Name: a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence
Uploaded: 2018-10-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence at JoVE.com

यह काम कुक्कुट अनुसंधान (एम. Boulianne) में चेयर द्वारा विश्विद्यालय डी मॉंट्रियल के पशु चिकित्सा के संकाय से समर्थित था. डीआरएस को लेकर Boulianne और पैरेंट्स ने मॉडल डेवलप किया । डीआरएस. Boulianne और जनक ने सर्जरी का प्रदर्शन किया । डॉ जलता संज्ञाहरण प्रोटोकॉल विकसित करने में सहायता की । डॉ जनक ने वीडियो संपादित किया और पांडुलिपि लिखी । डीआरएस में जले, Desrochers और Boulianne ने पांडुलिपि का संपादन किया ।

जीवित पशु उपयोग के साथ सभी प्रक्रियाओं पशु चिकित्सा, विश्विद्यालय डी मॉंट्रियल (CÉUA, ' Comité d'éthique de l'utilisation des Animaux ') के संकाय की नैतिक समिति द्वारा प्राधिकृत किया गया ।
1. सर्जरी से पहले विचार
<ol><li>10 सप्ताह ...

<ol>
	<li>Vitale, A., Chiarotti, F., Alleva, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+animal+models+in+disease+research.">The use of animal models in disease research.</a> Rare diseases and orphan drugs. 2 (1), 1-4 (2015).</li><li>Uzal, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+to+study+the+pathogenesis+of+human+and+animal+Clostridium+perfringens+infections.">Animal models to study the pathogenesis of human and animal Clostridium perfringens infections.</a> Veterinary Microbiology. , (2015).</li><li>Bernier, G., Phaneuf, J. B., Filion, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+in+broiler+chickens.+III.+Study+of+the+factors+favoring+the+multiplication+of+Clostridium+perfringens+and+the+experimental+transmission+of+the+disease.">Necrotic enteritis in broiler chickens. III. Study of the factors favoring the multiplication of Clostridium perfringens and the experimental transmission of the disease.</a> Canadian Journal of Comparative Medicine. 41 (1), 112-116 (1977).</li><li>Al-Sheikhly, F., Truscott, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathology+of+necrotic+enteritis+of+chickens+following+infusion+of+broth+cultures+of+Clostridium+perfringens+into+the+duodenum.">The pathology of necrotic enteritis of chickens following infusion of broth cultures of Clostridium perfringens into the duodenum.</a> Avian Diseases. 21 (2), 230-240 (1977).</li><li>Wicker, D. L., Iscrigg, W. N., Trammell, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+control+and+prevention+of+necrotic+enteritis+in+broilers+with+zinc+bacitracin.">The control and prevention of necrotic enteritis in broilers with zinc bacitracin.</a> Poultry Science. 56 (4), 1229-1231 (1977).</li><li>Keyburn, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NetB,+a+new+toxin+that+is+associated+with+avian+necrotic+enteritis+caused+by+Clostridium+perfringens.">NetB, a new toxin that is associated with avian necrotic enteritis caused by Clostridium perfringens.</a> PLoS Pathog. 4 (2), e26 (2008).</li><li>Timbermont, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+of+Clostridium+perfringens+isolates+determines+the+ability+to+induce+necrotic+enteritis+in+broilers.">Origin of Clostridium perfringens isolates determines the ability to induce necrotic enteritis in broilers.</a> Comp Immunol Microbiol Infect Dis. 32 (6), 503-512 (2009).</li><li>Paradis, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+avilamycin+for+the+prevention+of+necrotic+enteritis+caused+by+a+pathogenic+strain+of+Clostridium+perfringens+in+broiler+chickens.">Efficacy of avilamycin for the prevention of necrotic enteritis caused by a pathogenic strain of Clostridium perfringens in broiler chickens.</a> Avian Pathol. 45 (3), 365-369 (2016).</li><li>Valgaeren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lesion+development+in+a+new+intestinal+loop+model+indicates+the+involvement+of+a+shared+Clostridium+perfringens+virulence+factor+in+haemorrhagic+enteritis+in+calves.">Lesion development in a new intestinal loop model indicates the involvement of a shared Clostridium perfringens virulence factor in haemorrhagic enteritis in calves.</a> Journal of Comparative Pathology. 149 (1), 103-112 (2013).