Name: a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence
Uploaded: 2018-10-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence at JoVE.com

Detta arbete stöds av stolen i fjäderfä forskning (M. Boulianne) från den veterinärmedicinska fakulteten av den Université de Montréal. DRS. Boulianne och förälder utvecklat modellen. DRS. Boulianne och förälder utförs operationerna. Dr. Burns hjälp utveckla protokollet anestesi. Dr. Parent redigerade videon och skrev manuskriptet. DRS Burns, Desrochers och Boulianne redigerade manuskriptet.

Alla förfaranden med användning av levande djur var godkänts av den etiska kommittén av den veterinärmedicinska fakulteten, Université de Montréal (CÉUA, 'Comité d' éthique de l'utilisation des Animaux').
1. överväganden före operation
<ol><li>Välj 10 veckor gamla specifika patogener gratis (SPF) leghorn höns för operationen. Obs: Sin vikt måste vara mellan 1,0 och 1,2 kg.</li>
	<li>Återkalla foder 12 h innan förfarandena för att tömma tarmen.</li>
	<li>Före operatio...

<ol>
	<li>Vitale, A., Chiarotti, F., Alleva, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+animal+models+in+disease+research.">The use of animal models in disease research.</a> Rare diseases and orphan drugs. 2 (1), 1-4 (2015).</li><li>Uzal, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+to+study+the+pathogenesis+of+human+and+animal+Clostridium+perfringens+infections.">Animal models to study the pathogenesis of human and animal Clostridium perfringens infections.</a> Veterinary Microbiology. , (2015).</li><li>Bernier, G., Phaneuf, J. B., Filion, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+in+broiler+chickens.+III.+Study+of+the+factors+favoring+the+multiplication+of+Clostridium+perfringens+and+the+experimental+transmission+of+the+disease.">Necrotic enteritis in broiler chickens. III. Study of the factors favoring the multiplication of Clostridium perfringens and the experimental transmission of the disease.</a> Canadian Journal of Comparative Medicine. 41 (1), 112-116 (1977).</li><li>Al-Sheikhly, F., Truscott, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathology+of+necrotic+enteritis+of+chickens+following+infusion+of+broth+cultures+of+Clostridium+perfringens+into+the+duodenum.">The pathology of necrotic enteritis of chickens following infusion of broth cultures of Clostridium perfringens into the duodenum.</a> Avian Diseases. 21 (2), 230-240 (1977).</li><li>Wicker, D. L., Iscrigg, W. N., Trammell, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+control+and+prevention+of+necrotic+enteritis+in+broilers+with+zinc+bacitracin.">The control and prevention of necrotic enteritis in broilers with zinc bacitracin.</a> Poultry Science. 56 (4), 1229-1231 (1977).</li><li>Keyburn, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NetB,+a+new+toxin+that+is+associated+with+avian+necrotic+enteritis+caused+by+Clostridium+perfringens.">NetB, a new toxin that is associated with avian necrotic enteritis caused by Clostridium perfringens.</a> PLoS Pathog. 4 (2), e26 (2008).</li><li>Timbermont, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+of+Clostridium+perfringens+isolates+determines+the+ability+to+induce+necrotic+enteritis+in+broilers.">Origin of Clostridium perfringens isolates determines the ability to induce necrotic enteritis in broilers.</a> Comp Immunol Microbiol Infect Dis. 32 (6), 503-512 (2009).</li><li>Paradis, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+avilamycin+for+the+prevention+of+necrotic+enteritis+caused+by+a+pathogenic+strain+of+Clostridium+perfringens+in+broiler+chickens.">Efficacy of avilamycin for the prevention of necrotic enteritis caused by a pathogenic strain of Clostridium perfringens in broiler chickens.</a> Avian Pathol. 45 (3), 365-369 (2016).</li><li>Valgaeren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lesion+development+in+a+new+intestinal+loop+model+indicates+the+involvement+of+a+shared+Clostridium+perfringens+virulence+factor+in+haemorrhagic+enteritis+in+calves.">Lesion development in a new intestinal loop model indicates the involvement of a shared Clostridium perfringens virulence factor in haemorrhagic enteritis in calves.</a> Journal of Comparative Pathology. 149 (1), 103-112 (2013).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+C-terminal+domain+of+Clostridium+perfringens+alpha+toxin+as+a+vaccine+candidate+against+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">The C-terminal domain of Clostridium perfringens alpha toxin as a vaccine candidate against bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> Vet Res. 47 (1), 52 (2016).</li><li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxin-neutralizing+antibodies+protect+against+Clostridium+perfringens-induced+necrosis+in+an+intestinal+loop+model+for+bovine+necrohemorrhagic+enteritis.">Toxin-neutralizing antibodies protect against Clostridium perfringens-induced necrosis in an intestinal loop model for bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> BMC Vet Res. 12 (1), 101 (2016).</li><li>Parent, E., Archambault, M., Charlebois, A., Bernier-Lachance, J., Boulianne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chicken+intestinal+ligated+loop+model+to+study+the+virulence+of+Clostridium+perfringens+isolates+recovered+from+antibiotic-free+chicken+flocks.">A chicken intestinal ligated loop model to study the virulence of Clostridium perfringens isolates recovered from antibiotic-free chicken flocks.</a> Avian Pathol. 46 (2), 138-149 (2017).</li><li>Janvilisri, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+differential+proteomes+of+Clostridium+difficile+in+the+pig+ileal-ligated+loop+model.">Temporal differential proteomes of Clostridium difficile in the pig ileal-ligated loop model.</a> PLoS One. 7 (9), e45608 (2012).</li><li>Aabo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+in+vivo+model+for+study+of+intestinal+invasion+by+Salmonella+enterica+in+chickens.">Development of an in vivo model for study of intestinal invasion by Salmonella enterica in chickens.</a> Infection and Immunity. 68 (12), 7122-7125 (2000).</li><li>Meurens, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+immune+response+following+Salmonella+enterica+subspecies+enterica+serovar+Typhimurium+infection+in+porcine+jejunal+gut+loops.">Early immune response following Salmonella enterica subspecies enterica serovar Typhimurium infection in porcine jejunal gut loops.</a> Vet Res. 40 (1), 5 (2009).</li><li>Gerdts, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+intestinal+'loops'+provide+an+in+vivo+model+to+analyse+multiple+mucosal+immune+responses.">Multiple intestinal 'loops' provide an in vivo model to analyse multiple mucosal immune responses.</a> J Immunol Methods. 256 (1-2), 19-33 (2001).</li><li>Wade, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adherent+abilities+of+Clostridium+perfringens+strains+are+critical+for+the+pathogenesis+of+avian+necrotic+enteritis.">The adherent abilities of Clostridium perfringens strains are critical for the pathogenesis of avian necrotic enteritis.</a> Vet Microbiol. 197, 53-61 (2016).</li><li>Cooper, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+for+chickens+of+Clostridium+perfringens+isolated+from+poultry+and+other+sources.">Virulence for chickens of Clostridium perfringens isolated from poultry and other sources.</a> Anaerobe. 16 (3), 289-292 (2010).</li><li>Cooper, K. K., Songer, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+of+Clostridium+perfringens+in+an+experimental+model+of+poultry+necrotic+enteritis.">Virulence of Clostridium perfringens in an experimental model of poultry necrotic enteritis.</a> Veterinary Microbiology. 142 (3-4), 323-328 (2010).</li><li>Chalmers, G., Bruce, H. L., Toole, D. L., Barnum, D. A., Boerlin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+enteritis+potential+in+a+model+system+using+Clostridium+perfringens+isolated+from+field+outbreaks.">Necrotic enteritis potential in a model system using Clostridium perfringens isolated from field outbreaks.</a> Avian Diseases. 51 (4), 834-839 (2007).</li></ol>

