Name: a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence
Uploaded: 2018-10-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence at JoVE.com

Dit werk werd gesteund door de stoel in pluimvee onderzoek (M. Boulianne) van de Faculteit Diergeneeskunde van de Université de Montréal. Drs. Boulianne en bovenliggende ontwikkelde het model. Drs. Boulianne en bovenliggende uitgevoerd de operaties. Dr. Burns bijgestaan bij de ontwikkeling van het protocol van de verdoving. Dr. Parent de video bewerkt en schreef het manuscript. Drs Burns, Desrochers en Boulianne bewerkt het manuscript.

Alle procedures met levende dieren gebruik werden goedgekeurd door de ethische commissie van de Faculteit Diergeneeskunde, Université de Montréal (CÉUA, 'Comité d' éthique de l'utilisation des Animaux').
1. overwegingen voor de operatie
<ol><li>Selecteer 10 weken oude specifieke pathogene vrije (SPF) Livorno kippen voor de operatie. Opmerking: Hun gewicht moet tussen 1,0 en 1,2 kg.</li>
	<li>Trekken de feed 12u voorafgaand aan de procedures voor het leegmaken van het darmkanaal.</li>...

<ol>
	<li>Vitale, A., Chiarotti, F., Alleva, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+animal+models+in+disease+research.">The use of animal models in disease research.</a> Rare diseases and orphan drugs. 2 (1), 1-4 (2015).</li><li>Uzal, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+to+study+the+pathogenesis+of+human+and+animal+Clostridium+perfringens+infections.">Animal models to study the pathogenesis of human and animal Clostridium perfringens infections.</a> Veterinary Microbiology. , (2015).</li><li>Bernier, G., Phaneuf, J. B., Filion, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+in+broiler+chickens.+III.+Study+of+the+factors+favoring+the+multiplication+of+Clostridium+perfringens+and+the+experimental+transmission+of+the+disease.">Necrotic enteritis in broiler chickens. III. Study of the factors favoring the multiplication of Clostridium perfringens and the experimental transmission of the disease.</a> Canadian Journal of Comparative Medicine. 41 (1), 112-116 (1977).</li><li>Al-Sheikhly, F., Truscott, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathology+of+necrotic+enteritis+of+chickens+following+infusion+of+broth+cultures+of+Clostridium+perfringens+into+the+duodenum.">The pathology of necrotic enteritis of chickens following infusion of broth cultures of Clostridium perfringens into the duodenum.</a> Avian Diseases. 21 (2), 230-240 (1977).</li><li>Wicker, D. L., Iscrigg, W. N., Trammell, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+control+and+prevention+of+necrotic+enteritis+in+broilers+with+zinc+bacitracin.">The control and prevention of necrotic enteritis in broilers with zinc bacitracin.</a> Poultry Science. 56 (4), 1229-1231 (1977).</li><li>Keyburn, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NetB,+a+new+toxin+that+is+associated+with+avian+necrotic+enteritis+caused+by+Clostridium+perfringens.">NetB, a new toxin that is associated with avian necrotic enteritis caused by Clostridium perfringens.</a> PLoS Pathog. 4 (2), e26 (2008).</li><li>Timbermont, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+of+Clostridium+perfringens+isolates+determines+the+ability+to+induce+necrotic+enteritis+in+broilers.">Origin of Clostridium perfringens isolates determines the ability to induce necrotic enteritis in broilers.</a> Comp Immunol Microbiol Infect Dis. 32 (6), 503-512 (2009).</li><li>Paradis, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+avilamycin+for+the+prevention+of+necrotic+enteritis+caused+by+a+pathogenic+strain+of+Clostridium+perfringens+in+broiler+chickens.">Efficacy of avilamycin for the prevention of necrotic enteritis caused by a pathogenic strain of Clostridium perfringens in broiler chickens.</a> Avian Pathol. 45 (3), 365-369 (2016).</li><li>Valgaeren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lesion+development+in+a+new+intestinal+loop+model+indicates+the+involvement+of+a+shared+Clostridium+perfringens+virulence+factor+in+haemorrhagic+enteritis+in+calves.">Lesion development in a new intestinal loop model indicates the involvement of a shared Clostridium perfringens virulence factor in haemorrhagic enteritis in calves.