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+C-terminal+domain+of+Clostridium+perfringens+alpha+toxin+as+a+vaccine+candidate+against+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">The C-terminal domain of Clostridium perfringens alpha toxin as a vaccine candidate against bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> Vet Res. 47 (1), 52 (2016).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxin-neutralizing+antibodies+protect+against+Clostridium+perfringens-induced+necrosis+in+an+intestinal+loop+model+for+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">Toxin-neutralizing antibodies protect against Clostridium perfringens-induced necrosis in an intestinal loop model for bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> BMC Vet Res. 12 (1), 101 (2016).</li><li>Parent, E., Archambault, M., Charlebois, A., Bernier-Lachance, J., Boulianne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chicken+intestinal+ligated+loop+model+to+study+the+virulence+of+Clostridium+perfringens+isolates+recovered+from+antibiotic-free+chicken+flocks.">A chicken intestinal ligated loop model to study the virulence of Clostridium perfringens isolates recovered from antibiotic-free chicken flocks.</a> Avian Pathol. 46 (2), 138-149 (2017).</li><li>Janvilisri, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+differential+proteomes+of+Clostridium+difficile+in+the+pig+ileal-ligated+loop+model.">Temporal differential proteomes of Clostridium difficile in the pig ileal-ligated loop model.</a> PLoS One. 7 (9), e45608 (2012).</li><li>Aabo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+in+vivo+model+for+study+of+intestinal+invasion+by+Salmonella+enterica+in+chickens.">Development of an in vivo model for study of intestinal invasion by Salmonella enterica in chickens.</a> Infection and Immunity. 68 (12), 7122-7125 (2000).</li><li>Meurens, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+immune+response+following+Salmonella+enterica+subspecies+enterica+serovar+Typhimurium+infection+in+porcine+jejunal+gut+loops.">Early immune response following Salmonella enterica subspecies enterica serovar Typhimurium infection in porcine jejunal gut loops.</a> Vet Res. 40 (1), 5 (2009).</li><li>Gerdts, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+intestinal+'loops'+provide+an+in+vivo+model+to+analyse+multiple+mucosal+immune+responses.">Multiple intestinal 'loops' provide an in vivo model to analyse multiple mucosal immune responses.</a> J Immunol Methods. 256 (1-2), 19-33 (2001).</li><li>Wade, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adherent+abilities+of+Clostridium+perfringens+strains+are+critical+for+the+pathogenesis+of+avian+necrotic+enteritis.">The adherent abilities of Clostridium perfringens strains are critical for the pathogenesis of avian necrotic enteritis.</a> Vet Microbiol. 197, 53-61 (2016).</li><li>Cooper, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+for+chickens+of+Clostridium+perfringens+isolated+from+poultry+and+other+sources.">Virulence for chickens of Clostridium perfringens isolated from poultry and other sources.</a> Anaerobe. 16 (3), 289-292 (2010).</li><li>Cooper, K. K., Songer, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+of+Clostridium+perfringens+in+an+experimental+model+of+poultry+necrotic+enteritis.">Virulence of Clostridium perfringens in an experimental model of poultry necrotic enteritis.</a> Veterinary Microbiology. 142 (3-4), 323-328 (2010).</li><li>Chalmers, G., Bruce, H. L., Toole, D. L., Barnum, D. A., Boerlin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+potential+in+a+model+system+using+Clostridium+perfringens+isolated+from+field+outbreaks.">Necrotic enteritis potential in a model system using Clostridium perfringens isolated from field outbreaks.</a> Avian Diseases. 51 (4), 834-839 (2007).</li></ol>

आंत्र छोरों मॉडल कई प्रजातियों में वर्णित किया गया है के लिए मेजबान रोगज़नक़ बातचीत और विभिंन आंत्र रोगजनकों की वजह से रोगों के रोगजनन अध्ययन, जैसे क्लोस्ट्रीडियम perfringens, क्लोस्ट्रीडियम डिफीसाइल</...

