Name: a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence
Uploaded: 2018-10-11T12:30:00
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Este trabalho foi apoiado pela cadeira na pesquisa de aves de capoeira (M. Boulianne) da faculdade de medicina veterinária da Université de Montréal. Os Drs Boulianne e pai desenvolveram o modelo. Boulianne DRS e pai fez as cirurgias. Dr. Burns auxiliou no desenvolvimento do protocolo de anestesia. Dr. Parent o vídeo editado e escreveu o manuscrito. DRS Burns, Desrochers e Boulianne editado o manuscrito.

Todos os procedimentos com uso de animais vivo foram autorizados pelo Comitê de ética da faculdade de medicina veterinária, Université de Montréal (CÉUA, 'Comitê d' éthique de l'utilisation des Animaux').
1. considerações antes da cirurgia
<ol><li>Selecione 10 semanas de idade patógenos específicos (SPF) Livorno galinhas livres para a cirurgia. Nota: O seu peso deve estar entre 1,0 e 1,2 kg.</li>
	<li>Retire a alimentação 12 h antes dos procedimentos para esvaziar o trato in...

<ol>
	<li>Vitale, A., Chiarotti, F., Alleva, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+animal+models+in+disease+research.">The use of animal models in disease research.</a> Rare diseases and orphan drugs. 2 (1), 1-4 (2015).</li><li>Uzal, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+to+study+the+pathogenesis+of+human+and+animal+Clostridium+perfringens+infections.">Animal models to study the pathogenesis of human and animal Clostridium perfringens infections.</a> Veterinary Microbiology. , (2015).</li><li>Bernier, G., Phaneuf, J. 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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NetB,+a+new+toxin+that+is+associated+with+avian+necrotic+enteritis+caused+by+Clostridium+perfringens.">NetB, a new toxin that is associated with avian necrotic enteritis caused by Clostridium perfringens.</a> PLoS Pathog. 4 (2), e26 (2008).</li><li>Timbermont, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+of+Clostridium+perfringens+isolates+determines+the+ability+to+induce+necrotic+enteritis+in+broilers.">Origin of Clostridium perfringens isolates determines the ability to induce necrotic enteritis in broilers.</a> Comp Immunol Microbiol Infect Dis. 32 (6), 503-512 (2009).</li><li>Paradis, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+avilamycin+for+the+prevention+of+necrotic+enteritis+caused+by+a+pathogenic+strain+of+Clostridium+perfringens+in+broiler+chickens.">Efficacy of avilamycin for the prevention of necrotic enteritis caused by a pathogenic strain of Clostridium perfringens in broiler chickens.</a> Avian Pathol. 45 (3), 365-369 (2016).</li><li>Valgaeren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lesion+development+in+a+new+intestinal+loop+model+indicates+the+involvement+of+a+shared+Clostridium+perfringens+virulence+factor+in+haemorrhagic+enteritis+in+calves.">Lesion development in a new intestinal loop model indicates the involvement of a shared Clostridium perfringens virulence factor in haemorrhagic enteritis in calves.</a> Journal of Comparative Pathology. 149 (1), 103-112 (2013).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+C-terminal+domain+of+Clostridium+perfringens+alpha+toxin+as+a+vaccine+candidate+against+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">The C-terminal domain of Clostridium perfringens alpha toxin as a vaccine candidate against bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> Vet Res. 47 (1), 52 (2016).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxin-neutralizing+antibodies+protect+against+Clostridium+perfringens-induced+necrosis+in+an+intestinal+loop+model+for+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">Toxin-neutralizing antibodies protect against Clostridium perfringens-induced necrosis in an intestinal loop model for bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> BMC Vet Res. 12 (1), 101 (2016).</li><li>Parent, E., Archambault, M., Charlebois, A., Bernier-Lachance, J., Boulianne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chicken+intestinal+ligated+loop+model+to+study+the+virulence+of+Clostridium+perfringens+isolates+recovered+from+antibiotic-free+chicken+flocks.">A chicken intestinal ligated loop model to study the virulence of Clostridium perfringens isolates recovered from antibiotic-free chicken flocks.</a> Avian Pathol. 46 (2), 138-149 (2017).</li><li>Janvilisri, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+differential+proteomes+of+Clostridium+difficile+in+the+pig+ileal-ligated+loop+model.">Temporal differential proteomes of Clostridium difficile in the pig ileal-ligated loop model.</a> PLoS One. 7 (9), e45608 (2012).</li><li>Aabo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+in+vivo+model+for+study+of+intestinal+invasion+by+Salmonella+enterica+in+chickens.">Development of an in vivo model for study of intestinal invasion by Salmonella enterica in chickens.</a> Infection and Immunity. 68 (12), 7122-7125 (2000).</li><li>Meurens, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+immune+response+following+Salmonella+enterica+subspecies+enterica+serovar+Typhimurium+infection+in+porcine+jejunal+gut+loops.">Early immune response following Salmonella enterica subspecies enterica serovar Typhimurium infection in porcine jejunal gut loops.</a> Vet Res. 40 (1), 5 (2009).</li><li>Gerdts, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+intestinal+'loops'+provide+an+in+vivo+model+to+analyse+multiple+mucosal+immune+responses.">Multiple intestinal 'loops' provide an in vivo model to analyse multiple mucosal immune responses.</a> J Immunol Methods. 256 (1-2), 19-33 (2001).</li><li>Wade, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adherent+abilities+of+Clostridium+perfringens+strains+are+critical+for+the+pathogenesis+of+avian+necrotic+enteritis.">The adherent abilities of Clostridium perfringens strains are critical for the pathogenesis of avian necrotic enteritis.</a> Vet Microbiol. 197, 53-61 (2016).</li><li>Cooper, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+for+chickens+of+Clostridium+perfringens+isolated+from+poultry+and+other+sources.">Virulence for chickens of Clostridium perfringens isolated from poultry and other sources.</a> Anaerobe. 16 (3), 289-292 (2010).</li><li>Cooper, K. K., Songer, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+of+Clostridium+perfringens+in+an+experimental+model+of+poultry+necrotic+enteritis.">Virulence of Clostridium perfringens in an experimental model of poultry necrotic enteritis.</a> Veterinary Microbiology. 142 (3-4), 323-328 (2010).</li><li>Chalmers, G., Bruce, H. L., Toole, D. L., Barnum, D. A., Boerlin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+potential+in+a+model+system+using+Clostridium+perfringens+isolated+from+field+outbreaks.">Necrotic enteritis potential in a model system using Clostridium perfringens isolated from field outbreaks.</a> Avian Diseases. 51 (4), 834-839 (2007).</li></ol>

