Name: a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence
Uploaded: 2018-10-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af stolen i fjerkræ forskning (M. Boulianne) fra fakultetet for veterinærmedicin af Université de Montréal. DRs. Boulianne og overordnede udviklet modellen. DRs. Boulianne og overordnede udførte operationer. Dr. Burns bistået med at udvikle anæstesi protokol. Dr. Parent redigeret video og skrev manuskriptet. DRs Burns, Desrochers og Boulianne redigeret håndskriftet.

Alle procedurer med levende dyr brug blev godkendt af det etiske udvalg af Faculty of Veterinary Medicine, Université de Montréal (CÉUA, 'Comité d' éthique de l'utilisation des Animaux ").
1. overvejelser før operationen
<ol><li>Vælg 10 uger gamle specifikke patogen gratis (SPF) leghorn kyllinger til kirurgi. Bemærk: Deres vægt skal være mellem 1.0 og 1.2 kg.</li>
	<li>Trække foder 12t før procedurer til at tømme den tarmkanal.</li>
	<li>Forud for operationen, placere kylling...

<ol>
	<li>Vitale, A., Chiarotti, F., Alleva, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+animal+models+in+disease+research.">The use of animal models in disease research.</a> Rare diseases and orphan drugs. 2 (1), 1-4 (2015).</li><li>Uzal, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+to+study+the+pathogenesis+of+human+and+animal+Clostridium+perfringens+infections.">Animal models to study the pathogenesis of human and animal Clostridium perfringens infections.</a> Veterinary Microbiology. , (2015).</li><li>Bernier, G., Phaneuf, J. B., Filion, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+in+broiler+chickens.+III.+Study+of+the+factors+favoring+the+multiplication+of+Clostridium+perfringens+and+the+experimental+transmission+of+the+disease.">Necrotic enteritis in broiler chickens. III. Study of the factors favoring the multiplication of Clostridium perfringens and the experimental transmission of the disease.</a> Canadian Journal of Comparative Medicine. 41 (1), 112-116 (1977).</li><li>Al-Sheikhly, F., Truscott, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathology+of+necrotic+enteritis+of+chickens+following+infusion+of+broth+cultures+of+Clostridium+perfringens+into+the+duodenum.">The pathology of necrotic enteritis of chickens following infusion of broth cultures of Clostridium perfringens into the duodenum.</a> Avian Diseases. 21 (2), 230-240 (1977).</li><li>Wicker, D. L., Iscrigg, W. N., Trammell, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+control+and+prevention+of+necrotic+enteritis+in+broilers+with+zinc+bacitracin.">The control and prevention of necrotic enteritis in broilers with zinc bacitracin.</a> Poultry Science. 56 (4), 1229-1231 (1977).</li><li>Keyburn, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NetB,+a+new+toxin+that+is+associated+with+avian+necrotic+enteritis+caused+by+Clostridium+perfringens.">NetB, a new toxin that is associated with avian necrotic enteritis caused by Clostridium perfringens.</a> PLoS Pathog. 4 (2), e26 (2008).</li><li>Timbermont, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+of+Clostridium+perfringens+isolates+determines+the+ability+to+induce+necrotic+enteritis+in+broilers.">Origin of Clostridium perfringens isolates determines the ability to induce necrotic enteritis in broilers.</a> Comp Immunol Microbiol Infect Dis. 32 (6), 503-512 (2009).</li><li>Paradis, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+avilamycin+for+the+prevention+of+necrotic+enteritis+caused+by+a+pathogenic+strain+of+Clostridium+perfringens+in+broiler+chickens.">Efficacy of avilamycin for the prevention of necrotic enteritis caused by a pathogenic strain of Clostridium perfringens in broiler chickens.</a> Avian Pathol. 45 (3), 365-369 (2016).</li><li>Valgaeren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lesion+development+in+a+new+intestinal+loop+model+indicates+the+involvement+of+a+shared+Clostridium+perfringens+virulence+factor+in+haemorrhagic+enteritis+in+calves.">Lesion development in a new intestinal loop model indicates the involvement of a shared Clostridium perfringens virulence factor in haemorrhagic enteritis in calves.</a> Journal of Comparative Pathology. 149 (1), 103-112 (2013).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+C-terminal+domain+of+Clostridium+perfringens+alpha+toxin+as+a+vaccine+candidate+against+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">The C-terminal domain of Clostridium perfringens alpha toxin as a vaccine candidate against bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> Vet Res. 47 (1), 52 (2016).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxin-neutralizing+antibodies+protect+against+Clostridium+perfringens-induced+necrosis+in+an+intestinal+loop+model+for+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">Toxin-neutralizing antibodies protect against Clostridium perfringens-induced necrosis in an intestinal loop model for bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> BMC Vet Res. 12 (1), 101 (2016).</li><li>Parent, E., Archambault, M., Charlebois, A., Bernier-Lachance, J., Boulianne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chicken+intestinal+ligated+loop+model+to+study+the+virulence+of+Clostridium+perfringens+isolates+recovered+from+antibiotic-free+chicken+flocks.">A chicken intestinal ligated loop model to study the virulence of Clostridium perfringens isolates recovered from antibiotic-free chicken flocks.</a> Avian Pathol. 46 (2), 138-149 (2017).</li><li>Janvilisri, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+differential+proteomes+of+Clostridium+difficile+in+the+pig+ileal-ligated+loop+model.">Temporal differential proteomes of Clostridium difficile in the pig ileal-ligated loop model.</a> PLoS One. 7 (9), e45608 (2012).</li><li>Aabo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+in+vivo+model+for+study+of+intestinal+invasion+by+Salmonella+enterica+in+chickens.">Development of an in vivo model for study of intestinal invasion by Salmonella enterica in chickens.</a> Infection and Immunity. 68 (12), 7122-7125 (2000).</li><li>Meurens, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+immune+response+following+Salmonella+enterica+subspecies+enterica+serovar+Typhimurium+infection+in+porcine+jejunal+gut+loops.">Early immune response following Salmonella enterica subspecies enterica serovar Typhimurium infection in porcine jejunal gut loops.</a> Vet Res. 40 (1), 5 (2009).</li><li>Gerdts, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+intestinal+'loops'+provide+an+in+vivo+model+to+analyse+multiple+mucosal+immune+responses.">Multiple intestinal 'loops' provide an in vivo model to analyse multiple mucosal immune responses.</a> J Immunol Methods. 256 (1-2), 19-33 (2001).</li><li>Wade, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adherent+abilities+of+Clostridium+perfringens+strains+are+critical+for+the+pathogenesis+of+avian+necrotic+enteritis.">The adherent abilities of Clostridium perfringens strains are critical for the pathogenesis of avian necrotic enteritis.</a> Vet Microbiol. 197, 53-61 (2016).</li><li>Cooper, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+for+chickens+of+Clostridium+perfringens+isolated+from+poultry+and+other+sources.">Virulence for chickens of Clostridium perfringens isolated from poultry and other sources.</a> Anaerobe. 16 (3), 289-292 (2010).</li><li>Cooper, K. K., Songer, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+of+Clostridium+perfringens+in+an+experimental+model+of+poultry+necrotic+enteritis.">Virulence of Clostridium perfringens in an experimental model of poultry necrotic enteritis.</a> Veterinary Microbiology. 142 (3-4), 323-328 (2010).</li><li>Chalmers, G., Bruce, H. L., Toole, D. L., Barnum, D. A., Boerlin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+potential+in+a+model+system+using+Clostridium+perfringens+isolated+from+field+outbreaks.">Necrotic enteritis potential in a model system using Clostridium perfringens isolated from field outbreaks.</a> Avian Diseases. 51 (4), 834-839 (2007).</li></ol>

