Name: intraportal transplantation of pancreatic islets in mouse model
Uploaded: 2018-05-05T15:00:00
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Wir würden gerne Gundula Hertl für ihre Unterstützung zu erkennen.

Alle Verfahren in diesem Protokoll wurden von deutschen Tierschutzgesetz und Richtlinien genehmigt. Verwenden Sie 10 bis 12 Wochen alten NMRI nackte Mäuse und C57Bl/6 Mäusen (Spender: alte weiblich; Empfänger: männliche) während der Experimente. Verwenden Sie nackt NMRI Mäuse für Insel isoliert. Halten Sie die Mäuse unter definierten Bedingungen gemäß den Vorschriften der örtlichen Tierhaus.
1. Induktion von Diabetes durch die Streptozocin
<ol><li>Am Tag-4 Messen Sie das Körperge...

<ol>
	<li>McCall, M., Shapiro, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+islet+transplantation.">Update on islet transplantation.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2 (7), a007823 (2012).</li><li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen.">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> New England Journal of Medicine. 343 (4), 230-238 (2000).</li><li>Cantarelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow+as+an+alternative+site+for+islet+transplantation.">Bone marrow as an alternative site for islet transplantation.</a> Blood. 114 (20), 4566-4574 (2009).</li><li>Echeverri, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoscopic+gastric+submucosal+transplantation+of+islets+(ENDO-STI):+technique+and+initial+results+in+diabetic+pigs.">Endoscopic gastric submucosal transplantation of islets (ENDO-STI): technique and initial results in diabetic pigs.</a> American Journal of Transplantation. 9 (11), 2485-2496 (2009).</li><li>Korsgren, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimising+islet+engraftment+is+critical+for+successful+clinical+islet+transplantation.">Optimising islet engraftment is critical for successful clinical islet transplantation.</a> Diabetologia. 51 (2), 227-232 (2008).</li><li>Merani, S., Toso, C., Emamaullee, J., Shapiro, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+implantation+site+for+pancreatic+islet+transplantation.">Optimal implantation site for pancreatic islet transplantation.</a> British Journal of Surgery. 95 (12), 1449-1461 (2008).</li><li>Lingwal, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+gelatinase+B+(matrix+metalloprotease-9)+activity+reduces+cellular+inflammation+and+restores+function+of+transplanted+pancreatic+islets.">Inhibition of gelatinase B (matrix metalloprotease-9) activity reduces cellular inflammation and restores function of transplanted pancreatic islets.</a> Diabetes. 61 (8), 2045-2053 (2012).</li><li>Chen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+intraportal+islet+transplantation+outcome+by+systemic+IKK-beta+inhibition:+NF-kappaB+activity+in+pancreatic+islets+depends+on+oxygen+availability.">Improved intraportal islet transplantation outcome by systemic IKK-beta inhibition: NF-kappaB activity in pancreatic islets depends on oxygen availability.</a> American Journal of Transplantation. 11 (2), 215-224 (2011).</li><li>Wang, Y., Wang, T., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+aspects+are+critical+for+carrying+out+intraportal+islet+transplants+successfully+in+a+diabetes+mouse+model.">Three aspects are critical for carrying out intraportal islet transplants successfully in a diabetes mouse model.</a> Experimental and Clinical Transplantation. 10 (3), 302-304 (2012).</li><li>Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+mouse+pancreatic+islet+isolation+and+intracellular+cAMP+determination.">A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination.</a> Journal of Visualized Experiments. (88), e50374 (2014).</li><li>Zmuda, E. J., Powell, C. A., Hai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+murine+islet+isolation+and+subcapsular+kidney+transplantation.">A method for murine islet isolation and subcapsular kidney transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments. (50), (2011).</li><li>Rother, K. I., Harlan, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+facing+islet+transplantation+for+the+treatment+of+type+1+diabetes+mellitus.">Challenges facing islet transplantation for the treatment of type 1 diabetes mellitus.</a> Journal of Clinical Investigation. 114 (7), 877-883 (2004).</li><li>Su, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+islets+are+essential+for+successful+intraportal+transplantation+in+a+diabetes+mouse+model.">Small islets are essential for successful intraportal transplantation in a diabetes mouse model.</a> Scandinavian Journal of Immunology. 72 (6), 504-510 (2010).</li><li>Rekittke, N. E., Ang, M., Rawat, D., Khatri, R., Linn, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+Therapy+of+Type+1+Diabetes+Mellitus:+From+Pancreatic+Islet+Transplantation+to+Mesenchymal+Stem+Cells.">Regenerative Therapy of Type 1 Diabetes Mellitus: From Pancreatic Islet Transplantation to Mesenchymal Stem Cells.</a> Stem Cells International. 2016, 22 (2016).</li></ol>

In dieser Studie wird die intraportal Route der inselversetzung untersucht. Dieses Protokoll ist hocheffizient in diabetischen Stress abbauen und bietet eine ausführliche Gelegenheit Islet Transplantation Studien zu erkunden. Dieses Protokoll bestätigt, dass ca. 350 murine Inselchen hyperglykämischen Zustand umkehren können. Darüber hinaus keine der Mäuse starben während des Verfahrens und glykämische Kontrolle wurde in alle Empfänger erreicht. Körper-Gewicht und Blut-Glukosespiegel verzeichneten regelmäßig u...

