Name: three-dimensional organotypic cultures of vestibular and auditory sensory organs
Uploaded: 2018-06-01T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Three-dimensional Organotypic Cultures of Vestibular and Auditory Sensory Organs at JoVE.com

ونشكر الدكتور ألف جاكوبو وسالفي ج. د. بيتيلسكي أ لمساهماتها للبحث الأصلي الذي يستند إليه هذا البروتوكول. ونشكر أيضا ياء اللاما ووكر ماكمورا للمساعدة التقنية، وتربية الحيوانات. نعترف بمنحه التدريب NIDCD T32 DC009975، منح نيدكد R01DC015530، صندوق التنمية العلاجية روبرتسون، ومؤسسة عائلة كاروسو للتمويل. وأخيراً، نعترف بدعم من معهد هاوارد هيوز الطبي، الذي هو الدكتور هدزبيث محقق.

تمت الموافقة على جميع الأساليب الموصوفة هنا بالعناية بالحيوان واستخدام اللجان في جامعة روكفلر، ومن جامعة كاليفورنيا الجنوبية.
1-(اختياري) إعداد الكولاجين أنا الحل من الأوتار موسيتايل
ملاحظة: الكولاجين أنا الحلول متاحة تجارياً. اتبع إرشادات الشركة ا?...

<ol>
	<li>Oesterle, E. C., Tsue, T. T., Reh, T. A., Rubel, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair-cell+regeneration+in+organ+cultures+of+the+postnatal+chicken+inner+ear.">Hair-cell regeneration in organ cultures of the postnatal chicken inner ear.</a> Hear Res. 70 (1), 85-108 (1993).</li><li>Meyers, J. R., Corwin, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shape+change+controls+supporting+cell+proliferation+in+lesioned+mammalian+balance+epithelium.">Shape change controls supporting cell proliferation in lesioned mammalian balance epithelium.</a> J Neurosci Off J Soc Neurosci. 27 (16), 4313-4325 (2007).</li><li>Cunningham, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adult+mouse+utricle+as+an+in+vitro+preparation+for+studies+of+ototoxic-drug-induced+sensory+hair+cell+death.">The adult mouse utricle as an in vitro preparation for studies of ototoxic-drug-induced sensory hair cell death.</a> Brain Res. 1091 (1), 277-281 (2006).</li><li>Warchol, M. E., Lambert, P. R., Goldstein, B. J., Forge, A., Corwin, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+proliferation+in+inner+ear+sensory+epithelia+from+adult+guinea+pigs+and+humans.">Regenerative proliferation in inner ear sensory epithelia from adult guinea pigs and humans.</a> Science. 259 (5101), 1619-1622 (1993).</li><li>Lin, V., Golub, J. S., Nguyen, T. B., Hume, C. R., Oesterle, E. C., Stone, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+Notch+activity+promotes+nonmitotic+regeneration+of+hair+cells+in+the+adult+mouse+utricles.">Inhibition of Notch activity promotes nonmitotic regeneration of hair cells in the adult mouse utricles.</a> J Neurosci Off J Soc Neurosci. 31 (43), 15329-15339 (2011).</li><li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-regulation+of+the+Notch+and+Wnt+signaling+pathways+promotes+supporting+cell+proliferation+and+hair+cell+regeneration+in+mouse+utricles.">Co-regulation of the Notch and Wnt signaling pathways promotes supporting cell proliferation and hair cell regeneration in mouse utricles.</a> Sci Rep. 6, 29418 (2016).</li><li>Chai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt+signaling+induces+proliferation+of+sensory+precursors+in+the+postnatal+mouse+cochlea.">Wnt signaling induces proliferation of sensory precursors in the postnatal mouse cochlea.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (21), 8167-8172 (2012).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lgr5++cells+regenerate+hair+cells+via+proliferation+and+direct+transdifferentiation+in+damaged+neonatal+mouse+utricle.">Lgr5+ cells regenerate hair cells via proliferation and direct transdifferentiation in damaged neonatal mouse utricle.</a> Nat Commun. 6, 6613 (2015).</li><li>Doetzlhofer, A., White, P. M., Johnson, J. E., Segil, N., Groves, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+growth+and+differentiation+of+mammalian+sensory+hair+cell+progenitors:+a+requirement+for+EGF+and+periotic+mesenchyme.">In vitro growth and differentiation of mammalian sensory hair cell progenitors: a requirement for EGF and periotic mesenchyme.</a> Dev Biol. 272 (2), 432-447 (2004).</li><li>White, P. M., Stone, J. S., Groves, A. K., Segil, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EGFR+signaling+is+required+for+regenerative+proliferation+in+the+cochlea:+conservation+in+birds+and+mammals.">EGFR signaling is required for regenerative proliferation in the cochlea: conservation in birds and mammals.</a> Dev Biol. 363 (1), 191-200 (2012).</li><li>Gnedeva, K., Jacobo, A., Salvi, J. D., Petelski, A. A., Hudspeth, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastic+force+restricts+growth+of+the+murine+utricle.">Elastic force restricts growth of the murine utricle.