Name: a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence
Uploaded: 2018-10-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence at JoVE.com

وأيد هذا العمل الرئيس في "بحوث الدواجن" (م. بولين) من "كلية الطب البيطري" جامعة مونتريال. بولين بيليغوز والأصل وضع النموذج. بولين بيليغوز والأصل إجراء العمليات الجراحية. الدكتور بيرنز ساعد في وضع بروتوكول التخدير. الأصل الدكتور تحرير الفيديو وكتبت المخطوطة. بيرنز Drs، ديسروتشيرس وبولين تحرير المخطوطة.

إذن جميع الإجراءات باستخدام الحيوانات الحية "اللجنة الأخلاقية" لكلية الطب البيطري، جامعة دي مونتريال (CÉUA، 'لجنة د' الأخلاق دي استخدام des Animaux ').
1-الاعتبارات قبل الجراحة
<ol><li>حدد 10 أسابيع من العمر الممرض محددة مجاناً (منتدى جنوب المحيط الهادئ) القبعة الدجاج لعملية جراحية. م?...

<ol>
	<li>Vitale, A., Chiarotti, F., Alleva, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+animal+models+in+disease+research.">The use of animal models in disease research.</a> Rare diseases and orphan drugs. 2 (1), 1-4 (2015).</li><li>Uzal, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+to+study+the+pathogenesis+of+human+and+animal+Clostridium+perfringens+infections.">Animal models to study the pathogenesis of human and animal Clostridium perfringens infections.</a> Veterinary Microbiology. , (2015).</li><li>Bernier, G., Phaneuf, J. B., Filion, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+in+broiler+chickens.+III.+Study+of+the+factors+favoring+the+multiplication+of+Clostridium+perfringens+and+the+experimental+transmission+of+the+disease.">Necrotic enteritis in broiler chickens. III. Study of the factors favoring the multiplication of Clostridium perfringens and the experimental transmission of the disease.</a> Canadian Journal of Comparative Medicine. 41 (1), 112-116 (1977).</li><li>Al-Sheikhly, F., Truscott, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathology+of+necrotic+enteritis+of+chickens+following+infusion+of+broth+cultures+of+Clostridium+perfringens+into+the+duodenum.">The pathology of necrotic enteritis of chickens following infusion of broth cultures of Clostridium perfringens into the duodenum.</a> Avian Diseases. 21 (2), 230-240 (1977).</li><li>Wicker, D. L., Iscrigg, W. N., Trammell, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+control+and+prevention+of+necrotic+enteritis+in+broilers+with+zinc+bacitracin.">The control and prevention of necrotic enteritis in broilers with zinc bacitracin.</a> Poultry Science. 56 (4), 1229-1231 (1977).</li><li>Keyburn, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NetB,+a+new+toxin+that+is+associated+with+avian+necrotic+enteritis+caused+by+Clostridium+perfringens.">NetB, a new toxin that is associated with avian necrotic enteritis caused by Clostridium perfringens.</a> PLoS Pathog. 4 (2), e26 (2008).</li><li>Timbermont, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+of+Clostridium+perfringens+isolates+determines+the+ability+to+induce+necrotic+enteritis+in+broilers.">Origin of Clostridium perfringens isolates determines the ability to induce necrotic enteritis in broilers.</a> Comp Immunol Microbiol Infect Dis. 32 (6), 503-512 (2009).</li><li>Paradis, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+avilamycin+for+the+prevention+of+necrotic+enteritis+caused+by+a+pathogenic+strain+of+Clostridium+perfringens+in+broiler+chickens.">Efficacy of avilamycin for the prevention of necrotic enteritis caused by a pathogenic strain of Clostridium perfringens in broiler chickens.</a> Avian Pathol. 45 (3), 365-369 (2016).</li><li>Valgaeren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lesion+development+in+a+new+intestinal+loop+model+indicates+the+involvement+of+a+shared+Clostridium+perfringens+virulence+factor+in+haemorrhagic+enteritis+in+calves.">Lesion development in a new intestinal loop model indicates the involvement of a shared Clostridium perfringens virulence factor in haemorrhagic enteritis in calves.</a> Journal of Comparative Pathology. 149 (1), 103-112 (2013).