Inselversetzung ist ein vielversprechender Ansatz zur Behandlung von Typ 1 Diabetes Mellitus1. Der erste Versuch, ein Schaf Pankreas Fragment eines Diabetikers überweisen wurde 1893 von Watson Williams durchgeführt. Jedoch ein wichtiger Durchbruch in klinischen inselversetzung gelang mit dem Edmonton-Protokoll, und danach, waren eine Reihe von nationalen Programmen entwickelt2. In der Vergangenheit mehrere Standorte, wie Knochenmark, omentalis Beutel, intramuskuläre Region, Magen-Schleimhautoberfläche, Milz und Niere Kapsel wurden in präklinischen Modellen erforscht, aber das Portal Venensystem gilt als eines der angemessenen und wirksamen Website für klinische Programme3,4,5,6.
Exogene Verabreichung von Insulin kann durch kleine Insel Infusion in die Pfortader ersetzt werden. Dies gilt eine bevorzugte Seite, weil die Sauerstoffversorgung vergleichbar mit dem in der nativen Bauchspeicheldrüse aufgrund der Lage unterhalb des Zusammenflusses der Portal Arterie und Vene ist. Darüber hinaus könnte gibt es eine große Fläche, so dass die dreidimensionale Struktur der Inseln erhalten werden kann, und Vaskularisierung erleichterten5. In einer Empfänger Diabetische Maus, 2.000 Menschen oder Schweinen Inselchen Äquivalente oder 350 Maus genügen Inselchen hyperglykämischen Zustand7,8rückgängig zu machen. Euglycemic Ebenen wurden für 15 Tage in dem Empfänger Mausmodell xenogene Inseln und in der allogenen Maus-Maus-Modell und für mehr als 120 Tage in das Phänomen Maus-Maus-Transplantation gemeldet.
Für die Wirksamkeit der inselversetzung über Pfortader relevanten Faktoren sind geeignete Anästhesie, Methode der Punktion und Blutstillung9. Betäubung durch Inhalation (5 % Isofluran) oder Injektion (Ketamin, Xylazin oder Pentobarbital) induziert werden kann, und die Stoffe werden häufig kombiniert. Zur Steuerung der Tiefe und Zeit der Narkose sollte den Zustand der Maus, wie die Farbe der Schleimhaut, Auge Deckel, Hornhaut Reflex, Atemfrequenz und Temperatur des Körpers geachtet. Es ist darauf zu achten, dass das Tier nicht zu kämpfen hat und dass er die Operation überlebt. Die Temperatur kann durch verschiedene Heizgeräte wie Heizkissen, Rotlicht-Lampen erhalten, etc. A warm Thermoplatte verwendet wurde, um eine Temperatur von 25-30 ° C zwischen der Maus und dem OP-Tisch, der verhindert das Auftreten von Hypothermie. Die Dosierungen der Anästhetika sind wichtig, da alle von ihnen von der Leber metabolisiert werden und Leberfunktion vorübergehend werden, durch die Infusion der Insel Suspension. gestört kann Die ideale Einstichstelle für die Pfortader ist die Position zwischen der ersten und zweiten Nebenfluss Ader.
Die Anzahl der Inseln und der beabsichtigten Injektionsvolumen auch Einfluss auf den Ausgang des Transplantats, da übermäßiger Lautstärke die Scherspannung verstärken kann. 0,2 mL Volumen gilt für inselversetzung in die Pfortader geeignet. Die Punktion Wunde (26-Gauge-Nadel) induziert, Blutungen aus der Pfortader, die zeitnah und effektiv gestoppt werden muss. Steriler Gaze oder einem Finger einsetzbar mit minimalem Druck auf dem Gelände der Punktion für ca. 6 min., die Blutung zu stoppen. Genommen zusammen, Portal Inselchen Injektion ist effektiv und bietet Verordnung über den Blutzuckerspiegel bei chemisch induzierten Diabetische Mausmodellen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="600">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td>C57Bl/6 mice&#160;</td>
			<td>Charles River (Sulzfeld, Germany)</td>
			<td></td>
			<td>(10-12 weeks)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td>BALB/c mice</td>
			<td>Charles River (Sulzfeld, Germany)</td>
			<td></td>
			<td>(10-12 weeks)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td>NMRI nude mice</td>
			<td>Charles River (Sulzfeld, Germany)</td>
			<td></td>
			<td>(10-12 weeks)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ketamine</td>
			<td>Bela-pharm</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Xylazine</td>
			<td>CEVA TIERGESUNDHEIT GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Syringe, 23G and 26G needle</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Petri Dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>303800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">NaCl</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>351007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sterile Gauze</td>
			<td>Fuhrmann</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Shaking Water bath</td>
			<td>Kotterman</td>
			<td>1501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Scissors</td>
			<td>Braun</td>
			<td>1501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Glucose Meter&#160;</td>
			<td>One Touch</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Warm Thermal Plate</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Braunol (povidone-iodide solution)</td>
			<td>B.Braun Melsungen AG</td>
			<td>3864154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Liposic Edo - Sprinkled Ointment (eye ointment)</td>
			<td colspan="2">Dr. G Mann Chem.-Pharm.&#160; GmbH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Incubator</td>
			<td>Fa. Roth</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Flow Bench</td>
			<td>Herdus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ficoll</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>10771</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">5-0 Silk Suture Vicryl</td>
			<td>Braun</td>
			<td></td>
			<td>(7.5 *1.75mm)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Michel Clamps (clips)</td>
			<td>Aesculap&#160;</td>
			<td>BN507R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">P/FCS Solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21180-021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">TCM-199 (10x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21180-021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">FCS</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>S1810-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Penicillin-streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HEPES (1 M)</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>L 1613</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Gentamycin</td>
			<td>Ratiopharm</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ciprofloxacin</td>
			<td>Fresenius Kabi</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hank&#39;s Solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14060-040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Collagenase</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11213865001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Streptozotocin</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>572204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">OPSITE-spray (wound healer)</td>
			<td>Smith and nephew</td>
			<td>66004978</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Reugular food</td>
			<td>Altromin</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Head light LED 16042 (magnifying glass)</td>
			<td>Eschenbach</td>
			<td>16042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Rat anti-mouse PECAM-1(CD31) monoclonal primary antibody</td>
			<td>Millipore, Chemicon</td>
			<td>CBL1337</td>
			<td>Dilution (1:100)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Donkey anti-rat secondary antibody</td>
			<td>Dianova</td>
			<td>712095153</td>
			<td>Dilution (1:400)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Polyclonal guinea pig anti-insulin primay antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>A0564</td>
			<td>Dilution (1:500)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Donkey anti-guinea pig secondary antibody</td>
			<td>Dianova</td>
			<td>706-259-148</td>
			<td>Dilution (1:400)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intraportal transplantation of pancreatic islets in mouse model

