Name: a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence
Uploaded: 2018-10-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence at JoVE.com

Diese Arbeit wurde durch den Lehrstuhl für Geflügel Forschung (M. Boulianne) von der Veterinär-medizinische Fakultät der Université de Montréal unterstützt. DRS. Boulianne und Eltern entwickelt das Modell. DRS. Boulianne und Eltern durchgeführt die Operationen. Dr. Burns unterstützt bei der Entwicklung der Anästhesie-Protokoll. Dr. Parent das Video bearbeitet und schrieb das Manuskript. DRS-Burns, Desrochers und Boulianne bearbeitet das Manuskript.

Alle Verfahren mit live Tiernutzung wurden autorisiert durch die Ethikkommission der Faculty of Veterinary Medicine, Université de Montréal (CÉUA, 'Comité d' Éthique de Runden des Animaux ").
1. Überlegungen vor der Operation
<ol><li>Wählen Sie 10 Wochen alt spezifischen Erreger freie (SPF) Leghorn Hühnern für die Chirurgie. Hinweis: ihr Gewicht muss zwischen 1,0 und 1,2 kg liegen.</li>
	<li>Zurückziehen des Feeds 12 h vor dem Verfahren, den Darm zu entleeren.</li>
	<li>Legen Si...

<ol>
	<li>Vitale, A., Chiarotti, F., Alleva, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+animal+models+in+disease+research.">The use of animal models in disease research.</a> Rare diseases and orphan drugs. 2 (1), 1-4 (2015).</li><li>Uzal, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+to+study+the+pathogenesis+of+human+and+animal+Clostridium+perfringens+infections.">Animal models to study the pathogenesis of human and animal Clostridium perfringens infections.</a> Veterinary Microbiology. , (2015).</li><li>Bernier, G., Phaneuf, J. 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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+avilamycin+for+the+prevention+of+necrotic+enteritis+caused+by+a+pathogenic+strain+of+Clostridium+perfringens+in+broiler+chickens.">Efficacy of avilamycin for the prevention of necrotic enteritis caused by a pathogenic strain of Clostridium perfringens in broiler chickens.</a> Avian Pathol. 45 (3), 365-369 (2016).</li><li>Valgaeren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lesion+development+in+a+new+intestinal+loop+model+indicates+the+involvement+of+a+shared+Clostridium+perfringens+virulence+factor+in+haemorrhagic+enteritis+in+calves.">Lesion development in a new intestinal loop model indicates the involvement of a shared Clostridium perfringens virulence factor in haemorrhagic enteritis in calves.</a> Journal of Comparative Pathology. 149 (1), 103-112 (2013).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+C-terminal+domain+of+Clostridium+perfringens+alpha+toxin+as+a+vaccine+candidate+against+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">The C-terminal domain of Clostridium perfringens alpha toxin as a vaccine candidate against bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> Vet Res. 47 (1), 52 (2016).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxin-neutralizing+antibodies+protect+against+Clostridium+perfringens-induced+necrosis+in+an+intestinal+loop+model+for+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">Toxin-neutralizing antibodies protect against Clostridium perfringens-induced necrosis in an intestinal loop model for bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> BMC Vet Res. 12 (1), 101 (2016).</li><li>Parent, E., Archambault, M., Charlebois, A., Bernier-Lachance, J., Boulianne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chicken+intestinal+ligated+loop+model+to+study+the+virulence+of+Clostridium+perfringens+isolates+recovered+from+antibiotic-free+chicken+flocks.">A chicken intestinal ligated loop model to study the virulence of Clostridium perfringens isolates recovered from antibiotic-free chicken flocks.</a> Avian Pathol. 46 (2), 138-149 (2017).</li><li>Janvilisri, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+differential+proteomes+of+Clostridium+difficile+in+the+pig+ileal-ligated+loop+model.">Temporal differential proteomes of Clostridium difficile in the pig ileal-ligated loop model.</a> PLoS One. 7 (9), e45608 (2012).</li><li>Aabo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+in+vivo+model+for+study+of+intestinal+invasion+by+Salmonella+enterica+in+chickens.">Development of an in vivo model for study of intestinal invasion by Salmonella enterica in chickens.</a> Infection and Immunity. 68 (12), 7122-7125 (2000).</li><li>Meurens, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+immune+response+following+Salmonella+enterica+subspecies+enterica+serovar+Typhimurium+infection+in+porcine+jejunal+gut+loops.">Early immune response following Salmonella enterica subspecies enterica serovar Typhimurium infection in porcine jejunal gut loops.</a> Vet Res. 40 (1), 5 (2009).</li><li>Gerdts, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+intestinal+'loops'+provide+an+in+vivo+model+to+analyse+multiple+mucosal+immune+responses.">Multiple intestinal 'loops' provide an in vivo model to analyse multiple mucosal immune responses.</a> J Immunol Methods. 256 (1-2), 19-33 (2001).</li><li>Wade, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adherent+abilities+of+Clostridium+perfringens+strains+are+critical+for+the+pathogenesis+of+avian+necrotic+enteritis.">The adherent abilities of Clostridium perfringens strains are critical for the pathogenesis of avian necrotic enteritis.</a> Vet Microbiol. 197, 53-61 (2016).</li><li>Cooper, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+for+chickens+of+Clostridium+perfringens+isolated+from+poultry+and+other+sources.">Virulence for chickens of Clostridium perfringens isolated from poultry and other sources.</a> Anaerobe. 16 (3), 289-292 (2010).</li><li>Cooper, K. K., Songer, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+of+Clostridium+perfringens+in+an+experimental+model+of+poultry+necrotic+enteritis.">Virulence of Clostridium perfringens in an experimental model of poultry necrotic enteritis.</a> Veterinary Microbiology. 142 (3-4), 323-328 (2010).</li><li>Chalmers, G., Bruce, H. L., Toole, D. L., Barnum, D. A., Boerlin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+potential+in+a+model+system+using+Clostridium+perfringens+isolated+from+field+outbreaks.">Necrotic enteritis potential in a model system using Clostridium perfringens isolated from field outbreaks.</a> Avian Diseases. 51 (4), 834-839 (2007).</li></ol>