पशु मॉडलों के प्रयोग से मानव और पशुओं को प्रभावित करने वाले संक्रामक रोगों का अध्ययन करने के लिए एक विशिष्ट स्थिति के रोगजनन विनियमन डाह कारकों का आकलन करने में एक केंद्रीय उपकरण के रूप में अच्छी तरह के रूप में रोकने या रोगों का इलाज करने के लिए विस्तृत रणनीतियों1. विभिंन रोगों का अध्ययन करने के लिए पशु मॉडलों का उपयोग करने के कई फायदे के बावजूद, इस अभ्यास के बारे में नैतिक चिंताओं उत्पंन कर रहे हैं । शोधकर्ताओं ने महत्वपूर्ण और वैध परिणाम प्राप्त करते हुए पशु उपयोग को कम करने की जरूरत है । 3 रु सिद्धांतों की अवधारणा (बदलें, कम और परिष्कृत) यह सुनिश्चित करने के लिए कि कल्याण मुद्दों को इस तरह के परीक्षणों में संबोधित किया गया सविस्तार था । चिकन गल आंत्रशोथ अध्ययनों में, vivo चिकन मॉडल में एटियलजि, रोकथाम, और इस हालत2,3,4,5के उपचार की जांच करने के लिए उपयोग किया जाता है । perfringens के रोगजनक उपभेदों NetB विष6के रूप में विशिष्ट डाह कारकों, ले जाने,7मुर्गियों में गल आंत्रशोथ कारण प्रशासित रहे हैं । प्रतिस्थापन सिद्धांत है, इसलिए, इन डाह कारकों के रूप में इस तरह के मामले में प्राप्त करने के लिए मुश्किल अन्य पशु प्रजातियों में के रूप में महत्वपूर्ण नहीं हो सकता है. मुर्गियों में गल आंत्रशोथ के लिए ज्यादातर मॉडल coccidiosis और बदल आहार के रूप में जोखिम कारकों का एक संयोजन का उपयोग करें, आंत्रशोथ पैदा करने शोरबा संस्कृति के gavage द्वारा पीछा किया ग. perfringens2की बड़ी संख्या में शामिलहै । इन मॉडलों मुर्गियों की एक बड़ी संख्या में रोग पैदा होगा, और मृत्यु इस तरह के परीक्षण8में महत्वपूर्ण हो सकता है, इस प्रकार की कमी और पशु अनुसंधान में शोधन सिद्धांतों के बारे में चिंताओं को उठा ।
आंतों ligated छोरों मॉडल सिद्धांत कमी के संबंध में आंत्र रोगजनकों द्वारा प्रेरित रोगों के अध्ययन के लिए एक वांछनीय विकल्प हैं, और शोधन. इन मॉडलों में, आंतों क्षेत्रों ' नामक छोरों ' आंत्र पथ के साथ लिगेचर्स रखकर बनाया जाता है स्वतंत्र और hermetic डिब्बों के रूप में जहां रोगजनकों अकेले इंजेक्शन किया जा सकता9 या अन्य अणुओं के साथ, ऐसे वैक्सीन उंमीदवारों के रूप में 10 , 11. ब्याज के रोगजनकों आंत्र कोशिकाओं के साथ निकट संपर्क में रखा जाता है और संक्रमण के समय के कुछ ही घंटों के बाद, आंतों के नमूने आगे विश्लेषण के लिए बरामद किया जा सकता है । यह एक ही जानवर में एकाधिक उपचार और नियंत्रण समूहों के उपयोग की अनुमति देता है । सांख्यिकीय विश्लेषण दोहराया उपाय मॉडल है, जो समूहों के बीच भेदभाव की शक्ति बढ़ जाती है और मौखिक gavage परीक्षणों की तुलना में आवश्यक मुर्गियों की संख्या कम कर देता है के साथ किया जा सकता है । इसके अलावा, शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं और बाद में संक्रमण बार लगातार सामान्य संज्ञाहरण और analgesia के तहत प्रदर्शन कर रहे हैं, इसलिए जानवरों के दर्द को कम करने. बंद लूप ligations मेजबान संख्या को कम करने और पशु अनुसंधान में एक और अधिक मानवीय प्रणाली बनाने के लिए एक आदर्श टेंपलेट हैं ।
आंतों ligated छोरों मॉडल अच्छी तरह से विभिन्न प्रजातियों में वर्णित हैं, जैसे बछड़ों, खरगोश और चूहों2,9, लेकिन खराब7मुर्गियों में वर्णित. इस शल्य चिकित्सा मॉडल का एक इष्टतम उपयोग के लिए, उचित तकनीक और निष्पादन ligated आंत्र छोरों के निर्माण के लिए आंतों की अखंडता के लिए नुकसान से बचने के लिए आवश्यक हैं । इस पांडुलिपि का लक्ष्य एक चिकन मॉडल में कई आंत्र छोरों के निर्माण में कदम विधि द्वारा एक कदम का वर्णन करने के लिए है । इस तकनीक के सर्जन कौशल और अनुभव द्वारा सीमित है, के रूप में सटीक प्रक्रियाओं परियोजना की सफलता के लिए आवश्यक हैं ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>EZ-Scrub 747</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td></td>
