Name: a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence
Uploaded: 2018-10-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי הכיסא במחקר עופות (Boulianne מ') מן הפקולטה לרפואה וטרינרית של דה מאוניברסיטת מונטריאול. ד"ר Boulianne, האב פיתח את המודל. ד"ר Boulianne, האב לבצע את הניתוחים. ד ר ברנס סייע בפיתוח פרוטוקול הרדמה. ד ר הורה לערוך הוידאו וכתב את כתב היד. Drs ברנס, Desrochers ו- Boulianne לערוך את כתב היד.

כל ההליכים עם שימוש בבעלי חיים חיים היו מורשים על-ידי הוועדה האתית של הפקולטה לרפואה וטרינרית, דה מאוניברסיטת מונטריאול (CÉUA, 'Comité d' éthique de l'utilisation des Animaux ").
1. שיקולים לפני הניתוח
<ol><li>בחר בן 10 שבועות פתוגן מסוים חינם (SPF) לגהורן תרנגולות לניתוח. הערה: המשקל שלהם חייב להיות בי?...

<ol>
	<li>Vitale, A., Chiarotti, F., Alleva, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+animal+models+in+disease+research.">The use of animal models in disease research.</a> Rare diseases and orphan drugs. 2 (1), 1-4 (2015).</li><li>Uzal, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+to+study+the+pathogenesis+of+human+and+animal+Clostridium+perfringens+infections.">Animal models to study the pathogenesis of human and animal Clostridium perfringens infections.</a> Veterinary Microbiology. , (2015).</li><li>Bernier, G., Phaneuf, J. B., Filion, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+in+broiler+chickens.+III.+Study+of+the+factors+favoring+the+multiplication+of+Clostridium+perfringens+and+the+experimental+transmission+of+the+disease.">Necrotic enteritis in broiler chickens. III. Study of the factors favoring the multiplication of Clostridium perfringens and the experimental transmission of the disease.</a> Canadian Journal of Comparative Medicine. 41 (1), 112-116 (1977).</li><li>Al-Sheikhly, F., Truscott, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathology+of+necrotic+enteritis+of+chickens+following+infusion+of+broth+cultures+of+Clostridium+perfringens+into+the+duodenum.">The pathology of necrotic enteritis of chickens following infusion of broth cultures of Clostridium perfringens into the duodenum.</a> Avian Diseases. 21 (2), 230-240 (1977).</li><li>Wicker, D. L., Iscrigg, W. N., Trammell, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+control+and+prevention+of+necrotic+enteritis+in+broilers+with+zinc+bacitracin.">The control and prevention of necrotic enteritis in broilers with zinc bacitracin.</a> Poultry Science. 56 (4), 1229-1231 (1977).</li><li>Keyburn, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NetB,+a+new+toxin+that+is+associated+with+avian+necrotic+enteritis+caused+by+Clostridium+perfringens.">NetB, a new toxin that is associated with avian necrotic enteritis caused by Clostridium perfringens.</a> PLoS Pathog. 4 (2), e26 (2008).</li><li>Timbermont, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+of+Clostridium+perfringens+isolates+determines+the+ability+to+induce+necrotic+enteritis+in+broilers.">Origin of Clostridium perfringens isolates determines the ability to induce necrotic enteritis in broilers.</a> Comp Immunol Microbiol Infect Dis. 32 (6), 503-512 (2009).</li><li>Paradis, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+avilamycin+for+the+prevention+of+necrotic+enteritis+caused+by+a+pathogenic+strain+of+Clostridium+perfringens+in+broiler+chickens.">Efficacy of avilamycin for the prevention of necrotic enteritis caused by a pathogenic strain of Clostridium perfringens in broiler chickens.</a> Avian Pathol. 45 (3), 365-369 (2016).</li><li>Valgaeren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lesion+development+in+a+new+intestinal+loop+model+indicates+the+involvement+of+a+shared+Clostridium+perfringens+virulence+factor+in+haemorrhagic+enteritis+in+calves.">Lesion development in a new intestinal loop model indicates the involvement of a shared Clostridium perfringens virulence factor in haemorrhagic enteritis in calves.</a> Journal of Comparative Pathology. 149 (1), 103-112 (2013).