Intestinale Schleifen Modelle wurden in zahlreichen Arten, Wirt-Pathogen Interaktionen und Pathogenese von Krankheiten, die durch verschiedene Darm Krankheitserreger, wie , Clostridium Perfringensund Clostridium Difficile zu studieren beschrieben Salmonella Enterica7,9,13,14,15. Es wurde auch verwendet, der mukosalen Immunantwort<sup...

Die Verwendung von Tiermodellen, ansteckende Krankheiten, die Auswirkungen auf Mensch und Tier zu studieren ist ein zentrales Instrument bei der Beurteilung der Virulenzfaktoren Regulierung der Pathogenese einer bestimmten Bedingung sowie, erarbeiten Strategien zur Vorbeugung und Behandlung von Krankheiten1. Trotz der zahlreichen Vorteile der Verwendung von Tiermodellen um zu verschiedenen Krankheiten zu studieren entstehen ethische Bedenken in Bezug auf diese Praxis. Forscher müssen Verwendung von Tieren bei der Erlangung relevanter und gültige Ergebnisse zu minimieren. Das Konzept der 3 Rs Grundsätze (Replace, Reduce und verfeinern) wurde erarbeitet, um sicherzustellen, dass Tierschutz in solchen Studien behandelt wurden. In Huhn nekrotische Enteritis Studien sind in Vivo Huhn Modelle zur Ätiologie, Verhütung und Behandlung von diesem Zustand2,3,4,5zu untersuchen. Pathogene Stämme von C. Perfringens tragen spezielle Virulenzfaktoren, wie z. B. der NetB Toxin6, werden verabreicht, um nekrotische Enteritis in Hühner7verursachen. Das Ersatz-Prinzip ist daher schwierig, in einem solchen Fall zu erreichen, da diese Virulenzfaktoren möglicherweise nicht so kritisch bei anderen Tierarten. Die meisten Modelle für nekrotische Enteritis bei Hühnern verwenden eine Kombination von Risikofaktoren wie Kokzidiose und veränderte Ernährung zu induzieren nekrotische Enteritis, gefolgt von Magensonde bouillonkultur mit einer großen Anzahl von C. Perfringens2. Diese Modelle werden die Krankheit in eine große Anzahl von Hühnern induzieren und Sterblichkeit kann in solchen Studien8, so Bedenken über die Reduzierung und Raffinesse Prinzipien in Tierversuchen wichtig sein.
Intestinale aufgespaltenen Schleifen Modelle sind eine wünschenswerte Alternative für das Studium der Krankheiten ausgelöst durch Darm Krankheitserreger in Bezug auf die Reduzierung der Grundsatz und Raffinesse. In diesen Modellen entstehen indem man Ligaturen, entlang den Darm-Trakt, unabhängige und hermetische Fächer zu bilden, wo Krankheitserreger allein9 injiziert werden können, oder mit anderen Molekülen, wie z. B. Impfstoffkandidaten Darm Segmente, so genannte "Loops" 10 , 11. die Erreger von Interesse stehen in engem Kontakt mit der Darmzellen und nach ein paar Stunden hinweg Infektion, intestinale Proben zur weiteren Analyse gewonnen werden können. Dies ermöglicht die Verwendung von mehreren Behandlungs- und Kontrollgruppen im selben Tier. Statistische Analyse kann mit Messwiederholungen Modelle, die die Kraft der Unterscheidung zwischen Gruppen erhöht und reduziert die Anzahl der notwendigen Hühner im Vergleich zu oralen Magensonde Studien durchgeführt werden. Darüber hinaus sind chirurgische Eingriffe und anschließende Infekt-Zeiten unter kontinuierlicher allgemeine Anästhesie und Analgesie, damit den Tieren Schmerzen zu minimieren durchgeführt. Closed-Loop-grundsätzlich sind eine ideale Vorlage zur Verringerung der Host-Nummern und eine menschlichere System in Tierversuchen zu schaffen.
