Name: a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence
Uploaded: 2018-10-11T12:30:00
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Este trabajo fue financiado por la Cátedra de investigación de aves de corral (M. Boulianne) de la Facultad de medicina veterinaria de la Université de Montréal. Padres y los doctores Boulianne desarrollaron el modelo. Drs. Boulianne y padres realizaron las cirugías. El Dr. Burns ayudó a desarrollar el protocolo de anestesia. Dr. Parent había editado el video y escribió el manuscrito. DRS de Burns, Desrochers y Boulianne editan el manuscrito.

Todos los procedimientos con el uso de animales vivo fueron autorizados por el Comité de ética de la Facultad de medicina veterinaria de la Université de Montréal (CÉUA, 'Comité d' éthique de Deutsch des Animaux').
1. consideraciones antes de la cirugía
<ol><li>Seleccionar pollos de Livorno (SPF) libres de 10 semanas de edad de patógenos específicos para la cirugía. Nota: Su peso debe estar entre 1.0 y 1.2 kg.</li>
	<li>Retirar la alimentación 12 horas antes de los procedimien...

<ol>
	<li>Vitale, A., Chiarotti, F., Alleva, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+animal+models+in+disease+research.">The use of animal models in disease research.</a> Rare diseases and orphan drugs. 2 (1), 1-4 (2015).</li><li>Uzal, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+to+study+the+pathogenesis+of+human+and+animal+Clostridium+perfringens+infections.">Animal models to study the pathogenesis of human and animal Clostridium perfringens infections.</a> Veterinary Microbiology. , (2015).</li><li>Bernier, G., Phaneuf, J. 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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NetB,+a+new+toxin+that+is+associated+with+avian+necrotic+enteritis+caused+by+Clostridium+perfringens.">NetB, a new toxin that is associated with avian necrotic enteritis caused by Clostridium perfringens.</a> PLoS Pathog. 4 (2), e26 (2008).</li><li>Timbermont, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+of+Clostridium+perfringens+isolates+determines+the+ability+to+induce+necrotic+enteritis+in+broilers.">Origin of Clostridium perfringens isolates determines the ability to induce necrotic enteritis in broilers.</a> Comp Immunol Microbiol Infect Dis. 32 (6), 503-512 (2009).</li><li>Paradis, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+avilamycin+for+the+prevention+of+necrotic+enteritis+caused+by+a+pathogenic+strain+of+Clostridium+perfringens+in+broiler+chickens.">Efficacy of avilamycin for the prevention of necrotic enteritis caused by a pathogenic strain of Clostridium perfringens in broiler chickens.</a> Avian Pathol. 45 (3), 365-369 (2016).</li><li>Valgaeren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lesion+development+in+a+new+intestinal+loop+model+indicates+the+involvement+of+a+shared+Clostridium+perfringens+virulence+factor+in+haemorrhagic+enteritis+in+calves.">Lesion development in a new intestinal loop model indicates the involvement of a shared Clostridium perfringens virulence factor in haemorrhagic enteritis in calves.</a> Journal of Comparative Pathology. 149 (1), 103-112 (2013).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+C-terminal+domain+of+Clostridium+perfringens+alpha+toxin+as+a+vaccine+candidate+against+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">The C-terminal domain of Clostridium perfringens alpha toxin as a vaccine candidate against bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> Vet Res. 47 (1), 52 (2016).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxin-neutralizing+antibodies+protect+against+Clostridium+perfringens-induced+necrosis+in+an+intestinal+loop+model+for+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">Toxin-neutralizing antibodies protect against Clostridium perfringens-induced necrosis in an intestinal loop model for bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> BMC Vet Res. 12 (1), 101 (2016).</li><li>Parent, E., Archambault, M., Charlebois, A., Bernier-Lachance, J., Boulianne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chicken+intestinal+ligated+loop+model+to+study+the+virulence+of+Clostridium+perfringens+isolates+recovered+from+antibiotic-free+chicken+flocks.">A chicken intestinal ligated loop model to study the virulence of Clostridium perfringens isolates recovered from antibiotic-free chicken flocks.</a> Avian Pathol. 46 (2), 138-149 (2017).</li><li>Janvilisri, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+differential+proteomes+of+Clostridium+difficile+in+the+pig+ileal-ligated+loop+model.">Temporal differential proteomes of Clostridium difficile in the pig ileal-ligated loop model.</a> PLoS One. 7 (9), e45608 (2012).</li><li>Aabo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+in+vivo+model+for+study+of+intestinal+invasion+by+Salmonella+enterica+in+chickens.">Development of an in vivo model for study of intestinal invasion by Salmonella enterica in chickens.</a> Infection and Immunity. 68 (12), 7122-7125 (2000).</li><li>Meurens, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+immune+response+following+Salmonella+enterica+subspecies+enterica+serovar+Typhimurium+infection+in+porcine+jejunal+gut+loops.">Early immune response following Salmonella enterica subspecies enterica serovar Typhimurium infection in porcine jejunal gut loops.</a> Vet Res. 40 (1), 5 (2009).</li><li>Gerdts, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+intestinal+'loops'+provide+an+in+vivo+model+to+analyse+multiple+mucosal+immune+responses.">Multiple intestinal 'loops' provide an in vivo model to analyse multiple mucosal immune responses.</a> J Immunol Methods. 256 (1-2), 19-33 (2001).</li><li>Wade, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adherent+abilities+of+Clostridium+perfringens+strains+are+critical+for+the+pathogenesis+of+avian+necrotic+enteritis.">The adherent abilities of Clostridium perfringens strains are critical for the pathogenesis of avian necrotic enteritis.</a> Vet Microbiol. 197, 53-61 (2016).</li><li>Cooper, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+for+chickens+of+Clostridium+perfringens+isolated+from+poultry+and+other+sources.">Virulence for chickens of Clostridium perfringens isolated from poultry and other sources.</a> Anaerobe. 16 (3), 289-292 (2010).</li><li>Cooper, K. K., Songer, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+of+Clostridium+perfringens+in+an+experimental+model+of+poultry+necrotic+enteritis.">Virulence of Clostridium perfringens in an experimental model of poultry necrotic enteritis.</a> Veterinary Microbiology. 142 (3-4), 323-328 (2010).</li><li>Chalmers, G., Bruce, H. L., Toole, D. L., Barnum, D. A., Boerlin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+potential+in+a+model+system+using+Clostridium+perfringens+isolated+from+field+outbreaks.">Necrotic enteritis potential in a model system using Clostridium perfringens isolated from field outbreaks.</a> Avian Diseases. 51 (4), 834-839 (2007).</li></ol>