Tarm sløjfer modeller er blevet beskrevet i adskillige arter at studere vært-patogen interaktion og patogenese af sygdomme forårsaget af forskellige intestinal patogener, såsom Clostridium perfringens, Clostridium difficile og Salmonella enterica7,9,13,14,15. Det er også blevet brugt til at analysere den slimhinde immunrespons<s...

Anvendelsen af dyremodeller for at studere smitsomme sygdomme hos mennesker og dyr er et centralt værktøj i vurderingen af virulens faktorer regulering patogenesen af en bestemt tilstand samt at udarbejde strategier for at forebygge eller helbrede sygdomme1. Trods adskillige fordele ved at bruge dyremodeller for at studere forskellige sygdomme, opstår etiske bekymringer med hensyn til denne praksis. Forskere skal minimere brug af dyr samtidig at opnå væsentlige og valide resultater. Begrebet de 3 Rs principper (erstatte, begrænse og raffinere) blev udarbejdet for at sikre, at dyrevelfærd blev behandlet i sådanne forsøg. I kylling nekrotisk enteritis undersøgelser, der i vivo kylling modeller bruges til at undersøge ætiologi, forebyggelse og behandling af denne tilstand2,3,4,5. Patogene stammer af C. perfringens bærer specifikke virulens faktorer, såsom NetB toksin6, gives til at forårsage nekrotisk enteritis hos kyllinger7. Udskiftning princippet er derfor vanskeligt at opnå i sådanne tilfælde som disse virulens faktorer ikke kan være så kritisk i andre dyrearter. De fleste modeller for nekrotisk enteritis hos kyllinger bruger en kombination af risikofaktorer, såsom coccidiose og ændret kost for at fremkalde nekrotisk enteritis efterfulgt af sonde af bouillon kultur som indeholder store mængder af C. perfringens2. Disse modeller vil fremkalde sygdom hos et stort antal kyllinger, og dødeligheden kan være vigtigt i sådanne forsøg8, hvilket giver anledning til bekymringer om principperne om reduktion og raffinement i dyreforsøg.
Tarm sammenskrevne sløjfer modeller er et ønskeligt alternativ til studiet af sygdomme forårsaget af intestinal patogener med hensyn til princippet om reduktion og raffinement. I disse modeller, er intestinal segmenter kaldet 'loops' lavet ved at placere ligaturer langs den tarmkanal til at danne selvstændige og hermetiske rum hvor patogener kan injiceres alene9 eller med andre molekyler, som vaccine kandidater 10 , 11. patogener af interesse er placeret i tæt kontakt med de tarmcellerne og efter et par timers tid, infektion, intestinal prøver kan inddrives for yderligere analyse. Dette tillader brug af flere behandling og kontrolgrupper i samme dyr. Statistiske analyse kan udføres med gentagne foranstaltninger modeller, som øger styrken af forskelsbehandling mellem grupper og reducerer antallet af nødvendige kyllinger i forhold til oral sonde forsøg. Også, kirurgiske procedurer og efterfølgende infektion gange udføres under kontinuerlig generel anæstesi og analgesi, dermed minimere den animalske smerte. Lukket kredsløb ligations er en ideel skabelon for at reducere vært numre og skabe et mere humant system i dyreforsøg.
Tarm sammenskrevne sløjfer modeller er godt beskrevet i forskellige arter, som kalve, kaniner og mus2,9, men dårligt beskrevet i kyllinger7. For optimal udnyttelse af denne kirurgiske model er korrekt teknik og udførelse afgørende for oprettelsen af sammenskrevne intestinal loops til at undgå skader på tarm integritet. Målet med dette manuskript er at beskrive en trinvis metode til oprettelse af flere intestinal sløjfer i en kylling model. Denne teknik er begrænset af kirurgen dygtighed og erfaring, som nøjagtige procedurer er afgørende for projektets succes.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>EZ-Scrub 747</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td></td>
			<td>4% chlorhexidine gluconate detergent impregnated sterile brush. No catalog number available. Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/infection-prevention/surgical-hand-scrubs/ez-scrub-preoperative-surgical-scrub-brushes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl alcohol 70% USP 4 L</td>
			<td>Commercial isopropyl alcohol</td>
			<td>P016IP70</td>
			<td>Web address: http://www.comalc.com/products/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorexidine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>282227-1G</td>
			<td>Chlorhexidine gluconate solution, must be diluted to 4%. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/282227?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI8vHr4_OY1wIV3rrACh2ZWQKuEAAYAiAAEgLKx_D_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Drape Small (27 inch x 24 inch) with 3 x 6 inch Fenestration</td>
			<td>Veterinary Specialty Products</td>
			<td>32724</td>
			<td>Web address: http://www.vetspecialtyproducts.com/index.cfm?fuseaction=ecommercecatalog.detail&#38;productgroup_id=15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades #3</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>301</td>
			<td>Web address: https://www.swann-morton.com/product/16.php</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline NaCl 0.9%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8776-100ML</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8776?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl 3-0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>D9003</td>
			<td>Polyglactin multifilament absorbable suture material. Web address: http://www.ethicon.com/healthcare-professionals/products/wound-closure/absorbable-sutures/coated-vicryl-polyglactin-910-suture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1 ml with 26G needle</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td>329652</td>
			<td>Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/diabetes-care/insulin-syringes/bd-1-ml-conventional-insulin-syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Heart Infusion</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>1104930500</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/110493?lang=fr&#38;region=CA&#38;cm_sp=Insite-_-prodRecCold_xorders-_-prodRecCold2-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tube</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9661-500EA</td>
			<td>Microcentrifuge tube. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t9661?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI-YizzfiY1wIVRkCGCh30SQjuEAAYAiAAEgLK5fD_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, buffered neutral, 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td>Ratio tissue : formalin of 1: 10 for adequate fixation. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht501128?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clostridium perfringens strains</td>
			<td>Universit&#233; de Montr&#233;al, Chaire en recherche avicole</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Specific to each laboratory, available upon request to correspondant author</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence

Nekrotisk enteritis blev studeret i kyllinger ved hjælp af forskellige i vivo infektion modeller. De fleste af disse bruger en kombination af disponerende faktorer, såsom coccidiose og kost, med sonde eller administration via foder ved hjælp af Clostridium perfringens. I disse modeller kræver sammenligning af flere C. perfringens stammer for virulens undersøgelser et stort antal af værter til at opnå betydelige resultater. Dødelighed i løbet af undersøgelsen kan være høje afhængigt af den eksperimentelle model, dermed øge etiske bekymringer vedrørende dyrevelfærd i forskning. Udviklingen af nye infektion modeller kræver færre dyr at studere patogenese, endnu giver statistisk signifikant og valide resultater, er vigtigt at reducere brug af dyr i forskning. Intestinal sammenskrevne loop modeller har været brugt til at studere clostridier infektioner i forskellige arter såsom mus, kaniner og kalve. Efter kirurgiske procedurer til at oprette sammenskrevne loop segmenter, C. perfringens stammer injiceres direkte i løkker til at etablere en tæt kontakt mellem bakterier og tarmslimhinden. Der tages prøver af tyndtarmen og luminale indhold ved afslutning af procedurerne efter et par timer. Flere bakteriestammer kan podes i hvert dyr, derfor reducere antallet af krævede fag i eksperimenter. Også, procedurerne udføres under generel anæstesi til at mindske dyrenes smerter. I kyllinger, ville denne model være mere passende end oral administration at sammenligne C. perfringens stamme patogenicitet, fordi færre dyr er nødvendig, ingen disponerende faktorer er nødvendige for at fremkalde sygdommen og smerter er kontrolleret af analgetika . Tarm sammenskrevne loop model er dårligt beskrevet i kyllinger og standardisering er afgørende for optimal brug. Håndskriftet indeholder alle de nødvendige trin for at oprette talrige intestinal sammenskrevne sløjfer i kyllinger og bringer oplysninger om de kritiske punkter at opnå gyldige resultater.

En skematisk af 9 intestinal sløjfer og 8 interloops er vist i figur 1. I denne model, ialt 9 sløjfer og 8 interloops er lavet med simple ligaturer. Et loop består af proksimale og distale ligaturer fordelt med 2 cm målt fra den proksimale ligatur. To tilstødende loops er adskilt af en interloop på 1 cm. For at mindske den mulige risiko for krydskontaminering mellem sløjfer af lækage fra en ligatur, placeres en interloop ligatur halvvejs fra den dista...

Watch this Scientific Journal Video about A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence at JoVE.com

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Her præsenterer vi en protokol for at kirurgisk oprette intestinal sammenskrevne sløjfer i kylling små tarme. Denne procedure giver mulighed for sammenligning af flere Clostridium perfringens stammer virulens i situ i en enkelt vært. Denne metode reducerer markant antallet af kyllinger normalt nødvendigt for lignende i vivo eksperimenter.

En sammenskrevne Intestinal Loop Model i bedøvede specifikke patogen gratis kyllinger at studere Clostridium Perfringens virulens

Necrotic enteritis was studied in chickens using various in vivo infection models. Most of these use a combination of predisposing factors, such as ...