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+C-terminal+domain+of+Clostridium+perfringens+alpha+toxin+as+a+vaccine+candidate+against+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">The C-terminal domain of Clostridium perfringens alpha toxin as a vaccine candidate against bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> Vet Res. 47 (1), 52 (2016).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxin-neutralizing+antibodies+protect+against+Clostridium+perfringens-induced+necrosis+in+an+intestinal+loop+model+for+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">Toxin-neutralizing antibodies protect against Clostridium perfringens-induced necrosis in an intestinal loop model for bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> BMC Vet Res. 12 (1), 101 (2016).</li><li>Parent, E., Archambault, M., Charlebois, A., Bernier-Lachance, J., Boulianne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chicken+intestinal+ligated+loop+model+to+study+the+virulence+of+Clostridium+perfringens+isolates+recovered+from+antibiotic-free+chicken+flocks.">A chicken intestinal ligated loop model to study the virulence of Clostridium perfringens isolates recovered from antibiotic-free chicken flocks.</a> Avian Pathol. 46 (2), 138-149 (2017).</li><li>Janvilisri, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+differential+proteomes+of+Clostridium+difficile+in+the+pig+ileal-ligated+loop+model.">Temporal differential proteomes of Clostridium difficile in the pig ileal-ligated loop model.</a> PLoS One. 7 (9), e45608 (2012).</li><li>Aabo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+in+vivo+model+for+study+of+intestinal+invasion+by+Salmonella+enterica+in+chickens.">Development of an in vivo model for study of intestinal invasion by Salmonella enterica in chickens.</a> Infection and Immunity. 68 (12), 7122-7125 (2000).</li><li>Meurens, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+immune+response+following+Salmonella+enterica+subspecies+enterica+serovar+Typhimurium+infection+in+porcine+jejunal+gut+loops.">Early immune response following Salmonella enterica subspecies enterica serovar Typhimurium infection in porcine jejunal gut loops.</a> Vet Res. 40 (1), 5 (2009).</li><li>Gerdts, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+intestinal+'loops'+provide+an+in+vivo+model+to+analyse+multiple+mucosal+immune+responses.">Multiple intestinal 'loops' provide an in vivo model to analyse multiple mucosal immune responses.</a> J Immunol Methods. 256 (1-2), 19-33 (2001).</li><li>Wade, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adherent+abilities+of+Clostridium+perfringens+strains+are+critical+for+the+pathogenesis+of+avian+necrotic+enteritis.">The adherent abilities of Clostridium perfringens strains are critical for the pathogenesis of avian necrotic enteritis.</a> Vet Microbiol. 197, 53-61 (2016).</li><li>Cooper, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+for+chickens+of+Clostridium+perfringens+isolated+from+poultry+and+other+sources.">Virulence for chickens of Clostridium perfringens isolated from poultry and other sources.</a> Anaerobe. 16 (3), 289-292 (2010).</li><li>Cooper, K. K., Songer, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+of+Clostridium+perfringens+in+an+experimental+model+of+poultry+necrotic+enteritis.">Virulence of Clostridium perfringens in an experimental model of poultry necrotic enteritis.</a> Veterinary Microbiology. 142 (3-4), 323-328 (2010).</li><li>Chalmers, G., Bruce, H. L., Toole, D. L., Barnum, D. A., Boerlin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+potential+in+a+model+system+using+Clostridium+perfringens+isolated+from+field+outbreaks.">Necrotic enteritis potential in a model system using Clostridium perfringens isolated from field outbreaks.</a> Avian Diseases. 51 (4), 834-839 (2007).</li></ol>

وقد وصف نماذج الحلقات المعوية في العديد من الأنواع لدراسة التفاعل المضيف الممرض والمرضية للأمراض الناتجة عن مسببات الأمراض المعوية المختلفة، مثل كلوستريديوم بيرفرنجنز، المطثيّة العسيرة و السالمونيلا انتيريكا7،9،13،</su...

