Name: a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence
Uploaded: 2018-10-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence at JoVE.com

Ce travail a été soutenu par la Chair in Poultry Research (M. Boulianne) de la faculté de médecine vétérinaire de l’Université de Montréal. Les Drs Boulianne et Parent a développé le modèle. Drs Boulianne et Parent effectué les interventions chirurgicales. M. Burns a aidé à élaborer le protocole d’anesthésie. M. Parent a édité la vidéo et a écrit le manuscrit. Drs Burns, Desrochers et Boulianne édition le manuscrit.

Toutes les procédures avec l’utilisation des animaux vivant ont été autorisés par le Comité d’éthique de la faculté de médecine vétérinaire, Université de Montréal (CÉUA, « Comité d » éthique de l’utilisation des Animaux »).
1. considérations avant la chirurgie
<ol><li>Sélectionnez 10 semaines agent pathogène spécifique gratuit (SPF) poulets leghorn pour la chirurgie. Remarque : Leur poids doit être de 1,0 à 1,2 kg.</li>
	<li>Retirer l’aliment 12 h avan...

<ol>
	<li>Vitale, A., Chiarotti, F., Alleva, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+animal+models+in+disease+research.">The use of animal models in disease research.</a> Rare diseases and orphan drugs. 2 (1), 1-4 (2015).</li><li>Uzal, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+to+study+the+pathogenesis+of+human+and+animal+Clostridium+perfringens+infections.">Animal models to study the pathogenesis of human and animal Clostridium perfringens infections.</a> Veterinary Microbiology. , (2015).</li><li>Bernier, G., Phaneuf, J. B., Filion, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+in+broiler+chickens.+III.+Study+of+the+factors+favoring+the+multiplication+of+Clostridium+perfringens+and+the+experimental+transmission+of+the+disease.">Necrotic enteritis in broiler chickens. III. Study of the factors favoring the multiplication of Clostridium perfringens and the experimental transmission of the disease.</a> Canadian Journal of Comparative Medicine. 41 (1), 112-116 (1977).</li><li>Al-Sheikhly, F., Truscott, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathology+of+necrotic+enteritis+of+chickens+following+infusion+of+broth+cultures+of+Clostridium+perfringens+into+the+duodenum.">The pathology of necrotic enteritis of chickens following infusion of broth cultures of Clostridium perfringens into the duodenum.</a> Avian Diseases. 21 (2), 230-240 (1977).</li><li>Wicker, D. L., Iscrigg, W. N., Trammell, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+control+and+prevention+of+necrotic+enteritis+in+broilers+with+zinc+bacitracin.">The control and prevention of necrotic enteritis in broilers with zinc bacitracin.</a> Poultry Science. 56 (4), 1229-1231 (1977).</li><li>Keyburn, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NetB,+a+new+toxin+that+is+associated+with+avian+necrotic+enteritis+caused+by+Clostridium+perfringens.">NetB, a new toxin that is associated with avian necrotic enteritis caused by Clostridium perfringens.</a> PLoS Pathog. 4 (2), e26 (2008).</li><li>Timbermont, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+of+Clostridium+perfringens+isolates+determines+the+ability+to+induce+necrotic+enteritis+in+broilers.">Origin of Clostridium perfringens isolates determines the ability to induce necrotic enteritis in broilers.</a> Comp Immunol Microbiol Infect Dis. 32 (6), 503-512 (2009).</li><li>Paradis, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+avilamycin+for+the+prevention+of+necrotic+enteritis+caused+by+a+pathogenic+strain+of+Clostridium+perfringens+in+broiler+chickens.">Efficacy of avilamycin for the prevention of necrotic enteritis caused by a pathogenic strain of Clostridium perfringens in broiler chickens.</a> Avian Pathol. 45 (3), 365-369 (2016).</li><li>Valgaeren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lesion+development+in+a+new+intestinal+loop+model+indicates+the+involvement+of+a+shared+Clostridium+perfringens+virulence+factor+in+haemorrhagic+enteritis+in+calves.">Lesion development in a new intestinal loop model indicates the involvement of a shared Clostridium perfringens virulence factor in haemorrhagic enteritis in calves.</a> Journal of Comparative Pathology. 