</a> Journal of Comparative Pathology. 149 (1), 103-112 (2013).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+C-terminal+domain+of+Clostridium+perfringens+alpha+toxin+as+a+vaccine+candidate+against+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">The C-terminal domain of Clostridium perfringens alpha toxin as a vaccine candidate against bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> Vet Res. 47 (1), 52 (2016).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxin-neutralizing+antibodies+protect+against+Clostridium+perfringens-induced+necrosis+in+an+intestinal+loop+model+for+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">Toxin-neutralizing antibodies protect against Clostridium perfringens-induced necrosis in an intestinal loop model for bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> BMC Vet Res. 12 (1), 101 (2016).</li><li>Parent, E., Archambault, M., Charlebois, A., Bernier-Lachance, J., Boulianne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chicken+intestinal+ligated+loop+model+to+study+the+virulence+of+Clostridium+perfringens+isolates+recovered+from+antibiotic-free+chicken+flocks.">A chicken intestinal ligated loop model to study the virulence of Clostridium perfringens isolates recovered from antibiotic-free chicken flocks.</a> Avian Pathol. 46 (2), 138-149 (2017).</li><li>Janvilisri, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+differential+proteomes+of+Clostridium+difficile+in+the+pig+ileal-ligated+loop+model.">Temporal differential proteomes of Clostridium difficile in the pig ileal-ligated loop model.</a> PLoS One. 7 (9), e45608 (2012).</li><li>Aabo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+in+vivo+model+for+study+of+intestinal+invasion+by+Salmonella+enterica+in+chickens.">Development of an in vivo model for study of intestinal invasion by Salmonella enterica in chickens.</a> Infection and Immunity. 68 (12), 7122-7125 (2000).</li><li>Meurens, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+immune+response+following+Salmonella+enterica+subspecies+enterica+serovar+Typhimurium+infection+in+porcine+jejunal+gut+loops.">Early immune response following Salmonella enterica subspecies enterica serovar Typhimurium infection in porcine jejunal gut loops.</a> Vet Res. 40 (1), 5 (2009).</li><li>Gerdts, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+intestinal+'loops'+provide+an+in+vivo+model+to+analyse+multiple+mucosal+immune+responses.">Multiple intestinal 'loops' provide an in vivo model to analyse multiple mucosal immune responses.</a> J Immunol Methods. 256 (1-2), 19-33 (2001).</li><li>Wade, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adherent+abilities+of+Clostridium+perfringens+strains+are+critical+for+the+pathogenesis+of+avian+necrotic+enteritis.">The adherent abilities of Clostridium perfringens strains are critical for the pathogenesis of avian necrotic enteritis.</a> Vet Microbiol. 197, 53-61 (2016).</li><li>Cooper, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+for+chickens+of+Clostridium+perfringens+isolated+from+poultry+and+other+sources.">Virulence for chickens of Clostridium perfringens isolated from poultry and other sources.</a> Anaerobe. 16 (3), 289-292 (2010).</li><li>Cooper, K. K., Songer, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+of+Clostridium+perfringens+in+an+experimental+model+of+poultry+necrotic+enteritis.">Virulence of Clostridium perfringens in an experimental model of poultry necrotic enteritis.</a> Veterinary Microbiology. 142 (3-4), 323-328 (2010).</li><li>Chalmers, G., Bruce, H. L., Toole, D. L., Barnum, D. A., Boerlin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+potential+in+a+model+system+using+Clostridium+perfringens+isolated+from+field+outbreaks.">Necrotic enteritis potential in a model system using Clostridium perfringens isolated from field outbreaks.</a> Avian Diseases. 51 (4), 834-839 (2007).</li></ol>

Intestinale lussen modellen zijn beschreven in vele soorten te bestuderen van host-pathogen interactions en pathogenese van ziekten veroorzaakt door verschillende intestinale ziekteverwekkers, zoals Clostridium perfringens, Clostridium difficile en Salmonella enterica7,9,13,14,15. Het is ook gebruikt voor het analyseren van de mucosa...