استخدام نماذج حيوانية لدراسة الأمراض المعدية التي تصيب الإنسان والحيوان أداة أساسية في تقييم عوامل الفوعة تنظم الآلية المرضية لشرط معين، وكذلك فيما يتعلق بوضع استراتيجيات لمنع أو علاج الأمراض1. وعلى الرغم من المزايا العديدة لاستخدام نماذج حيوانية لدراسة الأمراض المختلفة، تنشأ الشواغل الأخلاقية فيما يتعلق بهذه الممارسة. يحتاج الباحثون للحد من استخدام الحيوانات في حين الحصول على نتائج ملموسة وصالحة. مفهوم المبادئ 3 روبية (استبدال وتقليل وصقل) وضعت لضمان معالجة قضايا الرعاية الاجتماعية في مثل هذه المحاكمات. في دراسات التهاب الأمعاء نخرية الدجاج، تستخدم في فيفو نماذج الدجاج للتحقيق المسببات والوقاية والعلاج من هذا الشرط2،3،،من45. وتدار سلالات ممرضة من بيرفرنجنز جيم- تحمل عوامل الفوعة محددة، مثل السمية نتب6، يسبب التهاب الأمعاء نخرية في الدجاج7. مبدأ الاستبدال، ولذلك يصعب، تحقيق في مثل هذه الحالة عوامل الفوعة هذه قد لا تكون ذات أهمية حاسمة في الأنواع الحيوانية الأخرى. ومعظم النماذج للامعاء نخرية في الدجاج استخدام تركيبة من عوامل الخطر، مثل الكوكسيديا وتغيير النظام الغذائي لحمل نخرية الأمعاء تليها تزقيمية مرق الثقافة التي تحتوي على عدد كبير من. بيرفرنجنز جيم-2 هذه النماذج سوف يحفز هذا المرض في عدد كبير من الدجاج، والوفيات يمكن أن تكون هامة في مثل هذه المحاكمات8، مما يثير المخاوف حول مبادئ الحد والصقل في الأبحاث الحيوانية.
نماذج الحلقات الواصلة المعوية بديل المرغوب فيه لدراسة الأمراض الناجمة عن العوامل الممرضة المعوية فيما يتعلق بمبدأ تخفيض، وصقل. قطاعات الأمعاء تسمى 'الحلقات' في هذه النماذج، يتم إنشاؤها بواسطة وضع الحروف المركبة على طول الأمعاء شكل حجرات مستقلة والمحكم حيث يمكن حقن مسببات الأمراض وحدها9 أو مع الجزيئات الأخرى، مثل لقاح المرشحين 10 , 11-توضع مسببات الأمراض ذات الأهمية في اتصال وثيق مع الخلايا المعوية، وبعد بضع ساعات من وقت الإصابة، يمكن استرداد العينات المعوية لمزيد من التحليل. وهذا يسمح باستخدام العلاج ومراقبة مجموعات متعددة في نفس الحيوان. يمكن إجراء التحليل الإحصائي مع نماذج التدابير المتكررة، مما يزيد من قوة التمييز بين المجموعات ويقلل من عدد الدجاج اللازمة مقارنة بمحاكمات تزقيمية الشفوي. أيضا، يتم تنفيذ العمليات الجراحية ومرات الإصابة اللاحقة تحت التخدير العام المستمر والتسكين، ومن ثم تقليل الألم الحيوان. ليجيشنز حلقة مغلقة، نموذجا مثاليا لخفض إعداد المضيف وإنشاء نظام أكثر إنسانية في الأبحاث الحيوانية.
نماذج الحلقات الواصلة المعوية الموصوفة كذلك في الأنواع المختلفة، مثل العجول والأرانب والفئران2،9، ولكن وصف ضعيف في الدجاج7. لاستخدام أمثل لهذا النموذج الجراحية، الأسلوب السليم والتنفيذ ضرورية لخلق الحلقات المعوية الواصلة لتجنب الأضرار بسلامة الأمعاء. والهدف من هذه المخطوطة وصف أسلوب خطوة بخطوة في إنشاء الحلقات المعوية متعددة في نموذج دجاج. ويحد هذا الأسلوب الجراح مهارة وخبرة، كإجراءات دقيقة ضرورية لنجاح المشروع.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>EZ-Scrub 747</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td></td>
			<td>4% chlorhexidine gluconate detergent impregnated sterile brush. No catalog number available. Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/infection-prevention/surgical-hand-scrubs/ez-scrub-preoperative-surgical-scrub-brushes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl alcohol 70% USP 4 L</td>
			<td>Commercial isopropyl alcohol</td>
			<td>P016IP70</td>
			<td>Web address: http://www.comalc.com/products/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorexidine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>282227-1G</td>
			<td>Chlorhexidine gluconate solution, must be diluted to 4%. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/282227?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI8vHr4_OY1wIV3rrACh2ZWQKuEAAYAiAAEgLKx_D_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Drape Small (27 inch x 24 inch) with 3 x 6 inch Fenestration</td>
			<td>Veterinary Specialty Products</td>
			<td>32724</td>
			<td>Web address: http://www.vetspecialtyproducts.com/index.cfm?fuseaction=ecommercecatalog.detail&#38;productgroup_id=15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades #3</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>301</td>
			<td>Web address: https://www.swann-morton.com/product/16.php</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline NaCl 0.9%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8776-100ML</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8776?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl 3-0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>D9003</td>
			<td>Polyglactin multifilament absorbable suture material. Web address: http://www.ethicon.com/healthcare-professionals/products/wound-closure/absorbable-sutures/coated-vicryl-polyglactin-910-suture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1 ml with 26G needle</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td>329652</td>
			<td>Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/diabetes-care/insulin-syringes/bd-1-ml-conventional-insulin-syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Heart Infusion</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>1104930500</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/110493?lang=fr&#38;region=CA&#38;cm_sp=Insite-_-prodRecCold_xorders-_-prodRecCold2-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tube</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9661-500EA</td>
			<td>Microcentrifuge tube. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t9661?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI-YizzfiY1wIVRkCGCh30SQjuEAAYAiAAEgLK5fD_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, buffered neutral, 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td>Ratio tissue : formalin of 1: 10 for adequate fixation. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht501128?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clostridium perfringens strains</td>
			<td>Universit&#233; de Montr&#233;al, Chaire en recherche avicole</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Specific to each laboratory, available upon request to correspondant author</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence

ودرس الأمعاء نخرية في الدجاج باستخدام مختلف نماذج العدوى في الجسم الحي . ومعظم هذه استخدام مزيج من العوامل المهيئة مثل الكوكسيديا والنظام الغذائي، مع تزقيمية مدتها أو الإدارة عن طريق تغذية استخدام كلوستريديوم بيرفرنجنز. في هذه النماذج، يتطلب مقارنة عدة سلالات بيرفرنجنز جيم- فوعة الدراسات عدد كبير من المضيفين للحصول على نتائج ملموسة. يمكن أن يكون معدل الوفيات أثناء فترة الدراسة عالية اعتماداً على نموذج تجريبي، ومن ثم زيادة الشواغل الأخلاقية فيما يتعلق بالرفق بالحيوان في البحث. من المهم تطوير نماذج جديدة من العدوى التي تحتاج إلى عدد أقل من الحيوانات لدراسة نشوء المرض، بعد تقديم نتائج هامة وصحيحة إحصائيا، في الحد من استخدام الحيوانات في البحوث. قد استخدمت نماذج المعوية الحلقة الواصلة لدراسة التهابات كلوستريديال في العديد من الأنواع مثل الفئران والأرانب والعجول. وبعد العمليات الجراحية لإنشاء شرائح الحلقة الواصلة، يتم حقن سلالات بيرفرنجنز جيم- مباشرة في الحلقات إقامة اتصال وثيق بين البكتيريا ومخاطيه الأمعاء. وتؤخذ عينات من الأمعاء ومحتويات لومينال في إنهاء الإجراءات بعد بضع ساعات. يمكن تلقيح سلالات بكتيرية متعددة في كل الحيوانات، ومن ثم الحد من عدد المواضيع المطلوبة في هذه التجارب. أيضا، يتم تنفيذ إجراءات تحت التخدير العام لتقليل ألم الحيوان. سيكون هذا النموذج في الدجاج، وأكثر ملاءمة من الإدارة عن طريق الفم لمقارنة بيرفرنجنز جيم- إجهاد القدرة الإمراضية لأن هناك حاجة إلى عدد أقل من الحيوانات، وتلزم لا العوامل المهيئة للحث على هذا المرض، ويتم التحكم في الألم بالمسكنات . نموذج الحلقة الواصلة المعوية وصف ضعيف في الدجاج وتوحيد ضروري للاستخدام الأمثل لها. هذه المخطوطة يوفر جميع الخطوات اللازمة لإنشاء العديد من الحلقات الواصلة المعوية في الدجاج ويجمع معلومات عن النقاط الحرجة للحصول على نتائج صحيحة.