Intestinal loopar modeller har beskrivits i många arter att studera värd-patogen interaktion och patogenes av sjukdomar orsakade av olika intestinala patogener som Clostridium perfringens, Clostridium difficile och Salmonella enterica7,9,13,14,15. Det har också använts för att analysera de slemhinna immunsvar16...

Användning av djurmodeller studera smittsamma sjukdomar som drabbar människor och djur är ett centralt verktyg vid bedömningen av virulensfaktorer som reglerar patogenesen av ett visst villkor samt att utarbeta strategier för att förebygga eller bota sjukdomar1. Trots många fördelar att använda djurmodeller för att studera olika sjukdomar uppstår etiska betänkligheter angående denna praxis. Forskare behöver minimera användning av djur när du erhåller betydande och giltiga resultat. Begreppet 3 Rs principerna (Ersätt, minska och förfina) utarbetades för att säkerställa att välfärd frågor behandlades i sådana prövningar. I kyckling nekrotiserande enterit studier används i vivo kyckling modeller för att undersöka etiologi, förebyggande och behandling av detta tillstånd2,3,4,5. Patogena stammar av C. perfringens transporterar specifika virulensfaktorer, såsom den NetB toxin6, administreras för att orsaka nekrotiserande enterit i kycklingar7. Principen om ersättning är därför svårt att uppnå i sådana fall eftersom dessa virulensfaktorer inte kanske är lika kritisk hos andra djurarter. De flesta modeller för nekrotiserande enterit hos kycklingar använder en kombination av riskfaktorer, såsom koccidios och förändrad kost för att inducera nekrotiserande enterit följt av sondmatning av buljong kultur som innehåller ett stort antal C. perfringens2. Dessa modeller kommer att framkalla sjukdomen i ett stort antal kycklingar, och dödligheten kan vara viktigt i sådana prövningar8, vilket gör att farhågor om begränsning och förfining principerna i djurförsök.
Intestinal sammanskrivna loopar modeller är ett önskvärt alternativ för studier av sjukdomar orsakade av intestinal patogener med avseende på principen minskning, och förfining. I dessa modeller skapas intestinal segment kallas 'öglor' genom att placera ligaturer längs tarmkanalen att bilda oberoende och hermetiska fack där patogener kan injiceras ensam9 eller med andra molekyler, såsom vaccinkandidater 10 , 11. patogenerna av intresse är placerade i nära kontakt med de intestinala cellerna och efter några timmar av infektion tid, intestinal prover kan återvinnas för vidare analys. Detta tillåter användning av flera behandling och kontrollgrupper på samma djur. Statistisk analys kan utföras med upprepade mätningar modeller, vilket ökar kraften av diskriminering mellan grupper och minskar antalet nödvändiga kycklingar jämfört med oral sondmatning prövningar. Även utförs kirurgiska ingrepp och efterföljande infektion gånger under kontinuerlig generell anestesi och analgesi, därmed minimera djurens smärta. Slutna nering är en idealisk mall för att minska värd nummer och skapa ett mer humant system i djurförsök.
Intestinal sammanskrivna loopar modeller är väl beskrivna i olika arter, såsom kalvar, kaniner och möss2,9, men dåligt beskrivs i kycklingar7. För en optimal användning av denna kirurgiska modell är rätt teknik och genomförande avgörande för skapandet av sammanskrivna intestinal slingor för att undvika skador på tarmen integritet. Målet med detta manuskript är att beskriva en steg för steg metod i skapandet av flera tarm loopar i en kyckling-modell. Denna teknik är begränsad av kirurgens skicklighet och erfarenhet, eftersom korrekt förfaranden är viktiga för framgången av projektet.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>EZ-Scrub 747</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td></td>
			<td>4% chlorhexidine gluconate detergent impregnated sterile brush. No catalog number available. Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/infection-prevention/surgical-hand-scrubs/ez-scrub-preoperative-surgical-scrub-brushes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl alcohol 70% USP 4 L</td>
			<td>Commercial isopropyl alcohol</td>
			<td>P016IP70</td>
			<td>Web address: http://www.comalc.com/products/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorexidine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>282227-1G</td>
			<td>Chlorhexidine gluconate solution, must be diluted to 4%. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/282227?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI8vHr4_OY1wIV3rrACh2ZWQKuEAAYAiAAEgLKx_D_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Drape Small (27 inch x 24 inch) with 3 x 6 inch Fenestration</td>
			<td>Veterinary Specialty Products</td>
			<td>32724</td>
			<td>Web address: http://www.vetspecialtyproducts.com/index.cfm?fuseaction=ecommercecatalog.detail&#38;productgroup_id=15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades #3</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>301</td>
			<td>Web address: https://www.swann-morton.com/product/16.php</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline NaCl 0.9%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8776-100ML</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8776?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl 3-0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>D9003</td>
			<td>Polyglactin multifilament absorbable suture material. Web address: http://www.ethicon.com/healthcare-professionals/products/wound-closure/absorbable-sutures/coated-vicryl-polyglactin-910-suture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1 ml with 26G needle</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td>329652</td>
			<td>Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/diabetes-care/insulin-syringes/bd-1-ml-conventional-insulin-syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Heart Infusion</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>1104930500</td>
			<td>Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/110493?lang=fr&#38;region=CA&#38;cm_sp=Insite-_-prodRecCold_xorders-_-prodRecCold2-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tube</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9661-500EA</td>
			<td>Microcentrifuge tube. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t9661?lang=fr&#38;region=CA&#38;gclid=EAIaIQobChMI-YizzfiY1wIVRkCGCh30SQjuEAAYAiAAEgLK5fD_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, buffered neutral, 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td>Ratio tissue : formalin of 1: 10 for adequate fixation. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht501128?lang=fr&#38;region=CA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clostridium perfringens strains</td>
			<td>Universit&#233; de Montr&#233;al, Chaire en recherche avicole</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Specific to each laboratory, available upon request to correspondant author</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a ligated intestinal loop model in anesthetized specific pathogen free chickens to study clostridium perfringens virulence