			<td>4% chlorhexidine gluconate detergent impregnated sterile brush. No catalog number available. Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/infection-prevention/surgical-hand-scrubs/ez-scrub-preoperative-surgical-scrub-brushes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl alcohol 70% USP 4 L</td>
			<td>Commercial isopropyl alcohol</td>
			<td>P016IP70</td>
			<td>Web address: http://www.comalc.com/products/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorexidine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>282227-1G</td>
			<td>Chlorhexidine gluconate solution, must be diluted to 4%. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/282227?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI8vHr4_OY1wIV3rrACh2ZWQKuEAAYAiAAEgLKx_D_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Drape Small (27 inch x 24 inch) with 3 x 6 inch Fenestration</td>
			<td>Veterinary Specialty Products</td>
			<td>32724</td>
			<td>Web address: http://www.vetspecialtyproducts.com/index.cfm?fuseaction=ecommercecatalog.detail&#38;productgroup_id=15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades #3</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>301</td>
			<td>Web address: https://www.swann-morton.com/product/16.php</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline NaCl 0.9%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8776-100ML</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8776?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl 3-0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>D9003</td>
			<td>Polyglactin multifilament absorbable suture material. Web address: http://www.ethicon.com/healthcare-professionals/products/wound-closure/absorbable-sutures/coated-vicryl-polyglactin-910-suture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1 ml with 26G needle</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td>329652</td>
			<td>Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/diabetes-care/insulin-syringes/bd-1-ml-conventional-insulin-syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Heart Infusion</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>1104930500</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/110493?lang=fr&#38;region=CA&#38;cm_sp=Insite-_-prodRecCold_xorders-_-prodRecCold2-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tube</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9661-500EA</td>
			<td>Microcentrifuge tube. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t9661?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI-YizzfiY1wIVRkCGCh30SQjuEAAYAiAAEgLK5fD_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, buffered neutral, 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td>Ratio tissue : formalin of 1: 10 for adequate fixation. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht501128?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clostridium perfringens strains</td>
			<td>Universit&#233; de Montr&#233;al, Chaire en recherche avicole</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Specific to each laboratory, available upon request to correspondant author</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence

गल आंत्रशोथ विवो संक्रमण मॉडल में विभिन्न का उपयोग मुर्गियों में अध्ययन किया गया था । इनमें से अधिकांश क्लोस्ट्रीडियम perfringensका उपयोग कर फ़ीड के माध्यम से gavage या प्रशासन के साथ, ऐसे coccidiosis और आहार के रूप में संवेदनशील कारकों का एक संयोजन का उपयोग करें । इन मॉडलों में, डाह अध्ययन के लिए एकाधिक सी perfringens उपभेदों की तुलना मेजबानों की एक बड़ी संख्या में महत्वपूर्ण परिणाम प्राप्त करने की आवश्यकता है । अध्ययन के दौरान मृत्यु दर प्रयोगात्मक मॉडल के आधार पर उच्च हो सकता है, इसलिए अनुसंधान में पशु कल्याण के संबंध में नैतिक चिंताओं को उठाना । रोगजनन अध्ययन करने के लिए कम जानवरों की आवश्यकता होती है नए संक्रमण मॉडल के विकास, अभी तक सांख्यिकीय महत्वपूर्ण और मान्य परिणाम प्रदान, अनुसंधान में पशु उपयोग को कम करने में महत्वपूर्ण है. आंतों ligated लूप मॉडल जैसे चूहों, खरगोशों और बछड़ों के रूप में विभिन्न प्रजातियों में clostridial संक्रमण का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है । ligated पाश क्षेत्रों बनाने के लिए सर्जिकल प्रक्रियाओं के बाद, सी perfringens उपभेदों बैक्टीरिया और आंतों की श्लेष्मा झिल्ली के बीच एक करीबी संपर्क स्थापित करने के लिए छोरों में सीधे इंजेक्शन रहे हैं. छोटी आंत और चमकदार सामग्री के नमूनों को कुछ घंटों के बाद प्रक्रियाओं की समाप्ति पर लिया जाता है । एकाधिक जीवाणु उपभेदों प्रत्येक जानवर में inoculated जा सकता है, इसलिए प्रयोगों में आवश्यक विषयों की संख्या को कम करने. इसके अलावा, प्रक्रियाओं सामान्य संज्ञाहरण के तहत प्रदर्शन करने के लिए पशु दर्द को कम कर रहे हैं । मुर्गियों में, इस मॉडल perfringens तनाव pathogenicity तुलना करने के लिए मौखिक प्रशासन की तुलना में अधिक उपयुक्त होगा क्योंकि कम जानवरों की जरूरत है, कोई अधिक संवेदनशील कारकों रोग पैदा करने के लिए आवश्यक हैं, और दर्द एनाल्जेसिक द्वारा नियंत्रित किया जाता है . आंतों ligated पाश मॉडल खराब मुर्गियों में वर्णित है और मानकीकरण इसके इष्टतम उपयोग के लिए आवश्यक है. इस पांडुलिपि मुर्गियों में कई आंत्र ligated छोरों बनाने के लिए सभी आवश्यक कदम प्रदान करता है और मान्य परिणाम प्राप्त करने के लिए महत्वपूर्ण बिंदुओं पर जानकारी लाता है ।

