Name: homogeneous time-resolved f&#246;rster resonance energy transfer-based assay for detection of insulin secretion
Uploaded: 2018-05-10T14:00:00
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1. 기능-1E 셀: 유지 보수 및 도금
<ol><li>기능-1E 셀 습도 37 ˚C/5% CO2 인큐베이터 고 RPMI 1640 매체와 교양 5% (v/v) 열 비활성화 태아 둔감 한 혈 청, 2 m m L-글루타민, 10 mM HEPES, 1mm 나트륨 pyruvate, 100 U/mL 페니실린/스와 보완 유지 솔루션, 50 µ M β-mercaptoethanol입니다. 80-90%의 합류를 도달할 때까지, 그들은 수 있는 trypsinized 및 passaged 또는 인슐린 분 비 분석 결과 대 한 사용 하는 경우 셀 (접시), 당 10 m...

<ol>
	<li>Taniguchi, C. M., Emanuelli, B., Kahn, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+nodes+in+signalling+pathways:+Insights+into+insulin+action.">Critical nodes in signalling pathways: Insights into insulin action.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 7 (2), 85-96 (2006).</li><li>Vetere, A., Choudhary, A., Burns, S. M., Wagner, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+the+pancreatic+beta-cell+to+treat+diabetes.">Targeting the pancreatic beta-cell to treat diabetes.</a> Nat Rev Drug Discov. 13 (4), 278-289 (2014).</li><li>Despres, J. P., Lemieux, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abdominal+obesity+and+metabolic+syndrome.">Abdominal obesity and metabolic syndrome.</a> Nature. 444 (7121), 881-887 (2006).</li><li>Kahn, S. E., Hull, R. L., Utzschneider, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+linking+obesity+to+insulin+resistance+and+type+2+diabetes.">Mechanisms linking obesity to insulin resistance and type 2 diabetes.</a> Nature. 444 (7121), 840-846 (2006).</li><li>Barg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+exocytosis+in+insulin-secreting+B-cells+and+glucagon-secreting+A-cells.">Mechanisms of exocytosis in insulin-secreting B-cells and glucagon-secreting A-cells.</a> Pharmacol Toxicol. 92 (1), 3-13 (2003).</li><li>Braun, M., Ramracheya, R., Rorsman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autocrine+regulation+of+insulin+secretion.">Autocrine regulation of insulin secretion.</a> Diabetes Obes Metab. 14 Suppl 3, 143-151 (2012).</li><li>Farino, Z. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+rapid+insulin+assay+by+homogenous+time-resolved+fluorescence.">Development of a rapid insulin assay by homogenous time-resolved fluorescence.</a> PLoS One. 11 (2), e0148684 (2016).</li><li>Simpson, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine-mediated+autocrine+inhibitory+circuit+regulating+human+insulin+secretion+in+vitro.">Dopamine-mediated autocrine inhibitory circuit regulating human insulin secretion in vitro.</a> Mol Endocrinol. 26 (10), 1757-1772 (2012).</li><li>Heyduk, E., Moxley, M. M., Salvatori, A., Corbett, J. A., Heyduk, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homogeneous+insulin+and+C-Peptide+sensors+for+rapid+assessment+of+insulin+and+C-peptide+secretion+by+the+islets.">Homogeneous insulin and C-Peptide sensors for rapid assessment of insulin and C-peptide secretion by the islets.</a> Diabetes. 59 (10), 2360-2365 (2010).</li><li>Heyduk, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+protein+conformational+changes+by+FRET/LRET.">Measuring protein conformational changes by FRET/LRET.</a> Curr Opin Biotechnol. 13 (4), 292-296 (2002).</li><li>Degorce, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HTRF((R)):+Pioneering+technology+for+high-throughput+screening.">HTRF((R)): Pioneering technology for high-throughput screening.</a> Expert Opin Drug Discov. 1 (7), 753-764 (2006).</li><li>Degorce, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HTRF:+A+technology+tailored+for+drug+discovery+-+a+review+of+theoretical+aspects+and+recent+applications.">HTRF: A technology tailored for drug discovery - a review of theoretical aspects and recent applications.</a> Curr Chem Genomics. 3, 22-32 (2009).</li><li>Mathis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HTRF(R)+Technology.">HTRF(R) Technology.</a> J Biomol Screen. 4 (6), 309-314 (1999).</li><li>Daijo, J. E., Sportsman, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+time-resolved+fluorescence+immunoassay+for+insulin+in+rodent+plasma.">A time-resolved fluorescence immunoassay for insulin in rodent plasma.</a> J Pharm Biomed Anal. 19 (3-4), 335-342 (1999).