149 (1), 103-112 (2013).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+C-terminal+domain+of+Clostridium+perfringens+alpha+toxin+as+a+vaccine+candidate+against+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">The C-terminal domain of Clostridium perfringens alpha toxin as a vaccine candidate against bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> Vet Res. 47 (1), 52 (2016).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxin-neutralizing+antibodies+protect+against+Clostridium+perfringens-induced+necrosis+in+an+intestinal+loop+model+for+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">Toxin-neutralizing antibodies protect against Clostridium perfringens-induced necrosis in an intestinal loop model for bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> BMC Vet Res. 12 (1), 101 (2016).</li><li>Parent, E., Archambault, M., Charlebois, A., Bernier-Lachance, J., Boulianne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chicken+intestinal+ligated+loop+model+to+study+the+virulence+of+Clostridium+perfringens+isolates+recovered+from+antibiotic-free+chicken+flocks.">A chicken intestinal ligated loop model to study the virulence of Clostridium perfringens isolates recovered from antibiotic-free chicken flocks.</a> Avian Pathol. 46 (2), 138-149 (2017).</li><li>Janvilisri, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+differential+proteomes+of+Clostridium+difficile+in+the+pig+ileal-ligated+loop+model.">Temporal differential proteomes of Clostridium difficile in the pig ileal-ligated loop model.</a> PLoS One. 7 (9), e45608 (2012).</li><li>Aabo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+in+vivo+model+for+study+of+intestinal+invasion+by+Salmonella+enterica+in+chickens.">Development of an in vivo model for study of intestinal invasion by Salmonella enterica in chickens.</a> Infection and Immunity. 68 (12), 7122-7125 (2000).</li><li>Meurens, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+immune+response+following+Salmonella+enterica+subspecies+enterica+serovar+Typhimurium+infection+in+porcine+jejunal+gut+loops.">Early immune response following Salmonella enterica subspecies enterica serovar Typhimurium infection in porcine jejunal gut loops.</a> Vet Res. 40 (1), 5 (2009).</li><li>Gerdts, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+intestinal+'loops'+provide+an+in+vivo+model+to+analyse+multiple+mucosal+immune+responses.">Multiple intestinal 'loops' provide an in vivo model to analyse multiple mucosal immune responses.</a> J Immunol Methods. 256 (1-2), 19-33 (2001).</li><li>Wade, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adherent+abilities+of+Clostridium+perfringens+strains+are+critical+for+the+pathogenesis+of+avian+necrotic+enteritis.">The adherent abilities of Clostridium perfringens strains are critical for the pathogenesis of avian necrotic enteritis.</a> Vet Microbiol. 197, 53-61 (2016).</li><li>Cooper, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+for+chickens+of+Clostridium+perfringens+isolated+from+poultry+and+other+sources.">Virulence for chickens of Clostridium perfringens isolated from poultry and other sources.</a> Anaerobe. 16 (3), 289-292 (2010).</li><li>Cooper, K. K., Songer, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+of+Clostridium+perfringens+in+an+experimental+model+of+poultry+necrotic+enteritis.">Virulence of Clostridium perfringens in an experimental model of poultry necrotic enteritis.</a> Veterinary Microbiology. 142 (3-4), 323-328 (2010).</li><li>Chalmers, G., Bruce, H. L., Toole, D. L., Barnum, D. A., Boerlin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+potential+in+a+model+system+using+Clostridium+perfringens+isolated+from+field+outbreaks.">Necrotic enteritis potential in a model system using Clostridium perfringens isolated from field outbreaks.</a> Avian Diseases. 51 (4), 834-839 (2007).</li></ol>

Modèles d’anses intestinales ont été décrites chez de nombreuses espèces d’étudier l’interaction hôte-pathogène et la pathogenèse des maladies causées par différents agents pathogènes intestinaux, comme les Clostridium perfringens, Clostridium difficile et Salmonella enterica7,9,13,14,15. Il a également été utili...