Intestinale aufgespaltenen Schleifen Modelle sind gut beschrieben in verschiedenen Arten, wie Kälber, Hasen und Mäuse2,9, aber schlecht in Hühner7beschrieben. Für eine optimale Nutzung dieses chirurgische Modells sind richtige Technik und Ausführung Voraussetzung für die Schaffung der aufgespaltenen Darm Schleifen zur Vermeidung von Schäden für die intestinale Integrität. Das Ziel dieser Handschrift ist eine Schritt-für-Schritt-Methode bei der Schaffung von mehreren Darm Schleifen in einem Huhn-Modell zu beschreiben. Diese Technik ist durch Geschick und Erfahrung des Operateurs begrenzt, da genaue Verfahren essentiell für den Erfolg des Projekts sind.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>EZ-Scrub 747</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td></td>
			<td>4% chlorhexidine gluconate detergent impregnated sterile brush. No catalog number available. Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/infection-prevention/surgical-hand-scrubs/ez-scrub-preoperative-surgical-scrub-brushes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl alcohol 70% USP 4 L</td>
			<td>Commercial isopropyl alcohol</td>
			<td>P016IP70</td>
			<td>Web address: http://www.comalc.com/products/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorexidine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>282227-1G</td>
			<td>Chlorhexidine gluconate solution, must be diluted to 4%. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/282227?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI8vHr4_OY1wIV3rrACh2ZWQKuEAAYAiAAEgLKx_D_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Drape Small (27 inch x 24 inch) with 3 x 6 inch Fenestration</td>
			<td>Veterinary Specialty Products</td>
			<td>32724</td>
			<td>Web address: http://www.vetspecialtyproducts.com/index.cfm?fuseaction=ecommercecatalog.detail&#38;productgroup_id=15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades #3</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>301</td>
			<td>Web address: https://www.swann-morton.com/product/16.php</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline NaCl 0.9%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8776-100ML</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8776?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl 3-0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>D9003</td>
			<td>Polyglactin multifilament absorbable suture material. Web address: http://www.ethicon.com/healthcare-professionals/products/wound-closure/absorbable-sutures/coated-vicryl-polyglactin-910-suture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1 ml with 26G needle</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td>329652</td>
			<td>Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/diabetes-care/insulin-syringes/bd-1-ml-conventional-insulin-syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Heart Infusion</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>1104930500</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/110493?lang=fr&#38;region=CA&#38;cm_sp=Insite-_-prodRecCold_xorders-_-prodRecCold2-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tube</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9661-500EA</td>
			<td>Microcentrifuge tube. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t9661?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI-YizzfiY1wIVRkCGCh30SQjuEAAYAiAAEgLK5fD_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, buffered neutral, 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td>Ratio tissue : formalin of 1: 10 for adequate fixation. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht501128?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clostridium perfringens strains</td>
			<td>Universit&#233; de Montr&#233;al, Chaire en recherche avicole</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Specific to each laboratory, available upon request to correspondant author</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence

Nekrotische Enteritis wurde bei Hühnern, die mit verschiedenen in Vivo Infektionsmodelle untersucht. Die meisten davon verwenden eine Kombination der prädisponierenden Faktoren wie Kokzidiose und Ernährung, mit Magensonde oder Verabreichung über das Futter mit Clostridium Perfringens. In diesen Modellen erfordert der Vergleich mehrerer C. Perfringens Belastungen für Virulenz Studien eine große Anzahl von Hosts, signifikante Ergebnisse zu erhalten. Sterblichkeit im Verlauf der Studie kann je nach experimentellen Modell, daher ethische Bedenken bezüglich Tierschutz in der Forschung hoch sein. Die Entwicklung der neuen Infektionsmodelle erfordern weniger Tiere, Pathogenese, noch eine statistisch signifikante und gültige Ergebnisse zu studieren ist wichtig bei der Verringerung der Tierversuche in der Forschung. Aufgespaltenen Dünndarmschlinge Modelle wurden verwendet, um eine Infektionen in verschiedenen Arten wie Mäuse, Kaninchen und Kälber zu studieren. Nach chirurgischen Eingriffen, aufgespaltenen Schleife Segmente zu erstellen sind C. Perfringens Stämmen direkt in die Schlaufen herstellen einen engen Kontakt zwischen den Bakterien und die Darmschleimhaut injiziert. Proben der Dünndarm und der luminalen Inhalte sind bei Beendigung der Verfahren nach ein paar Stunden genommen. In jedem Tier, damit die Verringerung der Anzahl der erforderlichen Themen in den Experimenten können mehrere Bakterienstämme inokuliert werden. Auch sind Eingriffe unter Vollnarkose, Tieren Schmerzen zu reduzieren. Bei Hühnern wäre dieses Modell besser geeignet als orale Verabreichung, C. Perfringens Belastungen Pathogenität zu vergleichen, weil weniger Tiere erforderlich sind, keine prädisponierenden Faktoren erforderlich sind, um die Krankheit zu induzieren und Schmerz durch Analgetika gesteuert wird . Die aufgespaltenen Dünndarmschlinge Modell ist schlecht beschrieben bei Hühnern und Standardisierung ist wichtig für die optimale Nutzung. Diese Handschrift enthält die notwendigen Schritte um zahlreiche Darm aufgespaltenen Schleifen bei Hühnern zu erstellen und bringt Informationen über die kritischen Punkte um valide Ergebnisse zu erhalten.

Abbildung 1zeigt eine schematische Darstellung der 9 Darm Loops und 8 Interloops. In diesem Modell werden insgesamt 9 Schleifen und 8 Interloops mit einfachen Ligaturen erstellt. Eine Schleife besteht aus proximalen und distalen Ligaturen Abstand von 2 cm, gemessen von der proximalen Ligatur. Zwei benachbarte Schleifen werden durch eine Interloop von 1 cm getrennt. Um das mögliche Risiko einer Kreuzkontamination zwischen Schleifen durch Leckage aus einer Lig...