</li><li>Merglen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+sensitivity+and+metabolism-secretion+coupling+studied+during+two-year+continuous+culture+in+INS-1E+insulinoma+cells.">Glucose sensitivity and metabolism-secretion coupling studied during two-year continuous culture in INS-1E insulinoma cells.</a> Endocrinology. 145 (2), 667-678 (2004).</li><li>Ustione, A., Piston, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+synthesis+and+D3+receptor+activation+in+pancreatic+beta-cells+regulates+insulin+secretion+and+intracellular+[Ca(2+)]+oscillations.">Dopamine synthesis and D3 receptor activation in pancreatic beta-cells regulates insulin secretion and intracellular [Ca(2+)] oscillations.</a> Mol Endocrinol. 26 (11), 1928-1940 (2012).</li><li>Ustione, A., Piston, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+introduction+to+multiphoton+microscopy.">A simple introduction to multiphoton microscopy.</a> J Microsc. 243 (3), 221-226 (2011).</li><li>Ustione, A., Piston, D. W., Harris, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minireview:+Dopaminergic+regulation+of+insulin+secretion+from+the+pancreatic+islet.">Minireview: Dopaminergic regulation of insulin secretion from the pancreatic islet.</a> Mol Endocrinol. 27 (8), 1198-1207 (2013).</li><li>Rubi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+D2-like+receptors+are+expressed+in+pancreatic+beta+cells+and+mediate+inhibition+of+insulin+secretion.">Dopamine D2-like receptors are expressed in pancreatic beta cells and mediate inhibition of insulin secretion.</a> J Biol Chem. 280 (44), 36824-36832 (2005).</li><li>Garcia-Tornadu, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+the+dopamine+d2+receptor+impairs+insulin+secretion+and+causes+glucose+intolerance.">Disruption of the dopamine d2 receptor impairs insulin secretion and causes glucose intolerance.</a> Endocrinology. 151 (4), 1441-1450 (2010).</li><li>Garcia-Tornadu, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+endocrine+and+metabolic+roles+of+dopamine+D2+receptors+gained+from+the+Drd2+mouse.">New insights into the endocrine and metabolic roles of dopamine D2 receptors gained from the Drd2 mouse.</a> Neuroendocrinology. 92 (4), 207-214 (2010).</li><li>Lopez Vicchi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopaminergic+drugs+in+type+2+diabetes+and+glucose+homeostasis.">Dopaminergic drugs in type 2 diabetes and glucose homeostasis.</a> Pharmacol Res. 109, 74-80 (2016).</li><li>Kalra, S., Kalra, B., Agrawal, N., Kumar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine:+The+forgotten+felon+in+type+2+diabetes.">Dopamine: The forgotten felon in type 2 diabetes.</a> Recent Pat Endocr Metab Immune Drug Discov. 5 (1), 61-65 (2011).</li><li>Mahajan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bromocriptine+mesylate:+FDA-approved+novel+treatment+for+type-2+diabetes.">Bromocriptine mesylate: FDA-approved novel treatment for type-2 diabetes.</a> Indian J Pharmacol. 41 (4), 197-198 (2009).</li><li>Caicedo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paracrine+and+autocrine+interactions+in+the+human+islet:+more+than+meets+the+eye.">Paracrine and autocrine interactions in the human islet: more than meets the eye.</a> Semin Cell Dev Biol. 24 (1), 11-21 (2013).</li><li>Ballon, J. S., Pajvani, U., Freyberg, Z., Leibel, R. L., Lieberman, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pathophysiology+of+metabolic+effects+of+antipsychotic+medications.">Molecular pathophysiology of metabolic effects of antipsychotic medications.</a> Trends Endocrinol Metab. , (2014).</li><li>Freyberg, Z., Aslanoglou, D., Shah, R., Ballon, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+and+antipsychotic+drug-induced+metabolic+dysfunction+in+schizophrenia.">Intrinsic and antipsychotic drug-induced metabolic dysfunction in schizophrenia.</a> Front Neurosci. 11, 432 (2017).</li><li>de Leeuw van Weenen, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dopamine+receptor+D2+agonist+bromocriptine+inhibits+glucose-stimulated+insulin+secretion+by+direct+activation+of+the+alpha2-adrenergic+receptors+in+beta+cells.">The dopamine receptor D2 agonist bromocriptine inhibits glucose-stimulated insulin secretion by direct activation of the alpha2-adrenergic receptors in beta cells.</a> Biochem Pharmacol. 79 (12), 1827-1836 (2010).</li></ol>