Het gebruik van dierlijke modellen om te studeren van besmettelijke ziekten bij mens en dier is een centraal instrument bij de beoordeling van virulentiefactoren regulering van de pathogenese van een bepaalde voorwaarde evenals aan het uitwerken van strategieën om te voorkomen of genezen van ziekten1. Ondanks de talrijke voordelen van het gebruik van dierlijke modellen om te studeren van diverse ziekten, ontstaan ethische bezwaren met betrekking tot deze praktijk. Onderzoekers moeten tot een minimum beperken dierlijke terwijl het verkrijgen van aanzienlijke en geldig resultaten. Het concept van de 3 Rs-beginselen (vervangen, verminderen en verfijnen) werd uitgewerkt om ervoor te zorgen dat sociale kwesties werden behandeld in dergelijke proeven. Kip necrotische enteritis studies, worden in vivo kip modellen gebruikt om te onderzoeken de etiologie, preventie en behandelingen van deze voorwaarde2,3,4,5. Pathogene stammen van C. perfringens uitvoering van specifieke virulentiefactoren, zoals de NetB toxine6, worden beheerd om het necrotische enteritis veroorzaken in kippen7. Het beginsel van vervanging is daarom moeilijk te bereiken in een dergelijk geval ook deze virulentiefactoren niet als kritiek op andere diersoorten mogen. De meeste modellen voor necrotische enteritis in kippen gebruik een combinatie van risicofactoren, zoals coccidiosis en veranderd dieet om te induceren necrotische enteritis gevolgd door middel van een maagsonde voor bouillon cultuur met grote aantallen C. perfringens2. Deze modellen zullen het opwekken van de ziekte in een groot aantal kippen kan, en sterfte belangrijk zijn in dergelijke proeven8, dus bezorgdheid over de vermindering en verfijning principes in het dierlijke onderzoek.
Intestinale ligaturen lussen modellen zijn een wenselijk alternatief voor de studie van ziekten veroorzaakt door intestinale ziekteverwekkers met betrekking tot het beginsel vermindering en verfijning. In deze modellen, worden intestinale segmenten genaamd 'lussen' gemaakt door het plaatsen van ligaturen langs het darmkanaal vormen van onafhankelijke en hermetische compartimenten waar ziekteverwekkers kunnen worden geïnjecteerd alleen9 of met andere moleculen, zoals vaccin kandidaten 10 , 11. de ziekteverwekkers van belang staan in nauw contact met de intestinale cellen en na een paar uur tijd van infectie, intestinale monsters kunnen worden teruggekregen voor verdere analyse. Hierdoor kan het gebruik van meerdere behandeling en controlegroepen in hetzelfde dier. Statistische analyse kan met herhaalde maatregelen modellen, die verhoogt de macht van de discriminatie tussen groepen en vermindert het aantal nodige kippen in vergelijking met mondelinge maagsonde proeven worden uitgevoerd. Ook worden chirurgische ingrepen en latere infectie tijden uitgevoerd onder continue narcose en Analgesie, dus het minimaliseren van de dierlijke pijn. Kringloop ligations zijn een ideale sjabloon voor vermindering van de nummers van de host en het creëren van een meer humane systeem in dierlijke onderzoek.
Intestinale ligaturen lussen modellen zijn ook beschreven in verschillende soorten, zoals kalveren, konijnen en muizen2,9, maar slecht in kippen7beschreven. Voor een optimaal gebruik van deze chirurgische model, zijn de juiste techniek en uitvoering zijn essentieel voor het creëren van ligaturen intestinale lussen om te voorkomen dat schade aan de intestinale integriteit. Het doel van dit manuscript is voor het beschrijven van een stap voor stap methode bij het creëren van meerdere intestinale lussen in een kip-model. Deze techniek wordt beperkt door de surgeon's vaardigheid en ervaring, zoals nauwkeurige procedures essentieel voor het succes van het project zijn.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>EZ-Scrub 747</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td></td>
			<td>4% chlorhexidine gluconate detergent impregnated sterile brush. No catalog number available. Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/infection-prevention/surgical-hand-scrubs/ez-scrub-preoperative-surgical-scrub-brushes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl alcohol 70% USP 4 L</td>
			<td>Commercial isopropyl alcohol</td>
			<td>P016IP70</td>
			<td>Web address: http://www.comalc.com/products/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorexidine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>282227-1G</td>
			<td>Chlorhexidine gluconate solution, must be diluted to 4%. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/282227?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI8vHr4_OY1wIV3rrACh2ZWQKuEAAYAiAAEgLKx_D_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Drape Small (27 inch x 24 inch) with 3 x 6 inch Fenestration</td>
			<td>Veterinary Specialty Products</td>
			<td>32724</td>
			<td>Web address: http://www.vetspecialtyproducts.com/index.cfm?fuseaction=ecommercecatalog.detail&#38;productgroup_id=15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades #3</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>301</td>
			<td>Web address: https://www.swann-morton.com/product/16.php</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline NaCl 0.9%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8776-100ML</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8776?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl 3-0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>D9003</td>
			<td>Polyglactin multifilament absorbable suture material. Web address: http://www.ethicon.com/healthcare-professionals/products/wound-closure/absorbable-sutures/coated-vicryl-polyglactin-910-suture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1 ml with 26G needle</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td>329652</td>
			<td>Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/diabetes-care/insulin-syringes/bd-1-ml-conventional-insulin-syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Heart Infusion</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>1104930500</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/110493?lang=fr&#38;region=CA&#38;cm_sp=Insite-_-prodRecCold_xorders-_-prodRecCold2-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tube</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9661-500EA</td>
			<td>Microcentrifuge tube. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t9661?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI-YizzfiY1wIVRkCGCh30SQjuEAAYAiAAEgLK5fD_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, buffered neutral, 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td>Ratio tissue : formalin of 1: 10 for adequate fixation. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht501128?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clostridium perfringens strains</td>
			<td>Universit&#233; de Montr&#233;al, Chaire en recherche avicole</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Specific to each laboratory, available upon request to correspondant author</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence

Necrotische enteritis werd bestudeerd bij kippen met behulp van verschillende in vivo infectie modellen. Een combinatie van predisponerende factoren zoals coccidiosis en voeding, de meeste van deze gebruiken met maagsonde of administratie via de feed met behulp van Clostridium perfringens. In deze modellen vereist de vergelijking van meerdere C. perfringens stammen voor virulentie studies een groot aantal hosts om significante resultaten te verkrijgen. Sterfte in de loop van de studie kunnen hoge afhankelijk van het experimentele model, vandaar de ethische bezorgdheid met betrekking tot het welzijn van dieren in het onderzoek. De ontwikkeling van nieuwe modellen van de infectie waarbij minder dieren te bestuderen pathogenese, nog het verkrijgen van statistisch significante en geldige resultaten, is belangrijk bij het terugdringen van dierlijke gebruik in onderzoek. Intestinale ligaturen lus modellen zijn gebruikt om de studie van clostridial infecties in verschillende soorten zoals muizen, konijnen en kalveren. Na chirurgische ingrepen om ligaturen lus segmenten te maken, C. perfringens stammen worden geïnjecteerd rechtstreeks in de lussen om een nauw contact tussen de bacteriën en de intestinale mucosa. Monsters van de dunne darm en luminal inhoud worden genomen bij de beëindiging van de procedures na een paar uur. Meerdere bacteriestammen kunnen worden geënt in elk dier, dus vermindering van het aantal vereiste onderwerpen in de experimenten. Ook de procedures worden uitgevoerd onder algehele narcose om dieren pijn te verminderen. Bij kippen zou dit model meer aangewezen dan orale toediening te vergelijken C. perfringens stam pathogeniteit omdat minder dieren nodig zijn, geen predisponerende factoren nodig zijn voor het opwekken van de ziekte en pijn wordt gecontroleerd door pijnstillers . Het model van de intestinale ligaturen lus is slecht beschreven is bij kippen en standaardisatie is essentieel voor het optimale gebruik ervan. Dit manuscript biedt alle nodige stappen om de talrijke intestinale ligaturen loops maken in kippen en brengt informatie van de kritieke punten om geldige resultaten te verkrijgen.