L’utilisation de modèles animaux pour l’étude des maladies infectieuses affectant les humains et les animaux est un outil central dans l’évaluation des facteurs de virulence régulant la pathogenèse d’une condition spécifique, aussi bien quant à élaborer des stratégies pour prévenir ou guérir des maladies1. Malgré les nombreux avantages de l’utilisation de modèles animaux pour étudier diverses maladies, les préoccupations éthiques concernant cette pratique sont présentent. Les chercheurs doivent minimiser l’utilisation des animaux tout en obtenant des résultats importants et valides. Le concept des 3 principes Rs (Replace, Reduce et affiner) a été élaboré pour s’assurer que les questions de bien-être ont été abordées dans ces essais. Dans les études de poulet d’entérite nécrotique, modèles in vivo de poulet sont utilisées pour enquêter sur l’étiologie, prévention et traitements de cette condition2,3,4,5. Les souches pathogènes de c. perfringens porteurs de facteurs de virulence spécifique, tel que la toxine de NetB6, sont administrés pour provoquer l’entérite nécrotique en poulets7. Le principe de remplacement est donc difficile à réaliser dans ce cas, que ces facteurs de virulence n’est peut-être pas aussi critiques chez d’autres espèces animales. La plupart des modèles d’entérite nécrotique chez les poulets utilisent une combinaison de facteurs de risque comme la coccidiose et modifié le régime pour provoquer l’entérite nécrotique suivie par gavage du bouillon de culture contenant un grand nombre de c. perfringens2. Ces modèles induira la maladie chez un grand nombre de poulets, et la mortalité peut être importante dans ces essais8, soulevant ainsi des préoccupations sur les principes de réduction et de raffinement dans la recherche sur les animaux.
Modèles de boucles ligaturé intestinaux sont une alternative souhaitable pour l’étude des maladies causées par des pathogènes intestinaux en ce qui concerne le principe de réduction et raffinement. Dans ces modèles, les segments intestinaux appelés « boucles » sont créés en plaçant des ligatures le long du tractus intestinal pour former des compartiments indépendants et hermétiques où les agents pathogènes peuvent être injectés seuls9 ou avec d’autres molécules, telles que des vaccins candidats 10 , 11. les agents pathogènes d’intérêt sont placés en contact étroit avec les cellules intestinales et après quelques heures de temps de l’infection, des échantillons intestinaux peuvent être récupérés pour une analyse ultérieure. Ceci permet l’utilisation de multiples traitements et groupes témoins chez le même animal. Analyse statistique peut être effectuée avec des modèles de mesures répétées, qui augmente la capacité de discrimination entre les groupes et réduit le nombre de poulets nécessaires par rapport aux essais de gavage oral. Aussi, interventions chirurgicales et des fois une infection ultérieure sont effectuées sous anesthésie générale continue et l’analgésie, minimisant ainsi la douleur animale. Boucle fermée des trompes sont un modèle idéal pour réduire le nombre d’hôte et de créer un système plus humain dans la recherche sur les animaux.
Anses intestinales de ligaturé modèles sont bien décrites chez diverses espèces, comme les veaux, les lapins et les souris2,9, mais mal décrit dans poulets7. Pour une utilisation optimale de ce modèle chirurgical, l’exécution et la technique appropriée sont essentielles pour la création des anses intestinales ligaturées à éviter tout dommage à l’intégrité intestinale. L’objectif de ce manuscrit est de décrire une méthode étape par étape dans la création de multiples anses intestinales dans un modèle de poulet. Cette technique est limitée par la compétence et l’expérience du chirurgien comme procédures précises sont essentielles pour la réussite du projet.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>EZ-Scrub 747</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td></td>
			<td>4% chlorhexidine gluconate detergent impregnated sterile brush. No catalog number available. Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/infection-prevention/surgical-hand-scrubs/ez-scrub-preoperative-surgical-scrub-brushes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl alcohol 70% USP 4 L</td>
			<td>Commercial isopropyl alcohol</td>
			<td>P016IP70</td>
			<td>Web address: http://www.comalc.com/products/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorexidine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>282227-1G</td>
			<td>Chlorhexidine gluconate solution, must be diluted to 4%. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/282227?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI8vHr4_OY1wIV3rrACh2ZWQKuEAAYAiAAEgLKx_D_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Drape Small (27 inch x 24 inch) with 3 x 6 inch Fenestration</td>
			<td>Veterinary Specialty Products</td>
			<td>32724</td>
			<td>Web address: http://www.vetspecialtyproducts.com/index.cfm?fuseaction=ecommercecatalog.detail&#38;productgroup_id=15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades #3</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>301</td>
			<td>Web address: https://www.swann-morton.com/product/16.php</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline NaCl 0.9%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8776-100ML</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8776?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl 3-0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>D9003</td>
			<td>Polyglactin multifilament absorbable suture material. Web address: http://www.ethicon.com/healthcare-professionals/products/wound-closure/absorbable-sutures/coated-vicryl-polyglactin-910-suture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1 ml with 26G needle</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td>329652</td>
			<td>Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/diabetes-care/insulin-syringes/bd-1-ml-conventional-insulin-syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Heart Infusion</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>1104930500</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/110493?lang=fr&#38;region=CA&#38;cm_sp=Insite-_-prodRecCold_xorders-_-prodRecCold2-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tube</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9661-500EA</td>
			<td>Microcentrifuge tube. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t9661?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI-YizzfiY1wIVRkCGCh30SQjuEAAYAiAAEgLK5fD_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, buffered neutral, 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td>Ratio tissue : formalin of 1: 10 for adequate fixation. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht501128?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clostridium perfringens strains</td>
			<td>Universit&#233; de Montr&#233;al, Chaire en recherche avicole</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Specific to each laboratory, available upon request to correspondant author</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence

Entérite nécrotique a été étudiée chez des poulets à l’aide de divers modèles d’infection in vivo . La plupart d'entre eux utilise une combinaison de facteurs prédisposants, comme la coccidiose et l’alimentation, avec gavage ou administration via le flux à l’aide de Clostridium perfringens. Dans ces modèles, la comparaison de plusieurs souches de c. perfringens pour études de virulence requiert un grand nombre d’hôtes à obtenir des résultats significatifs. Au cours de l’étude, la mortalité peut être élevée selon le modèle expérimental, donc soulevant des préoccupations éthiques concernant le bien-être des animaux dans la recherche. Le développement de nouveaux modèles d’infection nécessitant moins d’animaux pour étudier la pathogenèse, offrant encore des résultats statistiquement significatifs et valides, est important pour réduire l’utilisation des animaux en recherche. Anse intestinale de ligaturé modèles ont servi à étudier les infections clostridiales dans diverses espèces comme la souris, des lapins et des veaux. Suite à des interventions chirurgicales pour créer des segments de boucle ligaturés, les souches de c. perfringens sont injectés directement dans les boucles pour établir un contact étroit entre les bactéries et la muqueuse intestinale. Des échantillons de l’intestin grêle et le contenu luminal sont prises à la fin des procédures après quelques heures. Plusieurs souches bactériennes peuvent être inoculés dans chaque animal, ce qui réduira le nombre de matières obligatoires dans les expériences. En outre, les procédures sont effectuées sous anesthésie générale pour réduire la douleur animale. Chez les poulets, ce modèle serait plus approprié que l’administration orale de comparer la pathogénicité de la souche de c. perfringens car moins d’animaux sont nécessaires, aucun des facteurs prédisposants ne sont nécessaire pour provoquer la maladie et la douleur est contrôlée par des analgésiques . Le modèle de l’anse intestinale de ligaturé est mal décrit chez les poulets et normalisation est essentielle pour son utilisation optimale. Ce manuscrit fournit toutes les mesures nécessaires pour créer de nombreuses anses ligaturés intestinales chez les poulets et apporte des informations sur les points critiques pour obtenir des résultats similaires.

Un schéma de l’anses intestinales 9 et 8 interloops est illustré à la Figure 1. Dans ce modèle, un total de 9 boucles et 8 interloops sont créés avec des ligatures simples. Une boucle se compose de proximales et distales des ligatures espacées de 2 cm à partir de la ligature proximale. Deux boucles adjacents sont séparés par un interloop de 1 cm. Pour diminuer le risque de contamination croisée entre les boucles par la fuite d’une ligature, une...

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A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Nous présentons ici un protocole pour créer chirurgicalement « anses intestinales ligaturées » dans l’intestin grêle de poulet. Cette procédure permet la comparaison de virulence in situ dans un seul hôte plusieurs des souches de Clostridium perfringens . Cette méthode diminue considérablement le nombre de poulets habituellement nécessaires pour in vivo des expériences similaires.

Un modèle ligaturé anse intestinale chez les poulets gratuit anesthésiés pathogène spécifique pour étudier la Virulence de Clostridium Perfringens

Necrotic enteritis was studied in chickens using various in vivo infection models. Most of these use a combination of predisposing factors, such as ...