Nekrotiserande enterit studerades hos kycklingar som använder olika i vivo infektion modeller. De flesta av dessa använder en kombination av predisponerande faktorer, såsom koccidios och kost, med sondmatning eller administration via fodret med Clostridium perfringens. I dessa modeller kräver jämförelse av flera C. perfringens stammar för virulens studier ett stort antal värdar att uppnå betydande resultat. Dödlighet under loppet av studien kan vara hög beroende på experimentell modell, därmed höja etiska betänkligheter angående djurskydd i forskning. Utvecklingen av nya infektion modeller som kräver färre djur att studera patogenes, som ännu ger statistiskt signifikant och giltiga resultat, är viktigt att minska användning av djur i forskning. Intestinal sammanskrivna loop modeller har använts för att studera clostridier infektioner hos olika arter såsom möss, kaniner och kalvar. Efter kirurgiska ingrepp för att skapa sammanskrivna loop segment, C. perfringens stammar injiceras direkt i slingorna att etablera en nära kontakt mellan bakterierna och tarmslemhinnan. Prover av tunntarmen och luminala innehållet tas vid avslutande av förfarandena efter några timmar. Flera bakteriestammar kan ympas i varje djur, därmed minska antalet nödvändiga försökspersoner i experimenten. Dessutom utförs procedurer under narkos att minska djurens smärta. Hos kycklingar, skulle denna modell vara mer lämpligt än oral tillförsel att jämföra C. perfringens stam patogenicitet eftersom färre djur behövs, ingen predisponerande faktorer krävs för att framkalla sjukdomen och smärta styrs av analgetika . Intestinal sammanskrivna loop modellen är dåligt beskrivna i kycklingar och standardisering är nödvändig för dess optimal användning. Detta manuskript innehåller alla nödvändiga steg för att skapa många intestinal ligated slingor i kycklingar och ger information om de kritiska punkterna att erhålla giltiga resultat.

En schematisk bild av de 9 intestinal slingorna och 8 interloops visas i figur 1. I denna modell, totalt 9 slingor och 8 interloops skapas med enkla ligaturer. En loop består av proximala och distala ligaturer fördelade av 2 cm mätt från den proximala ligaturen. Två angränsande slingor separeras av en interloop 1 cm. För att minska risken för korskontaminering mellan loopar av läckage från en ligatur, placeras en interloop ligatur halvvägs från di...

Watch this Scientific Journal Video about A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence at JoVE.com

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Här presenterar vi ett protokoll för att kirurgiskt skapa 'intestinal sammanskrivna loopar' i kyckling tunntarmen. Detta förfarande möjliggör för jämförelse av flera Clostridium perfringens stammar virulens i situ i en enda värd. Denna metod minskar markant antalet kycklingar oftast nödvändigt för liknande i vivo experiment.

En sammanskrivna tarm Loop modell hos sövda specifik patogen fri kycklingar att studera Clostridium Perfringens virulens

Necrotic enteritis was studied in chickens using various in vivo infection models. Most of these use a combination of predisposing factors, such as ...