여기에 설명 된 HTRF 인슐린 분석 결과 교양된 셀 기반 시스템에서 인슐린 분 비를 측정 하는 신속 하 고 효율적인 시스템을 제공 합니다. 그것의 가장 중요 한 장점 중이 분석 결과 높은 신호 대 잡음 비율 때문에 낮은 배경 신호를 제공합니다. 또한, 우리는 시간의 연장된 기간에 대 한 HTRF 신호는 안정 확인 했습니다 (> 24 h)7. 그럼에도 불구 하 고, 인슐린 바인딩 단일 클론 항 체 ?...

에너지 대사의 규정 주요 단백 동화 호르몬, 인슐린에 의해 미세 하 게. 인슐린 합성 이며 췌 장 베타 세포 증가 세포 외 포도 당 수준에 대 한 응답에서에 의해 발표. 출시 된 인슐린 인슐린에 민감한 조직1,2포도 당 통풍 관을 트리거합니다. 생리학적으로,이 식사 후, 포도 당 통풍 관을 통제 하는 인슐린의 분 비에 의해 다음 포도 당 농도의 상승에 연결 됩니다. 포도 당 항상성 교란 인슐린 저항에 culminating 대사 장애가 발생할 고 궁극적으로 2 형 당뇨병2,,34의 발병에.
인슐린 분 비를 광범위 하 게 공부 했다, 하지만 그 규제 메커니즘 제대로 이해 남아 있습니다. 수 사의 중요 한 지역 베타 세포5,6,,78인슐린 분 비의 소설 변조기의 식별 되었습니다. 이러한 연구는 포도 당 자극 인슐린 분 비 사이의 결합 관계의 더 나은 이해 해야 합니다. 따라서, 정확 하 게 모니터링 하 고 포도 당 자극 인슐린 분 비 (GSIS)의 수준을 계량 능력 필수 되었습니다. 그러나 날짜 하려면,, 방법의 제한 된 수만 셀 라인 인슐린 분 비 췌 장 독도 이용 GSIS의 정량화를 허용 하도록 사용할 수 없었습니다. 하나는 방사성 태그 인슐린과 항 체를 이용 하는 방사 면역 검정 법 (RIA)입니다. 이 방법의 주요 제한 사항 처리 및 방사성 물질의 안전 문제가 포함 됩니다. 또한,이 방법은 노동 집약, 여러 긴 세척 및 인큐베이션 단계를 포함 합니다. 효소 연결 된 immunosorbent 분석 결과 (ELISA) 인슐린 검출을 위한 항 체를 이용 하는 또 다른 비용과 노동 집약적인 접근 이다. 항 체 친 화력 및 인슐린 인식의 효율 변화 요인이이 방법의 제한 그리고 결과의 재현성에 영향을 미칠 수 있습니다. 애 란도 리아 높은 처리량 실험을 위해 설계 되었습니다. AlphaScreen 균질 분석 결과 감지 하 고 인슐린 분 비의 수준 측정에 사용 되는. AlphaScreen 기술 화학의 세대의 결과로 chemiluminescent 종으로 대응할 수 있는 흥분된 산소 내의 상태로 주변 산소의 변환 기반으로 합니다. 분석 결과 균질 성 때문에, 많은 RIA와 ELISA 세척 단계는 제거 됩니다. 그러나, 반응의 특성상 신호의 불안정은 제한 요인 분석 결과의 판독에 영향을 미칠 수 있습니다. (TR-협공,9Heyduk와 동료 의해 개발 된 인슐린 분자에 다른 epitopes 두 개의 별도 항 체의 바인딩을에 따라 인슐린 측정에 다른 동종 접근 이다. 항 체는 짧은 상호 보완적인 단일 좌초 DNA 돌출부와 화학적으로 이중 연결 된 각 좌초 DNA. 인슐린 항 체의 바인딩 함께 그들을 제공 그리고 두 배 좌초 된 DNA 이중으로 이어집니다. 각 항 체는 또한 각 기증자 또는 수락자 fluorophore와 연결 하 고 DNA 이중의 협회 포스터 공명 에너지 전달 (무서 워)를 생성 하기 위해 이러한 fluorophores 함께 제공. 그러나 TR-협공의 한 가지 잠재적인 한계 자체 무서 워, 달려있다. 빠르게 무서 워 반응 동안 배경 형광을 발산 하지 못하는 배경 형광의 상대적으로 높은 수준 및 낮은 신호 대 잡음 비 분석 결과 내에서 발생할 수 있습니다. 따라서, 필요 높은 처리량 방식에서 GSIS를 측정에 대 한, 강력한, 안정적이 고 비용 효율적인 분석 결과 대 한 여전히 존재 합니다.
물리학에서 최근의 진보는 균질 시간 해결 형광 에너지 공명 전송 (HTRF) 기반으로 분석 결과의 개발에서 남 중 했다. 특히, 에너지 내에서 전송 하는 동안 분석 결과 수 있습니다 무서 워 기반으로 설명 더 정확 하 게, 발광 에너지 공명 전송 (LRET)10 은 기증자와 수락자 사이 에너지의 비 복사 전달에 의존 하는 HTRF 종11,,1213. 이 차이 이후는 형광의 타이밍 중요, 또는 냉각 하는 기반으로 무서 워 상호 작용 LRET, 보다 훨씬 다른 무서 워 및 LRET 게이팅의 동일한 종류를 사용할 수 있습니다. 또한, 유로 퓸 등 희토류 란타넘족 cryptate 사용 하 여 화합물 또는 HTRF에 븀 cryptate 생산 긴 형광 반감기12,14. 이 여기 기증자와 수락자 (즉, 시간 확인 시험)에서 방출의 측정 사이 타임 딜레이 (무색하)의 도입의 독특한 장점을 제공합니다. 이 시간 지연의 수락자 방출 형광 측정 전에 사라지고 배경 형광에 대 한 충분 한 시간을 허용 합니다. 따라서, 판독은 일반적인 형광의 자유롭고 높은 신호 대 잡음 비율 달성 하므로, (그림 1). 또한, HTRF의 동질적인 특성 분석 결과 많이 만드는 언바운드 종 ELISA 또는 RIA 기반 방법 보다 더 빠른 씻어 세척 단계에 대 한 필요가 없습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57531/57531fig1.jpg"> 그림 1: HTRF 인슐린 감지 메커니즘의 도식. 두 개의 독립적으로 생성 된 단일 클론 항 체는 특히 인식 하 고 별도 사이트에서 인슐린에 바인딩합니다. 이 항 체는 유로 퓸 cryptate 기증자 또는 수락자 XL665 활용 된. 여기 620에서 방출에 337 nm 결과에 기증자의 nm. 결과 에너지 전송 하면 더 긴 파장, 665에서 방출 하는 XL665 nm. <a href="/files/ftp_upload/57531/57531fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
여기, 우리는 자세한 프로토콜 제공 기능-1E 셀에서 GSIS의 수준을 결정 하는 HTRF 기반 방식을 사용 하 여를 위한 insulinoma 셀 선15쥐는 확고 인슐린 은닉 베타 세포 파생. 또한,이 분석 결과 인슐린 분 비의 분자 레 귤 레이 터의 약리 프로필을 식별 하는 데 사용할 수 있습니다. 우리이 인슐린 HTRF 기반 분석 결과 도파민 D2를 검사 하는 적용-GSIS의 수용 체 규칙 처럼. 증가 연구는 신경 전달 물질 도파민 GSIS8,,1617,18,19,20, 의 중요 한 레 귤 레이 터 밝혀졌다 21 , 22. 도파민은 도파민 D2에 대 한 작업을 통해 부정적인 autocrine/paracrine 방식에서 GSIS를에 영향을 미치는-같은 수용 체 (D2, D3D4 수용 체) 베타 췌 장 세포8 의 표면에 표현 , 16 , 19. 우리 GSIS의 부정적인 레 귤 레이 터로 서 도파민의 역할을 확인 하 고 입증 하는이 분석 결과 사용 하 여, 도파민 D2-수용 체 주 작동 근 bromocriptine와 quinpirole 또한 GSIS 감소 같은.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="773">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">96-well white half area plate</td>
			<td style="width:104px;">Greiner Bio-One</td>
