Name: a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence
Uploaded: 2018-10-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence at JoVE.com

Эта работа была поддержана в птицы исследований (M. Boulianne) Председатель факультета ветеринарной медицины Университет Монреаля. DRS. Boulianne и родитель разработали модель. DRS. Boulianne и родитель выполненных операций. Д-р ожоги помощь в разработке протокола анестезии. Д-р родитель редактировать видео и написал рукопись. DRS Бернс, Дероше и Boulianne редактировать рукописи.

Все процедуры с использование живого животного были утверждены Комитетом по этическим факультет ветеринарной медицины, Университет Монреаля (CÉUA, «Комите d» этики де использование des Animaux»).
1. соображения до операции
<ol><li>Выбор конкретного возбудителя бесплатно 10 недель...

<ol>
	<li>Vitale, A., Chiarotti, F., Alleva, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+animal+models+in+disease+research.">The use of animal models in disease research.</a> Rare diseases and orphan drugs. 2 (1), 1-4 (2015).</li><li>Uzal, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+to+study+the+pathogenesis+of+human+and+animal+Clostridium+perfringens+infections.">Animal models to study the pathogenesis of human and animal Clostridium perfringens infections.</a> Veterinary Microbiology. , (2015).</li><li>Bernier, G., Phaneuf, J. B., Filion, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+in+broiler+chickens.+III.+Study+of+the+factors+favoring+the+multiplication+of+Clostridium+perfringens+and+the+experimental+transmission+of+the+disease.">Necrotic enteritis in broiler chickens. III. Study of the factors favoring the multiplication of Clostridium perfringens and the experimental transmission of the disease.</a> Canadian Journal of Comparative Medicine. 41 (1), 112-116 (1977).</li><li>Al-Sheikhly, F., Truscott, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathology+of+necrotic+enteritis+of+chickens+following+infusion+of+broth+cultures+of+Clostridium+perfringens+into+the+duodenum.">The pathology of necrotic enteritis of chickens following infusion of broth cultures of Clostridium perfringens into the duodenum.</a> Avian Diseases. 21 (2), 230-240 (1977).</li><li>Wicker, D. L., Iscrigg, W. N., Trammell, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+control+and+prevention+of+necrotic+enteritis+in+broilers+with+zinc+bacitracin.">The control and prevention of necrotic enteritis in broilers with zinc bacitracin.</a> Poultry Science. 56 (4), 1229-1231 (1977).</li><li>Keyburn, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NetB,+a+new+toxin+that+is+associated+with+avian+necrotic+enteritis+caused+by+Clostridium+perfringens.">NetB, a new toxin that is associated with avian necrotic enteritis caused by Clostridium perfringens.</a> PLoS Pathog. 4 (2), e26 (2008).</li><li>Timbermont, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+of+Clostridium+perfringens+isolates+determines+the+ability+to+induce+necrotic+enteritis+in+broilers.">Origin of Clostridium perfringens isolates determines the ability to induce necrotic enteritis in broilers.</a> Comp Immunol Microbiol Infect Dis. 32 (6), 503-512 (2009).</li><li>Paradis, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+avilamycin+for+the+prevention+of+necrotic+enteritis+caused+by+a+pathogenic+strain+of+Clostridium+perfringens+in+broiler+chickens.">Efficacy of avilamycin for the prevention of necrotic enteritis caused by a pathogenic strain of Clostridium perfringens in broiler chickens.</a> Avian Pathol. 45 (3), 365-369 (2016).</li><li>Valgaeren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lesion+development+in+a+new+intestinal+loop+model+indicates+the+involvement+of+a+shared+Clostridium+perfringens+virulence+factor+in+haemorrhagic+enteritis+in+calves.">Lesion development in a new intestinal loop model indicates the involvement of a shared Clostridium perfringens virulence factor in haemorrhagic enteritis in calves.</a> Journal of Comparative Pathology. 149 (1), 103-112 (2013).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+C-terminal+domain+of+Clostridium+perfringens+alpha+toxin+as+a+vaccine+candidate+against+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">The C-terminal domain of Clostridium perfringens alpha toxin as a vaccine candidate against bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> Vet Res. 47 (1), 52 (2016).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxin-neutralizing+antibodies+protect+against+Clostridium+perfringens-induced+necrosis+in+an+intestinal+loop+model+for+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">Toxin-neutralizing antibodies protect against Clostridium perfringens-induced necrosis in an intestinal loop model for bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> BMC Vet Res. 12 (1), 101 (2016).</li><li>Parent, E., Archambault, M., Charlebois, A., Bernier-Lachance, J., Boulianne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chicken+intestinal+ligated+loop+model+to+study+the+virulence+of+Clostridium+perfringens+isolates+recovered+from+antibiotic-free+chicken+flocks.">A chicken intestinal ligated loop model to study the virulence of Clostridium perfringens isolates recovered from antibiotic-free chicken flocks.</a> Avian Pathol. 46 (2), 138-149 (2017).</li><li>Janvilisri, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+differential+proteomes+of+Clostridium+difficile+in+the+pig+ileal-ligated+loop+model.">Temporal differential proteomes of Clostridium difficile in the pig ileal-ligated loop model.</a> PLoS One. 7 (9), e45608 (2012).</li><li>Aabo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+in+vivo+model+for+study+of+intestinal+invasion+by+Salmonella+enterica+in+chickens.">Development of an in vivo model for study of intestinal invasion by Salmonella enterica in chickens.</a> Infection and Immunity. 68 (12), 7122-7125 (2000).</li><li>Meurens, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+immune+response+following+Salmonella+enterica+subspecies+enterica+serovar+Typhimurium+infection+in+porcine+jejunal+gut+loops.">Early immune response following Salmonella enterica subspecies enterica serovar Typhimurium infection in porcine jejunal gut loops.</a> Vet Res. 40 (1), 5 (2009).</li><li>Gerdts, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+intestinal+'loops'+provide+an+in+vivo+model+to+analyse+multiple+mucosal+immune+responses.">Multiple intestinal 'loops' provide an in vivo model to analyse multiple mucosal immune responses.</a> J Immunol Methods. 256 (1-2), 19-33 (2001).</li><li>Wade, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adherent+abilities+of+Clostridium+perfringens+strains+are+critical+for+the+pathogenesis+of+avian+necrotic+enteritis.">The adherent abilities of Clostridium perfringens strains are critical for the pathogenesis of avian necrotic enteritis.</a> Vet Microbiol. 197, 53-61 (2016).</li><li>Cooper, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+for+chickens+of+Clostridium+perfringens+isolated+from+poultry+and+other+sources.">Virulence for chickens of Clostridium perfringens isolated from poultry and other sources.</a> Anaerobe. 16 (3), 289-292 (2010).</li><li>Cooper, K. K., Songer, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+of+Clostridium+perfringens+in+an+experimental+model+of+poultry+necrotic+enteritis.">Virulence of Clostridium perfringens in an experimental model of poultry necrotic enteritis.</a> Veterinary Microbiology. 142 (3-4), 323-328 (2010).</li><li>Chalmers, G., Bruce, H. L., Toole, D. L., Barnum, D. A., Boerlin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+potential+in+a+model+system+using+Clostridium+perfringens+isolated+from+field+outbreaks.">Necrotic enteritis potential in a model system using Clostridium perfringens isolated from field outbreaks.</a> Avian Diseases. 51 (4), 834-839 (2007).</li></ol>