Denna metod kan hjälpa till att besvara viktiga frågor inom området Kyckling Necrotic Enteritis forskning. Såsom att jämföra virulensen av specifika Clostridium perfringens stammar som orsakar denna sjukdom. Den största fördelen med denna teknik är att det anmärkningsvärt minskar antalet kycklingar vanligtvis nödvändigt för liknande ambivore experiment.Medan denna metod kan ge insikt i virulens potential Clostridium perfringens stammar, Det kan också tillämpas på andra tarm patogener såsom Clostridium difficile, eller Salmonella enterica. Generellt, individer nya till denna metod kommer att kämpa eftersom kirurgiska ingrepp behöver särskild utbildning och skall endast utföras av dem som har förvärvat färdigheter såsom suturering, en teknik före experimentet. Efter anestesiering en 10 veckor gammal specifik patogen fri benhorn kyckling, ställa in monitorerna för vitala mätningar och börja manuellt ta bort fjädrarna från buken genom skonsam dragkraft.Därefter skrubba operationsstället med hjälp av Chlorhexidine glukonat med en mjuk borstborste. Skrubba försiktigt huden från centrum till periferin i fem minuter utan att vända kurs. Utför sedan tre alternerande passager på operationsstället med klorhexidinglukonatlösning och Isopropylalkohol med steril gasväv.Återigen, gå från centrum till periferin, sedan, drapera kycklingen. Börja med att öppna draperan ovanför operationsområdet, gör sedan ett L-format lågt mittlinjeskinn med ett nummer tre skalpell, börjar en centimeter mysa till bröstbenet, och slutar på en centimeter hjärnskålen till cloicha. Därefter fortsätter L-formad snitt vinkelrätt till den första genom att göra en andra snitt börjar vid gosa slutet av den första snitt och fortsätta fem centimeter till vänster sida av buken genom att följa bäckenet linjen.Denna öppning kommer att möjliggöra enkel utvinning av tarmarna. Därefter öppnar bukhinnan och magmusklerna med hjälp av samma L-formade mönster för att komma åt bukhålan. Luftsäckarna kommer nu att exponeras och måste hållas fuktiga med hjälp av saltlösning genomdränkt gasväv.Därefter sätter du in en Snook spay krok i bukhålan genom att följa den vänstra bukväggen och arbeta kroken runt buken luftsäckar för att extrahera tarmarna. Sedan, med hjälp av torr gasväv, fortsätt försiktigt exteriorizing tarmarna att exponera Jejunum. Sprid ut tarmarna och håll dem fuktiga med frekvent besprutning med Saline och genom att täcka dem med Saltlösning indränkt gasbinda.Det är viktigt att vara mycket skonsam samtidigt som man tar ut tarmar eftersom alltför stora spänningar kan brista de mesenteriala kärlen som kan leda till tarmen ischemisk skador och kraftigt äventyra resultatet av förfarandet. Efter exteriorizing tarmarna, gör en serie av slingor i tarmarna början i Jejunum. Varje slinga kan användas för olika behandling.I den proximala Jejunum, placera en enkel ligatur med en Polyglutamine Multifilament syntetiskt absorberbart material samtidigt som man undviker ligatur av stora mesenteri fartyg. Därefter placerar en distal ligatur två centimeter bort från den proximala ligaturen för att slutföra den första slingan. Alla proximala och distala ligaturer ska vara fördelade med cirka två centimeter.Varje par ligaturer gör en slinga, som är ett hermetiskt segment. Därefter skapar du en interloop eller ett segment av tarmen mellan slingorna. Placera en enkel ligatur en halv centimeter aborely till den distala ligaturen i den första slingan.Denna ligatur är i mitten av interloop och kommer att minska möjliga korskontaminering mellan slingor. Nu, fortsätta mönstret för att skapa en annan slinga en halv centimeter aborely från interloop ligatur. Här skapas nio slingor och åtta interloops som täcker 26 centimeter tarm.Antalet slingor kan justeras efter behov. Därefter fortsätter med att injicera stam av Clostridium perfringens i slingorna. In i den anti-mesenteria sidan av slingan, använd en 26 gauge nål i en 45 graders vinkel för att injicera 0,2 milliliter BHI-lösning, som innehåller en miljon kolonibildande enheter av bakterier i midlogtillväxtfasen.I