			<td style="width:139px;">82050-042</td>
			<td style="width:315px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">384-well white low-volume, round-bottom plate</td>
			<td style="width:104px;">Corning</td>
			<td>15100157</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Insulin High Range Kit</td>
			<td style="width:104px;">Cisbio Bioassays</td>
			<td style="width:139px;">62IN1PEH&#160;</td>
			<td>10,000 test HTRF-based insulin assay kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PHERAstar FSX plate reader</td>
			<td style="width:104px;">BMG Labtech</td>
			<td>FSX</td>
			<td>Plate reader adapted for HTRF-based assay readings</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Plate sealers</td>
			<td style="width:104px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:139px;">DY992</td>
			<td>To seal plate while antibodies incubate</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Hemocytometer</td>
			<td style="width:104px;">Hausser Scientific</td>
			<td style="width:139px;">3100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">RPMI Medium 1640 (1x)</td>
			<td style="width:104px;">Gibco&#160;</td>
			<td style="width:139px;">11875-093</td>
			<td>[+] L-glutamine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Trypsin 0.05%&#160;</td>
			<td style="width:104px;">Corning</td>
			<td style="width:139px;">25-052-CI</td>
			<td>0.53 mM EDTA, (-) sodium bicarbonate</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">DPBS (Dulbecco&#39;s phosphate buffered saline)</td>
			<td style="width:104px;">Corning</td>
			<td style="width:139px;">21-031-CV</td>
			<td>Without calcium and magnesium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:104px;">Corning</td>
			<td style="width:139px;">35-010-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HEPES</td>
			<td style="width:104px;">Gibco&#160;</td>
			<td style="width:139px;">156-30-080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium pyruvate</td>
			<td style="width:104px;">Gibco&#160;</td>
			<td style="width:139px;">11360070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Penicillin/Streptomycin solution 100x</td>
			<td style="width:104px;">Corning</td>
			<td style="width:139px;">30-002 CT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2-mercaptoethanol</td>
			<td style="width:104px;">Sigma</td>
			<td style="width:139px;">M1348</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Trypan Blue Stain (0.4%)</td>
			<td style="width:104px;">Gibco&#160;</td>
			<td style="width:139px;">15250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dopamine hydrochloride</td>
			<td style="width:104px;">Sigma</td>
			<td style="width:139px;">8502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bromocriptine mesylate</td>
			<td style="width:104px;">Tocris</td>
			<td style="width:139px;">427</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">(-)-Quinpirole hydrochloride</td>
			<td style="width:104px;">Tocris</td>
			<td style="width:139px;">1061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bovine Serum Albumin</td>
			<td style="width:104px;">Calbiochem</td>
			<td style="width:139px;">12659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Poly-L-Lysine</td>
			<td style="width:104px;">Sigma</td>
			<td style="width:139px;">P4832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glucose</td>
			<td style="width:104px;">Sigma</td>
			<td style="width:139px;">G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DMSO (Dimethyl sulfoxide)</td>
			<td style="width:104px;">Sigma</td>
			<td style="width:139px;">276855</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