</a> eLife. 6, (2017).</li><li>Aragona, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mechanical+checkpoint+controls+multicellular+growth+through+YAP/TAZ+regulation+by+actin-processing+factors.">A mechanical checkpoint controls multicellular growth through YAP/TAZ regulation by actin-processing factors.</a> Cell. 154 (5), 1047-1059 (2013).</li><li>Dong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elucidation+of+a+universal+size-control+mechanism+in+Drosophila+and+mammals.">Elucidation of a universal size-control mechanism in Drosophila and mammals.</a> Cell. 130 (6), 1120-1133 (2007).</li><li>Low, B. C., Pan, C. Q., Shivashankar, G. V., Bershadsky, A., Sudol, M., Sheetz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=YAP/TAZ+as+mechanosensors+and+mechanotransducers+in+regulating+organ+size+and+tumor+growth.">YAP/TAZ as mechanosensors and mechanotransducers in regulating organ size and tumor growth.</a> FEBS Lett. 588 (16), 2663-2670 (2014).</li><li>Zhao, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+YAP+oncoprotein+by+the+Hippo+pathway+is+involved+in+cell+contact+inhibition+and+tissue+growth+control.">Inactivation of YAP oncoprotein by the Hippo pathway is involved in cell contact inhibition and tissue growth control.</a> Genes Dev. 21 (21), 2747-2761 (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> AVMA Guidelines for the Euthanasia of Animals: 2013 Edition. , (2013).</li><li>Semerci, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lunatic+fringe-mediated+Notch+signaling+regulates+adult+hippocampal+neural+stem+cell+maintenance.">Lunatic fringe-mediated Notch signaling regulates adult hippocampal neural stem cell maintenance.</a> eLife. 6, (2017).</li><li>Tuan, R. S., Lo, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+biology+protocols.">Developmental biology protocols.</a> Methods in molecular biology. , 137 (2000).</li><li>Brandon, C. S., Voelkel-Johnson, C., May, L. A., Cunningham, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+adult+mouse+utricle+and+adenovirus-mediated+supporting-cell+infection.">Dissection of adult mouse utricle and adenovirus-mediated supporting-cell infection.</a> J Vis Exp JoVE. (61), (2012).</li><li>Gosset, M., Berenbaum, F., Thirion, S., Jacques, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+culture+and+phenotyping+of+murine+chondrocytes.">Primary culture and phenotyping of murine chondrocytes.</a> Nat Protoc. 3 (8), 1253-1260 (2008).</li><li>Landegger, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+synthetic+AAV+vector+enables+safe+and+efficient+gene+transfer+to+the+mammalian+inner+ear.">A synthetic AAV vector enables safe and efficient gene transfer to the mammalian inner ear.</a> Nat Biotechnol. 35 (3), 280-284 (2017).</li><li>Burns, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reinforcement+of+cell+junctions+correlates+with+the+absence+of+hair+cell+regeneration+in+mammals+and+its+occurrence+in+birds.">Reinforcement of cell junctions correlates with the absence of hair cell regeneration in mammals and its occurrence in birds.</a> J Comp Neurol. 511 (3), 396-414 (2008).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+polarized+extension+and+planar+cell+polarity+in+the+cochlea+by+the+vertebrate+PCP+pathway.">Regulation of polarized extension and planar cell polarity in the cochlea by the vertebrate PCP pathway.</a> Nat Genet. 37 (9), 980-985 (2005).</li><li>Chacon-Heszele, M. F., Ren, D., Reynolds, A. B., Chi, F., Chen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+cochlear+convergent+extension+by+the+vertebrate+planar+cell+polarity+pathway+is+dependent+on+p120-catenin.">Regulation of cochlear convergent extension by the vertebrate planar cell polarity pathway is dependent on p120-catenin.</a> Dev Camb Engl. 139 (5), 968-978 (2012).</li><li>Yamamoto, N., Okano, T., Ma, X., Adelstein, R. S., Kelley, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myosin+II+regulates+extension,+growth+and+patterning+in+the+mammalian+cochlear+duct.">Myosin II regulates extension, growth and patterning in the mammalian cochlear duct.</a> Dev Camb Engl. 136 (12), 1977-1986 (2009).</li><li>Tada, M., Heisenberg, C. -. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Convergent+extension:+using+collective+cell+migration+and+cell+intercalation+to+shape+embryos.">Convergent extension: using collective cell migration and cell intercalation to shape embryos.</a> Dev Camb Engl. 139 (21), 3897-3904 (2012).</li></ol>

