Name: isolation and characterization of extracellular vesicles from adult schistosoma japonicum
Uploaded: 2018-05-22T13:00:00
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本研究は、一部または全部、国家自然科学基金、中国の (31472187 および 31672550) および農業科学と中国農業科学院の技術革新プログラムでサポートされています。

上海中国農業科学院獣医研究所倫理委員会で承認されたすべての動物実験 (許可番号: SHVRIAU-14-0101)。
1住の体外培養。
注:住は、バイオハザードを表しています。労働者は関連生物学的材料をワーム、感染後懸濁液、または他を処理する場合もすべてのラテックス手袋を着用ください。ニュージーランドのウサギは、腹?...

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	<li>Tetta, C., Ghigo, E., Silengo, L., Deregibus, M. C., Camussi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+as+an+emerging+mechanism+of+cell-to-cell+communication.">Extracellular vesicles as an emerging mechanism of cell-to-cell communication.</a> Endocrine. 44 (1), 11-19 (2013).</li><li>Abels, E. R., Breakefield, X. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Introduction+to+Extracellular+Vesicles:+Biogenesis,+RNA+Cargo+Selection,+Content,+Release,+and+Uptake.">Introduction to Extracellular Vesicles: Biogenesis, RNA Cargo Selection, Content, Release, and Uptake.</a> Cell Mol Neurobiol. 36 (3), 301-312 (2016).</li><li>Riaz, F., Cheng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosome-like+vesicles+of+helminths:+implication+of+pathogenesis+and+vaccine+development.">Exosome-like vesicles of helminths: implication of pathogenesis and vaccine development.</a> Ann Transl Med. 5 (7), 175 (2017).</li><li>Zhang, H. G., Grizzle, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+and+cancer:+a+newly+described+pathway+of+immune+suppression.">Exosomes and cancer: a newly described pathway of immune suppression.</a> Clin Cancer Res. 17 (5), 959-964 (2011).</li><li>Colombo, M., Raposo, G., Thery, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biogenesis,+secretion,+and+intercellular+interactions+of+exosomes+and+other+extracellular+vesicles.">Biogenesis, secretion, and intercellular interactions of exosomes and other extracellular vesicles.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 30, 255-289 (2014).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circular+RNA+is+enriched+and+stable+in+exosomes:+a+promising+biomarker+for+cancer+diagnosis.">Circular RNA is enriched and stable in exosomes: a promising biomarker for cancer diagnosis.</a> Cell Res. 25 (8), 981-984 (2015).</li><li>Marcilla, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+in+parasitic+diseases.">Extracellular vesicles in parasitic diseases.</a> J Extracell Vesicles. 3, 25040 (2014).</li><li>Cwiklinski, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Extracellular+Vesicles+of+the+Helminth+Pathogen,+Fasciola+hepatica:+Biogenesis+Pathways+and+Cargo+Molecules+Involved+in+Parasite+Pathogenesis.">The Extracellular Vesicles of the Helminth Pathogen, Fasciola hepatica: Biogenesis Pathways and Cargo Molecules Involved in Parasite Pathogenesis.</a> Mol Cell Proteomics. 14 (12), 3258-3273 (2015).</li><li>Buck, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+secreted+by+nematode+parasites+transfer+small+RNAs+to+mammalian+cells+and+modulate+innate+immunity.">Exosomes secreted by nematode parasites transfer small RNAs to mammalian cells and modulate innate immunity.</a> Nat Commun. 5, 5488 (2014).</li><li>Sotillo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+secreted+by+Schistosoma+mansoni+contain+protein+vaccine+candidates.">Extracellular vesicles secreted by Schistosoma mansoni contain protein vaccine candidates.</a> Int J Parasitol. 46 (1), 1-5 (2016).</li><li>Nowacki, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+and+small+non-coding+RNA-enriched+extracellular+vesicles+are+released+by+the+pathogenic+blood+fluke+Schistosoma+mansoni.">Protein and small non-coding RNA-enriched extracellular vesicles are released by the pathogenic blood fluke Schistosoma mansoni.</a> J Extracell Vesicles. 4, 28665 (2015).</li><li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosome-like+vesicles+derived+by+Schistosoma+japonicum+adult+worms+mediates+M1+type+immune-+activity+of+macrophage.">Exosome-like vesicles derived by Schistosoma japonicum adult worms mediates M1 type immune- activity of macrophage.</a> Parasitol Res. 114 (5), 1865-1873 (2015).</li><li>Koh, Y. Q., Almughlliq, F. B., Vaswani, K., Peiris, H. N., Mitchell, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosome+enrichment+by+ultracentrifugation+and+size+exclusion+chromatography.">Exosome enrichment by ultracentrifugation and size exclusion chromatography.</a> Front Biosci (Landmark Ed). 23, 865-874 (2018).</li><li>Safdar, A., Saleem, A., Tarnopolsky, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+potential+of+endurance+exercise-derived+exosomes+to+treat+metabolic+diseases.">The potential of endurance exercise-derived exosomes to treat metabolic diseases.</a> Nat Rev Endocrinol. 12 (9), 504-517 (2016).</li><li>Livshits, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+exosomes+by+differential+centrifugation:+Theoretical+analysis+of+a+commonly+used+protocol.">Isolation of exosomes by differential centrifugation: Theoretical analysis of a commonly used protocol.</a> Sci Rep. 5, 17319 (2015).</li><li>Zhu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Release+of+extracellular+vesicles+containing+small+RNAs+from+the+eggs+of+Schistosoma+japonicum.">Release of extracellular vesicles containing small RNAs from the eggs of Schistosoma japonicum.</a> Parasit Vectors. 9 (1), 574 (2016).</li><li>Zhu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characterization+of+S.+japonicum+exosome-like+vesicles+reveals+their+regulatory+roles+in+parasite-host+interactions.">Molecular characterization of S. japonicum exosome-like vesicles reveals their regulatory roles in parasite-host interactions.</a> Sci Rep. 6, 25885 (2016).</li><li>Lewis, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schistosomiasis.">Schistosomiasis.</a> Curr Protoc Immunol. , 11 (2001).</li><li>Cheng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+miRNAs:+roles+in+cancer+diagnosis,+prognosis+and+therapy.">Circulating miRNAs: roles in cancer diagnosis, prognosis and therapy.</a> Adv Drug Deliv Rev. 81, 75-93 (2015).</li></ol>