Modelos de asas intestinales se han descrito en numerosas especies para estudiar la interacción huésped-patógeno y patogenia de las enfermedades causadas por varios patógenos intestinales, como Clostridium perfringens, Clostridium difficile y Enterica de las salmonelas7,9,13,14,15. También se ha utilizado para analizar la respue...

El uso de modelos animales para estudiar enfermedades infecciosas que afectan a los seres humanos y animales es una herramienta central en la evaluación de factores de virulencia, regulación de la patogenia de una enfermedad específica, así como a elaborar estrategias para prevenir o curar enfermedades1. A pesar de numerosas ventajas de la utilización de modelos animales para estudiar diversas enfermedades, han surgido preocupaciones éticas con respecto a esta práctica. Los investigadores deben minimizar el uso de animales y obtención de resultados significativos y válidos. El concepto de los 3 principios de Rs (reemplazar, reducir y refinar) fue elaborado para asegurar que en dichos estudios se abordaron temas de bienestar. En estudios de NE de pollo, en vivo pollo modelos se utilizan para investigar la etiología, prevención y tratamientos de esta condición2,3,4,5. Las cepas patógenas de C. perfringens que llevan factores de virulencia específicos, tales como la RedB toxina6, son administradas para causar enteritis necrótica en pollos7. Por lo tanto, el principio de sustitución es difícil de lograr en este caso como estos factores de virulencia pueden no ser tan críticos en otras especies animales. Mayoría de los modelos de enteritis necrótica en los pollos utiliza una combinación de factores de riesgo, tales como coccidiosis y alterado dieta para inducir enteritis necrótica seguida por sonda nasogástrica del caldo de cultivo que contienen grandes cantidades de C. perfringens2. Estos modelos inducirán la enfermedad en un gran número de pollos, y la mortalidad puede ser importante en estos ensayos8, así levantando preocupaciones acerca de los principios de reducción y refinamiento en la investigación animal.
Modelos de lazos ligados intestinal son una alternativa deseable para el estudio de enfermedades inducidas por patógenos intestinales en relación con el principio de reducción y refinamiento. En estos modelos, se crean segmentos de intestino llamados 'loops' mediante la colocación de ligaduras a lo largo del tracto intestinal para formar compartimentos independientes y herméticos donde patógenos pueden inyectar solo9 o con otras moléculas, tales como candidatos vacunales 10 , 11. los patógenos de interés estén en estrecho contacto con las células intestinales y que después de algunas horas de tiempo de infección, las muestras intestinales pueden ser recuperadas para su posterior análisis. Esto permite el uso de múltiples grupos de control y tratamiento en el mismo animal. Análisis estadístico puede realizarse con modelos de medidas repetidas, que aumenta el poder de discriminación entre grupos y reduce el número de gallinas necesarios en comparación con los ensayos orales gavage. También, procedimientos quirúrgicos y los tiempos de infección subsecuente se realizan bajo anestesia general continua y analgesia, por lo tanto, reducir al mínimo el dolor animal. Trompas de lazo cerrado están una plantilla ideal para reducir el número de host y crear un sistema más humano en la investigación animal.
Modelos de lazos ligados intestinal son bien descritos en varias especies, tales como terneros, conejos y ratones2,9, pero mal descritos en pollos7. Para un uso óptimo de este modelo quirúrgico, ejecución y la técnica adecuada son esenciales para la creación de bucles intestinales ligados para evitar daños a la integridad intestinal. El objetivo de este manuscrito es describir un método paso a paso en la creación de múltiples asas intestinales en un modelo de pollo. Esta técnica está limitada por la habilidad del cirujano y la experiencia, como procedimientos precisos son esenciales para el éxito del proyecto.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>EZ-Scrub 747</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td></td>
			<td>4% chlorhexidine gluconate detergent impregnated sterile brush. No catalog number available. Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/infection-prevention/surgical-hand-scrubs/ez-scrub-preoperative-surgical-scrub-brushes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl alcohol 70% USP 4 L</td>
			<td>Commercial isopropyl alcohol</td>
			<td>P016IP70</td>
			<td>Web address: http://www.comalc.com/products/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorexidine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>282227-1G</td>
			<td>Chlorhexidine gluconate solution, must be diluted to 4%. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/282227?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI8vHr4_OY1wIV3rrACh2ZWQKuEAAYAiAAEgLKx_D_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Drape Small (27 inch x 24 inch) with 3 x 6 inch Fenestration</td>
			<td>Veterinary Specialty Products</td>
			<td>32724</td>
			<td>Web address: http://www.vetspecialtyproducts.com/index.cfm?fuseaction=ecommercecatalog.detail&#38;productgroup_id=15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades #3</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>301</td>
			<td>Web address: https://www.swann-morton.com/product/16.php</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline NaCl 0.9%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8776-100ML</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8776?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl 3-0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>D9003</td>
			<td>Polyglactin multifilament absorbable suture material. Web address: http://www.ethicon.com/healthcare-professionals/products/wound-closure/absorbable-sutures/coated-vicryl-polyglactin-910-suture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1 ml with 26G needle</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td>329652</td>
			<td>Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/diabetes-care/insulin-syringes/bd-1-ml-conventional-insulin-syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Heart Infusion</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>1104930500</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/110493?lang=fr&#38;region=CA&#38;cm_sp=Insite-_-prodRecCold_xorders-_-prodRecCold2-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tube</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9661-500EA</td>
			<td>Microcentrifuge tube. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t9661?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI-YizzfiY1wIVRkCGCh30SQjuEAAYAiAAEgLK5fD_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, buffered neutral, 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td>Ratio tissue : formalin of 1: 10 for adequate fixation. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht501128?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clostridium perfringens strains</td>
			<td>Universit&#233; de Montr&#233;al, Chaire en recherche avicole</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Specific to each laboratory, available upon request to correspondant author</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence

Enteritis necrótica fue estudiada en pollos utilizando varios en vivo modelos de infección. La mayoría de éstos utiliza una combinación de factores predisponentes, tales como coccidiosis y dieta, con sonda nasogástrica o administración a través de la alimentación usando Clostridium perfringens. En estos modelos, la comparación de múltiples cepas de C. perfringens para estudios de virulencia requiere un gran número de hosts para obtener resultados significativos. Durante el curso del estudio de la mortalidad puede ser alta dependiendo del modelo experimental, por lo tanto, levantando preocupaciones éticas sobre el bienestar de los animales en la investigación. El desarrollo de nuevos modelos de infección que requieran menos animales para estudiar la patogenesia, pero proporciona resultados válidos y estadísticamente significativos, es importante en la reducción del uso de animales en investigación. Modelos de asa intestinal ligados se han utilizado para estudiar las infecciones clostridiales en diversas especies como ratones, conejos y terneros. Después de procedimientos quirúrgicos para crear segmentos ligados lazo, cepas de C. perfringens se inyectan directamente en los lazos para establecer un contacto cercano entre las bacterias y la mucosa intestinal. Se toman muestras de intestino delgado y contenido luminal en la terminación de los procedimientos después de unas horas. Múltiples cepas bacterianas pueden ser inoculadas en cada animal, por lo tanto reduciendo el número de sujetos necesarios en los experimentos. También, los procedimientos se realizan bajo anestesia general para reducir el dolor animal. En los pollos, este modelo sería más adecuado que la administración oral para comparar la patogenicidad de C. perfringens cepa porque se necesitan menos animales, factores predisponentes no deben inducir a la enfermedad y dolor se controla con analgésicos . El modelo de asa intestinal ligados está pobremente descrito en pollos y estandarización es esencial para su uso óptimo. Este manuscrito ofrece todos los pasos necesarios para crear numerosos bucles ligados intestinales en pollos y aporta información sobre los puntos críticos para obtener resultados válidos.

Figura 1muestra un esquema de las asas intestinales 9 y 8 interloops. En este modelo, se crean un total de 9 circuitos y 8 interloops con ligaduras simples. Un bucle consiste en ligaduras proximales y distales, separadas por 2 cm de la ligadura proximal. Dos bucles adyacentes están separados por un interloop de 1 cm. Para disminuir el posible riesgo de contaminación cruzada entre bucles por la fuga de una ligadura, una ligadura interloop se coloca a medio c...

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A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Aquí presentamos un protocolo quirúrgico crear «loops ligados intestinales» en intestino de pollo. Este procedimiento permite la comparación de virulencia en situ en un único host de varias cepas de Clostridium perfringens . Este método disminuye marcadamente el número de pollos generalmente necesarios para experimentos similares en vivo .

Un modelo de asa Intestinal ligados en pollos libre anestesiados patógenos específicos para el estudio de virulencia de Clostridium Perfringens

Necrotic enteritis was studied in chickens using various in vivo infection models. Most of these use a combination of predisposing factors, such as ...

Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la investigación de la enteritis necrótica de pollo. Como comparar la virulencia de cepas específicas de Clostridium perfringens que causan esta enfermedad. La principal ventaja de esta técnica es que reduce notablemente el número de pollos generalmente necesarios para experimentos ambivore similares.Si bien este método puede proporcionar información sobre el potencial de virulencia de las cepas de Clostridium perfringens, también se puede aplicar a otros patógenos intestinales como Clostridium difficile, o Salmonella enterica. Generalmente, los individuos nuevos en este método lucharán porque los procedimientos quirúrgicos necesitan entrenamiento específico y sólo deben ser realizados por aquellos que han adquirido habilidades como suturar, una técnica antes del experimento. Después de anestesiar un pollo sin piernas libre de patógenos de 10 semanas de edad, configure los monitores para mediciones vitales y comience a eliminar manualmente las plumas del abdomen mediante una tracción suave.A continuación, frote el sitio quirúrgico usando gluconato de clorhexidina con un cepillo de cerdas suaves. Frote suavemente la piel desde el centro hasta la periferia durante cinco minutos sin invertir el curso. A continuación, realice tres pasajes alternos en el sitio quirúrgico con solución de gluconato de clorhexidina y alcohol isopropílico utilizando gasas estériles.Una vez más, ir desde el centro a la periferia, a continuación, cubrir el pollo. Comience abriendo la cortina por encima del sitio quirúrgico, luego haga una incisión de piel de línea media baja en forma de L con un bisturí número tres, comenzando un centímetro de abrazo al esternón, y terminando en un centímetro craneal a la cloicha. A continuación, continúe la incisión en forma de L perpendicular a la primera haciendo una segunda incisión comenzando en el extremo del abrazo de la primera incisión y continúe cinco centímetros al lado izquierdo del abdomen siguiendo la línea de la pelvis.Esta abertura permitirá una fácil extracción de los intestinos. A continuación, abra el peritoneo y los músculos abdominales utilizando el mismo patrón en forma de L para acceder a la cavidad abdominal. Los sacos de aire ahora estarán expuestos y deben mantenerse húmedos usando gasa empapada de solución salina.A continuación, inserta un gancho de snook en la cavidad abdominal siguiendo la pared abdominal izquierda y trabajando el gancho alrededor de los sacos de aire abdominal para extraer los intestinos. Luego, usando gasa seca, continúe exteriorizando suavemente los intestinos para exponer el Jejunum. Extiende los intestinos y mantenlos húmedos con una pulverización frecuente con Saline y cubriéndolos con gasa empapada de Saline.Es importante ser muy suave al sacar los intestinos porque la tensión excesiva puede romper los vasos mesentéricos que pueden conducir a lesiones isquémicas intestinales y comprometer en gran medida el resultado del procedimiento. Después de exteriorizar los intestinos, hacer una serie de bucles en los intestinos que comienzan en el Jejunum. Cada bucle se puede utilizar para diferentes tratamientos.En el Jejunum proximal, colocar una ligadura simple con un material absorbente sintético de poliglutamina multifilamento evitando la ligadura de los principales recipientes mesentéricos. A continuación, coloque una ligadura distal a dos centímetros de distancia de la ligadura proximal para completar el primer bucle. Todas las ligaduras proximales y distales deben estar espaciadas por unos dos centímetros.Cada par de ligaduras hace un bucle, que es un segmento hermético. A continuación, cree un interloop o un segmento de intestino entre los bucles. Coloque una ligadura simple de medio centímetro aboremente a la ligadura distal del primer bucle.Esta ligadura está en el centro del interloop y disminuirá la posible contaminación cruzada entre bucles. Ahora, continúe el patrón de crear otro bucle de medio centímetro aborra de la ligadura interloop. Aquí, se crean nueve bucles y ocho interloops que cubren 26 centímetros de intestino.El número de bucles se puede ajustar según sea necesario. A continuación, proceder con la inyección de cepa de Clostridium perfringens en los bucles. En el lado antimesentérico del bucle, utilice una aguja de calibre 26 en un ángulo de 45 grados para inyectar 0,2 mililitros de solución de BHI, que contiene un millón de unidades formadoras de colonias de bacterias en la fase de crecimiento del midlog.En