Name: a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence
Uploaded: 2018-10-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av stolen i fjørfe forskning (M. Boulianne) fra Veterinary fakultet over Université de Montréal. Dr. Boulianne og overordnede utviklet modellen. Dr. Boulianne og overordnede fremført operasjoner. Dr. Burns bistått i utviklingen av anestesi-protokollen. Dr. Parent redigert video og skrev manuskriptet. DRS Burns, Desrochers og Boulianne endret manuskriptet.

Alle prosedyrer med levende dyr bruk ble godkjent av den etiske komiteen av fakultetet av Veterinary medisin, Université de Montréal (CÉUA, «Comité d» éthique de l'utilisation des Animaux ").
1. betraktninger før kirurgi
<ol><li>Velg 10 uker gammel bestemte patogen gratis (SPF) leghorn kyllinger for operasjonen. NOTE Sin vekt må være mellom 1,0 og 1,2 kg.</li>
	<li>Trekke feed 12t før fremgangsmåtene å tømme tarmkanalen.</li>
	<li>Før kirurgi, plassere kyllinger under narko...

<ol>
	<li>Vitale, A., Chiarotti, F., Alleva, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+animal+models+in+disease+research.">The use of animal models in disease research.</a> Rare diseases and orphan drugs. 2 (1), 1-4 (2015).</li><li>Uzal, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+to+study+the+pathogenesis+of+human+and+animal+Clostridium+perfringens+infections.">Animal models to study the pathogenesis of human and animal Clostridium perfringens infections.</a> Veterinary Microbiology. , (2015).</li><li>Bernier, G., Phaneuf, J. B., Filion, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+in+broiler+chickens.+III.+Study+of+the+factors+favoring+the+multiplication+of+Clostridium+perfringens+and+the+experimental+transmission+of+the+disease.">Necrotic enteritis in broiler chickens. III. Study of the factors favoring the multiplication of Clostridium perfringens and the experimental transmission of the disease.</a> Canadian Journal of Comparative Medicine. 41 (1), 112-116 (1977).</li><li>Al-Sheikhly, F., Truscott, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathology+of+necrotic+enteritis+of+chickens+following+infusion+of+broth+cultures+of+Clostridium+perfringens+into+the+duodenum.">The pathology of necrotic enteritis of chickens following infusion of broth cultures of Clostridium perfringens into the duodenum.</a> Avian Diseases. 21 (2), 230-240 (1977).</li><li>Wicker, D. L., Iscrigg, W. N., Trammell, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+control+and+prevention+of+necrotic+enteritis+in+broilers+with+zinc+bacitracin.">The control and prevention of necrotic enteritis in broilers with zinc bacitracin.</a> Poultry Science. 56 (4), 1229-1231 (1977).</li><li>Keyburn, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NetB,+a+new+toxin+that+is+associated+with+avian+necrotic+enteritis+caused+by+Clostridium+perfringens.">NetB, a new toxin that is associated with avian necrotic enteritis caused by Clostridium perfringens.</a> PLoS Pathog. 4 (2), e26 (2008).</li><li>Timbermont, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+of+Clostridium+perfringens+isolates+determines+the+ability+to+induce+necrotic+enteritis+in+broilers.">Origin of Clostridium perfringens isolates determines the ability to induce necrotic enteritis in broilers.</a> Comp Immunol Microbiol Infect Dis. 32 (6), 503-512 (2009).</li><li>Paradis, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+avilamycin+for+the+prevention+of+necrotic+enteritis+caused+by+a+pathogenic+strain+of+Clostridium+perfringens+in+broiler+chickens.">Efficacy of avilamycin for the prevention of necrotic enteritis caused by a pathogenic strain of Clostridium perfringens in broiler chickens.</a> Avian Pathol. 45 (3), 365-369 (2016).</li><li>Valgaeren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lesion+development+in+a+new+intestinal+loop+model+indicates+the+involvement+of+a+shared+Clostridium+perfringens+virulence+factor+in+haemorrhagic+enteritis+in+calves.">Lesion development in a new intestinal loop model indicates the involvement of a shared Clostridium perfringens virulence factor in haemorrhagic enteritis in calves.</a> Journal of Comparative Pathology. 149 (1), 103-112 (2013).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+C-terminal+domain+of+Clostridium+perfringens+alpha+toxin+as+a+vaccine+candidate+against+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">The C-terminal domain of Clostridium perfringens alpha toxin as a vaccine candidate against bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> Vet Res. 47 (1), 52 (2016).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxin-neutralizing+antibodies+protect+against+Clostridium+perfringens-induced+necrosis+in+an+intestinal+loop+model+for+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">Toxin-neutralizing antibodies protect against Clostridium perfringens-induced necrosis in an intestinal loop model for bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> BMC Vet Res. 12 (1), 101 (2016).</li><li>Parent, E., Archambault, M., Charlebois, A., Bernier-Lachance, J., Boulianne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chicken+intestinal+ligated+loop+model+to+study+the+virulence+of+Clostridium+perfringens+isolates+recovered+from+antibiotic-free+chicken+flocks.">A chicken intestinal ligated loop model to study the virulence of Clostridium perfringens isolates recovered from antibiotic-free chicken flocks.</a> Avian Pathol. 46 (2), 138-149 (2017).</li><li>Janvilisri, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+differential+proteomes+of+Clostridium+difficile+in+the+pig+ileal-ligated+loop+model.">Temporal differential proteomes of Clostridium difficile in the pig ileal-ligated loop model.</a> PLoS One. 7 (9), e45608 (2012).</li><li>Aabo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+in+vivo+model+for+study+of+intestinal+invasion+by+Salmonella+enterica+in+chickens.">Development of an in vivo model for study of intestinal invasion by Salmonella enterica in chickens.</a> Infection and Immunity. 68 (12), 7122-7125 (2000).</li><li>Meurens, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+immune+response+following+Salmonella+enterica+subspecies+enterica+serovar+Typhimurium+infection+in+porcine+jejunal+gut+loops.">Early immune response following Salmonella enterica subspecies enterica serovar Typhimurium infection in porcine jejunal gut loops.</a> Vet Res. 40 (1), 5 (2009).</li><li>Gerdts, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+intestinal+'loops'+provide+an+in+vivo+model+to+analyse+multiple+mucosal+immune+responses.">Multiple intestinal 'loops' provide an in vivo model to analyse multiple mucosal immune responses.</a> J Immunol Methods. 256 (1-2), 19-33 (2001).</li><li>Wade, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adherent+abilities+of+Clostridium+perfringens+strains+are+critical+for+the+pathogenesis+of+avian+necrotic+enteritis.">The adherent abilities of Clostridium perfringens strains are critical for the pathogenesis of avian necrotic enteritis.</a> Vet Microbiol. 197, 53-61 (2016).</li><li>Cooper, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+for+chickens+of+Clostridium+perfringens+isolated+from+poultry+and+other+sources.">Virulence for chickens of Clostridium perfringens isolated from poultry and other sources.</a> Anaerobe. 16 (3), 289-292 (2010).</li><li>Cooper, K. K., Songer, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+of+Clostridium+perfringens+in+an+experimental+model+of+poultry+necrotic+enteritis.">Virulence of Clostridium perfringens in an experimental model of poultry necrotic enteritis.</a> Veterinary Microbiology. 142 (3-4), 323-328 (2010).</li><li>Chalmers, G., Bruce, H. L., Toole, D. L., Barnum, D. A., Boerlin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+potential+in+a+model+system+using+Clostridium+perfringens+isolated+from+field+outbreaks.">Necrotic enteritis potential in a model system using Clostridium perfringens isolated from field outbreaks.</a> Avian Diseases. 51 (4), 834-839 (2007).</li></ol>