В многочисленных видов для изучения взаимодействия хост возбудителя и патогенезе заболеваний, вызванных различных кишечных патогенов, таких как Clostridium perfringens, Clostridium несговорчивый и были описаны модели кишечной петли Salmonella enterica7,9,<sup ...

Использование животных моделей для изучения инфекционных заболеваний, затрагивающих людей и животных является главным инструментом в оценке Факторы вирулентности, регулирующие патогенеза конкретные условия также в отношении разработки стратегий для предотвращения или лечения заболеваний1. Несмотря на многочисленные преимущества использования животных моделей для изучения различных заболеваний возникают этические соображения относительно этой практики. Исследователи должны свести к минимуму использование животных во время получения существенных и допустимые результаты. Для обеспечения учета вопросов благосостояния в таких исследованиях была разработана концепция 3 Rs принципов (Replace, уменьшить и уточнить). В исследованиях энтерит Некротический курица в естественных условиях курица модели используются для изучения этиологии, профилактики и лечения данного состояния2,3,4,5. Патогенные штаммы C. perfringens проведение конкретных вирулентности факторы, такие как NetB токсин6, находятся в ведении вызывают некротические энтерит в КУР7. Принцип замены, таким образом, трудно достичь в таком случае, поскольку эти факторы вирулентности могут быть не так критично в других видов животных. Большинство моделей для энтерит Некротический в КУР использовать комбинацию факторов риска, таких как кокцидиоза и изменили диету, чтобы побудить некротические энтерит, следуют затравки культуры бульон, содержащий большое количество C. perfringens2. Эти модели будут вызывать заболевания в большое количество кур, и смертности может иметь важное значение в таких испытаний8, таким образом вызывает обеспокоенность по поводу сокращения и уточнения принципов в исследований на животных.
Кишечные петли перевязаны модели являются желательной альтернативой для изучения болезней, вызванных кишечных патогенов отношении принцип сокращения и уточнения. В этих моделях кишечные сегментов, под названием «петли» создаются путем размещения лигатуры вдоль желудочно-кишечного тракта для формирования независимой и герметичных отсеков, где патогены могут быть введены только9 или с другими молекулами, например вакцин-кандидатов 10 , 11. патогенов интереса находятся в тесном контакте с клетками кишечника и после нескольких часов время инфекции, кишечные образцы могут быть восстановлены для дальнейшего анализа. Это позволяет использовать несколько лечения и контрольных групп в то же самое животное. Статистический анализ может выполняться с моделями неоднократные меры, которые увеличивает силу дискриминации между группами и уменьшает количество необходимых кур, по сравнению с пероральная затравка испытания. Кроме того хирургических процедур и последующего заражения раз выполняются под непрерывной общей анестезии и обезболивание, таким образом к минимуму животных боль. Замкнутая перешнуровок являются идеальным шаблон для сокращения числа узлов и создания более гуманной системы исследований на животных.
Кишечные петли перевязаны модели хорошо описаны в различных видов, таких как телят, кроликов и мышей2,9, но плохо описано в КУР7. Для оптимального использования этой хирургической модели правильную технику и выполнения необходимы для создания перевязаны кишечной петли, чтобы избежать повреждения кишечника целостности. Цель этой рукописи должен описать метод шаг за шагом в создании нескольких кишечных петель в модели курица. Этот метод ограничен хирурга мастерство и опыт, как точные процедуры имеют важное значение для успеха проекта.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>EZ-Scrub 747</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td></td>
			<td>4% chlorhexidine gluconate detergent impregnated sterile brush. No catalog number available. Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/infection-prevention/surgical-hand-scrubs/ez-scrub-preoperative-surgical-scrub-brushes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl alcohol 70% USP 4 L</td>
			<td>Commercial isopropyl alcohol</td>
			<td>P016IP70</td>
			<td>Web address: http://www.comalc.com/products/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorexidine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>282227-1G</td>
			<td>Chlorhexidine gluconate solution, must be diluted to 4%. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/282227?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI8vHr4_OY1wIV3rrACh2ZWQKuEAAYAiAAEgLKx_D_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Drape Small (27 inch x 24 inch) with 3 x 6 inch Fenestration</td>
			<td>Veterinary Specialty Products</td>
			<td>32724</td>
			<td>Web address: http://www.vetspecialtyproducts.com/index.cfm?fuseaction=ecommercecatalog.detail&#38;productgroup_id=15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades #3</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>301</td>
			<td>Web address: https://www.swann-morton.com/product/16.php</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline NaCl 0.9%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8776-100ML</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8776?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl 3-0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>D9003</td>
			<td>Polyglactin multifilament absorbable suture material. Web address: http://www.ethicon.com/healthcare-professionals/products/wound-closure/absorbable-sutures/coated-vicryl-polyglactin-910-suture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1 ml with 26G needle</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td>329652</td>
			<td>Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/diabetes-care/insulin-syringes/bd-1-ml-conventional-insulin-syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Heart Infusion</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>1104930500</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/110493?lang=fr&#38;region=CA&#38;cm_sp=Insite-_-prodRecCold_xorders-_-prodRecCold2-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tube</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9661-500EA</td>
			<td>Microcentrifuge tube. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t9661?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI-YizzfiY1wIVRkCGCh30SQjuEAAYAiAAEgLK5fD_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, buffered neutral, 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td>Ratio tissue : formalin of 1: 10 for adequate fixation. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht501128?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clostridium perfringens strains</td>
			<td>Universit&#233; de Montr&#233;al, Chaire en recherche avicole</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Specific to each laboratory, available upon request to correspondant author</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence

Энтерит Некротический был изучен в КУР, с использованием различных моделей инфекции в естественных условиях . Большинство из них использовать сочетание предрасполагающих факторов, таких как кокцидиоза и диеты, с кормления или администрации через канал, с помощью Clostridium perfringens. В этих моделях сравнение нескольких штаммов C. perfringens вирулентности исследований требуется большое количество хостов для получения значимых результатов. Смертность в ходе исследования может быть высокой зависимости от экспериментальной модели, поэтому повышение этических соображений относительно животных в научных исследованиях. Разработка новых моделей инфекции, требующие меньше животных для изучения патогенеза, пока предоставление статистически существенных и допустимых результатов, имеет важное значение в плане сокращения использования животных в научных исследованиях. Кишечные перевязаны цикла модели были использованы для изучения клостридий инфекции в различных видов, таких как мышей, кроликов и телят. После хирургических процедур для создания сегментов перевязаны цикла штаммы C. perfringens вводят непосредственно в петли, чтобы установить тесный контакт между бактериями и слизистую кишечника. По завершении процедуры после нескольких часов берутся образцы Люминал содержания и тонкой кишки. Несколько штаммов бактерий могут быть привиты в каждое животное, что сокращает количество необходимых предметов в экспериментах. Кроме того процедуры проводятся под общим наркозом для уменьшения боли животных. В КУР эта модель будет более подходящим, чем пероральный для сравнения патогенности штамм C. perfringens , поскольку требуется меньшее количество животных, не предрасполагающие факторы требуются навести болезни и боль контролируется анальгетики . Кишечные петли перевязаны модель плохо описан в кур и стандартизации имеет важное значение для его оптимального использования. Эта рукопись обеспечивает все необходимые шаги для создания многочисленных кишечных петель перевязаны в кур и приносит информацию о критических точек для получения достоверных результатов.

Схема 9 петель кишечника и 8 interloops показано на рисунке 1. В этой модели в общей сложности 9 петель и 8 interloops создаются с простой лигатуры. Цикл состоит из проксимальных и дистальных лигатуры, расположенных на 2 см, измеренное от проксимальных лигатур. Две см...

Watch this Scientific Journal Video about A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence at JoVE.com

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Здесь мы представляем протокол к хирургическим путем создания «кишечной петли перевязаны» в курица тонкий кишечник. Эта процедура позволяет для сравнения нескольких штаммов Clostridium perfringens вирулентности в situ в одном узле. Этот метод значительно уменьшается количество кур, обычно необходимых для подобных экспериментов в естественных условиях .

Модель в наркотизированных конкретного возбудителя бесплатные куры для изучения вирулентности Clostridium Perfringens перевязаны кишечной петли

Necrotic enteritis was studied in chickens using various in vivo infection models. Most of these use a combination of predisposing factors, such as ...