الإشارات الجزيئية التي تم التوسط النمو والتمايز في الإذن الداخلية أثناء تطوير دراسة مستفيضة5،،من67،،من89،10. بيد أن الأدلة التي تم الحصول عليها من النظام النموذجي أوتريكولار تشير إ?...

وقد تيسر دراسة معظم جوانب التنمية الجهاز الثدييات بنظم في المختبر . الآن تستخدم طريقتين الرئيسي لثقافة الدهليزية الحواس: التعويم الحر1 و ملتصقة2 الأعمال التحضيرية. كلا الأسلوبين يسمح بالتحري عن خلية الشعر الضعف3 والتجديد1،4 في المختبر. وبالإضافة إلى ذلك، لها أدوار التنموية من الدرجة5،6،7،Wnt8، وعامل نمو البشرة مستقبلات (EGFR)9،10 إشارات الشلالات في الإذن الداخلية تم إنشاء، في جزء منه، عن طريق استخدام الثقافات في المختبر من ابيثيليا الحسية. ومع ذلك، نمو الخلايا وتمايزها تخضع للرقابة، ليس فقط من خلال الإشارات التي مورفوجينس، ولكن أيضا من خلال الرموز المادية والميكانيكية مثل جهات الاتصال بين الخلايا وصلابة المصفوفة خارج الخلية، وتمتد الميكانيكية أو انقباض. دور مثل هذه المنبهات الميكانيكية صعبة التحقيق في الإذن الداخلية النامي في فيفو. وعلاوة على ذلك، أساليب التعويم الحر وملتصقة الثقافة القائمة ليست مناسبة لمثل هذه الدراسات في المختبر. هنا يصف لنا طريقة للثقافة أورجانوتيبيك ثلاثي الأبعاد في الكولاجين وأنا الهلام من صلابة متفاوتة. هذا الأسلوب إلى حد كبير يحافظ على البنية في فيفو الدهليزية و cochlear الحواس، ويسمح للتحقيق في آثار القوة الميكانيكية على النمو والتمايز11.
لأن المنبهات الميكانيكية معروفة لتنشيط الأحداث الجزيئية المتلقين للمعلومات، مثل فرس النهر مما يشير إلى مسار12،13،،من1415، من المهم أن تكون قادرة على الجمع بين التحفيز الميكانيكي مع التلاعبات البيوكيميائية والوراثية. يسمح بتسليم جينات الفيروس بوساطة الثقافة الطريقة الموضحة هنا وذلك يمكن استخدامها لدراسة الإشارات الميكانيكية والجزيئية على حد سواء خلال الإذن الداخلية التنمية11.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:749px;" width="750">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">#10 Surgical Blades</td>
			<td style="width:212px;">Miltex</td>
			<td style="width:119px;">4-110</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">#5 Forceps</td>
			<td style="width:212px;">Dumont</td>
			<td style="width:119px;">11252-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">100 mm Petri dish</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P5856-500EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">250 uL large orifice pipette tips</td>
			<td style="width:212px;">USA Scientific</td>
			<td style="width:119px;">1011-8406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">30 mm glass-bottom Petri dish</td>
			<td style="width:212px;">Matsunami Glass USA Corporation</td>
			<td style="width:119px;">D35-14-1.5-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">4 well plate</td>
			<td style="width:212px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">176740</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4-Hydroxytamoxifen&#160;</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">H7904</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">60&#160;mm Petri dish</td>
			<td style="width:212px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">123TS1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acetic acid&#160;</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">537020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Ad-GFP</td>
			<td style="width:212px;">Vector Biolabs</td>
			<td style="width:119px;">1060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Anti-GFP, chicken IgY fraction</td>
			<td style="width:212px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">A10262&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Anti-Myo7A</td>
			<td style="width:212px;">Proteus Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">25-6790</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Anti-Sox2 Antibody (Y-17)</td>
			<td style="width:212px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:119px;">sc-17320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bicinchoninic acid assay</td>
			<td style="width:212px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">23225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">Click-iT EdU Alexa Fluor 647 Imaging Kit</td>
			<td style="width:212px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">C10340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase I</td>
			<td style="width:212px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">17100017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">D-glucose</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM/F12&#160;</td>
			<td style="width:212px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11320033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Epidermal growth factor</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">E9644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td style="width:212px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">16140063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fibroblast growth factor</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">F5392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flaming/Brown Micropipette Puller</td>
			<td style="width:212px;">Sutter Instrument</td>
			<td style="width:119px;">P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glutamine</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">G8540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HBSS</td>
			<td style="width:212px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">14025092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Hemocytometer&#160;</td>
			<td style="width:212px;">Daigger</td>
			<td style="width:119px;">EF16034F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">HEPES</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">H4034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Insulin</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">I3536</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Iridectomy scissors&#160;</td>
			<td style="width:212px;">Zepf Medical Instruments</td>
			<td style="width:119px;">08-1201-10&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Microinjector</td>
			<td style="width:212px;">Narishige</td>
			<td style="width:119px;">IM-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nicotinamide</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">N0636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">PBS (10X), pH 7.4</td>
			<td style="width:212px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">70011044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PBS (1X), pH 7.4</td>
			<td style="width:212px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Phenol Red pH indicator&#160;</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P4633&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Pure Ethanol, 200 Proof</td>
			<td style="width:212px;">Decon Labs&#160;</td>
			<td style="width:119px;">2716</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">RFP antibody</td>
			<td style="width:212px;">ChromoTek</td>
			<td style="width:119px;">&#160;5F8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Sodium hydroxide</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">S8045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium selenite</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">S5261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Tabletop vortex&#160;</td>
			<td style="width:212px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">97043-562</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Transferrin</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T8158</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypan blue&#160;</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T6146</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