Ev に関する最近の研究は、EVs は、宿主-病原体相互作用3,9,12,16で重要な役割を果たす、住血吸虫を実証しています。さらにアドレスに規制機能のそれは住から EVs を分離するため不可欠であります。ここでは、SjEV の分離のための代替方法をについて説明します。このメソッドは、100 から、SjEVs の...

細胞小胞 (Ev) は、様々 なタンパク質、脂質、核酸でカプセル化されます小さな膜結合型ベシクルの人口です。EVs が細胞間の情報伝達に重要な役割を果たして、細胞の分化、免疫調節、血管新生、セル移行2など多数の生理学的なプロセスの規則にかかわる最近の研究を実証 3,4,5。証拠の蓄積は、EVs を, 循環エクソソーム、および miRNA 貨物が特定疾患6の潜在的なバイオ マーカーを表すことを示します。
トリコモナス、 cruzi トリパノソーマの原因、リーシュ マニア属などのいくつかの原生動物、EVs; を分泌することができることが示されている。寄生虫が見つかってまた7をホストの生活に EVs を分泌します。寄生 EVs 感染、病原性8、および免疫調節9の維持に関与することが示されています。住での最近の調査は両方のマンソン住血吸虫(マンソン住血吸虫など) 10、11 S. ササユリ12アダルト住がありますエキソソームのような小胞を分泌することが示されています。特定の生物学的プロセスの機能の規則にかかわる。
日には、超遠心法、限外濾過法13イムノアフィニティーカラム分離、サイズ排除クロマトグラフィー, ポリマー ベースの試薬の使用など、細胞の小胞を分離するいくつかの方法を使用されています。これらの異なる方法では、独自の利点と制限14を所有しています。一般的に、遠心は小胞の分離のためのゴールド スタンダード メソッドと見なされます。ただし、このメソッドは、潜在的な EV 集計14の制限に苦しみます。
住、いくつかのメソッドは、EV の分離報告されている: 遠心11,12,10といくつかの段階 (卵16、商用 EV 分離キット16の利用が含まれますschistosomula11, アダルト住10,12,17)。ベンチの遠心分離機、限外濾過から EVs を分離するための市販 EV 分離キットの使用を組み合わせた代替法を開発した機構の解明は、1000 ナノメートル数百ナノメートルからのサイズの広い範囲が、アダルト日本住血吸虫。分離の EVs は、通常 100-400 nm の直径を所有し、正常に受信者の細胞によって内面化されました。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1161px;" width="1160">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="height:31px;width:459px;">Material</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:188px;"></td>
			<td style="width:319px;"></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:459px;">Total Exosome Isolation Reagent (from cell culture media)</td>
			<td style="width:196px;">ThermoFisher SCIENTIFIC</td>
			<td style="width:188px;">4478359</td>
			<td style="width:319px;">For isolating S. japonicum extracellular vesicles</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:459px;">PKH67</td>
			<td style="width:196px;">Sigma-aldrich</td>
			<td style="width:188px;">MINI67</td>
			<td style="width:319px;">For labeling Evs</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">RPMI 1640 Medium</td>
			<td style="width:196px;">ThermoFisher SCIENTIFIC</td>
			<td>11875119</td>
			<td>For parasite culture</td>
		</tr>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="height:31px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:196px;">ThermoFisher SCIENTIFIC</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;">0.22&#956;m syringe filter</td>
			<td style="width:196px;">Merck</td>
			<td>SLGP033RB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="height:31px;">SnakeSkin Dialysis Tubing</td>
			<td style="width:196px;">Thermo SCIENTIFIC</td>
			<td>68035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;">PEG8000</td>
			<td style="width:196px;">Sangon Biotech</td>
			<td>A100159&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="height:31px;">RIPA</td>
			<td style="width:196px;">Beyotime</td>
			<td>P0013B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="30">
			<td height="30" style="height:30px;">EMD Millipore&#8482; Immobilon&#8482; Western Chemiluminescent HRP Substrate (ECL)</td>
			<td style="width:196px;">Fisher scientific</td>
			<td>WBKLS0100&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;">DAPI</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>4083</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;">BCA kit</td>
