Name: a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence
Uploaded: 2018-10-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence at JoVE.com

Quest'opera è stata sostenuta dal Presidente nella ricerca di pollame (Boulianne M.) dalla facoltà di medicina veterinaria di Université de Montréal. D. ssa Boulianne e padre ha sviluppato il modello. D. ssa Boulianne e padre effettuati gli interventi chirurgici. Dottor Burns ha aiutato nello sviluppo del protocollo di anestesia. Dr. Parent modificato il video e ha scritto il manoscritto. DRS Burns, Desrochers e Boulianne modificato il manoscritto.

Tutte le procedure con l'uso di animali dal vivo sono state autorizzate dal comitato etico della facoltà di medicina veterinaria, Université de Montréal (CÉUA, 'Comité d' éthique de l'utilisation des Animaux').
1. Considerazioni prima dell'intervento chirurgico
<ol><li>Selezionare polli gratis della (SPF) Livorno di 10 settimane vecchio agente patogeno specifico per la chirurgia. Nota: Il loro peso deve essere tra 1,0 e 1,2 kg.</li>
	<li>Ritirare il feed 12 h prima le procedure di s...

<ol>
	<li>Vitale, A., Chiarotti, F., Alleva, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+animal+models+in+disease+research.">The use of animal models in disease research.</a> Rare diseases and orphan drugs. 2 (1), 1-4 (2015).</li><li>Uzal, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+to+study+the+pathogenesis+of+human+and+animal+Clostridium+perfringens+infections.">Animal models to study the pathogenesis of human and animal Clostridium perfringens infections.</a> Veterinary Microbiology. , (2015).</li><li>Bernier, G., Phaneuf, J. B., Filion, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+in+broiler+chickens.+III.+Study+of+the+factors+favoring+the+multiplication+of+Clostridium+perfringens+and+the+experimental+transmission+of+the+disease.">Necrotic enteritis in broiler chickens. III. Study of the factors favoring the multiplication of Clostridium perfringens and the experimental transmission of the disease.</a> Canadian Journal of Comparative Medicine. 41 (1), 112-116 (1977).</li><li>Al-Sheikhly, F., Truscott, R. 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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NetB,+a+new+toxin+that+is+associated+with+avian+necrotic+enteritis+caused+by+Clostridium+perfringens.">NetB, a new toxin that is associated with avian necrotic enteritis caused by Clostridium perfringens.</a> PLoS Pathog. 4 (2), e26 (2008).</li><li>Timbermont, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+of+Clostridium+perfringens+isolates+determines+the+ability+to+induce+necrotic+enteritis+in+broilers.">Origin of Clostridium perfringens isolates determines the ability to induce necrotic enteritis in broilers.</a> Comp Immunol Microbiol Infect Dis. 32 (6), 503-512 (2009).</li><li>Paradis, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+avilamycin+for+the+prevention+of+necrotic+enteritis+caused+by+a+pathogenic+strain+of+Clostridium+perfringens+in+broiler+chickens.">Efficacy of avilamycin for the prevention of necrotic enteritis caused by a pathogenic strain of Clostridium perfringens in broiler chickens.</a> Avian Pathol. 45 (3), 365-369 (2016).</li><li>Valgaeren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lesion+development+in+a+new+intestinal+loop+model+indicates+the+involvement+of+a+shared+Clostridium+perfringens+virulence+factor+in+haemorrhagic+enteritis+in+calves.">Lesion development in a new intestinal loop model indicates the involvement of a shared Clostridium perfringens virulence factor in haemorrhagic enteritis in calves.</a> Journal of Comparative Pathology. 149 (1), 103-112 (2013).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+C-terminal+domain+of+Clostridium+perfringens+alpha+toxin+as+a+vaccine+candidate+against+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">The C-terminal domain of Clostridium perfringens alpha toxin as a vaccine candidate against bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> Vet Res. 47 (1), 52 (2016).