Denne metode kan hjælpe med at besvare centrale spørgsmål inden for Kylling Nekrotisk Enteritis forskning. Såsom at sammenligne virulens af specifikke Clostridium perfringens stammer forårsager denne sygdom. Den største fordel ved denne teknik er, at det bemærkelsesværdigt reducerer antallet af kyllinger normalt er nødvendige for lignende ambivore eksperimenter.Mens denne metode kan give indsigt i virulens potentiale clostridium perfringens stammer, det kan også anvendes på andre tarmpatogener såsom Clostridium difficile, eller Salmonella enterica. Generelt, personer nye til denne metode vil kæmpe, fordi kirurgiske procedurer har brug for særlig uddannelse og må kun udføres af dem, der har erhvervet færdigheder såsom suturering, en teknikker forud for forsøget. Efter bedøvelse af en 10 uger gammel specifik patogen fri benhorn kylling, oprette skærme til vitale målinger og begynde manuelt at fjerne fjer fra maven ved blid trækkraft.Dernæst krat det kirurgiske sted ved hjælp af Chlorhexidine gluconat med en blød børste. Skrub forsigtigt huden fra midten til periferien i fem minutter uden at vende kurs. Derefter udføre tre vekslende passager på operationsstedet med Chlorhexidin gluconat opløsning og Isopropyl alkohol ved hjælp af sterile gazer.Igen, gå fra centrum til periferien, så drapere kyllingen. Begynd med at åbne drapere over operationsstedet, derefter lave en L-formet lav midline hud snit med en nummer tre skalpel, starter en centimeter kæle til brystbenet, og slutter på en centimeter kraniel til cloicha. Fortsæt derefter det L-formede snit vinkelret på det første ved at gøre et andet snit, der starter ved kæleenden af det første snit, og fortsæt fem centimeter til venstre side af maven ved at følge bækkenlinjen.Denne åbning vil give let udvinding af tarmene. Dernæst åbne bughinde og mavemuskler ved hjælp af samme L-formet mønster for at få adgang til bughulen. Luftsækkene vil nu blive eksponeret og skal holdes fugtige ved hjælp af saltvand gennemblødt gaze.Dernæst indsætte en Snook spay krog i bughulen ved at følge den venstre bugvæggen og arbejder krogen omkring abdominal luft sække til at udtrække tarmene. Derefter, ved hjælp af tør gaze, fortsætte forsigtigt exteriorizing tarmene at udsætte Jejunum. Spred tarmene og holde dem fugtige med hyppig sprøjtning med saltvand og ved at dække dem med saltvand gennemblødt gaze.Det er vigtigt at være meget blid, mens du tager ud tarme, fordi overdreven spænding kan briste mesenteric fartøjer, som kan føre til intestinal iskæmisk læsioner og i høj grad kompromittere resultatet af proceduren. Efter exteriorizing tarmene, lave en række sløjfer i tarmene begynder i Jejunum. Hver sløjfe kan bruges til forskellig behandling.I den proksimale Jejunum, placere en simpel ligatur med en Polyglutamin Multifilament syntetisk absorberbare materiale og samtidig undgå ligatur af store mesenteriske fartøjer. Dernæst skal du placere en distal ligatur to centimeter væk fra den proksimale ligatur for at fuldføre den første løkke. Alle proksimale og distale ligaturer skal være fordelt med omkring to centimeter.Hvert par ligaturer gør en løkke, som er en hermetisk segment. Dernæst skal du oprette en interloop eller et segment af tarmen mellem løkkerne. Placer en simpel ligatur en halv centimeter aborely til den distale ligatur af den første sløjfe.Denne ligatur er midt i interloop og vil mindske mulig krydskontaminering mellem sløjfer. Nu fortsætte mønsteret for at skabe en anden løkke en halv centimeter aborely fra interloop ligatur. Her skabes der ni sløjfer og otte interloops, der dækker 26 centimeter tarm.Antallet af løkker kan justeres efter behov. Fortsæt derefter med at indsprøjte clostridium perfringens i løkkerne. Ind i den anti-mesenteric side af løkken, skal du bruge en 26 gauge nål i en 45 graders vinkel til at injicere 0,2 milliliter BHI opløsning, der indeholder en million koloni danner enheder af bakterier i midlog vækstfase.I denne