Een schematische voorstelling van de 9 intestinale loops en 8 interloops is afgebeeld in Figuur 1. In dit model, een totaal van 9 loops en 8 interloops worden gemaakt met eenvoudige ligaturen. Een lus bestaat uit proximale en distale ligaturen verdeeld door 2 cm, gemeten vanaf de ligatuur proximale. Twee aangrenzende lussen worden gescheiden door een interloop van 1 cm. Om te verminderen het risico van kruisbesmetting tussen lussen door lekkage van een ligatu...

Watch this Scientific Journal Video about A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence at JoVE.com

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Hier presenteren we een protocol om te 'intestinale ligaturen loops' in kip dunne darmen operatief te maken. Deze procedure kan voor het vergelijken van meerdere Clostridium perfringens stammen virulentie in situ in één host. Deze methode vermindert aanzienlijk het aantal kippen meestal nodig voor soortgelijke in vivo experimenten.

Een Model van de ligaturen intestinale lus in narcose van specifieke pathogenen vrije kippen te bestuderen van Clostridium Perfringens virulentie

Necrotic enteritis was studied in chickens using various in vivo infection models. Most of these use a combination of predisposing factors, such as ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van Chicken Necrotic Enteritis onderzoek. Zoals het vergelijken van de virulentie van specifieke Clostridium perfringens stammen die deze ziekte veroorzaken. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het opmerkelijk vermindert het aantal kippen meestal nodig voor soortgelijke ambivore experimenten.Hoewel deze methode inzicht kan geven in virulentiepotentieel van Clostridium perfringens stammen, kan het ook worden toegepast op andere darmpathogenen zoals Clostridium difficile, of Salmonella enterica. Over het algemeen zullen personen die nieuw zijn bij deze methode het moeilijk hebben omdat chirurgische ingrepen specifieke training nodig hebben en alleen worden uitgevoerd door degenen die vaardigheden hebben verworven, zoals hechten, een techniek voorafgaand aan het experiment. Na het anshesizing een 10 weken oude specifieke ziekteverwekker vrije beendoornkip, zet de monitors voor essentiële metingen op en begint met het handmatig verwijderen van de veren van de buik door zachte tractie.Vervolgens schrob de chirurgische site met chlorhexidine gluconaat met een zachte borstel. Schrob de huid voorzichtig vijf minuten van het midden naar de periferie zonder de koers om te draaien. Voer vervolgens drie afwisselende passages uit op de chirurgische plaats met chloorhexidine gluconaatoplossing en Isopropylalcohol met steriele gaasjes.Nogmaals, ga van het centrum naar de periferie, dan, draperen de kip. Begin met het openen van het laken boven de chirurgische site, maak dan een L-vormige lage middellijn huid incisie met een nummer drie scalpel, vanaf een centimeter knuffelen aan het borstbeen, en eindigend op een centimeter craniale aan de cloicha. Vervolg vervolgens de L-vormige incisie loodrecht op de eerste door een tweede incisie te doen vanaf het knuffeleinde van de eerste incisie en ga vijf centimeter verder naar de linkerkant van de buik door de bekkenlijn te volgen.Deze opening zal een gemakkelijke extractie van de darmen mogelijk maken. Open vervolgens het buikvlies en de buikspieren met hetzelfde L-vormige patroon om toegang te krijgen tot de buikholte. De luchtzakjes worden nu blootgesteld en moeten vochtig worden gehouden met zout geweekt gaas.Steek vervolgens een Snook spay haak in de buikholte door het volgen van de linker buikwand en het werken van de haak rond de buikluchtzakjes om de darmen te extraheren. Vervolgens, met behulp van droog gaas, blijven zachtjes exterioriseren van de darmen om de Jejunum bloot. Spreid de darmen uit en houd ze vochtig met frequent spuiten met Saline en door ze te bedekken met zoutoplossing gedrenkt gaas.Het is belangrijk om heel zacht te zijn tijdens het verwijderen van darmen, omdat overmatige spanning de mesenterische bloedvaten kan scheuren die kunnen leiden tot darm-ischemische laesies en de uitkomst van de procedure sterk in gevaar kunnen brengen. Na het exterioriseren van de darmen, maak een reeks lussen in de darmen te beginnen in het Jejunum. Elke lus kan worden gebruikt voor verschillende behandelingen.In het proximale Jejunum plaatst u een eenvoudige ligatuur met een Polyglutamine Multifilament synthetisch opneembaar materiaal terwijl u de ligatuur van grote mesenterische vaten vermijdt. Plaats vervolgens een distale ligatuur twee centimeter afstand van de proximale ligatuur om de eerste lus te voltooien. Alle proximale en distale ligaturen moeten worden verdeeld door ongeveer twee centimeter.Elk paar ligaturen maakt een lus, dat is een hermetisch segment. Maak vervolgens een interloop of een segment van de darm tussen de lussen. Plaats een eenvoudige ligatuur een halve centimeter aborely aan de distale ligatuur van de eerste lus.Deze ligatuur