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxin-neutralizing+antibodies+protect+against+Clostridium+perfringens-induced+necrosis+in+an+intestinal+loop+model+for+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">Toxin-neutralizing antibodies protect against Clostridium perfringens-induced necrosis in an intestinal loop model for bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> BMC Vet Res. 12 (1), 101 (2016).</li><li>Parent, E., Archambault, M., Charlebois, A., Bernier-Lachance, J., Boulianne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chicken+intestinal+ligated+loop+model+to+study+the+virulence+of+Clostridium+perfringens+isolates+recovered+from+antibiotic-free+chicken+flocks.">A chicken intestinal ligated loop model to study the virulence of Clostridium perfringens isolates recovered from antibiotic-free chicken flocks.</a> Avian Pathol. 46 (2), 138-149 (2017).</li><li>Janvilisri, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+differential+proteomes+of+Clostridium+difficile+in+the+pig+ileal-ligated+loop+model.">Temporal differential proteomes of Clostridium difficile in the pig ileal-ligated loop model.</a> PLoS One. 7 (9), e45608 (2012).</li><li>Aabo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+in+vivo+model+for+study+of+intestinal+invasion+by+Salmonella+enterica+in+chickens.">Development of an in vivo model for study of intestinal invasion by Salmonella enterica in chickens.</a> Infection and Immunity. 68 (12), 7122-7125 (2000).</li><li>Meurens, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+immune+response+following+Salmonella+enterica+subspecies+enterica+serovar+Typhimurium+infection+in+porcine+jejunal+gut+loops.">Early immune response following Salmonella enterica subspecies enterica serovar Typhimurium infection in porcine jejunal gut loops.</a> Vet Res. 40 (1), 5 (2009).</li><li>Gerdts, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+intestinal+'loops'+provide+an+in+vivo+model+to+analyse+multiple+mucosal+immune+responses.">Multiple intestinal 'loops' provide an in vivo model to analyse multiple mucosal immune responses.</a> J Immunol Methods. 256 (1-2), 19-33 (2001).</li><li>Wade, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adherent+abilities+of+Clostridium+perfringens+strains+are+critical+for+the+pathogenesis+of+avian+necrotic+enteritis.">The adherent abilities of Clostridium perfringens strains are critical for the pathogenesis of avian necrotic enteritis.</a> Vet Microbiol. 197, 53-61 (2016).</li><li>Cooper, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+for+chickens+of+Clostridium+perfringens+isolated+from+poultry+and+other+sources.">Virulence for chickens of Clostridium perfringens isolated from poultry and other sources.</a> Anaerobe. 16 (3), 289-292 (2010).</li><li>Cooper, K. K., Songer, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+of+Clostridium+perfringens+in+an+experimental+model+of+poultry+necrotic+enteritis.">Virulence of Clostridium perfringens in an experimental model of poultry necrotic enteritis.</a> Veterinary Microbiology. 142 (3-4), 323-328 (2010).</li><li>Chalmers, G., Bruce, H. L., Toole, D. L., Barnum, D. A., Boerlin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+potential+in+a+model+system+using+Clostridium+perfringens+isolated+from+field+outbreaks.">Necrotic enteritis potential in a model system using Clostridium perfringens isolated from field outbreaks.</a> Avian Diseases. 51 (4), 834-839 (2007).</li></ol>

Modelli di anse intestinali sono stati descritti in numerose specie per studiare l'interazione ospite-patogeno e la patogenesi di malattie causate da vari agenti patogeni intestinali, quali Clostridium perfringens, Clostridium difficile e Salmonella enterica7,9,13,14,15. È stato utilizzato anche per analizzare la risposta immunitari...