situation, med ni sløjfer, injiceres fem forskellige stammer i skiftende sløjfer med de mellemliggende sløjfer injiceres med køretøjet alene som negative kontroller. Efter injektion af patogener, forsigtigt erstatte tarmkanalen til rygområdet af bughulen under luftsækkene. Luk derefter bughulen.Sutur bughinden og mavemuskler langs bækkenet med en simpel kontinuerlig sutur mønster ved hjælp af en Polyglutamine Multifilament syntetisk absorberbare materiale. Fortsæt ved at suturere bughinden og mavemusklerne fra brystbenet til cloiche ved hjælp af simple kontinuerlige suturer. Dernæst sutur huden tæt ved hjælp af en Polyglutamin Multifilament syntetisk materiale og en simpel kontinuerlig mønster.Først sutur langs bækkenet, derefter sutur fra brystbenet til cloiche. Efter lukning af indsnit, holde kyllingen under generel anæstesi med korrekt brug af analgetika for at minimere dyrs smerter i løbet af infektionen tid. Fortsætte anæstesiovervågningen for at sikre et tilstrækkeligt anæstesiniveau.Efter den ønskede mængde infektion tid, såsom syv timer i det nuværende eksperiment, aflive fuglen og indsamle tarmvæv. Ved hjælp af en nummer tre skalpel, skåret ud en halv til en centimeter loop sektion. Derefter overføre afsnittet til 10% Formalin for natten fiksering og yderligere histopatologisk analyse.Brug derefter den samme skalpelkling på samme løkke til at skære resten af løkken ud og overføre dette væv til et mikrosarmeret rør til isolering af bakterierne. Gentag denne procedure for hver sløjfe ved hjælp af en ny skalpelklinge hver gang. Syv timer efter injektion, en tarm løkke injiceres med en kontrol sterilt medium har en intakt slimhinde børste kant uden nekrose.Mild overbelastning i tarmlagene i segmenterne er ikke ualmindeligt. Syv timer efter injektion med patogenet, Clostridium perfringens, er villi tips eroderet med nekrotiske indgangssteder omkring spidserne. Og så nekrotisk materiale omkring villi, der er klynger af store stangformede bakterier.Sommetider nekrose skyldes dårlig proceduremæssig udførelse og kan misforstås som læsioner produceret af bakterier. En afslørende tegn er fraværet af bakterier i histologiske afsnit. Også, blodkarrene i det muskulære lag er alvorligt udvidet med ophobning af mange degenererende erythrocytter tegn på vaskulær overbelastning.Dette var forårsaget af ligated mesenteric blodkar, der sandsynligvis var ligated at gøre overdreven fysisk belastning på tarmene. Iskæmisk sløjfer kan let identificeres mikroskopisk under de kirurgiske procedurer. Efter svær vaskulær overbelastning et par minutter efter ligaturen, vil serosa være mørkeblå i stedet for sin normale lyserøde rødlige farve.Efter at have set denne video, bør du have en god forståelse af, hvordan du opretter flere tarmsløjfe i en kylling model ved at placere ligaturer på tarmene. Når mestrer de kirurgiske procedurer, undtagen infektion tid, kan gøres på mindre end tre timer, hvis det udføres korrekt. Mens du forsøger denne procedure, Er det vigtigt at huske at holde kyllingen under dyb anæstesi til at kontrollere smerten og overvåge vitale tegn under alle procedurer, herunder kirurgisk del og efter infektion tid.Efter denne procedure eller deres metoder som bakteriel isolation, og lige identifikation såsom gendetektion af PCR kan udføres for at besvare eksterne spørgsmål som nyttiggørelse og identifikation af den oprindelige injicerede patogen. Efter denne udvikling banede denne teknik en måde for forskere inden for Clostridium perfringens patogenese at udforske nekrotisk enteritis hos kyllinger. Glem ikke, at arbejde med levende dyr kan være yderst varierende.Og forholdsregler såsom kontinuerlig bedøvelse overvågning af kyllingen bør altid ske, mens du udfører denne procedure.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Biomarkører i en dyremodel for at afsløre Neurale, hæmatologisk, og adfærdsmæssige korrelater til PTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