three-dimensional organotypic cultures of vestibular and auditory sensory organs

الأعضاء الحسية للإذن الداخلية تشكل تحديا للدراسة في الثدييات بسبب عدم إمكانية الوصول إلى التلاعب التجريبية والمراقبة البصرية. وعلاوة على ذلك، على الرغم من أن تقنيات الثقافة القائمة تسمح الاضطرابات البيوكيميائية، هذه الأساليب لا توفر وسيلة لدراسة آثار القوة الميكانيكية وتصلب الأنسجة أثناء تطوير الحواس الإذن الداخلية. هنا يصف لنا طريقة للثقافة أورجانوتيبيك ثلاثي الأبعاد utricle مورين سليمة والقوقعة أن يتغلب على هذه القيود. تقنية لتكيف صلابة مصفوفة ثلاثية الأبعاد وصفها هنا يسمح بالتلاعب بقوة مطاطا معارضة لنمو الأنسجة. ولذلك يمكن استخدام هذا الأسلوب لدراسة دور قوي ميكانيكية أثناء تطوير الإذن الداخلية. بالإضافة إلى ذلك، تسمح الثقافات إيصال الجينات بوساطة الفيروسات، التي يمكن استخدامها لإجراء التجارب على الربح والخسارة-من-وظيفة. يحتفظ هذا الأسلوب الثقافة الفطرية خلايا الشعر ودعم الخلايا، ويخدم كبديل يحتمل أن تكون متفوقة على الثقافة التقليدية ثنائية الأبعاد للحواس السمعية والدهليزيه.

الحواس السمعية والدهليزيه من آذان الجنينية، مثقف في 40-Pa الكولاجين أنا الجل محاكاة ظروف الجنينية صلابة منخفضة11والاحتفاظ بهياكل ثلاثية الأبعاد طبيعية نسبيا (الشكل 1) والحفاظ على خلايا الشعر و دعم الخلايا (الشكل 2 و ا...

Watch this Scientific Journal Video about Three-dimensional Organotypic Cultures of Vestibular and Auditory Sensory Organs at JoVE.com

Three-dimensional Organotypic Cultures of Vestibular and Auditory Sensory Organs

الثقافات أورجانوتيبيك ثلاثي الأبعاد مورين utricle والقوقعة في مسح الكولاجين أنا الهلام مورفولوجيا الأنسجة الفطرية حكرا على بصريا والسماح للتحفيز الميكانيكي من خلال تكيف صلابة مصفوفة، والسماح بإيصال جينات الفيروس بوساطة.