L'uso di modelli animali per studiare le malattie infettive che colpiscono gli esseri umani e animali è uno strumento centrale nella valutazione di fattori di virulenza che regolano la patogenesi di una condizione specifica anche quanto a elaborare strategie per prevenire o curare malattie1. Nonostante i numerosi vantaggi dell'utilizzo di modelli animali per lo studio di varie malattie, stanno sorgendo preoccupazioni etiche per quanto riguarda questa pratica. I ricercatori hanno bisogno per ridurre al minimo l'uso di animali mentre ottenendo risultati significativi e validi. Il concetto dei 3 principi Rs (sostituire, ridurre e raffinare) è stato elaborato per assicurare che a tali prove sono state affrontate questioni di benessere. Negli studi di enterite necrotica del pollo, in vivo modelli di pollo sono utilizzati per indagare l'eziologia, prevenzione e trattamenti di questa condizione2,3,4,5. Ceppi patogeni di c. perfringens che trasportano fattori di virulenza specifici, ad esempio la tossina ReteB6, sono somministrati per causare enterite necrotica in polli7. Il principio di sostituzione è, pertanto, difficile da raggiungere in tal caso come questi fattori di virulenza non possono essere come critici in altre specie animali. Maggior parte dei modelli per l'enterite necrotica nei polli utilizzare una combinazione di fattori di rischio, quali la coccidiosi e alterato dieta per indurre l'enterite necrotica seguita mediante sonda gastrica del brodo di coltura contenenti un elevato numero di c. perfringens2. Questi modelli potranno indurre la malattia in un gran numero di polli, e la mortalità può essere importante in tali prove8, così sollevando preoccupazioni circa i principi di riduzione e raffinatezza nella ricerca animale.
Anse intestinali dei modelli sono un'alternativa desiderabile per lo studio delle malattie indotte da patogeni intestinali per quanto riguarda la riduzione di principio e la raffinatezza. In questi modelli, vengono creati segmenti intestinali chiamati 'loop' inserendo le legature lungo il tratto intestinale per formare compartimenti indipendenti ed ermetici dove gli agenti patogeni possono essere iniettati solo9 o con altre molecole, quali vaccini candidati 10 , 11. gli agenti patogeni di interesse si trovano a stretto contatto con le cellule intestinali e dopo poche ore di tempo di infezione, campioni intestinali possono essere recuperati per ulteriori analisi. Questo consente l'utilizzo di più gruppi di controllo e di trattamento dello stesso animale. Analisi statistica può essere eseguita con modelli di misure ripetute, che aumenta il potere di discriminazione tra gruppi e riduce il numero di polli necessarie rispetto alle prove di alimentazione mediante sonda gastrica orale. Inoltre, le procedure chirurgiche e tempi di infezione successiva vengono eseguite sotto anestesia generale continua e analgesia, quindi riducendo al minimo il dolore animale. Anello chiuso legature sono un modello ideale per ridurre il numero di host e creare un sistema più umano nella ricerca animale.
Anse intestinali dei modelli sono ben descritti in varie specie, come vitelli, conigli e topi2,9, ma scarsamente descritto in polli7. Per un uso ottimale di questo modello chirurgico, l'esecuzione e la tecnica adeguata sono essenziali per la creazione delle anse intestinali legati per evitare danni all'integrità intestinale. L'obiettivo di questo manoscritto è di descrivere un metodo passo passo nella creazione delle anse intestinali multiple in un modello di pollo. Questa tecnica è limitata dalla abilità del chirurgo e dall'esperienza, come procedure esatte sono essenziali per il successo del progetto.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>EZ-Scrub 747</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td></td>
			<td>4% chlorhexidine gluconate detergent impregnated sterile brush. No catalog number available. Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/infection-prevention/surgical-hand-scrubs/ez-scrub-preoperative-surgical-scrub-brushes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl alcohol 70% USP 4 L</td>
			<td>Commercial isopropyl alcohol</td>
			<td>P016IP70</td>
			<td>Web address: http://www.comalc.com/products/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorexidine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>282227-1G</td>
			<td>Chlorhexidine gluconate solution, must be diluted to 4%. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/282227?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI8vHr4_OY1wIV3rrACh2ZWQKuEAAYAiAAEgLKx_D_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Drape Small (27 inch x 24 inch) with 3 x 6 inch Fenestration</td>
			<td>Veterinary Specialty Products</td>
			<td>32724</td>
			<td>Web address: http://www.vetspecialtyproducts.com/index.cfm?fuseaction=ecommercecatalog.detail&#38;productgroup_id=15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades #3</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>301</td>
			<td>Web address: https://www.swann-morton.com/product/16.php</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline NaCl 0.9%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8776-100ML</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8776?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl 3-0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>D9003</td>
			<td>Polyglactin multifilament absorbable suture material. Web address: http://www.ethicon.com/healthcare-professionals/products/wound-closure/absorbable-sutures/coated-vicryl-polyglactin-910-suture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1 ml with 26G needle</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td>329652</td>
			<td>Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/diabetes-care/insulin-syringes/bd-1-ml-conventional-insulin-syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Heart Infusion</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>1104930500</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/110493?lang=fr&#38;region=CA&#38;cm_sp=Insite-_-prodRecCold_xorders-_-prodRecCold2-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tube</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9661-500EA</td>
			<td>Microcentrifuge tube. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t9661?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI-YizzfiY1wIVRkCGCh30SQjuEAAYAiAAEgLK5fD_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, buffered neutral, 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td>Ratio tissue : formalin of 1: 10 for adequate fixation. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht501128?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clostridium perfringens strains</td>
			<td>Universit&#233; de Montr&#233;al, Chaire en recherche avicole</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Specific to each laboratory, available upon request to correspondant author</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence

Enterite necrotica è stata studiata in polli utilizzando vari modelli in vivo di infezione. La maggior parte di questi utilizzano una combinazione di fattori predisponenti, quali la coccidiosi e dieta, con sonda gastrica o amministrazione tramite il feed utilizzando Clostridium perfringens. In questi modelli, il confronto di più ceppi di c. perfringens per studi di virulenza richiede un numero elevato di host per ottenere risultati significativi. Mortalità durante il corso dello studio può essere elevato a seconda del modello sperimentale, quindi sollevare preoccupazioni di ordine etico per quanto riguarda il benessere degli animali nella ricerca. Lo sviluppo di nuovi modelli di infezione che richiedono meno animali per studiare la patogenesi, ancora fornire risultati statisticamente significativi e validi, è importante nella riduzione dell'uso di animali nella ricerca. Ciclo intestinale dei modelli sono stati utilizzati per studiare le infezioni clostridiali in varie specie come topi, conigli e vitelli. A seguito di interventi chirurgici per creare loop dei segmenti, ceppi di c. perfringens vengono iniettati direttamente i loop per stabilire uno stretto contatto tra i batteri e la mucosa intestinale. Al termine delle procedure dopo poche ore vengono prelevati campioni dell'intestino tenue e del contenuto luminale. Ceppi batterici multipli possono essere inoculati in ogni animale, quindi riducendo il numero di materie richieste negli esperimenti. Inoltre, le procedure vengono eseguite in anestesia generale per ridurre il dolore animale. Nei polli, questo modello sarebbe più appropriato che la somministrazione orale di confrontare la patogenicità del ceppo di c. perfringens perché meno animali sono necessari, fattori predisponenti non sono necessaria per indurre la malattia e dolore è controllato da analgesici . Il modello di ciclo intestinale legato è descritto male nei polli e standardizzazione è essenziale per il suo utilizzo ottima. Questo manoscritto fornisce tutti i passaggi necessari per creare numerose anse intestinali legati nei polli e porta informazioni sui punti critici per ottenere risultati validi.

Uno schema delle anse intestinali 9 e 8 interloops è illustrato nella Figura 1. In questo modello, un totale di 9 cicli e 8 interloops vengono creati con semplici legature. Un ciclo è costituito da legature prossimale e distale, distanziate di 2 cm misurato dalla legatura prossimale. Due spire adiacenti sono separati da un interloop di 1 cm. Per diminuire il possibile rischio di contaminazione incrociata tra cicli di perdita da una legatura, una legatura in...

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A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Qui presentiamo un protocollo per creare chirurgicamente 'anse intestinali legati' in intestini di pollo. Questa procedura consente il confronto di virulenza in situ in un singolo host di più ceppi Clostridium perfringens . Questo metodo notevolmente riduce il numero di polli solitamente necessari per simili esperimenti in vivo .

Un modello di ciclo intestinale legati nei polli gratis anestetizzati patogeno specifico per studiare la virulenza di Clostridium Perfringens

Necrotic enteritis was studied in chickens using various in vivo infection models. Most of these use a combination of predisposing factors, such as ...