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+C-terminal+domain+of+Clostridium+perfringens+alpha+toxin+as+a+vaccine+candidate+against+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">The C-terminal domain of Clostridium perfringens alpha toxin as a vaccine candidate against bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> Vet Res. 47 (1), 52 (2016).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxin-neutralizing+antibodies+protect+against+Clostridium+perfringens-induced+necrosis+in+an+intestinal+loop+model+for+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">Toxin-neutralizing antibodies protect against Clostridium perfringens-induced necrosis in an intestinal loop model for bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> BMC Vet Res. 12 (1), 101 (2016).</li><li>Parent, E., Archambault, M., Charlebois, A., Bernier-Lachance, J., Boulianne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chicken+intestinal+ligated+loop+model+to+study+the+virulence+of+Clostridium+perfringens+isolates+recovered+from+antibiotic-free+chicken+flocks.">A chicken intestinal ligated loop model to study the virulence of Clostridium perfringens isolates recovered from antibiotic-free chicken flocks.</a> Avian Pathol. 46 (2), 138-149 (2017).</li><li>Janvilisri, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+differential+proteomes+of+Clostridium+difficile+in+the+pig+ileal-ligated+loop+model.">Temporal differential proteomes of Clostridium difficile in the pig ileal-ligated loop model.</a> PLoS One. 7 (9), e45608 (2012).</li><li>Aabo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+in+vivo+model+for+study+of+intestinal+invasion+by+Salmonella+enterica+in+chickens.">Development of an in vivo model for study of intestinal invasion by Salmonella enterica in chickens.</a> Infection and Immunity. 68 (12), 7122-7125 (2000).</li><li>Meurens, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+immune+response+following+Salmonella+enterica+subspecies+enterica+serovar+Typhimurium+infection+in+porcine+jejunal+gut+loops.">Early immune response following Salmonella enterica subspecies enterica serovar Typhimurium infection in porcine jejunal gut loops.</a> Vet Res. 40 (1), 5 (2009).</li><li>Gerdts, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+intestinal+'loops'+provide+an+in+vivo+model+to+analyse+multiple+mucosal+immune+responses.">Multiple intestinal 'loops' provide an in vivo model to analyse multiple mucosal immune responses.</a> J Immunol Methods. 256 (1-2), 19-33 (2001).</li><li>Wade, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adherent+abilities+of+Clostridium+perfringens+strains+are+critical+for+the+pathogenesis+of+avian+necrotic+enteritis.">The adherent abilities of Clostridium perfringens strains are critical for the pathogenesis of avian necrotic enteritis.</a> Vet Microbiol. 197, 53-61 (2016).</li><li>Cooper, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+for+chickens+of+Clostridium+perfringens+isolated+from+poultry+and+other+sources.">Virulence for chickens of Clostridium perfringens isolated from poultry and other sources.</a> Anaerobe. 16 (3), 289-292 (2010).</li><li>Cooper, K. K., Songer, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+of+Clostridium+perfringens+in+an+experimental+model+of+poultry+necrotic+enteritis.">Virulence of Clostridium perfringens in an experimental model of poultry necrotic enteritis.</a> Veterinary Microbiology. 142 (3-4), 323-328 (2010).</li><li>Chalmers, G., Bruce, H. L., Toole, D. L., Barnum, D. A., Boerlin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+potential+in+a+model+system+using+Clostridium+perfringens+isolated+from+field+outbreaks.">Necrotic enteritis potential in a model system using Clostridium perfringens isolated from field outbreaks.</a> Avian Diseases. 51 (4), 834-839 (2007).</li></ol>

לולאות מעיים מודלים תוארו במינים רבים ללמוד פתוגן-פונדקאי אינטראקציה, בפתוגנזה של מחלות הנגרמות על ידי פתוגנים מעיים שונות, כגון החיידק Clostridium, Clostridium difficile , סלמונלה enterica7,9,13,14,15. הוא גם ...