9 आंत्र छोरों और 8 छोरों का एक योजनाबद्ध चित्र 1में दिखाया गया है. इस मॉडल में, कुल 9 छोरों और 8 छोरों सरल लिगेचर्स के साथ बनाया जाता है । एक पाश समीपस्थ और बाहर लिगेचर्स के होते हैं सम?...

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A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

यहाँ हम शल्य चिकित्सा के लिए एक प्रोटोकॉल वर्तमान चिकन छोटी आंत में ' आंत्र ligated छोरों ' बनाने के लिए । यह प्रक्रिया एक एकल मेजबान में सीटू में मल्टीपल क्लोस्ट्रीडियम perfringens उपभेदों ' डाह की तुलना के लिए अनुमति देता है । इस विधि के रूप में आम तौर पर vivo प्रयोगों में इसी तरह के लिए आवश्यक मुर्गियों की संख्या कम हो जाती है.

Anesthetized विशिष्ट रोगज़नक़ में एक Ligated आंत्र पाश मॉडल नि: शुल्क मुर्गियों का अध्ययन करने के लिए क्लोस्ट्रीडियम Perfringens डाह

Necrotic enteritis was studied in chickens using various in vivo infection models. Most of these use a combination of predisposing factors, such as ...

इस विधि चिकन नेक्रोटिक एंटिसिस अनुसंधान के क्षेत्र में महत्वपूर्ण सवालों के जवाब देने में मदद कर सकते हैं। जैसे विशिष्ट क्लोस्ट्रीडियम परफ्रिंगेंस की उग्रता की तुलना इस बीमारी के कारण उपभेदों। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह आमतौर पर समान एम्बिवोर प्रयोगों के लिए आवश्यक मुर्गियों की संख्या को उल्लेखनीय रूप से कम कर देता है।हालांकि यह विधि क्लोस्ट्रिडियम परफ्रिंगन उपभेदों की उग्रता क्षमता में अंतर्दृष्टि प्रदान कर सकती है, इसे क्लोस्ट्रीडियम डिफिसिल, या साल्मोनेला एंटिका जैसे अन्य आंतों के रोगजनकों पर भी लागू किया जा सकता है। आम तौर पर, इस विधि के लिए नए व्यक्ति संघर्ष करेंगे क्योंकि सर्जिकल प्रक्रियाओं को विशिष्ट प्रशिक्षण की आवश्यकता होती है और केवल उन लोगों द्वारा किया जाएगा जिन्होंने प्रयोग से पहले एक तकनीक जैसे कौशल प्राप्त किए हैं। 10 सप्ताह पुराने विशिष्ट रोगजनक मुक्त लेगहॉर्न चिकन को संज्ञा देने के बाद, महत्वपूर्ण मापों के लिए मॉनिटर स्थापित करें और कोमल कर्षण द्वारा पेट से पंखों को मैन्युअल रूप से हटाना शुरू करें।इसके बाद, एक नरम ब्रिसल ब्रश के साथ क्लोरहेक्सीडीन ग्लूकोनेट का उपयोग करके सर्जिकल साइट को साफ़ करें। धीरे-धीरे त्वचा को केंद्र से परिधि तक पांच मिनट के लिए साफ़ करें। फिर, बाँझ धुंध का उपयोग करके क्लोरहेक्सीडीन ग्लूकोनेट समाधान और आइसोप्रोपिल अल्कोहल के साथ सर्जिकल साइट पर तीन वैकल्पिक मार्ग करें।फिर, केंद्र से परिधि में जाएं, फिर, चिकन को कपड़ा करें। सर्जिकल साइट के ऊपर कपड़ा खोलकर शुरू करें, फिर एक नंबर तीन स्केलपेल के साथ एल-आकार की कम मिडलाइन त्वचा चीरा बनाएं, एक सेंटीमीटर को उरोस्थि में शुरू करें, और क्लोइचा के लिए एक सेंटीमीटर कपाल पर समाप्त करें। इसके बाद, एल के आकार का चीरा पहले चीरा के कुदाल छोर से शुरू होने वाला दूसरा चीरा करके पहले से लंबवत जारी रखें और श्रोणि रेखा का पालन करके पेट के बाईं ओर पांच सेंटीमीटर जारी रखें।इस उद्घाटन आंतों के आसानी से निकालने की अनुमति देगा। इसके बाद, पेट की गुहा तक पहुंचने के लिए एक ही एल-आकार के पैटर्न का उपयोग करके पेरिटोनम और पेट की मांसपेशियों को खोलें। हवा की थैली अब उजागर हो जाएगा और खारा लथपथ धुंध का उपयोग कर नम रखा जाना चाहिए ।