Modelos de laços intestinal têm sido descritos em inúmeras espécies para estudar a interação patógeno-hospedeiro e patogénese das doenças causadas por vários patógenos intestinais, tais como o Clostridium perfringens, Clostridium difficile e Salmonella typhi7,9,13,14,15. Também tem sido usado para analisar as mucosas resp...

O uso de modelos animais para estudo de doenças infecciosas que afetam os seres humanos e animais é uma ferramenta central na avaliação de fatores de virulência, regulando a patogênese de uma condição específica, bem como para elaborar estratégias para prevenir ou curar doenças1. Apesar das inúmeras vantagens do uso de modelos animais para o estudo de várias doenças, estão surgindo preocupações éticas em relação a esta prática. Os pesquisadores precisam minimizar o uso de animais durante a obtenção de resultados significativos e válidos. O conceito dos 3 princípios Rs (Replace, Reduce e Refine) foi elaborado para garantir que o bem-estar questões foram tratadas em tais ensaios. Em estudos de enterite necrótica do frango, na vivo modelos de galinha são usados para investigar a etiologia, prevenção e tratamentos desta condição2,3,4,5. Cepas patogênicas de c. perfringens carregando fatores de virulência específicos, tais como a toxina NetB6, são administradas para causar enterite necrótica em galinhas7. O princípio de substituição é, portanto, difícil de conseguir neste caso como estes fatores de virulência podem não ser tão críticos em outras espécies animais. A maioria dos modelos para enterite necrótica em galinhas usam uma combinação de fatores de risco, tais como coccidiose e alteraram a dieta para induzir a enterite necrótica, seguido por gavagem do caldo de cultura que contém um grande número de c. perfringens2. Estes modelos irão induzir a doença em um grande número de galinhas, e a mortalidade pode ser importante em tais ensaios8, assim, levantando preocupações sobre os princípios de redução e refinamento em pesquisas com animais.
Modelos de laços ligados intestinal são uma alternativa desejável para o estudo de doenças induzidas por patógenos intestinais em relação à redução de princípio e refinamento. Nestes modelos, chamados 'loops' de segmentos intestinais são criados colocando ligaduras ao longo do trato intestinal formando compartimentos independentes e herméticos onde patógenos podem ser injetados sozinho9 ou com outras moléculas, tais como candidatos vacinais 10 , 11. os patógenos de interesse são colocados em contato com as células intestinais, e após algumas horas de tempo de infecção, amostras intestinais podem ser recuperadas para posterior análise. Isto permite o uso de múltiplos grupos tratamento e controle no mesmo animal. Análise estatística pode ser realizada com modelos de medidas repetidas, o que aumenta o poder de discriminação entre grupos e reduz o número de galinhas necessárias em relação aos testes de gavagem oral. Além disso, procedimentos cirúrgicos e subsequente infecção vezes são realizadas sob anestesia geral contínua e analgesia, portanto, minimizando a dor animal. Câmara de circuito fechado é um modelo ideal para reduzir o números de hosts e criando um sistema mais humano em pesquisas com animais.
Modelos de laços ligados intestinal são bem descritos em várias espécies, tais como vacas, coelhos e ratos2,9, mas mal descritos em galinhas7. Para uma utilização óptima deste modelo cirúrgico, execução e técnica adequada são essenciais para a criação de loops intestinais ligados para evitar danos à integridade intestinal. O objetivo deste manuscrito é descrever um método passo a passo na criação de vários loops intestinais em um modelo de frango. Esta técnica é limitada pela habilidade e experiência do cirurgião, como procedimentos precisos são essenciais para o sucesso do projeto.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>EZ-Scrub 747</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td></td>
			<td>4% chlorhexidine gluconate detergent impregnated sterile brush. No catalog number available. Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/infection-prevention/surgical-hand-scrubs/ez-scrub-preoperative-surgical-scrub-brushes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl alcohol 70% USP 4 L</td>
			<td>Commercial isopropyl alcohol</td>
			<td>P016IP70</td>
			<td>Web address: http://www.comalc.com/products/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorexidine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>282227-1G</td>
			<td>Chlorhexidine gluconate solution, must be diluted to 4%. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/282227?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI8vHr4_OY1wIV3rrACh2ZWQKuEAAYAiAAEgLKx_D_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Drape Small (27 inch x 24 inch) with 3 x 6 inch Fenestration</td>
			<td>Veterinary Specialty Products</td>
			<td>32724</td>
			<td>Web address: http://www.vetspecialtyproducts.com/index.cfm?fuseaction=ecommercecatalog.detail&#38;productgroup_id=15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades #3</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>301</td>
			<td>Web address: https://www.swann-morton.com/product/16.php</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline NaCl 0.9%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8776-100ML</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8776?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl 3-0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>D9003</td>
			<td>Polyglactin multifilament absorbable suture material. Web address: http://www.ethicon.com/healthcare-professionals/products/wound-closure/absorbable-sutures/coated-vicryl-polyglactin-910-suture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1 ml with 26G needle</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td>329652</td>
			<td>Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/diabetes-care/insulin-syringes/bd-1-ml-conventional-insulin-syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Heart Infusion</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>1104930500</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/110493?lang=fr&#38;region=CA&#38;cm_sp=Insite-_-prodRecCold_xorders-_-prodRecCold2-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tube</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9661-500EA</td>
			<td>Microcentrifuge tube. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t9661?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI-YizzfiY1wIVRkCGCh30SQjuEAAYAiAAEgLK5fD_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, buffered neutral, 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td>Ratio tissue : formalin of 1: 10 for adequate fixation. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht501128?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clostridium perfringens strains</td>
			<td>Universit&#233; de Montr&#233;al, Chaire en recherche avicole</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Specific to each laboratory, available upon request to correspondant author</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence

Enterite necrótica foi estudada em galinhas usando várias em vivo modelos de infecção. A maioria destes usa uma combinação de fatores predisponentes, tais como a dieta e coccidiose com gavagem ou administração através do feed usando o Clostridium perfringens. Nestes modelos, a comparação de várias cepas de c. perfringens para estudos de virulência requer um grande número de hosts para obter resultados significativos. Mortalidade no decorrer do estudo pode ser alta dependendo do modelo experimental, portanto, levantando preocupações éticas relativas ao bem-estar dos animal na pesquisa. O desenvolvimento de novos modelos de infecção, exigindo menos animais para estudar a patogênese, ainda, fornecer resultados estatisticamente significativos e válidos, é importante na redução do uso de animais em pesquisa. Modelos de alça intestinal ligados têm sido usados para estudar clostridial infecções em várias espécies, como ratos, coelhos e bezerros. Na sequência de procedimentos cirúrgicos para criar segmentos de laço ligados, cepas de c. perfringens são injetadas diretamente dos loops para estabelecer um contato próximo entre as bactérias e a mucosa intestinal. São retiradas amostras de intestino delgado e conteúdo luminal a finalização dos procedimentos, depois de algumas horas. Várias estirpes bacterianas podem ser inoculadas em cada animal, portanto, reduzindo o número de sujeitos necessários nos experimentos. Também, os procedimentos são realizados sob anestesia geral para reduzir a dor do animal. Em galinhas, esse modelo seria mais adequado que a administração oral para comparar a patogenicidade de cepa de c. perfringens , porque menos animais são necessários, sem fatores predisponentes são necessárias para induzir a doença e dor é controlada por analgésicos . O modelo de alça intestinal ligados é mal descrito em galinhas e padronização é essencial para optimizar a sua utilização. Este manuscrito fornece todos os passos necessários para criar inúmeros laços ligados intestinais em frangos e traz informações sobre os pontos críticos para obter resultados válidos.

Um esquema de 9 alças intestinais e 8 interloops é mostrado na Figura 1. Neste modelo, um total de 9 loops e 8 interloops são criados com ligaduras simples. Um ciclo consiste de ligaduras proximais e distais, espaçadas por 2 cm, medido a partir da ligadura proximal. Dois loops adjacentes são separados por um interloop de 1 cm. Para diminuir o risco de contaminação cruzada entre loops por vazamento de uma ligadura, uma ligadura interloop é colocada a m...

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A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Aqui nós apresentamos um protocolo para criar cirurgicamente 'intestinais laços ligados' no intestino de frango. Este procedimento permite a comparação de virulência em situ em um único host vários as estirpes Clostridium perfringens . Esse método marcadamente diminui o número de galinhas geralmente necessários para experimentos semelhantes na vivo .

Um modelo de alça Intestinal ligados em galinhas livres anestesiados patógeno específico para estudar a virulência de Clostridium Perfringens

Necrotic enteritis was studied in chickens using various in vivo infection models. Most of these use a combination of predisposing factors, such as ...