Intestinal looper modeller har blitt beskrevet i mange arter å studere vert-patogen samhandling og patogenesen av sykdommer forårsaket av ulike intestinal patogener, som Clostridium perfringens, Clostridium difficile og Salmonella enterica7,9,13,14,15. Det er også brukt til å analysere mucosal immunrespons16</su...

Bruk av dyr modeller å studere smittsomme sykdommer som påvirker mennesker og dyr er et sentralt verktøy i vurderingen virulens faktorer regulere patogenesen av et bestemt vilkår samt å utdype strategier for å forebygge eller kurere sykdommer1. Til tross for mange fordeler med å bruke dyremodeller for å studere ulike sykdommer, er Etiske bekymringene om denne praksisen som oppstår. Forskere må redusere dyr bruk under henting signifikant og gyldig resultater. Begrepet 3 Rs prinsipper (Erstatt, Reduser og Forny) ble utarbeidet for å sikre at velferd var adressert i slike studier. Kylling nekrotisk enteritt studier brukes i vivo kylling modeller å undersøke den etiologi, forebygging og behandling av denne tilstanden2,3,4,5. Sykdomsfremkallende stammer av C. perfringens bærer bestemte virulens faktorer, for eksempel NetB gift6, administreres for å forårsake nekrotisk enteritt i kyllinger7. Erstatning prinsippet er derfor vanskelig å oppnå i så fall som disse virulens faktorer ikke kan være så avgjørende i andre dyrearter. De fleste modeller for nekrotisk enteritt i kyllinger bruker en kombinasjon av risikofaktorer, som coccidiosis og endret kosthold for å indusere nekrotisk enteritt etterfulgt av gavage kjøttkraft kultur som inneholder store mengder C. perfringens2. Disse modellene vil indusere sykdommen i en rekke kyllinger og dødelighet kan være viktig i slike forsøk8dermed øke bekymringer om reduksjon og raffinement prinsippene i Forsøksdyrutvalget.
Intestinal samskrevet looper modeller er et ønskelig alternativ for studier av sykdommer forårsaket av intestinal patogener med hensyn til prinsippet reduksjon, og raffinement. Disse modellene opprettes intestinal segmenter som kalles "looper" ved å plassere ligaturer langs tarmkanalen til uavhengige og hermetiske rom hvor patogener kan injiseres alene9 eller med andre molekyler, som vaksine kandidater 10 , 11. patogener av interesse er plassert nær kontakt med intestinal celler og etter noen timer infeksjon tid, intestinal prøver kan gjenopprettes for videre analyse. Dette tillater bruk av flere behandling og kontroll grupper i samme dyret. Statistisk analyse kan utføres med gjentatte measures modeller, som øker kraften til diskriminering mellom grupper og reduserer antallet nødvendige kyllinger sammenlignet muntlig gavage forsøk. Også utføres kirurgiske prosedyrer og påfølgende infeksjon ganger under kontinuerlig narkose og analgesi, derav som dyr smertene. Lukket sløyfe ligations er en ideell mal for å redusere vert tall og skape en mer human system i Forsøksdyrutvalget.
Intestinal samskrevet looper modeller er også beskrevet i ulike arter, som kalver, kanin og mus2,9, men dårlig beskrevet i kyllinger7. For optimal utnyttelse av denne kirurgiske modellen er riktig teknikk og utførelse avgjørende for etableringen av samskrevet intestinal looper å unngå skader på intestinal integritet. Målet med dette manuskriptet er å beskrive en steg for steg metoden i etableringen av flere intestinal looper i en kylling modell. Denne teknikken er begrenset av kirurgens dyktighet og erfaring, som nøyaktig prosedyrer er avgjørende for suksess for prosjektet.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>EZ-Scrub 747</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td></td>
			<td>4% chlorhexidine gluconate detergent impregnated sterile brush. No catalog number available. Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/infection-prevention/surgical-hand-scrubs/ez-scrub-preoperative-surgical-scrub-brushes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl alcohol 70% USP 4 L</td>
			<td>Commercial isopropyl alcohol</td>
			<td>P016IP70</td>
			<td>Web address: http://www.comalc.com/products/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorexidine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>282227-1G</td>
			<td>Chlorhexidine gluconate solution, must be diluted to 4%. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/282227?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI8vHr4_OY1wIV3rrACh2ZWQKuEAAYAiAAEgLKx_D_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Drape Small (27 inch x 24 inch) with 3 x 6 inch Fenestration</td>
			<td>Veterinary Specialty Products</td>
			<td>32724</td>
			<td>Web address: http://www.vetspecialtyproducts.com/index.cfm?fuseaction=ecommercecatalog.detail&#38;productgroup_id=15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades #3</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>301</td>
			<td>Web address: https://www.swann-morton.com/product/16.php</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline NaCl 0.9%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8776-100ML</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8776?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl 3-0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>D9003</td>
			<td>Polyglactin multifilament absorbable suture material. Web address: http://www.ethicon.com/healthcare-professionals/products/wound-closure/absorbable-sutures/coated-vicryl-polyglactin-910-suture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1 ml with 26G needle</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td>329652</td>
			<td>Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/diabetes-care/insulin-syringes/bd-1-ml-conventional-insulin-syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Heart Infusion</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>1104930500</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/110493?lang=fr&#38;region=CA&#38;cm_sp=Insite-_-prodRecCold_xorders-_-prodRecCold2-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tube</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9661-500EA</td>
			<td>Microcentrifuge tube. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t9661?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI-YizzfiY1wIVRkCGCh30SQjuEAAYAiAAEgLK5fD_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, buffered neutral, 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td>Ratio tissue : formalin of 1: 10 for adequate fixation. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht501128?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clostridium perfringens strains</td>
			<td>Universit&#233; de Montr&#233;al, Chaire en recherche avicole</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Specific to each laboratory, available upon request to correspondant author</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence

Nekrotisk enteritt ble studert i kyllinger bruker ulike i vivo infeksjon modeller. De fleste av disse bruker en kombinasjon av faktorene, som coccidiosis og kosthold, med gavage eller administrasjon via feed ved hjelp av Clostridium perfringens. Disse modellene krever sammenligning av flere C. perfringens stammene for virulens studier mange verter å få betydelige resultater. Dødelighet i løpet av studien kan være høy avhengig av eksperimentell modell, dermed heve visse etiske spørsmål om dyrevelferd i forskning. Utviklingen av nye infeksjon modeller krever færre dyr å studere patogenesen, likevel gir statistisk signifikant og gyldig resultater, er viktig å redusere dyr bruk i forskning. Intestinal samskrevet loop modeller har blitt brukt til å studere clostridial infeksjoner i ulike arter som mus, kaniner og kalver. Etter kirurgiske prosedyrer til å opprette samskrevet loop segmenter, C. perfringens stammene er injisert direkte inn looper å etablere en nær kontakt mellom bakterier og tarmen. Prøver av tynntarm og luminal innholdet er tatt ved oppsigelse av fremgangsmåten etter noen timer. Flere bakteriell stammer kan være inokulert i hvert dyr, derfor redusere antall nødvendige fag i forsøkene. Også er prosedyrer utført under narkose å redusere dyr smerte. I kyllinger, ville denne modell være mer hensiktsmessig enn peroral administrering sammenligne C. perfringens belastning virusets fordi færre dyr kreves ingen faktorene som kreves for å indusere sykdommen og pain kontrolleres av smertestillende . Intestinal samskrevet loop modellen er dårlig beskrevet i kyllinger og standardisering er avgjørende for optimal bruk. Dette manuskriptet gir alle nødvendige skritt for å opprette mange intestinal ligated looper i kyllinger og gir informasjon om kritiske punkter å oppnå gyldig resultater.

En skjematisk 9 intestinal looper og 8 interloops er vist i figur 1. I denne modellen, totalt 9 looper og 8 interloops opprettes med enkel ligaturer. En løkke består av proksimale og distale ligaturer linjeavstand av 2 cm målt fra den proksimale ligaturen. To tilstøtende løkker er atskilt med en interloop på 1 cm. Du kan redusere mulig risiko for kryssforurensning mellom looper av lekkasje fra en ligatur, plasseres en interloop ligatur halvveis fra dist...

Watch this Scientific Journal Video about A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence at JoVE.com

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Her presenterer vi en protokoll for å opprette kirurgisk 'intestinal samskrevet looper' i kylling små tarmer. Denne prosedyren kan sammenligne flere Clostridium perfringens stammer virulens i situ i en enkelt vert. Denne metoden reduserer betydelig antall kyllinger vanligvis nødvendig for lignende i vivo eksperimenter.

En samskrevet Intestinal Loop modell bedøvet bestemt patogen gratis kyllinger å studere Clostridium Perfringens virulens

Necrotic enteritis was studied in chickens using various in vivo infection models. Most of these use a combination of predisposing factors, such as ...