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della ricerca sull'enterite necrotica di pollo. Come confrontare la virulenza di specifici ceppi di Clostridium perfringens che causano questa malattia. Il vantaggio principale di questa tecnica è che riduce notevolmente il numero di polli solitamente necessari per simili esperimenti di ambivore.Mentre questo metodo può fornire informazioni sul potenziale di virulenza dei ceppi di Clostridium perfringens, può anche essere applicato ad altri agenti patogeni intestinali come Clostridium difficile o Salmonella enterica. Generalmente, gli individui nuovi a questo metodo avranno difficoltà perché le procedure chirurgiche hanno bisogno di un allenamento specifico e devono essere eseguite solo da coloro che hanno acquisito abilità come la sutura, una tecnica prima dell'esperimento. Dopo aver anestetico un pollo livorno specifico privo di agenti patogeni di 10 settimane, impostare i monitor per le misurazioni vitali e iniziare a rimuovere manualmente le piume dall'addome con una leggera trazione.Quindi, strofinare il sito chirurgico utilizzando gluconato di clorexidina con un pennello a setole morbide. Strofinare delicatamente la pelle dal centro alla periferia per cinque minuti senza invertire il percorso. Quindi, eseguire tre passaggi alternati sul sito chirurgico con soluzione di gluconato di clorexidina e alcol isopropile usando garze sterili.Ancora una volta, vai dal centro alla periferia, quindi, drappeggi il pollo. Inizia aprendo il drappo sopra il sito chirurgico, quindi fai un'incisione della pelle della linea mediana bassa a forma di L con un bisturi numero tre, iniziando una coccola di un centimetro allo sterno e terminando a un centimetro cranica alla cloicha. Successivamente, continuare l'incisione a forma di L perpendicolare alla prima facendo una seconda incisione a partire dall'estremità coccola della prima incisione e continuare di cinque centimetri sul lato sinistro dell'addome seguendo la linea del bacino.Questa apertura consentirà una facile estrazione dell'intestino. Successivamente, aprire il peritoneo e i muscoli addominali utilizzando lo stesso modello a forma di L per accedere alla cavità addominale. Le sacche d'aria saranno ora esposte e devono essere mantenute umidi usando garza imbevuta salina.Successivamente, inserire un gancio spay Snook nella cavità addominale seguendo la parete addominale sinistra e lavorando il gancio intorno alle sacche d'aria addominali per estrarre l'intestino. Quindi, usando una garza secca, continuare ad esternalizzare delicatamente l'intestino per esporre il Jejunum. Stendere l'intestino e mantenerli umidi con frequenti irrorazione con saline e coprendoli con garza imbevuta di salina.È importante essere molto delicati mentre si esempa l'intestino perché una tensione eccessiva può rompersi i vasi mesenterici che possono portare a lesioni ischemiche intestinali e compromettere notevolmente l'esito della procedura. Dopo aver esteriore l'intestino, fai una serie di anelli nell'intestino a partire dal Jejunum. Ogni ciclo può essere utilizzato per un trattamento diverso.Nel Jejunum prossimale, posizionare una legatura semplice con un materiale assorbibile sintetico multifilamento poliglutamina evitando la legatura dei principali vasi mesenterici. Quindi, posizionare una legatura distale a due centimetri di distanza dalla legatura prossimale per completare il primo ciclo. Tutte le legature prossimali e distali devono essere distanziate di circa due centimetri.Ogni coppia di legature crea un anello, che è un segmento ermetico. Quindi, creare un interloop o un segmento di intestino tra i loop. Posizionare una legatura semplice mezzo centimetro aborely alla legatura distale del primo anello.Questa legatura è al centro dell'interlopo e diminuirà la possibile contaminazione incrociata tra i loop. Ora, continua il modello di creare un altro anello aborely mezzo centimetro dalla legatura interloop. Qui, vengono creati nove anelli e otto interloopi che coprono 26 centimetri di intestino.Il numero di loop può essere regolato in base alle esigenze. Quindi, procedere con il ceppo di iniezione di Clostridium perfringens nei loop. Nel lato anti-mesenterico dell'anello, utilizzare un ago calibro 26 con un angolo di 45 gradi per iniettare 0,2 millilitri di soluzione BHI, contenente un milione di unità di colonia che formano unità di