Este método pode ajudar a responder perguntas-chave no campo da pesquisa de Enteritis Necrotic De Frango. Como comparar a virulência de cepas específicas de clostridium que causam essa doença. A principal vantagem desta técnica é que ela reduz notavelmente o número de galinhas geralmente necessárias para experimentos ambientais semelhantes.Embora este método possa fornecer uma visão sobre o potencial de virulência das cepas de clostridium perfringens, ele também pode ser aplicado a outros patógenos intestinais, como Clostridium difficile, ou Salmonella enterica. Geralmente, indivíduos novos nesse método lutarão porque os procedimentos cirúrgicos precisam de treinamento específico e só devem ser realizados por aqueles que adquiriram habilidades como sutura, técnicas anteriores ao experimento. Depois de anestesiar um frango leghorn livre de patógeno específico de 10 semanas, configure os monitores para medidas vitais e comece a remover manualmente as penas do abdômen por tração suave.Em seguida, esfregue o local cirúrgico usando gluconato de clorexidina com uma escova de cerdas macias. Esfregue suavemente a pele do centro para a periferia por cinco minutos sem inverter o curso. Em seguida, realize três passagens alternadas no local cirúrgico com solução de colacote de clorexidina e álcool isopropílico usando gazes estéreis.Novamente, vá do centro para a periferia, então, drape o frango. Comece abrindo a cortina acima do local cirúrgico, em seguida, faça uma incisão de pele média baixa em forma de L com um bisturi número três, começando um abraço centímetro ao esterno, e terminando em um centímetro cranial para a cloicha. Em seguida, continue a incisão em forma de L perpendicular ao primeiro fazendo uma segunda incisão começando na extremidade do abraço da primeira incisão e continue cinco centímetros para o lado esquerdo do abdômen seguindo a linha pélvis.Esta abertura permitirá a fácil extração dos intestinos. Em seguida, abra os músculos peritônio e abdominal usando o mesmo padrão em forma de L para acessar a cavidade abdominal. Os sacos de ar serão agora expostos e devem ser mantidos úmidos usando gaze salina encharcada.Em seguida, insira um gancho snook spay na cavidade abdominal seguindo a parede abdominal esquerda e trabalhando o gancho em torno dos sacos de ar abdominal para extrair os intestinos. Em seguida, usando gaze seca, continue exteriorizando suavemente os intestinos para expor o Jejunum. Espalhe os intestinos e mantenha-os úmidos com pulverização frequente com soro fisiológico e cobrindo-os com gaze salina encharcada.É importante ser muito gentil ao retirar os intestinos porque a tensão excessiva pode romper os vasos mesentéricos que podem levar a lesões isquêmicas intestinais e comprometer muito o resultado do procedimento. Depois de exteriorizar os intestinos, faça uma série de laços nos intestinos começando no Jejunum. Cada loop pode ser usado para tratamento diferente.No jejunum proximal, coloque uma ligadura simples com um material absorvente sintético poliglutamina multifilament, evitando a ligadura dos principais vasos mesentéricos. Em seguida, coloque uma ligadura distal a dois centímetros da ligadura proximal para completar o primeiro loop. Todas as ligaduras proximais e distais devem ser espaçadas por cerca de dois centímetros.Cada par de ligaduras faz um loop, que é um segmento hermético. Em seguida, crie um interloop ou um segmento de intestino entre as alças. Coloque uma ligadura simples meio centímetro aborely à ligadura distal do primeiro loop.Esta ligadura está no meio do interloop e diminuirá a possível contaminação cruzada entre as alças. Agora, continue o padrão de criar outro loop meio centímetro aborely aborely a partir da ligadura interloop. Aqui, nove loops e oito interloops são criados cobrindo 26 centímetros de intestino.O número de loops pode ser ajustado conforme necessário. Em seguida, prossiga com a injeção de clostridium perfringens nos loops. No lado anti-mesentérico do loop, use uma agulha de calibre 26 em um ângulo de 45 graus para injetar 0,2 mililitros de solução BHI, contendo um milhão de colônias formando unidades de bactérias na fase