Name: three-dimensional organotypic cultures of vestibular and auditory sensory organs
Uploaded: 2018-06-01T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Three-dimensional Organotypic Cultures of Vestibular and Auditory Sensory Organs at JoVE.com

हम डॉ ए. Jacobo, डॉ जे सालवी, और एक Petelski मूल अनुसंधान जिस पर इस प्रोटोकॉल पर आधारित है उनके योगदान के लिए धंयवाद । हम तकनीकी सहायता और पशुपालन के लिए जे Llamas और डब्ल्यू Makmura का भी धन्यवाद करते हैं । हम NIDCD प्रशिक्षण ग्रांट T32 DC009975, NIDCD ग्रांट R01DC015530, Robertson चिकित्सीय विकास निधि, और Caruso परिवार फाउंडेशन को फंडिंग के लिए स्वीकार करते हैं । अंत में, हम हावर्ड ह्यूजेस चिकित्सा संस्थान, जिनमें से डॉ Hudspeth एक अंवेषक है से समर्थन स्वीकार करते हैं ।

सभी तरीकों यहां वर्णित पशु देखभाल और रॉकफेलर विश्वविद्यालय के उपयोग समितियों और दक्षिणी कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय के द्वारा अनुमोदित किया गया है ।
1. (वैकल्पिक) की तैयारी कोलेजन मैं समाधा?...