השימוש במודלים לחקר מחלות זיהומיות להשפיע על בני האדם ובעלי החיים הוא כלי מרכזי בהערכת הגורמים התקפה אלימה ויסות בפתוגנזה של תנאי ספציפי כמו גם באשר לפרט אסטרטגיות כדי למנוע או לרפא מחלות1. למרות יתרונות רבים לשימוש בבעלי חיים כדי ללמוד מחלות שונות, חופרים אתית חששות לגבי המנהג. חוקרים צריך למזער את השימוש בבעלי חיים בעת השגת תוצאות משמעותיות וחוקית. הרעיון של ר' 3 העקרונות (החלף, הקטן, מקד) היה פירט כדי להבטיח רווחה סוגיות נדונו בניסויים כאלה. במחקרים דלקת מעיים נמק עוף, ויוו עוף מודלים משמשים כדי לחקור את אטיולוגיה, מניעת וטיפולים זה תנאי2,3,4,5. פתוגניים זנים של החיידק נושאת גורמים התקפה אלימה ספציפיים, כגון הרעלן NetB6, מנוהלים כדי לגרום דלקת מעיים נמק של תרנגולות7. העיקרון החלפת הוא, לכן, קשה לתפיסה ולהשגה במקרה כזה כמו אלה הגורמים התקפה אלימה לא יכול להיות קריטי של מיני בעלי חיים אחרים. רוב הדגמים עבור דלקת מעיים נמק בעופות להשתמש בשילוב של גורמי סיכון, כגון כגון ושינינו דיאטה כדי לגרום דלקת מעיים נמק ואחריו gavage של תרבות מרק המכיל מספר גדול של החיידק2. מודלים אלה יגרום למחלה במספר רב של עופות, תמותה יכול להיות חשוב כזה ניסויים8, וליחסיו חששות לגבי העקרונות הפחתת ועידון מחקר בבעלי חיים.
לולאות מעיים מחוברים הן חלופה רצויה לחקר מחלות הנגרמת על ידי פתוגנים במעיים ביחס עיקרון הפחתת ולאחר עידון. מודלים אלה, מקטעי מעיים שנקרא "לולאות" נוצרים על-ידי הצבת ליגטורות לאורך צינור העיכול כדי ליצור תאים עצמאית, הרמטי איפה פתוגנים יכול להיות מוזרק לבד9 או עם מולקולות אחרות, כגון חיסון מועמדים 10 , 11. פתוגנים עניין ממוקמים קשר הדוק עם תאי המעי, אחרי כמה שעות של זמן זיהום, דגימות מעיים ניתן לשחזר לצורך ניתוח נוסף. זה מאפשר את השימוש במספר קבוצות שליטה וטיפול של אותה חיה. ניתן לבצע ניתוח סטטיסטי עם דגמים מידות החוזרות ונשנות, אשר מגדילה את כוחו של אפליה בין קבוצות, מקטין את מספר תרנגולות הכרחי בהשוואה gavage אוראלי ניסויים. כמו כן, ניתוחים ושעות זיהום לאחר מכן מבוצעים תחת הרדמה כללית רציפה, שיכוך כאבים, ומכאן הקטנת הכאב בעלי חיים. לולאה סגורה ligations הם תבנית אידיאלית עבור הפחתת מספרים מארח ויצירת מערכת אנושית יותר מחקר בבעלי חיים.
לולאות מעיים מחוברים מודלים היטיב לתאר במינים שונים, כגון עגלים, שפנים, עכברים2,9, אך גרוע שמתואר תרנגולות7. לשימוש מיטבי של מודל ניתוח זה, טכניקה נכונה וביצוע חיוניים ליצירת מחוברים לולאות מעיים כדי למנוע נזקים את השלמות מעיים. המטרה של כתב יד זה היא לתאר את שיטת צעד אחר צעד ליצירת של מספר לולאות מעיים במודל של עוף. טכניקה זו הוא מוגבל על ידי מיומנותו וניסיונו של המנתח, כמו נהלים מדויקים חיוניים להצלחת הפרויקט.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>EZ-Scrub 747</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td></td>
			<td>4% chlorhexidine gluconate detergent impregnated sterile brush. No catalog number available. Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/infection-prevention/surgical-hand-scrubs/ez-scrub-preoperative-surgical-scrub-brushes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl alcohol 70% USP 4 L</td>
			<td>Commercial isopropyl alcohol</td>
			<td>P016IP70</td>
			<td>Web address: http://www.comalc.com/products/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorexidine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>282227-1G</td>
			<td>Chlorhexidine gluconate solution, must be diluted to 4%. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/282227?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI8vHr4_OY1wIV3rrACh2ZWQKuEAAYAiAAEgLKx_D_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Drape Small (27 inch x 24 inch) with 3 x 6 inch Fenestration</td>
			<td>Veterinary Specialty Products</td>
			<td>32724</td>
			<td>Web address: http://www.vetspecialtyproducts.com/index.cfm?fuseaction=ecommercecatalog.detail&#38;productgroup_id=15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades #3</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>301</td>
			<td>Web address: https://www.swann-morton.com/product/16.php</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline NaCl 0.9%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8776-100ML</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8776?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl 3-0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>D9003</td>
			<td>Polyglactin multifilament absorbable suture material. Web address: http://www.ethicon.com/healthcare-professionals/products/wound-closure/absorbable-sutures/coated-vicryl-polyglactin-910-suture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1 ml with 26G needle</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td>329652</td>
			<td>Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/diabetes-care/insulin-syringes/bd-1-ml-conventional-insulin-syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Heart Infusion</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>1104930500</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/110493?lang=fr&#38;region=CA&#38;cm_sp=Insite-_-prodRecCold_xorders-_-prodRecCold2-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tube</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9661-500EA</td>
			<td>Microcentrifuge tube. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t9661?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI-YizzfiY1wIVRkCGCh30SQjuEAAYAiAAEgLK5fD_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, buffered neutral, 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td>Ratio tissue : formalin of 1: 10 for adequate fixation. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht501128?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clostridium perfringens strains</td>
			<td>Universit&#233; de Montr&#233;al, Chaire en recherche avicole</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Specific to each laboratory, available upon request to correspondant author</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence

דלקת מעיים נמק נחקרה תרנגולות באמצעות ויוו זיהום מודלים שונים. רוב אלה להשתמש בשילוב של גורמים נטייה, כגון כגון ותזונה, עם gavage או באמצעות ההזנה באמצעות החיידק Clostridium. דגמים אלה, השוואת מספר זני החיידק ללימודי התקפה אלימה דורש מספר רב של מחשבים מארחים עד להשגת תוצאות משמעותיות. התמותה במהלך המחקר יכול להיות גבוה בהתאם לדגם ניסיוני, ומכאן העלאת חששות אתיים בנוגע רווחת בעלי חיים במחקר. הפיתוח של הדגמים החדשים של זיהום, הדורשים פחות חיות ללמוד פתוגנזה, טרם מתן תוצאות משמעותיות מבחינה סטטיסטית וחוקית, חשוב להפחית את השימוש בבעלי חיים במחקר. לולאת המעי מחוברים מודלים שימשו ללמוד זיהומים clostridial מינים שונים כגון עכברים, ארנבים, עגלים. בעקבות ניתוחים ליצירת לולאה מחוברים מקטעי, זני החיידק הם מוזרק ישירות לתוך לולאות להקים במגע ישיר בין החיידק לבין רירית המעי. דוגמאות המעי הדק ותוכנו luminal נלקחים על הפסקת ההליכים אחרי כמה שעות. מספר זני חיידקים יכולים לקבל חיסון בכל בעל חיים, ומכאן הקטנת מספר הנושאים הנדרשים בניסויים. בנוסף, נהלים מבוצעים בהרדמה כללית כדי להפחית כאב בבעלי חיים. בעופות, מודל זה יהיה מתאים יותר מאשר ניהול דרך הפה כדי להשוות בין החיידק זן פתוגניות כי בעלי חיים פחות נחוצים ללא גורמי predisposing נדרשים כדי לגרום למחלה, כאב נשלטת על ידי משככי כאבים . המודל לולאת המעי מחוברים מתואר בצורה גרועה בעופות, תקינה חיונית עבור השימוש האופטימלי. כתב יד זה מספק את כל הצעדים הדרושים כדי ליצור לולאות מחוברים מעיים רבים בעופות ומביא מידע על נקודות קריטי כדי להשיג תוצאות בתוקף.