ويرد في الشكل 1تخطيطي للحلقات المعوية 9 و 8 إينتيرلوبس. في هذا النموذج، يتم إنشاء مجموعة الحلقات 9 و 8 إينتيرلوبس مع الحروف البسيطة. حلقة تتألف من الحروف الدانية والبعيدة متباعدة من 2 سم يقاس من حرف مزدوج الدانية. اثنين من الحلقات المتجاورة مفصولة إينتيرلوب ?...

Watch this Scientific Journal Video about A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence at JoVE.com

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

نقدم هنا بروتوكولا لإنشاء 'الحلقات الواصلة المعوية' جراحيا في الأمعاء الصغيرة الدجاج. يسمح هذا الإجراء للمقارنة بين سلالات كلوستريديوم بيرفرنجنز متعددة بضراوة في الموقع في مضيف واحد. ملحوظة هذا الأسلوب يقلل من عدد الدجاج اللازمة عادة لتجارب مماثلة في فيفو .

نموذج حلقة معوية الواصلة في الدجاج الحرة تخديره الممرض محددة لدراسة كلوستريديوم بيرفرنجنز الفوعة

Necrotic enteritis was studied in chickens using various in vivo infection models. Most of these use a combination of predisposing factors, such as ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال أبحاث التهاب الأمعاء النخري للدجاج. مثل مقارنة الفوعة من سلالات Clostridium perfringens محددة تسبب هذا المرض. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يقلل بشكل ملحوظ من عدد الدجاج الضروري عادة لتجارب الأجواء المتشابهة.في حين أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في إمكانات الفوعة من سلالات Perfringens كلوستريديوم، فإنه يمكن أيضا أن تطبق على مسببات الأمراض المعوية الأخرى مثل كلوستريديوم difficile، أو السالمونيلا enterica. عموما، سوف الأفراد الجدد لهذه الطريقة النضال لأن العمليات الجراحية يحتاج إلى تدريب محدد ويجب أن يتم فقط من قبل أولئك الذين اكتسبوا مهارات مثل خياطة، وتقنيات قبل التجربة. بعد تخدير 10 أسابيع محددة ممرضة محددة الدجاج leghorn الحرة، وإعداد شاشات لقياسات حيوية والبدء في إزالة يدويا الريش من البطن عن طريق الجر لطيف.بعد ذلك، فرك موقع الجراحة باستخدام جلوكونات الكلورهيكسيدين مع فرشاة شعيرات ناعمة. فرك بلطف الجلد من المركز إلى المحيط لمدة خمس دقائق دون عكس مسار. ثم, تنفيذ ثلاثة ممرات بالتناوب على موقع الجراحة مع حل غلوكونات الكلورهيكسيدين والكحول الأيزوبروبيل باستخدام الشاش المعقم.مرة أخرى، انتقل من المركز إلى المحيط، ثم، ستائر الدجاج. تبدأ بفتح الستائر فوق موقع الجراحة، ثم جعل شق الجلد في خط الوسط منخفضة على شكل L مع مشرط رقم ثلاثة، بدءا من حضن سنتيمتر واحد إلى القص، وتنتهي في القرنية سنتيمتر واحد إلى cloicha. بعد ذلك، استمر في عمودي شق على شكل حرف L على الأول عن طريق القيام بشق ثان يبدأ في نهاية عناق الشق الأول ويستمر خمسة سنتيمترات إلى الجانب الأيسر من البطن باتباع خط الحوض.هذا الافتتاح سوف يسمح بسهولة استخراج الأمعاء. بعد ذلك، افتح عضلات الصفاق والبطن باستخدام نفس النمط على شكل حرف L للوصول إلى تجويف البطن. سوف تتعرض الآن الحويصلات الهوائية ويجب أن تبقى رطبة باستخدام الشاش المحلى المنقوع.بعد ذلك ، أدخل هوك Snook spay في تجويف البطن باتباع جدار البطن الأيسر والعمل على ربط حول الحويصلات الهوائية البطنية لاستخراج الأمعاء. ثم، وذلك باستخدام الشاش الجاف، ومواصلة التزيين بلطف الأمعاء لفضح Jejunum. تنتشر خارج الأمعاء والاحتفاظ بها رطبة مع رش متكررة مع المالحة وعن طريق تغطيتها مع الشاش المبلل المنقوع.من المهم أن تكون لطيف جدا في حين أخذ الأمعاء بسبب التوتر المفرط يمكن أن تمزق الأوعية mesenteric التي قد تؤدي إلى آفات نقص تروية الأمعاء وتهين إلى حد كبير نتيجة الإجراء. بعد الأمعاء الخارج، وجعل سلسلة من الحلقات في الأمعاء ابتداء من Jejunum. يمكن استخدام كل حلقة لعلاج مختلف.في Jejunum القريبة، ضع رباط بسيط مع مادة متعددة الألياف الاصطناعية للامتصاص الاصطناعية مع تجنب ربط الأوعية الرئيسية المينتونية. بعد ذلك، ضع رباطًا ًا ً فصّلاً على بعد سنتيمترين من الرباط القريب لإكمال الحلقة الأولى. يجب أن تكون جميع الأربطة القريبة والمسافات متباعدة بنحو سنتيمترين.كل زوج من الأربطة يجعل حلقة، وهو جزء محكم. بعد ذلك، إنشاء interloop أو قطعة من الأمعاء بين الحلقات. ضع رابطة بسيطة نصف سنتيمتر على حدى إلى الرباط الثنية للحلقة الأولى.