इसके बाद, बाएं पेट की दीवार का पालन करके पेट की गुहा में स्नूक स्पे हुक डालें और आंतों को निकालने के लिए पेट की हवा के चारों ओर हुक काम करें। फिर, सूखी धुंध का उपयोग करके, जेजुनम को बेनकाब करने के लिए धीरे-धीरे आंतों को बाहरी बनाना जारी रखें। आंतों को फैलाएं और उन्हें नमकीन के साथ लगातार छिड़काव के साथ और नमकीन लथपथ धुंध से ढककर नम रखें।आंतों को बाहर निकालते समय बहुत कोमल होना महत्वपूर्ण है क्योंकि अत्यधिक तनाव मेसेन्टरिक जहाजों को टूट सकता है जिससे आंतों के इस्कीमिक घाव हो सकते हैं और प्रक्रिया के परिणाम से बहुत समझौता हो सकता है। आंतों को बाहरी बनाने के बाद, जेजुनम में शुरू होने वाली आंतों में छोरों की एक श्रृंखला बनाएं। प्रत्येक लूप का उपयोग अलग-अलग उपचार के लिए किया जा सकता है।समीपस्थ जेजुम में, प्रमुख मेसेन्टेरिक जहाजों के लिगेचर से बचते हुए पॉलीग्लूटामाइन मल्टीफिलामेंट सिंथेटिक अवशोषण सामग्री के साथ एक साधारण लिगामेंट रखें। इसके बाद, पहले लूप को पूरा करने के लिए समीपस्थ लिगेचर से दो सेंटीमीटर दूर एक डिस्टल लिगेचर रखें। सभी समीपस्थ और डिस्टल लिगेचर को लगभग दो सेंटीमीटर की दूरी पर रखा जाना चाहिए।लिगेचर्स की प्रत्येक जोड़ी एक लूप बनाती है, जो एक हर्मेटिक सेगमेंट है। इसके बाद, छोरों के बीच एक इंटरलूप या आंत का एक खंड बनाएं। पहले लूप के डिस्टल लिगेचर के लिए एक साधारण लिगेचर आधा सेंटीमीटर रखें।यह लिगेचर इंटरलूप के बीच में है और छोरों के बीच संभावित क्रॉस संदूषण को कम करेगा। अब, इंटरलूप लिगेचर से आधा सेंटीमीटर एक और लूप बनाने का पैटर्न जारी रखें। यहां 26 सेंटीमीटर आंत को कवर करते हुए नौ लूप और आठ इंटरलूप बनाए जाते हैं।छोरों की संख्या को आवश्यकतानुसार समायोजित किया जा सकता है। इसके बाद, लूप में क्लोस्ट्रीडियम परफ्रिंगन के इंजेक्शन तनाव के साथ आगे बढ़ें। लूप के एंटी-मेसेन्टेरिक साइड में, 45 डिग्री कोण पर 26 गेज सुई का उपयोग बीएचआई समाधान के 0.2 मिलीलीटर इंजेक्ट करने के लिए करें, जिसमें मिडलॉग विकास चरण में बैक्टीरिया की इकाइयों का गठन करने वाली दस लाख कॉलोनी होती है।इस स्थिति में, नौ छोरों के साथ, पांच अलग-अलग उपभेदों को नकारात्मक नियंत्रण के रूप में अकेले वाहन के साथ इंजेक्शन दिए गए बीच के छोरों के साथ बारी-बारी से छोरों में इंजेक्ट किया जाता है। रोगजनकों को इंजेक्शन लगाने के बाद, धीरे-धीरे आंतों के पथ को हवा की थैली के नीचे पेट की गुहा के पृष्ठीय क्षेत्र में बदलें। इसके बाद पेट की गुहा को बंद कर दो।एक पॉलीग्लूटामाइन मल्टीफाइलमेंट सिंथेटिक अवशोषण सामग्री का उपयोग करके एक साधारण सतत सीवन पैटर्न के साथ श्रोणि के साथ पेरिटोनम और पेट की मांसपेशियों को सीवन। सरल सतत टांके का उपयोग कर क्लीच के लिए उरोस्थि से पेरिटोनम और पेट की मांसपेशियों को टांका लगाकर जारी रखें। इसके बाद, पॉलीग्लूटामाइन मल्टीफिलामेंट सिंथेटिक सामग्री और एक सरल सतत पैटर्न का उपयोग करके त्वचा को बंद कर दिया।सबसे पहले, श्रोणि के साथ सीवन, फिर उरोस्थि से क्लॉइच तक सीवन। चीरों को बंद करने के बाद, संक्रमण के समय के दौरान जानवरों के दर्द को कम करने के लिए एनेल्जेसिक के उचित उपयोग के साथ चिकन को सामान्य संज्ञाहरण के तहत रखें। पर्याप्त संज्ञाहरण स्तर सुनिश्चित करने के लिए एनेस्थेटिक निगरानी जारी रखें।