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области исследования куриного некротического энтерита. Такие, как сравнение вирулентности конкретных Clostridium perfringens штаммов, вызывающих это заболевание. Основным преимуществом этой техники является то, что она значительно сокращает количество кур, обычно необходимых для подобных амбиворных экспериментов.Хотя этот метод может дать представление о потенциале вирулентности штаммов Clostridium perfringens, он также может быть применен к другим кишечным патогенам, таким как Clostridium difficile, или Salmonella enterica. Как правило, лица, новые для этого метода будет бороться, потому что хирургические процедуры нуждается в конкретной подготовке и должны выполняться только теми, кто приобрел навыки, такие как завасывания, методы до эксперимента. После обеззавкиив 10-недельного специфического патогена свободной leghorn курица, настроить мониторы для жизненно важных измерений и начать вручную удаления перьев из живота нежной тяги.Затем скраб хирургического сайта с помощью хлоргексидина глюконат с мягкой щеткой щетины. Аккуратно скраб кожи от центра до периферии в течение пяти минут без обращения курса. Затем выполните три чередующихся прохода на хирургическом участке с глюконатным раствором хлоргексидина и изопропиловым спиртом с использованием стерильных марлей.Опять же, перейдите из центра на периферию, а затем, драпировка курица. Начните с открытия драпировки над хирургическим участком, затем сделайте L-образный разрез кожи средней линии с скальпелем номер три, начиная один сантиметр прижиматься к грудине, и заканчивая одним сантиметром черепа к клоиче. Далее, продолжить L-образный разрез перпендикулярно первому, делая второй разрез, начиная с обниматься конце первого разреза и продолжать пять сантиметров в левую сторону живота, следуя линии таза.Это отверстие позволит легко экстракции кишечника. Затем откройте брюшной полости и брюшной мышцы, используя тот же L-образный узор для доступа к брюшной полости. Воздушные мешки теперь будут подвергаться воздействию и должны быть влажными с использованием солевой пропитанной марли.Затем вставьте крючок Snook spay в брюшную полость, следуя за левой брюшной стенкой и работая крючком вокруг брюшных воздушных мешков для извлечения кишечника. Затем, используя сухую марлю, продолжайте мягко экстерьеризации кишечника подвергать Jejunum. Распространение кишечника и держать их влажными с частым распыления с солевым раствором и, покрывая их солевой пропитанной марлей.Важно быть очень мягким при выемки кишечника, потому что чрезмерное напряжение может разорвать мезентерических сосудов, которые могут привести к кишечным ишемических поражений и значительно поставить под угрозу исход процедуры. После экстерьеризации кишечника, сделать серию петель в кишечнике, начиная с Jejunum. Каждая петля может быть использована для различного лечения.В проксимальной Jejunum, место простой лигатуры с полиглутамин Multifilament синтетического абсорбируемого материала, избегая при этом лигатуры основных мезентерических сосудов. Затем поместите дистальную лигатуру в двух сантиметрах от проксимальной лигатуры, чтобы завершить первый цикл. Все проксимальные и дистальные лигатуры должны быть размыты примерно на два сантиметра.Каждая пара лигатур составляет петлю, которая является герметичным сегментом. Затем создайте интерлуп или сегмент кишечника между петлями. Поместите простую лигатуру на пол-сантиметра к дистальной лигатуре первого цикла.Эта лигатура находится в середине интерлупа и уменьшит возможное перекрестное загрязнение между петлями. Теперь, продолжить шаблон создания еще один цикл пол-сантиметра aborely от интерлуп лигатуры. Здесь создаются девять петель и восемь интерлуп, покрывающих 26 сантиметров кишечника.Количество петель можно регулировать по мере необходимости. Далее, приступить к инъекционным штаммом Clostridium perfringens в петли. В анти-мезентерической стороне петли, используйте 26 калибровочных иглы под углом 45 градусов, чтобы придать 0,2 миллилитров раствора BHI, содержащий один миллион колоний формирования единиц бактерий в фазе роста midlog.