Denne metoden kan bidra til å svare på viktige spørsmål innen kylling nekrotisk enteritt forskning. Som å sammenligne virulens av spesifikke Clostridium perfringens stammer som forårsaker denne sykdommen. Den største fordelen med denne teknikken er at det bemerkelsesverdig reduserer antall kyllinger som vanligvis er nødvendige for lignende ambivore eksperimenter.Selv om denne metoden kan gi innsikt i virulenspotensialet til Clostridium perfringens stammer, kan den også brukes på andre tarmpatogener som Clostridium difficile, eller Salmonella enterica. Generelt vil personer som er nye på denne metoden slite fordi kirurgiske prosedyrer trenger spesifikk opplæring og skal bare utføres av de som har tilegnet seg ferdigheter som suturing, en teknikk før eksperimentet. Etter å ha bedertet en 10 uker gammel spesifikk patogenfri leghorn kylling, sett opp skjermene for vitale målinger og begynn å fjerne fjærene manuelt fra magen ved mild trekkraft.Deretter skrubber du operasjonsstedet ved hjelp av klorhexidinglukot med en myk børste. Skrubb forsiktig huden fra midten til periferien i fem minutter uten å reversere kurs. Deretter utfører du tre vekslende passasjer på operasjonsstedet med klorhexidinglukonatløsning og Isopropylalkohol ved hjelp av sterile gasbind.Igjen, gå fra midten til periferien, så draper kyllingen. Begynn med å åpne draperingen over operasjonsstedet, og lag deretter et L-formet lavt midtlinjet hud snitt med en nummer tre skalpell, starter en centimeter kos til brystbenet, og slutter på en centimeter kranial til cloicha. Deretter fortsetter L-formet snitt vinkelrett på den første ved å gjøre et andre snitt starter på kose enden av det første snittet og fortsette fem centimeter til venstre side av magen ved å følge bekkenlinjen.Denne åpningen vil tillate enkel ekstraksjon av tarmene. Deretter åpner du bukhinnen og magemusklene ved hjelp av det samme L-formede mønsteret for å få tilgang til bukhulen. Luftsekkene vil nå bli utsatt og må holdes fuktige ved hjelp av saltvann gjennomvåt gasbind.Deretter setter du inn en Snook spay krok i bukhulen ved å følge venstre bukvegg og jobbe kroken rundt bukluftssekker for å trekke ut tarmene. Deretter, ved hjelp av tørr gasbind, fortsett forsiktig å eksteriere tarmene for å eksponere Jejunum. Spre tarmene og hold dem fuktige med hyppig sprøyting med Saltvann og ved å dekke dem med Saltvann gjennomvåt gasbind.Det er viktig å være veldig forsiktig mens du tar ut tarmene fordi overdreven spenning kan bryte de mesenteriske karene som kan føre til tarmiske iskemiske lesjoner og i stor grad kompromittere utfallet av prosedyren. Etter eksteriøring av tarmene, lag en rekke løkker i tarmene som begynner i Jejunum. Hver løkke kan brukes til forskjellig behandling.I det proksimale Jejunum plasserer du en enkel ligatur med et polyglutamin multifilament syntetisk absorberbart materiale samtidig som du unngår ligaturen til store mesenteriske kar. Deretter plasserer du en distal ligatur to centimeter unna den proksimale ligaturen for å fullføre den første sløyfen. Alle proksimale og distale ligaturer bør være fordelt med omtrent to centimeter.Hvert par ligaturer gjør en løkke, som er et hermetisk segment. Deretter oppretter du en interloop eller et segment av tarmen mellom løkkene. Plasser en enkel ligatur en halv centimeter aborely til distal ligatur av den første sløyfen.Denne ligaturen er midt i interloopen og vil redusere mulig krysskontaminering mellom løkker. Nå fortsetter du mønsteret for å skape en ny sløyfe en halv centimeter aborely fra interloop ligatur. Her er ni løkker og åtte interloops opprettet som dekker 26 centimeter tarm.Antall løkker kan justeres etter behov. Deretter fortsetter du med å injisere stamme av Clostridium perfringens i løkkene. Inn i den anti-mesenteriske siden av løkken, bruk en 26 gauge nål i en 45 graders vinkel for å injisere 0,2 milliliter BHI-løsning, som inneholder en million kolonidannende enheter av bakterier i