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A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um chirurgisch "Darm aufgespaltenen Loops" Huhn Dünndarm schaffen. Dieses Verfahren ermöglicht den Vergleich von mehreren Clostridium Perfringens Stämmen Virulenz in Situ in einem einzelnen Host. Diese Methode verringert deutlich die Anzahl der Hühner in der Regel für ähnliche in Vivo Experimente notwendig.

Ein Modell der aufgespaltenen Dünndarmschlinge in Kostenlose Hühner narkotisierten spezifischen Erreger Clostridium Perfringens Virulenz zu studieren

Necrotic enteritis was studied in chickens using various in vivo infection models. Most of these use a combination of predisposing factors, such as ...

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen auf dem Gebiet der Chicken Necrotic Enteritis Forschung zu beantworten. Wie der Vergleich der Virulenz bestimmter Clostridium perfringens Stämme, die diese Krankheit verursachen. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass sie die Anzahl der Hühner, die normalerweise für ähnliche Ambivore-Experimente notwendig sind, bemerkenswert reduziert.Während diese Methode Einblick in das Virulenzpotenzial von Clostridium perfringens Stämmen bieten kann, kann es auch auf andere Darmpathogene wie Clostridium difficile oder Salmonella enterica angewendet werden. Im Allgemeinen werden Personen, die neu in dieser Methode sind, Schwierigkeiten haben, weil chirurgische Eingriffe eine spezifische Ausbildung erfordern und nur von Personen durchgeführt werden dürfen, die Fähigkeiten wie Dassnieren erworben haben, eine Technik vor dem Experiment. Nach der Beästhesierung eines 10 Wochen alten spezifischen pathogenfreien Leghornhuhns, richten Sie die Monitore für lebenswichtige Messungen ein und beginnen Sie manuell, die Federn durch sanfte Traktion aus dem Bauch zu entfernen.Als nächstes schrubben Sie die chirurgische Stelle mit Chlorhexidin-Gluconat mit einer weichen Borstenbürste. Schrubben Sie die Haut vorsichtig von der Mitte in die Peripherie für fünf Minuten, ohne Kurs umzukehren. Führen Sie dann drei abwechselnde Passagen auf der chirurgischen Stelle mit Chlorhexidin-Gluconat-Lösung und Isopropylalkohol mit sterilen Gazen durch.Wieder, gehen Sie von der Mitte an die Peripherie, dann, drapieren Sie das Huhn. Beginnen Sie, indem Sie den Vorhang über der chirurgischen Stelle öffnen, dann machen Sie einen L-förmigen niedrigen Mittellinie Hautschnitt mit einem Nummer-drei-Skalpell, beginnend einen Zentimeter Kuscheln an das Brustbein, und endet bei einem Zentimeter Schädel zur Kloicha. Als nächstes setzen Sie den L-förmigen Schnitt senkrecht zum ersten fort, indem Sie einen zweiten Schnitt ab dem Kuschelende des ersten Schnitts machen und fünf Zentimeter auf die linke Seite des Bauches fortsetzen, indem Sie der Beckenlinie folgen.Diese Öffnung ermöglicht eine einfache Extraktion des Darms. Als nächstes öffnen Sie das Peritoneum und die Bauchmuskeln mit dem gleichen L-förmigen Muster, um auf die Bauchhöhle zuzugreifen. Die Luftsäcke werden nun freigelegt und müssen mit salinegetränkter Gaze feucht gehalten werden.Als nächstes legen Sie einen Snook Spay Haken in die Bauchhöhle, indem Sie der linken Bauchwand folgen und den Haken um die Bauchluftsäcke arbeiten, um den Darm zu extrahieren. Dann, mit trockener Gaze, weiter sanft aus dem Darm, um das Jejunum auszusetzen. Verteilen Sie den Darm und halten Sie sie feucht mit häufigen Sprühen mit Saline und durch Bedecken sie mit Saline getränkte Gaze.Es ist wichtig, sehr sanft zu sein, während der Darm ausgenommen wird, da übermäßige Spannung die mesenterischen Gefäße brechen kann, was zu darmen ischämischen Läsionen führen kann und das Ergebnis