 22 x 22 mm</td>
			<td>Pearl</td>
			<td>MS-SLIDCV</td>
			<td>Calibration of microcapsules under microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass microcapillaries Intra MARK, 10 &#181;L</td>
			<td>Blaubrand</td>
			<td>BR708709</td>
			<td>To collect fish blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clove oil</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>C8392</td>
			<td>Fish anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lancet No 11</td>
			<td>Apexmed international B.V.</td>
			<td>P00588</td>
			<td>To cut the fish tail and release the steel needle from the tip of insulin autoinjector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin, 5000 U/mL</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>L6510-BC</td>
			<td>For treating all surfaces that come in contact with fish blood during fish blood collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seven 2 Go Pro pH-meter with a microelectrode</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td></td>
			<td>To determine fish blood pH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin pen needles Micro-Fine Plus, 0.25 x 5 mm</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td></td>
			<td>For injection procedure. Any thin needle (&#216; 0.33 mm or less) is appropriate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass capillaries, 1 x 75 mm</td>
			<td>Hirschmann Laborger&#228;te GmbH &#38; Co</td>
			<td>9201075</td>
			<td>For injection procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas torch</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>To solder steel needle to glass capillary</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjector IM-9B</td>
			<td>NARISHIGE</td>
			<td></td>
			<td>For precise dosing of microcapsules suspension</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, 60 mm x 15 mm, polystyrene</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>P5481</td>
			<td>For manipulations with fish under anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic spoon</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For manipulations with fish under anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Damp sponge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For manipulations with fish under anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection scissors</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>31212</td>
			<td>To remove the gill cover from the fish head</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette, 3.5 mL</td>
			<td>BRAND</td>
			<td>Z331767</td>
			<td>To moisten fish gills</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

simple and effective administration and visualization of microparticles in the circulatory system of small fishes using kidney injection

A administração sistémica de tamanho micro partículas em um organismo vivo pode ser aplicada para a visualização da vasculatura, drogas e entrega de vacina, implantação de células transgénicas e pequenos sensores ópticos. No entanto, microinjeções intravenosas em animais de pequenos porte, que são principalmente usados em laboratórios biológicos e veterinários, são muito difíceis e exigem pessoal treinado. Aqui, vamos demonstrar um método robusto e eficiente para a introdução de micropartículas no sistema circulatório do adulto peixe-zebra (Danio rerio) por injeção para o rim de peixe. Para visualizar as micropartículas introduzidas na vasculatura, propomos uma técnica simples de intravital imagem em guelras de peixe. In vivo , monitoramento do zebrafish pH sangue foi realizada utilizando um fluorescente microencapsulado injetado sonda, SNARF-1, para demonstrar uma das possíveis aplicações da técnica descrita. Este artigo fornece uma descrição detalhada do encapsulamento do corante sensíveis ao pH e demonstra os princípios da injeção rápida e visualização das microcápsulas obtidas para in vivo de gravação do sinal fluorescente. O método proposto de injeção é caracterizado por uma taxa de mortalidade baixa (0-20%) e alta eficiência (70-90% de sucesso) e é fácil de instituir utilizando equipamentos comumente disponíveis. Todos os procedimentos descritos podem ser executados em outras espécies de peixes pequenos, tais como guppies e medaka.

Os resultados obtidos vêm de um dos três principais categorias do protocolo apresentado: a formação de micropartículas fluorescentes por encapsulamento de um corante fluorescente (Figura 1), a injeção de rim de microcápsulas com mais visualização no Gill capilares (Figura 2 e 3) e, finalmente, na vivo espectral gravação de fluorescência SNARF-1 para monitorar níveis de pH ...

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Simple and Effective Administration and Visualization of Microparticles in the Circulatory System of Small Fishes Using Kidney Injection

Administração simples e eficaz e visualização de micropartículas no sistema circulatório de peixes pequenos usando injeção de rim

Este artigo demonstra os princípios de uma injeção rápida, minimamente invasiva de micropartículas fluorescentes para a circulatory system de peixes pequenos e a visualização na vivo das micropartículas em sangue de peixe.

The systemic administration of micro-size particles into a living organism can be applied for vasculature visualization, drug and vaccine delivery, ...

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