esta situación, con nueve bucles, cinco cepas diferentes se inyectan en bucles alternos con los bucles intermedios inyectados con el vehículo solo como controles negativos. Después de inyectar los patógenos, reemplace suavemente el tracto intestinal a la zona dorsal de la cavidad abdominal debajo de los sacos de aire. Luego, cierra la cavidad abdominal.Suturar el peritoneo y los músculos abdominales a lo largo de la pelvis con un patrón de sutura continua simple utilizando un material absorbente sintético de poliglutamina multifilamento. Continúe suturando el peritoneo y los músculos abdominales desde el esternón hasta el cloiche utilizando suturas continuas simples. A continuación, suturar la piel cerca utilizando un material sintético Multifilamento de poliglutamina y un patrón continuo simple.Primero, sutura a lo largo de la pelvis, luego sutura desde el esternón hasta el cloiche. Después de cerrar las incisiones, mantenga el pollo bajo anestesia general con el uso adecuado de analgésicos para minimizar el dolor animal durante el tiempo de infección. Continúe la monitorización anestésica para garantizar un nivel adecuado de anestesia.Después de la cantidad deseada de tiempo de infección, como siete horas en el presente experimento, eutanasia el ave y recoger los tejidos intestinales. Usando un bisturí número tres, corte una sección de bucle de medio a centímetro. A continuación, transfiera la sección a 10%Formalin para la fijación durante la noche y análisis histopatológicos posteriores.Luego, usa la misma cuchilla de bisturí en el mismo lazo para cortar el resto del lazo y transferir ese tejido a un tubo microfundido para el aislamiento de las bacterias. Repita este procedimiento para cada bucle con una nueva cuchilla de bisturí cada vez. Siete horas después de la inyección, un lazo intestinal inyectado con un medio estéril de control tiene un borde de cepillo muesco intacto sin necrosis.La congestión leve en las capas intestinales de los segmentos no es infrecuente. Siete horas después de la inyección con el patógeno, Clostridium perfringens, las puntas de las vellosidades se erosionan con sitios de entrada necrótica que rodean las puntas. Y luego material necrótico que rodea las vellosidades, hay racimos de bacterias grandes en forma de varilla.A veces la necrosis se debe a una mala ejecución procesal y puede ser malinterpretada como lesiones producidas por bacterias. Un signo revelador es la ausencia de bacterias en la sección histológica. Además, los vasos sanguíneos de la capa muscular se dilatan gravemente por la acumulación de muchos eritrocitos degenerantes indicativos de congestión vascular.Esto fue causado por vasos sanguíneos mesentéricos ligados que probablemente fueron ligados para hacer tensión física excesiva en los intestinos. Los bucles isquémicos se pueden identificar fácilmente microscópicamente durante los procedimientos quirúrgicos. Después de la congestión vascular severa unos minutos después de la ligadura, la serosa será de color azul oscuro en lugar de su coloración rojiza rosa normal.Después de ver este video, usted debe tener una buena comprensión de cómo crear múltiples bucles intestinales en un modelo de pollo mediante la colocación de ligaduras en los intestinos. Una vez dominados los procedimientos quirúrgicos, excluyendo el tiempo de infección, se pueden hacer en menos de tres horas, si se realiza correctamente. Al intentar este procedimiento, es importante recordar mantener el pollo bajo anestesia profunda para controlar el dolor y controlar los signos vitales durante todos los procedimientos, incluyendo la parte quirúrgica y después del tiempo de infección.Siguiendo este procedimiento o sus métodos como el aislamiento bacteriano, y la identificación directa, como la detección de genes por PCR, se pueden realizar para responder a preguntas externas como la recuperación y la identificación del patógeno inyectado inicial. Después de este desarrollo, esta técnica allanó un camino para que los investigadores en el campo de la patogénesis Clostridium perfringens exploraran la Enteritis Necrótica en pollos. No olvides que trabajar con animales vivos puede ser extremadamente variable.Y las precauciones tales como el monitoreo anestésico continuo del pollo siempre deben hacerse durante el proceso de realización de este procedimiento.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Biomarcadores en un modelo animal para Revelar correlatos neurales, hematológicas y conductuales de estrés postraumático