<ol>
	<li>Oesterle, E. C., Tsue, T. T., Reh, T. A., Rubel, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair-cell+regeneration+in+organ+cultures+of+the+postnatal+chicken+inner+ear.">Hair-cell regeneration in organ cultures of the postnatal chicken inner ear.</a> Hear Res. 70 (1), 85-108 (1993).</li><li>Meyers, J. R., Corwin, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shape+change+controls+supporting+cell+proliferation+in+lesioned+mammalian+balance+epithelium.">Shape change controls supporting cell proliferation in lesioned mammalian balance epithelium.</a> J Neurosci Off J Soc Neurosci. 27 (16), 4313-4325 (2007).</li><li>Cunningham, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adult+mouse+utricle+as+an+in+vitro+preparation+for+studies+of+ototoxic-drug-induced+sensory+hair+cell+death.">The adult mouse utricle as an in vitro preparation for studies of ototoxic-drug-induced sensory hair cell death.</a> Brain Res. 1091 (1), 277-281 (2006).</li><li>Warchol, M. E., Lambert, P. R., Goldstein, B. J., Forge, A., Corwin, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+proliferation+in+inner+ear+sensory+epithelia+from+adult+guinea+pigs+and+humans.">Regenerative proliferation in inner ear sensory epithelia from adult guinea pigs and humans.</a> Science. 259 (5101), 1619-1622 (1993).</li><li>Lin, V., Golub, J. S., Nguyen, T. B., Hume, C. R., Oesterle, E. C., Stone, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+Notch+activity+promotes+nonmitotic+regeneration+of+hair+cells+in+the+adult+mouse+utricles.">Inhibition of Notch activity promotes nonmitotic regeneration of hair cells in the adult mouse utricles.</a> J Neurosci Off J Soc Neurosci. 31 (43), 15329-15339 (2011).</li><li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-regulation+of+the+Notch+and+Wnt+signaling+pathways+promotes+supporting+cell+proliferation+and+hair+cell+regeneration+in+mouse+utricles.">Co-regulation of the Notch and Wnt signaling pathways promotes supporting cell proliferation and hair cell regeneration in mouse utricles.</a> Sci Rep. 6, 29418 (2016).</li><li>Chai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt+signaling+induces+proliferation+of+sensory+precursors+in+the+postnatal+mouse+cochlea.">Wnt signaling induces proliferation of sensory precursors in the postnatal mouse cochlea.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (21), 8167-8172 (2012).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lgr5++cells+regenerate+hair+cells+via+proliferation+and+direct+transdifferentiation+in+damaged+neonatal+mouse+utricle.">Lgr5+ cells regenerate hair cells via proliferation and direct transdifferentiation in damaged neonatal mouse utricle.</a> Nat Commun. 6, 6613 (2015).</li><li>Doetzlhofer, A., White, P. M., Johnson, J. E., Segil, N., Groves, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+growth+and+differentiation+of+mammalian+sensory+hair+cell+progenitors:+a+requirement+for+EGF+and+periotic+mesenchyme.">In vitro growth and differentiation of mammalian sensory hair cell progenitors: a requirement for EGF and periotic mesenchyme.</a> Dev Biol. 272 (2), 432-447 (2004).</li><li>White, P. M., Stone, J. S., Groves, A. K., Segil, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EGFR+signaling+is+required+for+regenerative+proliferation+in+the+cochlea:+conservation+in+birds+and+mammals.">EGFR signaling is required for regenerative proliferation in the cochlea: conservation in birds and mammals.</a> Dev Biol. 363 (1), 191-200 (2012).</li><li>Gnedeva, K., Jacobo, A., Salvi, J. D., Petelski, A. A., Hudspeth, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastic+force+restricts+growth+of+the+murine+utricle.">Elastic force restricts growth of the murine utricle.</a> eLife. 6, (2017).</li><li>Aragona, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mechanical+checkpoint+controls+multicellular+growth+through+YAP/TAZ+regulation+by+actin-processing+factors.">A mechanical checkpoint controls multicellular growth through YAP/TAZ regulation by actin-processing factors.</a> Cell. 154 (5), 1047-1059 (2013).</li><li>Dong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elucidation+of+a+universal+size-control+mechanism+in+Drosophila+and+mammals.">Elucidation of a universal size-control mechanism in Drosophila and mammals.</a> Cell. 130 (6), 1120-1133 (2007).</li><li>Low, B. C., Pan, C. Q., Shivashankar, G. V., Bershadsky, A., Sudol, M., Sheetz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=YAP/TAZ+as+mechanosensors+and+mechanotransducers+in+regulating+organ+size+and+tumor+growth.">YAP/TAZ as mechanosensors and mechanotransducers in regulating organ size and tumor growth.</a> FEBS Lett. 588 (16), 2663-2670 (2014).</li><li>Zhao, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+YAP+oncoprotein+by+the+Hippo+pathway+is+involved+in+cell+contact+inhibition+and+tissue+growth+control.">Inactivation of YAP oncoprotein by the Hippo pathway is involved in cell contact inhibition and tissue growth control.</a> Genes Dev. 21 (21), 2747-2761 (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> AVMA Guidelines for the Euthanasia of Animals: 2013 Edition. , (2013).</li><li>Semerci, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lunatic+fringe-mediated+Notch+signaling+regulates+adult+hippocampal+neural+stem+cell+maintenance.">Lunatic fringe-mediated Notch signaling regulates adult hippocampal neural stem cell maintenance.</a> eLife. 6, (2017).</li><li>Tuan, R. S., Lo, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+biology+protocols.">Developmental biology protocols.</a> Methods in molecular biology. , 137 (2000).</li><li>Brandon, C. S., Voelkel-Johnson, C., May, L. A., Cunningham, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+adult+mouse+utricle+and+adenovirus-mediated+supporting-cell+infection.">Dissection of adult mouse utricle and adenovirus-mediated supporting-cell infection.</a> J Vis Exp JoVE. (61), (2012).</li><li>Gosset, M., Berenbaum, F., Thirion, S., Jacques, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+culture+and+phenotyping+of+murine+chondrocytes.">Primary culture and phenotyping of murine chondrocytes.</a> Nat Protoc. 3 (8), 1253-1260 (2008).</li><li>Landegger, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+synthetic+AAV+vector+enables+safe+and+efficient+gene+transfer+to+the+mammalian+inner+ear.">A synthetic AAV vector enables safe and efficient gene transfer to the mammalian inner ear.</a> Nat Biotechnol. 35 (3), 280-284 (2017).</li><li>Burns, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reinforcement+of+cell+junctions+correlates+with+the+absence+of+hair+cell+regeneration+in+mammals+and+its+occurrence+in+birds.">Reinforcement of cell junctions correlates with the absence of hair cell regeneration in mammals and its occurrence in birds.</a> J Comp Neurol. 511 (3), 396-414 (2008).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+polarized+extension+and+planar+cell+polarity+in+the+cochlea+by+the+vertebrate+PCP+pathway.">Regulation of polarized extension and planar cell polarity in the cochlea by the vertebrate PCP pathway.</a> Nat Genet. 37 (9), 980-985 (2005).</li><li>Chacon-Heszele, M. F., Ren, D., Reynolds, A. B., Chi, F., Chen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+cochlear+convergent+extension+by+the+vertebrate+planar+cell+polarity+pathway+is+dependent+on+p120-catenin.">Regulation of cochlear convergent extension by the vertebrate planar cell polarity pathway is dependent on p120-catenin.</a> Dev Camb Engl. 139 (5), 968-978 (2012).</li><li>Yamamoto, N., Okano, T., Ma, X., Adelstein, R. S., Kelley, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myosin+II+regulates+extension,+growth+and+patterning+in+the+mammalian+cochlear+duct.">Myosin II regulates extension, growth and patterning in the mammalian cochlear duct.</a> Dev Camb Engl. 136 (12), 1977-1986 (2009).</li><li>Tada, M., Heisenberg, C. -. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Convergent+extension:+using+collective+cell+migration+and+cell+intercalation+to+shape+embryos.">Convergent extension: using collective cell migration and cell intercalation to shape embryos.</a> Dev Camb Engl. 139 (21), 3897-3904 (2012).</li></ol>

विकास के दौरान भीतरी कान में विकास और भेदभाव की मध्यस्थता करने वाले आणविक संकेतों को बड़े पैमाने पर5,6,7,8,9,10का अध्ययन किया गया ह?...