denna situation, med nio slingor, injiceras fem olika stammar i alternerande slingor med de mellanliggande slingorna injicerade med enbart fordon som negativa kontroller. Efter att ha injicerat patogenerna, byt försiktigt ut tarmkanalen till dorsala området i bukhålan under luftsäckarna. Stäng sedan bukhålan.Suturera bukhinnan och magmusklerna längs bäckenet med ett enkelt kontinuerligt suturmönster med hjälp av ett Polyglutamine Multifilament syntetiskt resorberbart material. Fortsätt genom suturering av bukhinnan och magmusklerna från bröstbenet till cloiche med hjälp av enkla kontinuerlig suturer. Därefter suturera huden nära med hjälp av en Polyglutamine Multifilament syntetiskt material och ett enkelt kontinuerligt mönster.Först sutur längs bäckenet, sedan sutur från bröstbenet till cloiche. Efter stängning av snitten, hålla kycklingen under narkos med korrekt användning av smärtstillande medel för att minimera djursmärta under infektionstiden. Fortsätt anestesi övervakning för att säkerställa en adekvat anestesi nivå.Efter önskad mängd infektionstid, såsom sju timmar i det nuvarande experimentet, avliva fågeln och samla in tarmvävnaderna. Med hjälp av en nummer tre skalpell, skär ut en halv till en centimeter slinga avsnitt. Sedan överföra avsnittet till 10%Formalin för övernattning fixering och ytterligare histopatologisk analys.Använd sedan samma skalpellblad på samma slinga för att skära ut resten av slingan och överföra den vävnaden till ett mikrosmält rör för isolering av bakterierna. Upprepa denna procedur för varje slinga med hjälp av ett nytt skalpellblad varje gång. Sju timmar efter injektion, en intestinal slinga injiceras med en kontroll sterilt medium har en intakt slemhinnan pensel gränsen utan nekros.Mild trängsel i tarmskikten av segmenten är inte ovanligt. Sju timmar efter injektion med patogenen, Clostridium perfringens, villi tips urholkas med nekrotiska ingångsplatser kring tips. Och sedan nekrotiskt material som omger villi, det finns kluster av stora stavformade bakterier.Ibland nekros beror på dålig processuella utförande och kan misstolkas som skador som produceras av bakterier. En kontrollampa tecken är frånvaron av bakterier i den histologiska delen. Också, blodkärlen i det muskulösa lagret är allvarligt vidgade av ansamling av många degenererande erytrocyter som tyder på vaskulär trängsel.Detta orsakades av ligated mesenterial blodkärl som sannolikt var ligated att göra alltför fysisk påfrestning på tarmarna. Ischemiska loopar kan lätt identifieras mikroskopiskt under de kirurgiska ingreppen. Efter allvarliga vaskulär trängsel några minuter efter ligaturen, serosa kommer att vara mörkblå i stället för sin normala rosa rödaktiga färgning.Efter att ha sett den här videon, bör du ha en god förståelse för hur man skapar flera intestinala loopar i en kyckling modell genom att placera ligaturer på tarmarna. När behärskar de kirurgiska ingreppen, exklusive infektionstid, kan göras på mindre än tre timmar, om det utförs på rätt sätt. Samtidigt försöker detta förfarande, Det är viktigt att komma ihåg att hålla kycklingen under djup anestesi för att kontrollera smärtan och övervaka vitala tecken under alla förfaranden, inklusive kirurgiska delen och följande infektion tid.Efter detta förfarande eller deras metoder som bakteriell isolering, och rak identifiering såsom gendetektering av PCR kan utföras för att besvara externa frågor som återvinning och identifiering av den ursprungliga injicerade patogenen. Efter denna utveckling, denna teknik banade ett sätt för forskare inom området Clostridium perfringens patogenes att utforska Necrotic Enterit hos kycklingar. Glöm inte att arbeta med levande djur kan vara extremt varierande.Och försiktighetsåtgärder såsom kontinuerlig bedövningsmedel övervakning av kycklingen bör alltid göras när du utför detta förfarande.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Biomarkörer i en djurmodell för att avslöja Neurala, Hematologiska och Behavioral korrelat till PTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