batteri nella fase di crescita del midlog.In questa situazione, con nove anelli, cinque diversi ceppi vengono iniettati in anelli alternati con i loop intermedi iniettati con il solo veicolo come controlli negativi. Dopo aver iniettato gli agenti patogeni, sostituire delicatamente il tratto intestinale nell'area dorsale della cavità addominale sotto le sacche d'aria. Quindi, chiudere la cavità addominale.Suturare i muscoli peritoneo e addominale lungo il bacino con un semplice modello di sutura continua utilizzando un materiale sintetico assorbibile multifilamento in poliglutamina. Continuare suturando il peritoneo e i muscoli addominali dallo sterno al cloiche usando semplici suture continue. Successivamente, suturare la pelle chiudere utilizzando un materiale sintetico poliglutamina multifilamento e un semplice modello continuo.In primo luogo, sutura lungo il bacino, quindi sutura dallo sterno al cloiche. Dopo aver chiuso le incisioni, tenere il pollo in anestesia generale con un uso corretto degli analgesici per ridurre al minimo il dolore animale durante il tempo di infezione. Continuare il monitoraggio anestetico per garantire un livello adeguato di anestesia.Dopo la quantità desiderata di tempo di infezione, come sette ore nel presente esperimento, eutanasiare l'uccello e raccogliere i tessuti intestinali. Usando un bisturi numero tre, ritaglia una sezione ad anello da mezzo a un centimetro. Quindi, trasferire la sezione al 10%Formalin per la fissazione notturna e ulteriori analisi istopatologiche.Quindi, utilizzare la stessa lama bisturi sullo stesso anello per tagliare il resto del ciclo e trasferire quel tessuto in un tubo microfuso per l'isolamento dei batteri. Ripetere questa procedura per ogni ciclo utilizzando ogni volta una nuova lama bisturi. Sette ore dopo l'iniezione, un anello intestinale iniettato con un mezzo sterile di controllo ha un bordo intatto della spazzola della mucosa senza necrosi.Una lieve congestione negli strati intestinali dei segmenti non è rara. Sette ore dopo l'iniezione con l'agente patogeno, Clostridium perfringens, le punte di villi vengono erose con siti di ingresso necrotici che circondano le punte. E poi materiale necrotico che circonda i villi, ci sono ammassi di grandi batteri a forma di asta.A volte la necrosi è dovuta a una cattiva esecuzione procedurale e può essere fraintesa come lesioni prodotte dai batteri. Un segno rivelatore è l'assenza di batteri nella sezione istologica. Inoltre, i vasi sanguigni nello strato muscolare sono gravemente dilatati dall'accumulo di molti eriociti degenerati indicativi della congestione vascolare.Ciò è stato causato da vasi sanguigni mesenterici legati che probabilmente sono stati legati per fare un eccessivo sforzo fisico sull'intestino. I loop ischemici possono essere facilmente identificati microscopicamente durante le procedure chirurgiche. A seguito di una grave congestione vascolare pochi minuti dopo la legatura, la serosa sarà blu scuro invece della sua normale colorazione rossastra rosa.Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come creare più anelli intestinali in un modello di pollo posizionando le legature sull'intestino. Una volta padroneggiate le procedure chirurgiche, escluso il tempo di infezione, possono essere eseguite in meno di tre ore, se eseguite correttamente. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di tenere il pollo in anestesia profonda per controllare il dolore e monitorare i segni vitali durante tutte le procedure, inclusa la parte chirurgica e dopo il tempo di infezione.Seguendo questa procedura o i loro metodi come l'isolamento batterico, e l'identificazione diretta come il rilevamento genico da parte della PCR può essere eseguita al fine di rispondere a domande esterne come il recupero e l'identificazione dell'agente patogeno iniettato iniziale. Dopo questo sviluppo, questa tecnica ha aperto la strada ai ricercatori nel campo della patogenesi di Clostridium perfringens per esplorare l'enterite necrotica nei polli. Non dimenticare che lavorare con animali vivi può essere estremamente variabile.E precauzioni come il monitoraggio anestetico continuo del pollo dovrebbero sempre essere fatte durante l'esecuzione di questa procedura.

Research

JoVE Journal

Medicine

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Ricerca

Medicina

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