Functional Assessment of tarmmotilitet og tarmvæggen Inflammation i Gnavere: Analyser i en standardiseret model af Intestinal Manipulation

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

En human<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Aterosklerotisk plaque Model til Studieinformationen Læsionssynligheden Biologi

Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease of the vasculature. There are various methods to study the inflammatory compound in atherosclerotic ...

Facial Nerve Axotomy in Mice: A Model to Study Motoneuron Response to Injury

Facial Nerve aksotomi i mus: en model til at studere motoneuron Reaktion på Skade

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Murin model af intestinal iskæmi-reperfusionsskade

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

Vein indskydning Model: En passende model til at studere Bypass Graft Åbenhed

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

A Model of Free Tissue Transfer: The Rat Epigastric Free Flap

En model af gratis Tissue Transfer: The Rat Epigastriske Gratis Flap

Free tissue transfer has been increasingly used in clinical practice since the 1970s, allowing reconstruction of complex and otherwise untreatable defects ...

Intestinal Stem Cell Isolation and Culture in a Porcine Model of Segmental Small Intestinal Ischemia

Tarm stamceller isoleret og kultur i et svin Model af Segmental lille Intestinal iskæmi

Intestinal ischemia remains a major cause of morbidity and mortality in human and veterinary patients. Many disease processes result in intestinal ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Isometrisk kontraktilitet måling af musen mesenterica arterie ved hjælp af Wire blodkar

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

En Kryoskade model til undersøgelse af myokardieinfarkt i mus

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we ...