de crescimento do midlog.Nesta situação, com nove loops, cinco cepas diferentes são injetadas em loops alternados com as alças intervenientes injetadas apenas com o veículo como controles negativos. Depois de injetar os patógenos, substitua suavemente o trato intestinal para a área dorsal da cavidade abdominal sob os sacos de ar. Então, feche a cavidade abdominal.Sutura os músculos peritônio e abdominal ao longo da pelve com um simples padrão de sutura contínua usando um material absorvente sintético poliglutamina multifilament. Continue suturando os músculos peritônio e abdominal do esterno ao cloiche usando suturas contínuas simples. Em seguida, suturar a pele perto usando um material sintético Poliglutamina Multifilament e um padrão contínuo simples.Primeiro, sutura ao longo da pélvis, em seguida, sutura do esterno para o cloiche. Após o fechamento das incisões, mantenha o frango sob anestesia geral com o uso adequado de analgésicos para minimizar a dor animal durante o tempo de infecção. Continue o monitoramento anestésico para garantir um nível adequado de anestesia.Após o tempo desejado de infecção, como sete horas no presente experimento, eutanize a ave e colete os tecidos intestinais. Usando um bisturi número três, corte uma seção de loop de meio a um centímetro. Em seguida, transfira a seção para 10% Formalin para fixação noturna e posterior análise histopatológica.Em seguida, use a mesma lâmina de bisturi no mesmo laço para cortar o restante do laço e transferir esse tecido para um tubo microfusado para o isolamento das bactérias. Repita este procedimento para cada loop usando uma nova lâmina de bisturi cada vez. Sete horas após a injeção, uma alça intestinal injetada com um meio controle estéril tem uma borda de escova mucosa intacta sem necrose.Congestionamento leve nas camadas intestinais dos segmentos não é incomum. Sete horas após a injeção com o patógeno, Clostridium perfringens, pontas de villi são corroídas com locais de entrada necrosado ao redor das pontas. E então material necrosado ao redor do villi, há aglomerados de grandes bactérias em forma de vara.Às vezes, a necrose é devido à má execução processual e pode ser mal interpretada como lesões produzidas por bactérias. Um sinal revelador é a ausência de bactérias na seção histológica. Além disso, os vasos sanguíneos da camada muscular são severamente dilatados pelo acúmulo de muitos eritrócitos degenerados indicativos de congestionamento vascular.Isso foi causado por vasos sanguíneos mesentéricos ligados que provavelmente foram ligados para fazer esforço físico excessivo nos intestinos. As alças isquêmicas podem ser facilmente identificadas microscopicamente durante os procedimentos cirúrgicos. Após um congestionamento vascular severo alguns minutos após a ligadura, o serosa será azul escuro em vez de sua coloração rosa normal avermelhada.Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como criar múltiplas alças intestinais em um modelo de frango colocando ligaduras nos intestinos. Uma vez dominados os procedimentos cirúrgicos, excluindo o tempo de infecção, podem ser feitos em menos de três horas, se for realizado corretamente. Ao tentar esse procedimento, é importante lembrar de manter o frango sob anestesia profunda para controlar a dor e monitorar sinais vitais durante todos os procedimentos, incluindo parte cirúrgica e tempo de infecção.Seguindo este procedimento ou seus métodos como isolamento bacteriano, e identificação direta, como detecção de genes por PCR, podem ser realizadas a fim de responder a perguntas externas como recuperação e identificação do patógeno injetado inicial. Após esse desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores do campo de Clostridium perfringens patogênese explorarem enterite necrosada em galinhas. Não se esqueça que trabalhar com animais vivos pode ser extremamente variável.E precauções como o monitoramento anestésico contínuo do frango devem ser sempre feitas durante a realização deste procedimento.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Biomarcadores em um modelo animal para Revelando correlatos neurais, hematológica e Comportamental do TEPT