bevindt zich in het midden van de interloop en vermindert mogelijke kruisbesmetting tussen lussen. Nu, ga verder met het patroon van het creëren van een andere lus een halve centimeter aborely van de interloop ligatuur. Hier worden negen lussen en acht interloops gemaakt die 26 centimeter darmen bedekken.Het aantal lussen kan naar behoefte worden aangepast. Ga vervolgens verder met het injecteren van een stam van Clostridium perfringens in de lussen. Gebruik in de anti-mesenterische kant van de lus een 26-meter naald in een hoek van 45 graden om 0,2 milliliter BHI-oplossing te injecteren, met een miljoen kolonievormende eenheden van bacteriën in de midloggroeifase.In deze situatie, met negen lussen, worden vijf verschillende stammen geïnjecteerd in afwisselende lussen met de tussenliggende lussen geïnjecteerd met het voertuig alleen als negatieve controles. Na het injecteren van de ziekteverwekkers, vervang voorzichtig het darmkanaal naar het ruggebied van de buikholte onder de luchtzakjes. Sluit vervolgens de buikholte.Hecht het buikvlies en de buikspieren langs het bekken met een eenvoudig continu hechtpatroon met behulp van een Polyglutamine Multifilament synthetisch absorbeerbaar materiaal. Ga verder door het peritoneum en de buikspieren van het borstbeen aan de cloiche te hechten met behulp van eenvoudige continue hechtingen. Vervolgens hecht de huid nauw met behulp van een Polyglutamine Multifilament synthetisch materiaal en een eenvoudig continu patroon.Eerst hecht je langs het bekken, dan hecht je van het borstbeen tot de cloiche. Na het sluiten van de incisies, houd de kip onder algemene anesthesie met het juiste gebruik van pijnstillers om pijn bij dieren tijdens de infectietijd te minimaliseren. Blijf verdovingscontrole om een adequaat anesthesieniveau te garanderen.Na de gewenste hoeveelheid infectietijd, zoals zeven uur in het huidige experiment, euthanaseren de vogel en het verzamelen van de darmweefsels. Met behulp van een nummer drie scalpel, knip een halve tot een centimeter lus sectie. Breng vervolgens de sectie over naar 10%Formalin voor nachtelijke fixatie en verdere histopathologische analyse.Gebruik vervolgens hetzelfde scalpelblad op dezelfde lus om de rest van de lus uit te snijden en dat weefsel over te brengen naar een gemicrofundeerde buis voor isolatie van de bacteriën. Herhaal deze procedure voor elke lus met behulp van een nieuwe scalpel mes elke keer. Zeven uur na injectie heeft een darmlus geïnjecteerd met een controlesteriel medium een intacte slijmborstelrand zonder necrose.Milde congestie in de darmlagen van de segmenten is niet ongewoon. Zeven uur na injectie met de ziekteverwekker, Clostridium perfringens, villi tips worden uitgehold met necrotische entry sites rond de tips. En dan necrotisch materiaal rond de villi, zijn er clusters van grote staafvormige bacteriën.Soms necrose is te wijten aan slechte procedurele uitvoering en kan verkeerd worden geïnterpreteerd als laesies geproduceerd door bacteriën. Een veelbetekenende tekenen is de afwezigheid van bacteriën in de histologische sectie. Ook zijn de bloedvaten in de spierlaag ernstig verwijd door de accumulatie van veel degraderende erytrocyten die wijzen op vasculaire congestie.Dit werd veroorzaakt door ligated mesenteric bloedvaten die waarschijnlijk werden gebonden aan overmatige fysieke belasting op de darmen te doen. Ischemische lussen kunnen gemakkelijk microscopisch worden geïdentificeerd tijdens de chirurgische ingrepen. Na ernstige vasculaire congestie een paar minuten na de ligatuur, zal de serosa donkerblauw zijn in plaats van zijn normale roze roodachtige kleur.Na het bekijken van deze video, moet je een goed begrip van hoe je meerdere darmlussen in een kip model te maken door het plaatsen van ligaturen op de darmen. Eenmaal onder de knie de chirurgische ingrepen, met uitzondering van infectie tijd, kan worden gedaan in minder dan drie uur, als het goed wordt uitgevoerd. Tijdens een poging tot deze procedure, is het belangrijk om te onthouden om de kip onder diepe anesthesie te houden om de pijn te controleren en vitale functies te controleren tijdens alle procedures, met inbegrip van chirurgisch deel en na infectie tijd.Na deze procedure of hun methoden zoals bacteriële isolatie, en rechte identificatie, zoals gendetectie door PCR kan worden uitgevoerd om externe vragen te beantwoorden, zoals herstel en identificatie van de eerste geïnjecteerde ziekteverwekker. Na deze ontwikkeling maakte deze techniek een weg vrij voor onderzoekers op het gebied van Clostridium perfringens pathogenese om Necrotic Enteritis bij kippen te verkennen. Vergeet niet dat het werken met levende dieren zeer variabel kan zijn.En voorzorgsmaatregelen zoals continue verdoving van de kip moet altijd worden gedaan tijdens het uitvoeren van deze procedure.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Biomarkers in een diermodel voor het openbaren van Neural, hematologische, en gedragsmatige correlaten van PTSS