В этой ситуации, с девятью петлями, пять различных штаммов вводятся в чередующиеся петли с промежуточными петлями, введенными с транспортным средством в одиночку в качестве отрицательного контроля. После введения патогенных микроорганизмов, аккуратно замените желудочно-кишечный тракт на спинную область брюшной полости под воздушными мешками. Затем закройте брюшную полость.Шов брюшной политонея и брюшной мышцы вдоль таза с простой непрерывной шовной картины с использованием полиглутамина Multifilament синтетический абсорбируемый материал. Продолжить, зашив брюшной полости и брюшной мышцы от грудины до cloiche с помощью простых непрерывных швов. Далее, шов кожи близко с помощью полиглутамина Multifilament синтетический материал и простой непрерывный узор.Сначала шов вдоль таза, затем шов от грудины до клоиша. После закрытия разрезов, держать курицу под общим наркозом при правильном использовании анальгетиков, чтобы свести к минимуму боль животных во время инфекции. Продолжить анестезиологический мониторинг, чтобы обеспечить адекватный уровень анестезии.После желаемого количества инфекционного времени, например, семи часов в настоящем эксперименте, усылайте птицу и соберите кишечные ткани. Используя скальпель номер три, вырежьте секцию петли от половины до одного сантиметра. Затем перенесите секцию на 10% Формалина для ночной фиксации и дальнейшего гистопатологического анализа.Затем используйте тот же лезвие скальпеля на той же петле, чтобы вырезать оставшуюся часть петли и перенести эту ткань в микросовеленную трубку для изоляции бактерий. Повторяйте эту процедуру для каждого цикла, используя новое лезвие скальпеля каждый раз. Через семь часов после инъекции кишечная петля, вводимая контрольно-стерильной средой, имеет нетронутую слизистую щетку без некроза.Мягкие заторы в кишечных слоях сегментов не редкость. Через семь часов после инъекции с патогеном, Clostridium perfringens, вилли советы размываются с некротических входных участков, окружающих советы. А потом некротический материал, окружающий вилли, есть скопления крупных бактерий в форме стержня.Иногда некроз из-за плохого процедурного исполнения и может быть неправильно истолкован как поражения, производимые бактериями. Явным признаком является отсутствие бактерий в гистологическом разделе. Кроме того, кровеносные сосуды в мышечном слое сильно расширены накоплением многих вырождающихся эритроцитов, указывающих на сосудистые заторы.Это было вызвано лигатированных мезентерических кровеносных сосудов, которые, вероятно, были лигатированы, чтобы сделать чрезмерную физическую нагрузку на кишечник. Ишемические петли можно легко определить микроскопически во время хирургических процедур. После тяжелых сосудистых заторов через несколько минут после лигатуры, сероза будет темно-синий вместо его нормальной розовой красноватой окраски.После просмотра этого видео, вы должны иметь хорошее понимание того, как создать несколько кишечных петель в модели курицы, поместив лигатуры на кишечнике. После освоения хирургических процедур, за исключением времени инфекции, может быть сделано менее чем за три часа, если она выполняется должным образом. При попытке этой процедуры, важно помнить, чтобы держать курицу под глубокой анестезией, чтобы контролировать боль и контролировать жизненно важные признаки во время всех процедур, в том числе хирургической части и после инфекции времени.После этой процедуры или их методы, такие как бактериальная изоляция, и прямой идентификации, такие как обнаружение генов ПЦР может быть выполнена для того, чтобы ответить на внешние вопросы, такие как восстановление и идентификация первоначального вводили патогена. После этого развития, этот метод проложил путь для исследователей в области Clostridium perfringens патогенеза для изучения некротического энтерита у кур. Не забывайте, что работа с живыми животными может быть чрезвычайно переменной.И меры предосторожности, такие как непрерывный анестетический мониторинг курицы всегда должно быть сделано при выполнении этой процедуры.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Биомаркеры в животной модели для выявления нервных, гематологических, и поведенческие корреляты посттравматического стрессового расстройства