			<td style="width:196px;">Beyotime</td>
			<td>P0010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;">CD63 antibodies</td>
			<td style="width:196px;">Sangon Biotech</td>
			<td>D160973-0025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;">PVDF</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1704273</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">Formvar/Carbon 400 mesh</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>01754-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">Phosphotungstic Acid</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>19402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="36">
			<td height="36" style="height:36px;">anti-mouse IgG-HRP</td>
			<td>CWBIO</td>
			<td>CW0102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:459px;">NCTC clone 1469 cells</td>
			<td style="width:196px;">ATCC</td>
			<td style="width:188px;">ATCC&#174; CCL-9.1&#8482;</td>
			<td style="width:319px;"></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:459px;">FBS</td>
			<td style="width:196px;">HyClone</td>
			<td style="width:188px;">SV30087.02</td>
			<td style="width:319px;"></td>
		</tr>
		<tr height="30">
			<td height="30" style="height:30px;width:459px;">Equipments</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:188px;"></td>
			<td style="width:319px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;">GE chemoluminescance imaging system</td>
			<td>GE</td>
			<td>ImageQuant LAS4000mini</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;">Transmission electron microscopy</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>H-7600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="height:31px;">Milli-Q water</td>
			<td>Milli-Q</td>
			<td>Milli-Q Elix</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="height:31px;">Eppendor Centrifuge&#160;</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Centrifuge 5804R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;">Zetasizer Nano</td>
			<td>Malvern</td>
			<td>Zetasizer Nano ZS&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="30">
			<td height="30" style="height:30px;">Ultracentrifuge</td>
			<td style="width:196px;">Beckman</td>
			<td colspan="2">Optima L-100 XP Ultracentrifuge</td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">Incubator</td>
			<td style="width:196px;">ESCO</td>
			<td>CCL-107B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">Microscope</td>
			<td style="width:196px;">Zeiss</td>
			<td>Zeiss Axin Observer Z1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and characterization of extracellular vesicles from adult schistosoma japonicum

細胞小胞 (Ev) は、膜小胞の細胞外微小環境に様々 な細胞によって放出です。EVs は、異種の小胞の人口は 40 と 1,000 nm 間のサイズの範囲を表しています。蓄積された証拠は、EVs がホスト病原体の相互作用で重要な規制の役割を果たすことを示した。住血吸虫の EVs の深い理解は、住血吸虫ホスト相互作用、住血吸虫症に対する新しい戦略の開発を有効にするメカニズムに洞察力を提供しなければなりません。ここでは、さらにアダルト日本住血吸虫(S. ササユリ) から分離・同定 EVs のためのプロトコルを提示による住で EVs 機能を研究を目指しています。EVs は体外培養液遠心商業エキソソーム分離キットと組み合わせての使用から分離しました。分離されたs. ササユリEVs (SjEVs) は通常 100-400 nm の直径を持つし、透過電子顕微鏡と西部にしみが付くことによって特徴付けられます。PKH67 色素標識 SjEVs の使用は、SjEVs は受信者の細胞によって内面化を実証しています。全体として、我々 のプロトコルは大人住; から EVs を分離するための代替方法を提供します。分離 SjEVs の機能解析が適さない場合があります。