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

Functionele Evaluatie van darmmotiliteit en de darmwand ontsteking in Knaagdieren: Analyses in een gestandaardiseerd model van Intestinal Manipulatie

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

Een Menselijke<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Atherosclerotische plaque Model naar Letsel Biologie studeren

Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease of the vasculature. There are various methods to study the inflammatory compound in atherosclerotic ...

Facial Nerve Axotomy in Mice: A Model to Study Motoneuron Response to Injury

Facial Nerve axotomie in Muizen: een model om motoneuron Response to Injury Study

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Muizenmodel van Intestinale ischemie-reperfusie schade

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

Vein Interpositie Model: Een geschikt model om te studeren Bypass Graft Patency

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

A Model of Free Tissue Transfer: The Rat Epigastric Free Flap

Een model van Free Tissue Transfer: The Rat Epigastrische Gratis Flap

Free tissue transfer has been increasingly used in clinical practice since the 1970s, allowing reconstruction of complex and otherwise untreatable defects ...

Intestinal Stem Cell Isolation and Culture in a Porcine Model of Segmental Small Intestinal Ischemia

De cel van de stam van de intestinale isolatie en cultuur in een varkens Model van gesegmenteerde kleine intestinale ischemie

Intestinal ischemia remains a major cause of morbidity and mortality in human and veterinary patients. Many disease processes result in intestinal ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Isometrische Contractility meting van de muis mesenterische slagader met behulp van draad Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

Een Cryoblessure model om myocardinfarct in de muis te bestuderen

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we ...