संक्रमण के समय की वांछित मात्रा के बाद, जैसे वर्तमान प्रयोग में सात घंटे, पक्षी को इच्छामृत्यु और आंतों के ऊतकों को इकट्ठा करें। एक नंबर तीन स्केलपेल का उपयोग करके, आधा से एक सेंटीमीटर लूप सेक्शन काट लें। फिर, रात भर निर्धारण और आगे हिस्टोपैथोलॉजिकल विश्लेषण के लिए अनुभाग को 10% फॉर्मेलिन में स्थानांतरित करें।फिर, लूप के शेष को काटने और बैक्टीरिया के अलगाव के लिए उस ऊतक को माइक्रोफस्ड ट्यूब में स्थानांतरित करने के लिए एक ही लूप पर एक ही स्केलपेल ब्लेड का उपयोग करें। हर बार एक नए स्केलपेल ब्लेड का उपयोग करके प्रत्येक लूप के लिए इस प्रक्रिया को दोहराएं। इंजेक्शन के सात घंटे बाद, नियंत्रण बाँझ माध्यम के साथ इंजेक्शन दिए गए आंतों के लूप में एक बरकरार म्यूकोसल ब्रश सीमा होती है जिसमें कोई परिगलन नहीं होता है।खंडों की आंतों की परतों में हल्की भीड़ असामान्य नहीं है। रोगजनक, क्लोस्ट्रिडियम परफ्रिंगन के साथ इंजेक्शन के सात घंटे बाद, विली युक्तियों को युक्तियों के आसपास के परिगलित प्रवेश साइटों के साथ क्षीण कर दिया जाता है। और फिर विली के आसपास परिगलित सामग्री, बड़े रॉड के आकार के बैक्टीरिया के समूह हैं।कभी-कभी परिगलन खराब प्रक्रियात्मक निष्पादन के कारण होता है और बैक्टीरिया द्वारा उत्पादित घावों के रूप में गलत तरीके से व्याख्या की जा सकती है। एक गप्पी संकेत हिस्टोलॉजिकल सेक्शन में बैक्टीरिया की अनुपस्थिति है। इसके अलावा, मांसपेशियों की परत में रक्त वाहिकाओं को कई विकृत एरिथ्रोसाइट्स के संचय से गंभीर रूप से फैल जाता है जो संवहनी भीड़ का संकेत देता है।यह लिगाटेड मेसेंटेरिक रक्त वाहिकाओं के कारण हुआ था जो संभवतः आंतों पर अत्यधिक शारीरिक तनाव करने के लिए लिगा हुआ था। इस्कीमिक लूप को सर्जिकल प्रक्रियाओं के दौरान सूक्ष्म रूप से आसानी से पहचाना जा सकता है। लिगेचर के कुछ मिनट बाद गंभीर संवहनी भीड़ के बाद, सेरोसा अपने सामान्य गुलाबी लाल रंग के बजाय गहरे नीले रंग का होगा।इस वीडियो को देखने के बाद, आपको इस बात की अच्छी समझ होनी चाहिए कि आंतों पर लिगेचर रखकर चिकन मॉडल में कई आंतों के छोरों को कैसे बनाया जाए। एक बार शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं में महारत हासिल है, संक्रमण के समय को छोड़कर, तीन घंटे से भी कम समय में किया जा सकता है, अगर यह ठीक से किया जाता है । इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय, दर्द को नियंत्रित करने और सर्जिकल भाग और संक्रमण के बाद के समय सहित सभी प्रक्रियाओं के दौरान महत्वपूर्ण संकेतों की निगरानी करने के लिए चिकन को गहरे संज्ञाहरण के नीचे रखना याद रखना महत्वपूर्ण है।इस प्रक्रिया या बैक्टीरियल अलगाव जैसे उनके तरीकों का पालन करना, और पीसीआर द्वारा जीन डिटेक्शन जैसे सीधे पहचान को प्रारंभिक इंजेक्शन रोगजनक की वसूली और पहचान जैसे बाहरी सवालों के जवाब देने के लिए किया जा सकता है। इस विकास के बाद, इस तकनीक ने मुर्गियों में नेक्रोटिक आंत्रशोथ का पता लगाने के लिए क्लोस्ट्रीडियम पेफ्रिंगन रोगजनकों के क्षेत्र में शोधकर्ताओं के लिए एक मार्ग प्रशस्त किया। यह न भूलें कि जीवित जानवरों के साथ काम करना बेहद परिवर्तनशील हो सकता है।और इस प्रक्रिया को निष्पादित करते समय चिकन की निरंतर संवेदनाहारी निगरानी जैसी सावधानियां हमेशा की जानी चाहिए।

Research

JoVE Journal

Medicine

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