midtslåvekstfasen.I dette tilfellet, med ni løkker, injiseres fem forskjellige stammer i vekslende løkker med de mellomliggende løkkene injisert med kjøretøy alene som negative kontroller. Etter å ha injisert patogenene, skift forsiktig tarmkanalen til dorsalområdet i bukhulen under luftsekkene. Lukk deretter bukhulen.Sutur bukhinnen og magemusklene langs bekkenet med et enkelt kontinuerlig suturmønster ved hjelp av et polyglutamin multifilament syntetisk absorberbart materiale. Fortsett med å suturere bukhinnen og magemusklene fra brystbenet til cloiche ved hjelp av enkle kontinuerlige suturer. Deretter suturerer huden tett ved hjelp av et polyglutamin multifilament syntetisk materiale og et enkelt kontinuerlig mønster.Først sutur langs bekkenet, deretter sutur fra brystbenet til cloiche. Etter å ha lukket snittene, hold kyllingen under generell anestesi med riktig bruk av smertestillende midler for å minimere dyresmerter under infeksjonstiden. Fortsett bedøvelsesovervåking for å sikre et tilstrekkelig anestesinivå.Etter ønsket mengde infeksjonstid, for eksempel syv timer i det nåværende eksperimentet, euthanize fuglen og samle tarmvevet. Bruk en nummer tre skalpell, kutt ut en halv til en centimeter loop seksjon. Deretter overfører du seksjonen til 10% Formalin for overnattingfiksering og ytterligere histopatologisk analyse.Deretter bruker du det samme skalpellbladet på samme sløyfe for å kutte ut resten av løkken og overføre det vevet til et mikrofundert rør for isolering av bakteriene. Gjenta denne prosedyren for hver løkke ved hjelp av et nytt skalpellblad hver gang. Syv timer etter injeksjon, en tarmsløyfe injisert med en kontroll sterilt medium har en intakt slimhinnebørste grensen uten nekrose.Mild overbelastning i tarmlagene i segmentene er ikke uvanlig. Syv timer etter injeksjon med patogenet, Clostridium perfringens, villi tips er erodert med nekrotiske inngangssteder rundt tipsene. Og så nekrotisk materiale rundt villi, det er klynger av store stangformede bakterier.Noen ganger er nekrose på grunn av dårlig prosedyremessig utførelse og kan feiltolkes som lesjoner produsert av bakterier. Et telltale tegn er fraværet av bakterier i histologisk seksjon. Også blodkarene i muskellaget er sterkt utvidet ved akkumulering av mange degenererende erytrocytter som indikerer vaskulær overbelastning.Dette var forårsaket av ligated mesenteriske blodkar som sannsynligvis ble ligated å gjøre overdreven fysisk belastning på tarmene. Iskemiske løkker kan enkelt identifiseres mikroskopisk under kirurgiske prosedyrer. Etter alvorlig vaskulær overbelastning noen minutter etter ligaturen, vil serosaen være mørk blå i stedet for sin normale rosa rødlige farge.Etter å ha sett denne videoen, bør du ha en god forståelse av hvordan du lager flere tarmløkker i en kyllingmodell ved å plassere ligaturer på tarmene. Når mestret kirurgiske prosedyrer, unntatt infeksjonstid, kan gjøres på mindre enn tre timer, hvis det utføres riktig. Mens du prøver denne prosedyren, er det viktig å huske å holde kyllingen under dyp anestesi for å kontrollere smerten og overvåke vitale tegn under alle prosedyrene, inkludert kirurgisk del og etter infeksjonstid.Etter denne prosedyren eller deres metoder som bakteriell isolasjon, og rett identifisering som gendeteksjon av PCR kan utføres for å svare på eksterne spørsmål som utvinning og identifisering av det første injiserte patogenet. Etter denne utviklingen banet denne teknikken en måte for forskere innen Clostridium perfringens patogenese for å utforske nekrotisk enteritt hos kyllinger. Ikke glem at det å jobbe med levende dyr kan være ekstremt variabelt.Og forholdsregler som kontinuerlig bedøvelse overvåking av kyllingen bør alltid gjøres mens du utfører denne prosedyren.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Biomarkører i en dyremodell for Avslører Neural, Hematologic, og Behavioral korrelerer av PTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