des Verfahrens stark beeinträchtigen kann. Nach dem Aussendesatdes des Darms, machen eine Reihe von Schleifen im Darm beginnend im Jejunum. Jede Schleife kann für unterschiedliche Behandlungen verwendet werden.Legen Sie im proximalen Jejunum eine einfache Ligatur mit einem Polyglutamin-Multifilament-Synthetik-Absorbermaterial auf, während Sie die Ligatur wichtiger mesenterischer Gefäße vermeiden. Als nächstes legen Sie eine distale Ligatur zwei Zentimeter von der proximalen Ligatur entfernt, um die erste Schleife zu vervollständigen. Alle proximalen und distalen Ligaturen sollten um etwa zwei Zentimeter verteilt sein.Jedes Ligaturenpaar bildet eine Schleife, die ein hermetisches Segment ist. Erstellen Sie als Nächstes einen Interloop oder ein Darmsegment zwischen den Schleifen. Legen Sie eine einfache Ligatur einen halben Zentimeter aborely auf die distale Ligatur der ersten Schleife.Diese Ligatur befindet sich in der Mitte des Interloop und verringert die mögliche Kreuzkontamination zwischen den Schleifen. Fahren Sie nun mit dem Muster fort, eine weitere Schleife einen halben Zentimeter aborely aus der Interloop-Ligatur zu erstellen. Hier entstehen neun Schleifen und acht Interloops mit 26 Zentimetern Darm.Die Anzahl der Schleifen kann bei Bedarf angepasst werden. Als nächstes fahren Sie mit der Injektion von Clostridium perfringens in die Schleifen fort. In die anti-mesentische Seite der Schleife, verwenden Sie eine 26-Meter-Nadel in einem 45-Grad-Winkel, um 0,2 Milliliter BHI-Lösung zu injizieren, die eine Million koloniebildende Einheiten von Bakterien in der Midlog-Wachstumsphase enthält.In dieser Situation werden mit neun Schleifen fünf verschiedene Stämme in Wechselschleifen injiziert, wobei die dazwischen liegenden Schleifen allein mit dem Fahrzeug als Negativkontrollen injiziert werden. Nach der Injektion der Krankheitserreger, ersetzen Sie vorsichtig den Darmtrakt in den dorsalen Bereich der Bauchhöhle unter den Luftsäcken. Schließen Sie dann die Bauchhöhle.Besinnen Sie das Peritoneum und die Bauchmuskeln entlang des Beckens mit einem einfachen kontinuierlichen Nahtmuster mit einem Polyglutamin Multifilament synthetischen resorbierbaren Material. Weiter durch Nähen der Peritoneum und Bauchmuskeln vom Brustbein bis zur Kloiche mit einfachen kontinuierlichen Nähten. Als nächstes, Nähen Sie die Haut schließen mit einem Polyglutamin Multifilament synthetisches Material und ein einfaches kontinuierliches Muster.Zuerst Nähen entlang des Beckens, dann Naht vom Brustbein bis zur Kloiche. Nach dem Schließen der Einschnitte, halten Sie das Huhn unter Vollnarkose mit der richtigen Verwendung von Analgetika, um tierquälelige Schmerzen während der Infektionszeit zu minimieren. Fortsetzen der Anästhesieüberwachung, um ein angemessenes Anästhesieniveau zu gewährleisten.Nach der gewünschten Infektionszeit, wie z. B. sieben Stunden im vorliegenden Experiment, einschläfern Sie den Vogel und sammeln Sie das Darmgewebe. Schneiden Sie mit einem Skalpell Nummer drei einen halben bis einen Zentimeter langen Schleifenabschnitt aus. Übertragen Sie dann den Abschnitt auf 10%Formalin für die nächtliche Fixierung und weitere histopathologische Analyse.Verwenden Sie dann die gleiche Skalpellklinge auf der gleichen Schleife, um den Rest der Schleife auszuschneiden und dieses Gewebe in ein mikrofused Rohr zur Isolierung der Bakterien zu übertragen. Wiederholen Sie diesen Vorgang für jede Schleife mit einem neuen Skalpellblatt jedes Mal. Sieben Stunden nach der Injektion hat eine Darmschlaufe, die mit einem Kontrollsterilmedium injiziert wird, eine intakte Schleimhautbürstengrenze ohne Nekrose.Leichte Staus in den Darmschichten der Segmente sind keine