תיאור סכמטי של לולאות מעיים 9, 8 interloops מוצג באיור1. במודל זה, סך של לולאות 9, 8 interloops נוצרים עם ליגטורות פשוטה. הלולאה מורכבת ליגטורות לקרע, במרווחים קבועים על ידי 2 ס מ נמדד מאמצע הקשירה הפרוקסימלית. שתי לולאות הסמוכים מופרדות interloop של 1 ס מ. כדי להקטין את הסכנה ?...

Watch this Scientific Journal Video about A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence at JoVE.com

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

כאן אנו מציגים פרוטוקול ליצירת בניתוח 'לולאות מעיים מחוברים' בהמעי הדק עוף. הליך זה מאפשר ההשוואה של מספר זנים של החיידק Clostridium התקפה אלימה בחיי עיר שורה בודדת. שיטה זו פוחתת במידה ניכרת את מספר התרנגולות ההכרחיות בדרך כלל לצורך ניסויים דומים ויוו .

מודל לולאת המעי מחוברים בעופות חינם ומורדמת פתוגן מסוים ללמוד החיידק Clostridium התקפה אלימה

Necrotic enteritis was studied in chickens using various in vivo infection models. Most of these use a combination of predisposing factors, such as ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום המחקר דלקת פרקטיות נמק עוף. כגון השוואת הארסיות של זנים ספציפיים Clostridium perfringens הגורמים למחלה זו. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מפחיתה באופן ניכר את מספר התרנגולות הנחוצות בדרך כלל לניסויי אמביבור דומים.בעוד שיטה זו יכולה לספק תובנה לתוך פוטנציאל ארסיות של זנים Clostridium perfringens, זה יכול להיות מיושם גם על פתוגנים מעיים אחרים כגון Clostridium difficile, או סלמונלה אנטריקה. בדרך כלל, אנשים חדשים בשיטה זו יתקשו כי הליכים כירורגיים זקוקים להכשרה ספציפית ויבוצעו רק על ידי אלה שרכשו מיומנויות כגון תירה, טכניקה לפני הניסוי. לאחר הרדמה של עוף בן 10 שבועות ללא פתוגן, הקים את הצגים למדידות חיוניות והתחל להסיר ידנית את הנוצות מהבטן על ידי מתיחה עדינה.לאחר מכן, לשפשף את האתר הכירורגי באמצעות כלורקסידין gluconate עם מברשת זיפים רכה. מקרצפים בעדינות את העור מהמרכז לפריפריה במשך חמש דקות ללא היפוך מסלול. לאחר מכן, לבצע שלושה קטעים לסירוגין באתר הניתוח עם פתרון גלוקונאט כלורקסידין ואלכוהול Isopropyl באמצעות גזות סטריליות.שוב, ללכת מהמרכז לפריפריה, ולאחר מכן, לעטוף את העוף. התחל על ידי פתיחת הווילון מעל האתר הכירורגי, ולאחר מכן להפוך חתך עור קו אמצע נמוך בצורת L עם מספר שלוש אזמל, החל חיבוק סנטימטר אחד אל עצם החזה, ומסתיים בגולגולת סנטימטר אחד כדי cloicha. לאחר מכן, המשיכו את החתך בצורת L בניצב הראשון על ידי ביצוע חתך שני החל בקצה החיבוק של החתך הראשון והמשיכו חמישה סנטימטרים לצד שמאל של הבטן על ידי ביצוע קו האגן.פתח זה יאפשר מיצוי קל של המעיים. לאחר מכן, פתח את שרירי הלידה והבטן באמצעות אותו דפוס בצורת L כדי לגשת לחלל הבטן. שיקי האוויר ייחשפו כעת ויש לשמור אותם לחים באמצעות גזה ספוגה מלוחה.לאחר מכן, הכנס וו מעוקר Snook לתוך חלל הבטן על ידי ביצוע דופן הבטן השמאלית עובד את הוו סביב שקעי אוויר הבטן כדי לחלץ את המעיים. לאחר מכן, באמצעות גזה יבשה, להמשיך בעדינות חיצונית המעיים כדי לחשוף את Jejunum. מורחים את המעיים ולשמור אותם לחים עם ריסוס תכופים עם מלוחים ועל ידי כיסוי אותם עם גזה ספוגה מלוחים.חשוב להיות עדין מאוד בעת נטילת המעיים כי מתח מוגזם יכול לקרוע את כלי mesenteric אשר עלול להוביל נגעים איסכמיים במעיים מאוד לסכן את התוצאה של ההליך. לאחר החיצוניות של המעיים, לעשות סדרה של לולאות במעיים החל Jejunum. כל לולאה יכולה לשמש לטיפול שונה.ב Jejunum proximal, מניחים קשירה פשוטה עם חומר רב-פילמנט פוליגלוטמין סינטטי לספיגה תוך הימנעות קשירה של כלי mesenteric העיקריים. לאחר מכן, מניחים קשירה דיסטלית שני סנטימטרים מן הקשירה הפרוקסימלית כדי להשלים את הלולאה הראשונה. כל הקשירות הפרוקסימליות והדיסטליות צריכות להיות מ רווחים של כשני סנטימטרים.