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

Investigación

Medicina

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

Evaluación funcional de la motilidad intestinal y la inflamación de la pared intestinal en roedores: Análisis de un modelo estandarizado de manipulación intestinal

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

Un humano<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Placa aterosclerótica modelo para estudiar la lesión Biología

Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease of the vasculature. There are various methods to study the inflammatory compound in atherosclerotic ...

Facial Nerve Axotomy in Mice: A Model to Study Motoneuron Response to Injury

Axotomía nervio facial en ratones: un modelo para estudiar las motoneuronas respuesta a la lesión

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Modelo murino de isquemia-reperfusión intestinal Lesiones

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

La interposición de la vena del modelo: un modelo adecuado para estudiar la permeabilidad del injerto de bypass

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

A Model of Free Tissue Transfer: The Rat Epigastric Free Flap

Un modelo de transferencia de tejido libre: La rata epigástrica libre de la aleta

Free tissue transfer has been increasingly used in clinical practice since the 1970s, allowing reconstruction of complex and otherwise untreatable defects ...

Intestinal Stem Cell Isolation and Culture in a Porcine Model of Segmental Small Intestinal Ischemia

Aislamiento de células madre intestinales y de la cultura en un modelo porcino de isquemia Intestinal pequeño segmentaria

Intestinal ischemia remains a major cause of morbidity and mortality in human and veterinary patients. Many disease processes result in intestinal ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Medición de la contractilidad isométrica de la arteria mesentérica de ratón con cable miografía

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

Un modelo de criolesiones para estudiar el infarto de miocardio en el ratón

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we ...