記述のプロトコルを使用して孤立した SjEVs の収量を定量化するには、28 日アダルト住から分離された SjEVs の蛋白質の集中をアクセスするのに BCA タンパク質アッセイを使用しました。表 1に示すように、SjEV 蛋白質の集中は媒体 (表 1) の 100 mL あたり 250 μ g 208 μ g からであった。粒子サイズ モールヴァン ナノ粒子解析によって決定される表?...

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Isolation and Characterization of Extracellular Vesicles from Adult Schistosoma japonicum

分離と大人住血吸虫から細胞外小胞のキャラクタリゼーション

ここでは、アダルト住血吸虫から培養体外細胞小胞 (Ev) の分離を記述するプロトコルを提案する.

Extracellular vesicles (EVs) are membranous vesicles released by a variety of cells into the extracellular microenvironment. EVs represent a population of ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation and Characterization of Extracellular Vesicles from Adult Schistosoma japonicum

Cercarial Transformation and in vitro Cultivation of Schistosoma mansoni Schistosomules

Cercarial Transformation and in vitro Cultivation of Schistosoma mansoni Schistosomules

セルカリア変換と in vitroで</emの>栽培マンソン住血吸虫 Schistosomules

Schistosome parasites are the causative agents of schistosomiasis, a chronically debilitating disease that affects over 200 million people globally and ...

Using Eggs from Schistosoma mansoni as an In vivo Model of Helminth-induced Lung Inflammation

Using Eggs from Schistosoma mansoni as an In vivo Model of Helminth-induced Lung Inflammation

から卵を使用して、<em&gt;マンソン住血吸虫</em&gt;として<emインビボ&gt;</em蠕虫によって誘発される肺の炎症の&gt;モデル

Schistosoma parasites are blood flukes that infect an estimated 200 million people worldwide 1. In chronic infection with Schistosoma, the severe ...

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

マウスの腸からの樹状細胞およびマクロファージの単離とキャラクタリゼーション

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Simplified Human Neutrophil Extracellular Traps (NETs) Isolation and Handling

Simplified Human Neutrophil Extracellular Traps NETs Isolation and Handling

簡体ヒト好中球細胞外トラップ（のNET）の単離と取扱い

Neutrophil Extracellular Traps (NETs) have been recently identified as part of the neutrophil&#8217;s antimicrobial armamentarium. Apart from their role ...

Isolation and Characterization of Neutrophils with Anti-Tumor Properties

抗腫瘍特性を有する好中球の単離とキャラクタリゼーション

Neutrophils, the most abundant of all white blood cells in the human circulation, play an important role in the host defense against invading ...

Isolation, Characterization and Functional Examination of the Gingival Immune Cell Network

単離、特徴付けおよび歯肉免疫細胞ネットワークの機能検討

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident ...

Isolation and Flow Cytometric Characterization of Murine Small Intestinal Lymphocytes

マウスの小腸リンパ球の単離およびフローサイトメトリーキャラクタリゼーション

The intestines &#8212; which contain the largest number of immune cells of any organ in the body &#8212; are constantly exposed to foreign antigens, both ...

Flow Virometry to Analyze Antigenic Spectra of Virions and Extracellular Vesicles

ビリオンの抗原性スペクトルと細胞外ベシクルを分析するためのフローVirometry

Cells release small extracellular vesicles (EVs) into the surrounding media. Upon virus infection cells also release virions that have the same size of ...

Legionella pneumophila Outer Membrane Vesicles: Isolation and Analysis of Their Pro-inflammatory Potential on Macrophages

Legionella pneumophila Outer Membrane Vesicles: Isolation and Analysis of Their Pro-inflammatory Potential on Macrophages

レジオネラ・ニューモ外膜小胞：マクロファージ上における炎症誘発ポテンシャルの単離と解析

Bacteria are able to secrete a variety of molecules via various secretory systems. Besides the secretion of molecules into the extracellular space or ...