هذا الربط هو في منتصف interloop وسوف تقلل من التلوث عبر ممكن بين الحلقات. الآن ، ومواصلة نمط خلق حلقة أخرى نصف سنتيمتر aborely من ربطة عنق interloop. هنا، يتم إنشاء تسع حلقات وثمانية interloops تغطي 26 سنتيمترا من الأمعاء.يمكن ضبط عدد الحلقات حسب الحاجة. المقبل، والمضي قدما في حقن سلالة من Perfringens كلوستريديوم في الحلقات. في الجانب المضاد للميناتاريا من الحلقة ، استخدم إبرة قياس 26 بزاوية 45 درجة لحقن 0.2 ملليلتر من محلول BHI ، يحتوي على مليون وحدة مستعمرة تشكل البكتيريا في مرحلة نمو منتصف الجلد.في هذه الحالة، مع تسع حلقات، يتم حقن خمس سلالات مختلفة في حلقات بالتناوب مع الحلقات المتدخلة حقنها مع السيارة وحدها كضوابط سلبية. بعد حقن مسببات الأمراض ، استبدل بلطف الأمعاء إلى منطقة الظهر في تجويف البطن تحت الحويصلات الهوائية. ثم أغلق تجويف البطن.خياطة البريتوني وعضلات البطن على طول الحوض مع نمط خياطة مستمرة بسيطة باستخدام مادة متعددة الألياف الاصطناعية للامتصاص. الاستمرار عن طريق خياطة البريتون وعضلات البطن من القص إلى كليش باستخدام خيوط مستمرة بسيطة. المقبل، خياطة الجلد إغلاق باستخدام مادة متعددة الألياف الاصطناعية متعدد الألياف ونمط بسيط مستمر.أولا، خياطة على طول الحوض، ثم خياطة من القص إلى كليش. بعد إغلاق الشقوق، والحفاظ على الدجاج تحت التخدير العام مع الاستخدام السليم للمسكنات لتقليل آلام الحيوان خلال وقت العدوى. مواصلة مراقبة التخدير لضمان مستوى التخدير الكافي.بعد المبلغ المطلوب من وقت العدوى، مثل سبع ساعات في التجربة الحالية، euthanize الطيور وجمع الأنسجة المعوية. باستخدام مشرط رقم ثلاثة، وقطع من نصف إلى مقطع حلقة سنتيمتر واحد. ثم، نقل القسم إلى 10٪ Formalin لتثبيت بين عشية وضحاها ومزيد من تحليل الهدولوجي.ثم، استخدم نفس شفرة مشرط على نفس الحلقة لقطع ما تبقى من الحلقة ونقل تلك الأنسجة إلى أنبوب دقيق لعزل البكتيريا. كرر هذا الإجراء لكل حلقة باستخدام شفرة مشرط جديدة في كل مرة. بعد سبع ساعات من الحقن ، تحتوي حلقة الأمعاء التي يتم حقنها بوسيلة معقمة للتحكم على حد فرشاة مخاطية سليمة مع عدم وجود نخر.احتقان خفيف في الطبقات المعوية من شرائح ليس من غير المألوف. سبع ساعات بعد الحقن مع الممرض، كلوستريديوم perfringens، وتتآكل نصائح الزغب مع مواقع دخول نخرية المحيطة نصائح. ثم المواد النخرية المحيطة الزغب، وهناك مجموعات من البكتيريا على شكل قضيب كبير.في بعض الأحيان نخر هو بسبب سوء التنفيذ الإجرائية ويمكن أن يساء تفسيره على أنها آفات تنتجها البكتيريا. علامات تنبئ هي عدم وجود البكتيريا في قسم النسيج. أيضا ، يتم توسع الأوعية الدموية في الطبقة العضلية بشدة من تراكم العديد من الكريات الحمراء المتحللة التي تدل على احتقان الأوعية الدموية.كان هذا بسبب الأوعية الدموية الميسنتة التي من المرجح أن تكون مُلَكّلة للقيام بإجهاد جسدي مفرط على الأمعاء. يمكن التعرف بسهولة على الحلقات الإقفاريّة المجهرية أثناء العمليات الجراحية. بعد احتقان الأوعية الدموية الشديدة بعد بضع دقائق من الرباط، وسوف يكون سيروزا الأزرق الداكن بدلا من التلوين الوردي المحمر العادي.بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إنشاء حلقات الأمعاء متعددة في نموذج الدجاج عن طريق وضع الأربطة على الأمعاء. مرة واحدة يتقن العمليات الجراحية، باستثناء وقت العدوى، يمكن أن يتم في أقل من ثلاث ساعات، إذا تم تنفيذها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن نتذكر للحفاظ على الدجاج تحت التخدير العميق للسيطرة على الألم ومراقبة العلامات الحيوية خلال جميع الإجراءات، بما في ذلك الجزء الجراحي وبعد وقت العدوى.بعد هذا الإجراء أو أساليب مثل العزل البكتيري، وتحديد مستقيم مثل الكشف الجيني عن طريق PCR يمكن أن يتم من أجل الإجابة على الأسئلة الخارجية مثل الانتعاش وتحديد مسببات الأمراض حقن الأولية. بعد هذا التطور، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال Clostridium perfringens التسبب في الأمراض لاستكشاف التهاب الأمعاء النخري في الدجاج. لا تنسى أن العمل مع الحيوانات الحية يمكن أن يكون متغير للغاية.وينبغي دائما الاحتياطات مثل الرصد التخدير المستمر للدجاج أن يتم أثناء تنفيذ هذا الإجراء.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