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

Medicina

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

Avaliação Funcional da motilidade intestinal e inflamação da parede do intestino em Roedores: Análises em um modelo padronizado de Manipulação Intestinal

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

A Human<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Placa aterosclerótica modelo para estudar Lesão Biologia

Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease of the vasculature. There are various methods to study the inflammatory compound in atherosclerotic ...

Facial Nerve Axotomy in Mice: A Model to Study Motoneuron Response to Injury

Axotomia do nervo facial em ratos: um modelo para estudo de resposta motoneuron para Injury

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Modelo murino de isquemia-reperfusão

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

Veia Interposição Modelo: Um modelo adequado para estudar Bypass Graft Perviedade

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

A Model of Free Tissue Transfer: The Rat Epigastric Free Flap

Um Modelo de Transferência Tissue Free: The Rat epigástrica gratuito Flap

Free tissue transfer has been increasingly used in clinical practice since the 1970s, allowing reconstruction of complex and otherwise untreatable defects ...

Intestinal Stem Cell Isolation and Culture in a Porcine Model of Segmental Small Intestinal Ischemia

Isolamento de células-tronco intestinal e cultura em um modelo suíno de isquemia Intestinal pequena segmentar

Intestinal ischemia remains a major cause of morbidity and mortality in human and veterinary patients. Many disease processes result in intestinal ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Medição de contratilidade isométrica da artéria mesentérica Mouse usando fio miografia

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

Um modelo Crioferimento para estudar infarto do miocárdio no mouse

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we ...