כל זוג קשירה יוצר לולאה, שהיא קטע הרמטי. לאחר מכן, ליצור interloop או קטע של המעי בין לולאות. מניחים קשירה פשוטה חצי סנטימטר aboreeter כדי קשירה דיסטלית של הלולאה הראשונה.קשירה זו נמצאת באמצע interloop ותפחית זיהום לחצות אפשרי בין לולאות. עכשיו, להמשיך את הדפוס של יצירת לולאה נוספת חצי סנטימטר aboreeter מן הקשירה interloop. כאן, תשע לולאות ושמונה interloops נוצרים מכסה 26 סנטימטרים של המעי.ניתן להתאים את מספר הלולאות לפי הצורך. לאחר מכן, להמשיך עם זן הזרקת Clostridium perfringens לתוך לולאות. לתוך הצד האנטי-mesenteric של הלולאה, להשתמש מחט מד 26 בזווית של 45 מעלות להזריק 0.2 מיליליטר של פתרון BHI, המכיל מיליון מושבה להרכיב יחידות של חיידקים בשלב הצמיחה midlog.במצב זה, עם תשע לולאות, חמישה זנים שונים מוזרקים לולאות לסירוגין עם לולאות להתערב מוזרק עם הרכב לבד כמו פקדים שליליים. לאחר הזרקת הפתוגנים, החלף בעדינות את מערכת העיכול לאזור הגבי של חלל הבטן מתחת לשקי האוויר. לאחר מכן, סגור את חלל הבטן.לתפור את שרירי צפא והבטן לאורך האגן עם דפוס תפר מתמשך פשוט באמצעות חומר ספיגה סינתטי Polyglutamine Multifilament סינתטי. המשך על ידי תפור את צמיטונום ושרירי הבטן מעצם החזה אל הקלוש באמצעות תפרים רציפים פשוטים. לאחר מכן, לתפור את העור קרוב באמצעות חומר סינתטי Multifilament פוליגלוטמין דפוס רציף פשוט.ראשית, תפר לאורך האגן, ולאחר מכן תפר מעצם החזה אל הקלוש. לאחר סגירת החתכים, לשמור על העוף תחת הרדמה כללית עם שימוש נכון של משככי כאבים כדי למזער את הכאב של בעלי חיים במהלך זמן הזיהום. המשך ניטור הרדמה כדי להבטיח רמת הרדמה נאותה.לאחר הכמות הרצויה של זמן ההדבקה, כגון שבע שעות בניסוי הנוכחי, המתת דם לציפור ולאסוף את רקמות המעי. באמצעות אזמל מספר שלוש, לגזור חצי עד קטע לולאה סנטימטר אחד. לאחר מכן, להעביר את החלק ל 10% פורמלין עבור קיבעון לילה וניתוח היסטופתולוגי נוסף.לאחר מכן, השתמש באותו להב אזמל על אותה לולאה כדי לחתוך את שארית הלולאה ולהעביר את הרקמה לצינור microfused לבידוד של החיידקים. חזור על הליך זה עבור כל לולאה באמצעות להב אזמל חדש בכל פעם. שבע שעות לאחר ההזרקה, לולאת מעיים מוזרקת עם מדיום סטרילי שליטה יש גבול מברשת רירית שלם ללא נמק.גודש קל בשכבות המעיים של המקטעים אינו נדיר. שבע שעות לאחר הזרקה עם הפתוגן, Clostridium perfringens, טיפים villi נשחקים עם אתרי כניסה נמק המקיפים את הטיפים. ואז חומר נמק המקיף את הווילי, יש אשכולות של חיידקים גדולים בצורת מוט.לפעמים נמק נובע ביצוע פרוצדורלי לקוי והוא יכול להיות מתפרש לא נכון כמו נגעים המיוצרים על ידי חיידקים. סימן מסגיר הוא היעדר חיידקים בחלק ההיסטולוגי. כמו כן, כלי הדם בשכבת השרירים הם הוחממו קשות על ידי הצטברות של אריתרוציטים מנוון רבים המעידים על גודש בכלי הדם.זה נגרם על ידי כלי דם mesenteric קשור כי סביר היו קשורות לעשות עומס פיזי מוגזם על המעיים. לולאות איסכמיות ניתן לזהות בקלות מיקרוסקופית במהלך ההליכים הכירורגיים. בעקבות גודש חמור בכלי הדם כמה דקות לאחר הקשירה, serosa יהיה כחול כהה במקום צבע אדמדם ורוד רגיל שלה.לאחר צפייה בסרטון זה, אתה צריך הבנה טובה של איך ליצור לולאות מעיים מרובות במודל עוף על ידי הצבת קשירה על המעיים. לאחר שלל את ההליכים הכירורגיים, למעט זמן זיהום, ניתן לעשות זאת בתוך פחות משלוש שעות, אם הוא מבוצע כראוי. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לשמור על העוף תחת הרדמה עמוקה כדי לשלוט בכאב ולפקח על סימנים חיוניים במהלך כל ההליכים, כולל חלק כירורגי ולאחר זמן ההדבקה.בעקבות הליך זה או השיטות שלהם כמו בידוד חיידקי, וזיהוי ישר כגון זיהוי גנים על ידי PCR ניתן לבצע על מנת לענות על שאלות חיצוניות כמו התאוששות וזיהוי הפתוגן הראשוני מוזרק. לאחר התפתחות זו, טכניקה זו סללה דרך לחוקרים בתחום Clostridium perfringens פתוגנזה לחקור דלקת פרקטית נקרטית בתרנגולות. אל תשכח כי עבודה עם בעלי חיים חיים יכול להיות משתנה מאוד.ואמצעי זהירות כגון ניטור הרדמה מתמשך של העוף צריך תמיד להיעשות בעת ביצוע הליך זה.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