Seltenheit. Sieben Stunden nach der Injektion mit dem Erreger, Clostridium perfringens, zotten Spitzen werden mit nekrotischen Einstiegsstellen rund um die Spitzen erodiert. Und dann nekrotisches Material, das die Zotten umgibt, gibt es Haufen von großen stabförmigen Bakterien.Manchmal ist Nekrose auf eine schlechte verfahrenstechnische Ausführung zurückzuführen und kann als lästig interpretiert werden, die von Bakterien produziert werden. Ein verräterisches Zeichen ist das Fehlen von Bakterien im histologischen Abschnitt. Auch die Blutgefäße in der Muskelschicht sind durch die Anhäufung vieler degenerierender Erythrozyten, die auf eine Gefäßverstopfung hinweisen, stark erweitert.Dies wurde durch ligated mesenterische Blutgefäße verursacht, die wahrscheinlich ligted wurden, um übermäßige körperliche Belastung des Darms zu tun. Ischämische Schleifen lassen sich während der chirurgischen Eingriffe mikroskopisch leicht identifizieren. Nach schweren Gefäßstaus ein paar Minuten nach der Ligatur wird die Serosa dunkelblau sein, anstatt ihre normale rosa rötliche Färbung.Nachdem Sie sich dieses Video angeschaut haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie mehrere Darmschlaufen in einem Hühnermodell erstellen können, indem Sie Ligaturen auf den Darm legen. Einmal gemeistert die chirurgischen Eingriffe, ohne Infektionszeit, kann in weniger als drei Stunden durchgeführt werden, wenn es richtig durchgeführt wird. Während dieses Verfahrens zu versuchen, ist es wichtig, das Huhn unter tiefer Anästhesie zu halten, um die Schmerzen zu kontrollieren und vitale Zeichen während aller Verfahren zu überwachen, einschließlich chirurgischer Teil und nach der InfektionZeit.Nach diesem Verfahren oder ihren Methoden wie bakterielle Isolierung, und eine direkte Identifizierung wie Gen-Nachweis durch PCR kann durchgeführt werden, um externe Fragen wie Dierückung und Identifizierung des ersten injizierten Erregers zu beantworten. Nach dieser Entwicklung ebnete diese Technik einen Weg für Forscher auf dem Gebiet der Clostridium perfringens Pathogenese, um nekrotische Enteritis bei Hühnern zu erforschen. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit lebenden Tieren extrem variabel sein kann.Und Vorsichtsmaßnahmen wie kontinuierliche Anästhesieüberwachung des Huhns sollten immer während der Durchführung dieses Verfahrens durchgeführt werden.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Biomarker in einem Tiermodell für die Aufdeckung Neural, hämatologischen und Behavioral Korrelate der PTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

Forschung

Medizin

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Functional Assessment of Darmmotilität und Darmwand Entzündung in Nagetiere: Analysen in einem standardisierten Modell der intestinalen Manipulation

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

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Murine Modell der intestinalen Ischämie-Reperfusionsschaden

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Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

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A Model of Free Tissue Transfer: The Rat Epigastric Free Flap

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Free tissue transfer has been increasingly used in clinical practice since the 1970s, allowing reconstruction of complex and otherwise untreatable defects ...

Intestinal Stem Cell Isolation and Culture in a Porcine Model of Segmental Small Intestinal Ischemia

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Messung der isometrischen Kontraktilität der Maus mesenterialen Arterie mit Draht Myographie

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