Funktionell bedömning av intestinal motilitet och tarmväggen Inflammation i Gnagare: Analyser i en standardiserad modell av intestinal manipulation

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

En Människa<em&gt; Ex vivo</em&gt; Aterosklerotiska plack modell för att studera Lesion Biologi

Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease of the vasculature. There are various methods to study the inflammatory compound in atherosclerotic ...

Facial Nerve Axotomy in Mice: A Model to Study Motoneuron Response to Injury

Ansiktsnerven axotomy hos möss: En modell för att studera motoneuron svar på skada

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Murina Modell av Intestinal ischemi-reperfusionsskada

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

Ven mellan Modell: en lämplig modell för att studera bypass öppenhet

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

A Model of Free Tissue Transfer: The Rat Epigastric Free Flap

En modell av gratis Tissue Transfer: The Rat Epigastrisk Free Flap

Free tissue transfer has been increasingly used in clinical practice since the 1970s, allowing reconstruction of complex and otherwise untreatable defects ...

Intestinal Stem Cell Isolation and Culture in a Porcine Model of Segmental Small Intestinal Ischemia

Intestinal Stem Cell isolering och kultur i en svin modell av segmentell små Intestinal ischemi

Intestinal ischemia remains a major cause of morbidity and mortality in human and veterinary patients. Many disease processes result in intestinal ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Isometrisk kontraktilitet mätning av mus mesenterica artär med Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

En Kryoskademodell för att studera hjärtinfarkt i mus

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we ...