homogeneous time-resolved f&#246;rster resonance energy transfer-based assay for detection of insulin secretion

인슐린 분 비의 검출은 규제의 분 비 또한 연구에서 물질 대사의 elucidating 메커니즘에 대 한 중요 합니다. 비록 수많은 인슐린 분석 실험은 수십 년 동안 존재 했다, 균질 시간 해결 포스터 공명 에너지 전송 (HTRF) 기술의 최근 출현 방식이 크게이 측정을 간소화 하 게 됩니다. 이것은, 비용, 재현성, 신속 하 고 강력한 광학 분석 결과 오래 지속 방출 포스터 공명 에너지 전송 시간 해결 용이와 밝은 fluorophores에 활용 된 항 체에 의존. 또한, HTRF 인슐린 탐지 높은 처리량 검열 분석 실험의 개발에 대 한 순종입니다. 여기 우리는 기능-1E 셀, 쥐 insulinoma 파생 셀 라인에서에서 인슐린 분 비를 검색 하기 위해 HTRF를 사용 합니다. 인슐린과 포도 당 자극에 그들의 변화 기초 수준 추정 수 있습니다. 또한,이 인슐린 탐지 시스템 사용 하 여 포도 당 자극 인슐린 분 비 (GSIS)의 부정적인 레 귤 레이 터로 서 도파민의 역할을 확인 하. 비슷한 방식으로, 다른 도파민 D2-수용 체 주 작동 근, quinpirole, bromocriptine, 줄일 GSIS 농도 의존 방식에서 처럼. 우리의 결과 GSIS와 그들의 약리 프로필에 수많은 약물의 역할을 결정 HTRF 인슐린 분석 결과 형식 유틸리티를 강조 표시 합니다.