Cette méthode peut aider à répondre aux questions clés dans le domaine de la recherche sur l’entérite nécrotique du poulet. Comme comparer la virulence de souches spécifiques clostridium perfringens causant cette maladie. Le principal avantage de cette technique est qu’elle réduit remarquablement le nombre de poulets habituellement nécessaires pour des expériences d’ambivore similaires.Bien que cette méthode puisse donner un aperçu du potentiel de virulence des souches de Clostridium perfringens, elle peut également être appliquée à d’autres agents pathogènes intestinaux tels que Clostridium difficile, ou Salmonella enterica. En général, les personnes nouvelles à cette méthode auront du mal parce que les interventions chirurgicales ont besoin d’une formation spécifique et ne doivent être effectuées que par ceux qui ont acquis des compétences telles que la suture, une technique avant l’expérience. Après l’anesthésisation d’un poulet sans corne de jambe pathogène spécifique de 10 semaines, installez les moniteurs pour des mesures vitales et commencez manuellement à enlever les plumes de l’abdomen par traction douce.Ensuite, frottez le site chirurgical à l’aide de chlorhexidine gluconate avec une brosse à poils doux. Frottez doucement la peau du centre à la périphérie pendant cinq minutes sans inverser le cours. Ensuite, effectuez trois passages alternatifs sur le site chirurgical avec la solution de gluconate de chlorhexidine et l’alcool d’Isopropyl utilisant des gazes stériles.Encore une fois, allez du centre à la périphérie, puis, draper le poulet. Commencez par ouvrir le drapé au-dessus du site chirurgical, puis faire une incision de la peau mi-ligne basse en forme de L avec un scalpel numéro trois, en commençant un centimètre câlin au sternum, et se terminant à un centimètre crânien à la cloicha. Ensuite, continuer l’incision en forme de L perpendiculaire à la première en faisant une deuxième incision à partir de l’extrémité câlin de la première incision et continuer cinq centimètres sur le côté gauche de l’abdomen en suivant la ligne du bassin.Cette ouverture permettra une extraction facile des intestins. Ensuite, ouvrez le péritoine et les muscles abdominaux en utilisant le même modèle en forme de L pour accéder à la cavité abdominale. Les sacs d’air seront maintenant exposés et doivent être conservés humides à l’aide de gaze saline trempée.Ensuite, insérez un crochet snook spay dans la cavité abdominale en suivant la paroi abdominale gauche et en travaillant le crochet autour des sacs d’air abdominal pour extraire les intestins. Ensuite, à l’aide de gaze sèche, continuer doucement extérioriser les intestins pour exposer le Jejunum. Étalez les intestins et gardez-les humides avec des pulvérisations fréquentes avec saline et en les couvrant de gaze trempée saline.Il est important d’être très doux tout en prenant des intestins parce que la tension excessive peut rompre les vaisseaux mésentériques qui peuvent mener aux lésions ischémiques intestinales et compromettre considérablement le résultat de la procédure. Après avoir extériorisé les intestins, faire une série de boucles dans les intestins à partir du Jejunum. Chaque boucle peut être utilisée pour un traitement différent.Dans le Jejunum proximal, placez une ligature simple avec un matériau absorbable synthétique polyglutamine multifilament tout en évitant la ligature des principaux vaisseaux mésentériques. Ensuite, placez une ligature distale à deux centimètres de la ligature proximale pour compléter la première boucle. Toutes les ligatures proximales et distales doivent être espacées d’environ deux centimètres.Chaque paire de ligatures fait une boucle, qui est un segment hermétique. Ensuite, créez un interloop ou un segment d’intestin entre les boucles. Placez une ligature simple d’un demi-centimètre aborely à la ligature distale de la première boucle.Cette ligature est au milieu de l’interloop et permettra de réduire la contamination croisée possible entre les boucles. Maintenant, continuer le modèle de créer une autre boucle d’un demi-centimètre aborely de la ligature interloop. Ici, neuf boucles et huit interloops sont créés couvrant 26 centimètres d’intestin.Le nombre de boucles peut être ajusté au besoin. Ensuite, procéder à l’injection de souche de Clostridium perfringens dans les boucles. Dans le côté anti-mésentérique de la boucle, utilisez une aiguille de calibre 26 à un angle de 45 degrés pour injecter 0,2 millilitres de solution BHI, contenant un million d’unités de formation de