Funksjonell Vurdering av intestinal motilitet og tarmveggen Betennelse i Gnagere: Analyser i en standardisert modell for Intestinal Manipulation

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

A Human<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Aterosklerotisk plakk modell for å studere Lesjon Biology

Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease of the vasculature. There are various methods to study the inflammatory compound in atherosclerotic ...

Facial Nerve Axotomy in Mice: A Model to Study Motoneuron Response to Injury

Ansikts Nerve aksotomi i Mus: En modell for å studere Motoneuron Response to Injury

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Murine modell av intestinal iskemi-reperfusjon Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

Vein Interposisjon Modell: En passende modell for å studere Bypass Graft åpenhet

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

A Model of Free Tissue Transfer: The Rat Epigastric Free Flap

En modell av Free Tissue Transfer: The Rat Epigastric Gratis Flap

Free tissue transfer has been increasingly used in clinical practice since the 1970s, allowing reconstruction of complex and otherwise untreatable defects ...

Intestinal Stem Cell Isolation and Culture in a Porcine Model of Segmental Small Intestinal Ischemia

Intestinal stamcelleforskningen isolasjon og kultur i en Porcine modell av Segmentinformasjon liten Intestinal Ischemia

Intestinal ischemia remains a major cause of morbidity and mortality in human and veterinary patients. Many disease processes result in intestinal ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Isometrisk Contractility måling av musen hvem arterien bruker Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

En Cryoinjury modell for å studere hjerteinfarkt i Mouse

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we ...