우리는 미리 정의 된 농도 (그림 2)의 순화 된 인간의 인슐린 표준을 사용 하 여 인슐린 표준 곡선을 생성 하 여 우리의 인슐린 HTRF 분석 결과 검증. 따라서 우리 비율 형광 수치를 추정 하는 것을 허용 하는 표준 곡선의 세대 하 고 다음으로 하는 약물 치료 (그림 2)에 대 한 응답 인슐린 분 비 수준을 결정. 커브 피팅 Intraplate 변형 ...

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Homogeneous Time-resolved FÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¶rster Resonance Energy Transfer-based Assay for Detection of Insulin Secretion

균질 시간 해결 포스터 공명 에너지 전송 기반 분석 결과 인슐린 분 비의 검출에 대 한

여기, 우리가 현재의 균질 시간 세포에서 분 비 하는 인슐린의 신속한 검출을 위한 효율적인 방법으로 무서 워 (HTRF) 해결.

The detection of insulin secretion is critical for elucidating mechanisms of regulated secretion as well as in studies of metabolism. Though numerous ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Homogeneous Time-resolved F&#246;rster Resonance Energy Transfer-based Assay for Detection of Insulin Secretion

Production and Detection of Reactive Oxygen Species (ROS) in Cancers

Production and Detection of Reactive Oxygen Species ROS in Cancers

암의 생산 및 반응 산소 종의 감지 (ROS)

Reactive oxygen species include a number of molecules that damage DNA and RNA and oxidize proteins and lipids (lipid peroxydation). These reactive ...

연구

의학

Improving IV Insulin Administration in a Community Hospital

동네 병원에서 정맥 주사 인슐린 관리 개선

Diabetes mellitus is a major independent risk factor for increased morbidity and mortality in the hospitalized patient, and elevated blood glucose ...

Cerenkov Luminescence Imaging (CLI) for Cancer Therapy Monitoring

Cerenkov Luminescence Imaging CLI for Cancer Therapy Monitoring

암 치료 모니터링을위한 Cerenkov 발광 이미징 (CLI)

In  molecular imaging, positron emission tomography (PET) and optical imaging (OI)  are two of the most important and thus most widely used modalities1-3. ...

Coculture Analysis of Extracellular Protein Interactions Affecting Insulin Secretion by Pancreatic Beta Cells

췌장의 베타 세포가 인슐린 분비에 영향을 미치는 세포 외 단백질 상호 작용의 배양 분석

Interactions between cell-surface proteins help coordinate the function of neighboring cells. Pancreatic beta cells are clustered together within ...

Combined Intravital Microscopy and Contrast-enhanced Ultrasonography of the Mouse Hindlimb to Study Insulin-induced Vasodilation and Muscle Perfusion

Intravital 현미경 검사 법 및 대비 향상 된 초음파 마우스 Hindlimb의 인슐린 유도 된 혈관과 근육 관류 결합

It has been demonstrated that insulin's vascular actions contribute to regulation of insulin sensitivity. Insulin's effects on muscle perfusion regulate ...

Cardiac Magnetic Resonance Imaging at 7 Tesla

CMR at an ultra-high field (magnetic field strength B0&#160;&#8805; 7 Tesla) benefits from the signal-to-noise ratio (SNR) advantage inherent at higher ...

Studying the Hypothalamic Insulin Signal to Peripheral Glucose Intolerance with a Continuous Drug Infusion System into the Mouse Brain

쥐의 뇌에 지속적인 약물 주입 시스템 주변 포도 당 옹 졸 Hypothalamic 인슐린 신호를 공부

Insulin regulates systematic metabolism in the hypothalamus and the peripheral insulin response. An inflammatory reaction in peripheral adipose tissues ...

Endotoxin Activity Assay for the Detection of Whole Blood Endotoxemia in Critically Ill Patients

중증 환자에서 전혈 내독소 혈증 검출을 위한 내독소 활성 분석

Lipopolysaccharide, also known as endotoxin, is a fundamental component of gram-negative bacteria and plays a crucial role in the development of sepsis ...

Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine

창 자 호르몬 분 비는 격리를 사용 하 여 기본 메커니즘 끼얹는다 쥐 소장

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, ...

Cardiac Magnetic Resonance for the Evaluation of Suspected Cardiac Thrombus: Conventional and Emerging Techniques

의심되는 심장 혈전의 평가를 위한 심장 자기 공명: 기존 및 신흥 기술

We present the conventional cardiac magnetic resonance (CMR) protocol for evaluating a suspected thrombus and highlight emerging techniques.&#160;The ...