स्तनधारी अंग विकास के अधिकांश पहलुओं के अध्ययन के द्वारा इन विट्रो प्रणालियों में सुविधा दी गई है. दो प्रमुख तरीकों अब vestibular संवेदी अंगों की संस्कृति के लिए प्रयोग किया जाता है: मुक्त फ्लोटिंग1 और अनुयाई2 तैयारी । दोनों तरीकों बाल कोशिका कमजोरियों की जांच की अनुमति3 और पुनर्जनन1,4 इन विट्रो में। इसके अलावा, पायदान की विकासात्मक भूमिकाओं5,6, Wnt7,8, और एपिडर्मल वृद्धि कारक रिसेप्टर (EGFR)9,10 संकेतन झरने भीतरी कान में है की स्थापना की गई, भाग में, के उपयोग के माध्यम से इन विट्रो संस्कृतियों संवेदी epithelia. हालांकि, सेल विकास और भेदभाव नियंत्रित कर रहे हैं, न केवल morphogens द्वारा संकेत के माध्यम से, लेकिन यह भी सेलुलर संपर्क के रूप में भौतिक और यांत्रिक संकेतों के माध्यम से, extracellular मैट्रिक्स की कठोरता, और यांत्रिक खींच या कसना. ऐसे यांत्रिक उत्तेजनाओं की भूमिका vivo मेंविकासशील भीतरी कान में जांच के लिए चुनौती दे रहा है । इसके अलावा, मौजूदा फ्री-फ्लोटिंग और अनुयाई कल्चर के तरीके इन विट्रो मेंऐसे अध्ययनों के लिए उपयुक्त नहीं हैं । यहां हम तीन के लिए एक विधि का वर्णन आयामी organotypic संस्कृति कोलेजन मैं कठोरता बदलती के जैल में । इस विधि vivo में vestibular और कॉकलियर संवेदी अंगों की वास्तुकला को बरकरार रखता है और विकास और भेदभाव11पर यांत्रिक बल के प्रभाव की जांच की अनुमति देता है ।
यांत्रिक उत्तेजनाओं के बहाव के रूप में आणविक घटनाओं को सक्रिय करने के लिए जाना जाता है, क्योंकि इस तरह के मार्ग12,13,14,15, यह यांत्रिक उत्तेजना गठबंधन करने में सक्षम होने के लिए महत्वपूर्ण है जैव रासायनिक और आनुवंशिक जोड़तोड़ के साथ । संस्कृति विधि यहां वर्णित वायरस मध्यस्थता जीन वितरण परमिट और इसलिए भीतरी कान विकास के दौरान दोनों यांत्रिक और आणविक संकेतन11अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:749px;" width="750">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">#10 Surgical Blades</td>
			<td style="width:212px;">Miltex</td>
			<td style="width:119px;">4-110</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">#5 Forceps</td>
			<td style="width:212px;">Dumont</td>
			<td style="width:119px;">11252-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">100 mm Petri dish</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P5856-500EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">250 uL large orifice pipette tips</td>
			<td style="width:212px;">USA Scientific</td>
			<td style="width:119px;">1011-8406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">30 mm glass-bottom Petri dish</td>
			<td style="width:212px;">Matsunami Glass USA Corporation</td>
			<td style="width:119px;">D35-14-1.5-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">4 well plate</td>
			<td style="width:212px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">176740</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4-Hydroxytamoxifen&#160;</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">H7904</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">60&#160;mm Petri dish</td>
			<td style="width:212px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">123TS1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acetic acid&#160;</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">537020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Ad-GFP</td>
			<td style="width:212px;">Vector Biolabs</td>
			<td style="width:119px;">1060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Anti-GFP, chicken IgY fraction</td>
			<td style="width:212px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">A10262&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Anti-Myo7A</td>
			<td style="width:212px;">Proteus Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">25-6790</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Anti-Sox2 Antibody (Y-17)</td>
			<td style="width:212px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:119px;">sc-17320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bicinchoninic acid assay</td>
			<td style="width:212px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">23225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">Click-iT EdU Alexa Fluor 647 Imaging Kit</td>
			<td style="width:212px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">C10340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase I</td>
			<td style="width:212px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">17100017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">D-glucose</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM/F12&#160;</td>
			<td style="width:212px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11320033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Epidermal growth factor</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">E9644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td style="width:212px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">16140063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fibroblast growth factor</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">F5392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flaming/Brown Micropipette Puller</td>
			<td style="width:212px;">Sutter Instrument</td>
			<td style="width:119px;">P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glutamine</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">G8540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HBSS</td>
			<td style="width:212px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">14025092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Hemocytometer&#160;</td>
			<td style="width:212px;">Daigger</td>
			<td style="width:119px;">EF16034F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">HEPES</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">H4034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Insulin</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">I3536</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Iridectomy scissors&#160;</td>
			<td style="width:212px;">Zepf Medical Instruments</td>
			<td style="width:119px;">08-1201-10&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Microinjector</td>
			<td style="width:212px;">Narishige</td>
			<td style="width:119px;">IM-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nicotinamide</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">N0636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">PBS (10X), pH 7.4</td>
			<td style="width:212px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">70011044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PBS (1X), pH 7.4</td>
			<td style="width:212px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Phenol Red pH indicator&#160;</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P4633&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Pure Ethanol, 200 Proof</td>
			<td style="width:212px;">Decon Labs&#160;</td>
			<td style="width:119px;">2716</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">RFP antibody</td>
			<td style="width:212px;">ChromoTek</td>
			<td style="width:119px;">&#160;5F8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Sodium hydroxide</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">S8045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium selenite</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">S5261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Tabletop vortex&#160;</td>
			<td style="width:212px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">97043-562</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Transferrin</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T8158</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypan blue&#160;</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T6146</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