الثقافات أورجانوتيبيك ثلاثي الأبعاد للأجهزة الحسية السمعية والدهليزيه

The sensory organs of the inner ear are challenging to study in mammals due to their inaccessibility to experimental manipulation and optical observation. ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Organotypic Slice Cultures for Studies of Postnatal Neurogenesis

الثقافات شريحة عضوي النمط لدراسات ما بعد الولادة تكوين الخلايا العصبية

Here we describe a technique for studying hippocampal postnatal neurogenesis in the rodent brain using the organotypic slice culture technique. This ...

Differentiation of a Human Neural Stem Cell Line on Three Dimensional Cultures, Analysis of MicroRNA and Putative Target Genes

التمايز من العصبية البشرية خط الخلايا الجذعية على الثقافات الثلاث الأبعاد، تحليل الجينات الرنا الميكروي، واعتبارا الهدف

Neural stem cells (NSCs) are capable of self-renewal and differentiation into neurons, astrocytes and oligodendrocytes under specific local ...

Three-dimensional Quantification of Dendritic Spines from Pyramidal Neurons Derived from Human Induced Pluripotent Stem Cells

الكمي ثلاثي الأبعاد من شجيري العمود الفقري من الخلايا العصبية الهرمية المستمدة من صنع الإنسان المحفزة الخلايا الجذعية

Dendritic spines are small protrusions that correspond to the post-synaptic compartments of excitatory synapses in the central nervous system. They are ...

Using Ex Vivo Upright Droplet Cultures of Whole Fetal Organs to Study Developmental Processes during Mouse Organogenesis

Using Ex Vivo Upright Droplet Cultures of Whole Fetal Organs to Study Developmental Processes during Mouse Organogenesis

باستخدام<em&gt; السابقين فيفو</em&gt; الثقافات تستقيم القطرة من الجامعة الجنين هيئات لدراسة العمليات التنموية خلال الماوس توالد

Investigating organogenesis in utero is a technically challenging process in placental mammals due to inaccessibility of reagents to embryos that develop ...

Generation of Genetically Modified Organotypic Skin Cultures Using Devitalized Human Dermis

جيل المعدلة وراثيا الثقافات الجلد الميتة عضوي عن طريق الأدمة الإنسان

Organotypic cultures allow the reconstitution of a 3D environment critical for cell-cell contact and cell-matrix interactions which mimics the function ...

Gene Transfer into the Chicken Auditory Organ by In Ovo Micro-electroporation

Gene Transfer into the Chicken Auditory Organ by In Ovo Micro-electroporation

نقل الجينات إلى داخل الجهاز الدجاج السمعية التي كتبها<em&gt; في البيضة</em&gt; الصغرى Electroporation لل

Chicken embryos are ideal model systems for studying embryonic development as manipulations of gene function can be conducted with relative ease in ovo. ...

Protocols for Visualizing Steroidogenic Organs and Their Interactive Organs with Immunostaining in the Fruit Fly Drosophila melanogaster

Protocols for Visualizing Steroidogenic Organs and Their Interactive Organs with Immunostaining in the Fruit Fly Drosophila melanogaster

بروتوكولات لتصور الستيرويدي المنشأ أجهزة وهيئات التفاعلية مع المناعية في ذبابة الفاكهة<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

In multicellular organisms, a small group of cells is endowed with a specialized function in their biogenic activity, inducing a systemic response ...

Analysis of Retinoic Acid-induced Neural Differentiation of Mouse Embryonic Stem Cells in Two and Three-dimensional Embryoid Bodies

تحليل الناجم عن حمض الريتينويك العصبية تمايز الخلايا الجذعية الجنينية الماوس في الهيئات مضغي اثنين وثلاثة الأبعاد

Mouse embryonic stem cells (ESCs) isolated from the inner mass of the blastocyst (typically at day E3.5), can be used as in vitro model system for ...

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

أفقي جبل كامل: A معالجة الرواية والتصوير بروتوكول للثدي، ثلاثة-- الأبعاد الأنسجة عبر-- أقسام الجلد

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

A Novel Use of Three-dimensional High-frequency Ultrasonography for Early Pregnancy Characterization in the Mouse

استخدام الموجات فوق الصوتية عالية التردد ثلاثي الأبعاد رواية لتوصيف الحمل المبكر في الماوس

High-frequency ultrasonography (HFUS) is a common method to non-invasively monitor the real-time development of the human fetus in utero. The mouse is ...