colonies de bactéries dans la phase de croissance midlog.Dans ce cas, avec neuf boucles, cinq souches différentes sont injectées en boucles alternées avec les boucles intermédiaires injectées avec le véhicule seul comme contrôles négatifs. Après l’injection des agents pathogènes, remplacer délicatement le tractus intestinal à la zone dorsale de la cavité abdominale sous les sacs d’air. Ensuite, fermez la cavité abdominale.Suture le péritoine et les muscles abdominaux le long du bassin avec un motif de suture continue simple à l’aide d’un matériau absorbable synthétique polyglutamine multifilament. Continuer en suturant le péritoine et les muscles abdominaux du sternum à la cloiche à l’aide de sutures continues simples. Ensuite, suture de la peau à proximité à l’aide d’un matériau synthétique Polyglutamine Multifilament et un modèle continu simple.D’abord, suture le long du bassin, puis suture du sternum à la cloiche. Après la fermeture des incisions, garder le poulet sous anesthésie générale avec une bonne utilisation des analgésiques pour minimiser la douleur animale pendant le temps d’infection. Poursuivre la surveillance anesthésique pour assurer un niveau d’anesthésie adéquat.Après la quantité désirée de temps d’infection, comme sept heures dans la présente expérience, euthanasier l’oiseau et recueillir les tissus intestinaux. À l’aide d’un scalpel numéro trois, découper une section de boucle d’un demi à un centimètre. Ensuite, transférez la section à 10% Formalin pour la fixation du jour au lendemain et d’autres analyses histopathologiques.Ensuite, utilisez la même lame de scalpel sur la même boucle pour découper le reste de la boucle et transférer ce tissu dans un tube microfusé pour isoler les bactéries. Répétez cette procédure pour chaque boucle à l’aide d’une nouvelle lame de scalpel à chaque fois. Sept heures après l’injection, une boucle intestinale injectée avec un milieu stérile de commande a une bordure intacte de brosse muqueuse sans nécrose.La congestion légère dans les couches intestinales des segments n’est pas rare. Sept heures après l’injection avec l’agent pathogène Clostridium perfringens, les pointes de villosités sont érodées avec les sites d’entrée nécrotiques entourant les pointes. Et puis le matériel nécrotique entourant les villosités, il ya des grappes de grandes bactéries en forme de tige.Parfois, la nécrose est due à une mauvaise exécution procédurale et peut être mal interprétée comme des lésions produites par des bactéries. Un signe révélateur est l’absence de bactéries dans la section histologique. En outre, les vaisseaux sanguins dans la couche musculaire sont sévèrement dilatés par l’accumulation de nombreux érythrocytes dégénératifs indiquant la congestion vasculaire.Ceci a été provoqué par les vaisseaux sanguins mésentériques ligated qui ont probablement été ligated pour faire la tension physique excessive sur les intestins. Les boucles ischémiques peuvent être facilement identifiées au microscope pendant les procédures chirurgicales. Après une congestion vasculaire sévère quelques minutes après la ligature, la serosa sera bleu foncé au lieu de sa coloration rougeâtre rose normale.Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de créer plusieurs boucles intestinales dans un modèle de poulet en plaçant des ligatures sur les intestins. Une fois maîtrisées, les interventions chirurgicales, à l’exclusion du temps d’infection, peuvent être effectuées en moins de trois heures, si elles sont effectuées correctement. Tout en essayant cette procédure, il est important de se rappeler de garder le poulet sous anesthésie profonde pour contrôler la douleur et surveiller les signes vitaux pendant toutes les procédures, y compris la partie chirurgicale et après le temps d’infection.Après cette procédure ou leurs méthodes comme l’isolement bactérien, et l’identification directe comme la détection des gènes par PCR peut être effectuée afin de répondre à des questions externes comme la récupération et l’identification de l’agent pathogène injecté initial. Après ce développement, cette technique a permis aux chercheurs dans le domaine de clostridium perfringens pathogénie d’explorer l’entérite nécrotique chez les poulets. N’oubliez pas que travailler avec des animaux vivants peut être extrêmement variable.Et des précautions telles que la surveillance anesthésique continue du poulet doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure.

Research

JoVE Journal

Medicine

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