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

Функциональная оценка моторики кишечника и воспаление стенки кишечника у грызунов: Анализы в стандартной модели Кишечные Манипуляции

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

Человек<em&gt; Экс Vivo</em&gt; Атеросклеротической бляшки моделью для изучения поражения Биология

Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease of the vasculature. There are various methods to study the inflammatory compound in atherosclerotic ...

Facial Nerve Axotomy in Mice: A Model to Study Motoneuron Response to Injury

Лицевого нерва аксотомии у мышей: модель для изучения двигательных нейронов ответ на повреждение

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Мышиной модели кишечная ишемия-реперфузии

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

Жила интерпозиция Модель: A Подходит модель для изучения шунтирование проходимость

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

A Model of Free Tissue Transfer: The Rat Epigastric Free Flap

Модель свободной ткани Transfer: The Rat эпигастрии Free закрылков

Free tissue transfer has been increasingly used in clinical practice since the 1970s, allowing reconstruction of complex and otherwise untreatable defects ...

Intestinal Stem Cell Isolation and Culture in a Porcine Model of Segmental Small Intestinal Ischemia

Стволовых клеток кишечника изоляции и культуры в свинину модели сегментарный малого кишечника ишемии

Intestinal ischemia remains a major cause of morbidity and mortality in human and veterinary patients. Many disease processes result in intestinal ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Изометрические сократимости измерение верхней брыжеечной артерии мыши, с помощью проволоки миография

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

Криотравма модель для изучения инфаркта миокарда в мыши

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we ...