three-dimensional organotypic cultures of vestibular and auditory sensory organs

भीतरी कान के संवेदी अंगों प्रयोगात्मक हेरफेर और ऑप्टिकल अवलोकन के लिए उनके अप्राप्यता के कारण स्तनधारियों में अध्ययन करने के लिए चुनौती दे रहे हैं । इसके अलावा, हालांकि मौजूदा संस्कृति तकनीक जैव रासायनिक perturbations की अनुमति देते हैं, इन तरीकों को भीतरी कान संवेदी अंगों के विकास के दौरान यांत्रिक बल और ऊतक जकड़न के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए एक साधन प्रदान नहीं करते । यहां हम तीन के लिए एक विधि का वर्णन बरकरार murine utricle और कोक्लीअ है कि इन सीमाओं पर काबू के आयामी organotypic संस्कृति । एक तीन आयामी मैट्रिक्स कठोरता के समायोजन के लिए तकनीक यहां वर्णित लोचदार बल ऊतक विकास का विरोध के हेरफेर परमिट । इस विधि इसलिए भीतरी कान के विकास के दौरान यांत्रिक बलों की भूमिका का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । इसके अतिरिक्त, संस्कृतियों वायरस मध्यस्थता जीन वितरण, जो लाभ और हानि के समारोह प्रयोगों के लिए इस्तेमाल किया जा सकता अनुमति देते हैं । इस संस्कृति विधि जंमजात बाल कोशिकाओं और सहायक कोशिकाओं को बरकरार रखता है और पारंपरिक दो vestibular और श्रवण संवेदी अंगों की आयामी संस्कृति के लिए एक संभावित बेहतर विकल्प के रूप में कार्य करता है ।

भ्रूण कान से Vestibular और श्रवण संवेदी अंगों, ४० में प्रसंस्कृत-Pa कोलेजन मैं कम कठोरता भ्रूण शर्तों11नकल उतार, अपेक्षाकृत सामांय तीन आयामी संरचनाओं बनाए रखने (चित्रा 1) और बालो?...

Watch this Scientific Journal Video about Three-dimensional Organotypic Cultures of Vestibular and Auditory Sensory Organs at JoVE.com

Three-dimensional Organotypic Cultures of Vestibular and Auditory Sensory Organs

murine utricle और कोक्लीअ के तीन आयामी organotypic संस्कृतियों ऑप्टिकली स्पष्ट कोलेजन में मैं सहज ऊतक आकृति विज्ञान की रक्षा, मैट्रिक्स कठोरता के समायोजन के माध्यम से यांत्रिक उत्तेजना के लिए अनुमति देते हैं, और वायरस की मध्यस्थता जीन वितरण की अनुमति.