סמנים ביולוגיים במודל חיה לחשיפה קושרת עצבית, המטולוגית, והתנהגות של PTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

הערכה תפקודית של תנועתיות מעיים ודלקת דופן מעי במכרסמים: ניתוח בדגם סטנדרטי של מניפולצית מעיים

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

אדם<em&gt; Ex Vivo</em&gt; טרשת רובד מודל ללמוד ביולוגיה נגע

Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease of the vasculature. There are various methods to study the inflammatory compound in atherosclerotic ...

Facial Nerve Axotomy in Mice: A Model to Study Motoneuron Response to Injury

Axotomy פנים עצב של עכברים: דגם לחקר תגובת Motoneuron לפגיעה

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

דגם Murine של פגיעת המעיים איסכמיה reperfusion

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

וריד ביון דגם: מודל מתאים ללמוד patency מעקף

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

A Model of Free Tissue Transfer: The Rat Epigastric Free Flap

מודל של העברת רקמות חינם: דש עכברוש ברום הבטן חינם

Free tissue transfer has been increasingly used in clinical practice since the 1970s, allowing reconstruction of complex and otherwise untreatable defects ...

Intestinal Stem Cell Isolation and Culture in a Porcine Model of Segmental Small Intestinal Ischemia

בידוד תאי המעי ותרבות במודל של חזירי של סגמנטלי איסכמיה במעיים קטן

Intestinal ischemia remains a major cause of morbidity and mortality in human and veterinary patients. Many disease processes result in intestinal ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

מודל לפציעה בהקפאה לחקור אוטם שריר הלב בעכבר

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we ...