المؤشرات الحيوية في نموذج حيواني لكشف الاقتران العصبية، الدموية، والسلوكية للPTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

وظيفية تقييم الحركة المعوية والتهاب الأمعاء الجدار في القوارض: التحليلات في نموذج موحد من التلاعب المعوية

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

والإنسان<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; تصلب الشرايين البلاك نموذج لدراسة علم الأحياء الآفات

Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease of the vasculature. There are various methods to study the inflammatory compound in atherosclerotic ...

Facial Nerve Axotomy in Mice: A Model to Study Motoneuron Response to Injury

الوجه Axotomy العصب في الفئران: نموذج لدراسة الاستجابة العصبون الحركي للإصابة

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

نموذج الفئران من المعوية الإسكيمية-ضخه إصابة

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

الوريد الإعتراض نموذج: نموذج مناسب لدراسة الالتفافية الكسب غير المشروع الإنفتاح

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

A Model of Free Tissue Transfer: The Rat Epigastric Free Flap

نموذج من حر نقل الأنسجة: الجرذ شرسوفي الحرة رفرف

Free tissue transfer has been increasingly used in clinical practice since the 1970s, allowing reconstruction of complex and otherwise untreatable defects ...

Intestinal Stem Cell Isolation and Culture in a Porcine Model of Segmental Small Intestinal Ischemia

عزل الخلايا الجذعية المعوية والثقافة في نموذج الخنزير من المجزأ الاسكيمية الأمعاء الصغيرة

Intestinal ischemia remains a major cause of morbidity and mortality in human and veterinary patients. Many disease processes result in intestinal ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

متساوي القياس كونتراكتيليتي القياس الشريان المساريقي العلوي الماوس باستخدام أسلاك ميوجرافي

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

نموذج الإصابة بالتبريد لدراسة احتشاء عضلة القلب في الماوس

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we ...