Vestibular और श्रवण संवेदी अंगों की तीन आयामी Organotypic संस्कृतियों

The sensory organs of the inner ear are challenging to study in mammals due to their inaccessibility to experimental manipulation and optical observation. ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Organotypic Slice Cultures for Studies of Postnatal Neurogenesis

प्रसव के बाद न्यूरोजेनेसिस के अध्ययन के लिए Organotypic स्लाइस संस्कृति

Here we describe a technique for studying hippocampal postnatal neurogenesis in the rodent brain using the organotypic slice culture technique. This ...

Differentiation of a Human Neural Stem Cell Line on Three Dimensional Cultures, Analysis of MicroRNA and Putative Target Genes

तीन आयामी संस्कृति, MicroRNA का विश्लेषण और ख्यात लक्ष्य जीन पर एक मानव तंत्रिका स्टेम सेल लाइन के भेदभाव

Neural stem cells (NSCs) are capable of self-renewal and differentiation into neurons, astrocytes and oligodendrocytes under specific local ...

Three-dimensional Quantification of Dendritic Spines from Pyramidal Neurons Derived from Human Induced Pluripotent Stem Cells

मानव प्रेरित स्टेम कोशिकाओं से व्युत्पन्न पिरामिड न्यूरॉन्स से वृक्ष के समान spines के तीन आयामी मात्रा

Dendritic spines are small protrusions that correspond to the post-synaptic compartments of excitatory synapses in the central nervous system. They are ...

Using Ex Vivo Upright Droplet Cultures of Whole Fetal Organs to Study Developmental Processes during Mouse Organogenesis

Using Ex Vivo Upright Droplet Cultures of Whole Fetal Organs to Study Developmental Processes during Mouse Organogenesis

का प्रयोग<em&gt; पूर्व Vivo</em&gt; पूरे भ्रूण अंगों की ईमानदार बूंद संस्कृतियों माउस जीवोत्पत्ति के दौरान विकास की प्रक्रिया का अध्ययन करने के लिए

Investigating organogenesis in utero is a technically challenging process in placental mammals due to inaccessibility of reagents to embryos that develop ...

Generation of Genetically Modified Organotypic Skin Cultures Using Devitalized Human Dermis

निष्प्राण मानव डर्मिस का प्रयोग आनुवंशिक रूप से संशोधित Organotypic त्वचा संस्कृतियों की पीढ़ी

Organotypic cultures allow the reconstitution of a 3D environment critical for cell-cell contact and cell-matrix interactions which mimics the function ...

Gene Transfer into the Chicken Auditory Organ by In Ovo Micro-electroporation

Gene Transfer into the Chicken Auditory Organ by In Ovo Micro-electroporation

चिकन श्रवण अंग में जीन स्थानांतरण द्वारा<em&gt; Ovo में</em&gt; माइक्रो-electroporation

Chicken embryos are ideal model systems for studying embryonic development as manipulations of gene function can be conducted with relative ease in ovo. ...

Protocols for Visualizing Steroidogenic Organs and Their Interactive Organs with Immunostaining in the Fruit Fly Drosophila melanogaster

Protocols for Visualizing Steroidogenic Organs and Their Interactive Organs with Immunostaining in the Fruit Fly Drosophila melanogaster

फल मक्खी में Immunostaining साथ Steroidogenic अंगों और उनके इंटरएक्टिव अंगों दृश्यमान करने के लिए प्रोटोकॉल<em&gt; ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em

In multicellular organisms, a small group of cells is endowed with a specialized function in their biogenic activity, inducing a systemic response ...

Analysis of Retinoic Acid-induced Neural Differentiation of Mouse Embryonic Stem Cells in Two and Three-dimensional Embryoid Bodies

दो और तीन आयामी embryoid निकायों में मूषक भ्रूणीय स्टेम कोशिकाओं की रेटिनोइक एसिड प्रेरित तंत्रिका विभेदन का विश्लेषण

Mouse embryonic stem cells (ESCs) isolated from the inner mass of the blastocyst (typically at day E3.5), can be used as in vitro model system for ...

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

क्षैतिज पूरे माउंट: मोटा, तीन आयामी ऊतक के लिए एक उपन्यास प्रसंस्करण और इमेजिंग प्रोटोकॉल

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

A Novel Use of Three-dimensional High-frequency Ultrasonography for Early Pregnancy Characterization in the Mouse

माउस में प्रारंभिक गर्भावस्था लक्षण वर्णन के लिए तीन आयामी उच्च आवृत्ति ट्रा का एक उपंयास का उपयोग

High-frequency ultrasonography (HFUS) is a common method to non-invasively monitor the real-time development of the human fetus in utero. The mouse is ...