Pankreatischen inselversetzung Hyperglykämie zu reduzieren ist sehr erfolgreich bei Nagetieren mit chemisch induzierte Diabetes. Die häufigste Lokalisation der Transplantation in experimentellen inselversetzung ist die Niere-Kapsel. Jedoch da weniger über das Zusammenspiel von pankreatischen kleinen Inseln mit Blut Bestandteile bekannt ist, ist es auch sinnvoll, die Pfortader Ansatz in experimentellen inselversetzung nutzen.
Dieses Protokoll zeigt eine intraportal Islet Transplantation Technik in NMRI nackte Mäuse. Streptozocin (180 mg/kg) ist intraperitoneal injiziert, um Hyperglykämie bei Empfänger Mäusen zu induzieren. Sie als Diabetiker auf ein nicht-Fasten Blutzuckerspiegel größer als 20 Mmol/l gelten als Einen Tag vor der Transplantation, sind Maus pankreatischen kleinen Inseln isoliert aus der Bauchspeicheldrüse Spender von Kollagenase Verdauung; mindestens 350 Inseln werden pro Diabetiker Empfänger eingesetzt. Abhängig von der kleinen Insel isoliert Ertrag, sind zwei oder mehrere Spender Mäuse pro Empfänger genutzt. Nach Übernachtung Kultur bei 37 ° C sind Inseln in den Empfänger Leber über die Pfortader verabreicht. Nach der Operation, die Mäuse in roter Makrolon Häuser geschützt und bis sind wach. Dieses Protokoll unterhält glykämische Kontrolle für 120 Tage in Phänomen Mäuse und 15 Tage bei allogenen Mäusen.

Die Kompetenz der verpflanzten kleinen Inseln wurde in chemisch induzierten diabetischen Mäusen untersucht. Die Inseln wurden über das Portal Venensystem in diabetischen Mäusen Modell transplantiert. Der Geber-nehmer-Anteil betrug 2:1. In dem Phänomen Mausmodell wurden zwei Spender Mäuse eingesetzt, um 350 Inseln zu erhalten. Die Inseln wurden dann in diabetischen Mäusen verpflanzt. Ein Rückgang der Blutzuckerspiegel war am 1. Tag nach der Transplantation, was eine Rolle des transp...

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Intraportal Transplantation of Pancreatic Islets in Mouse Model

Pankreatischen inselversetzung ist eine Möglichkeit, Normoglycemia bei Diabetes Typ 1 zu erreichen. Dieser Artikel konzentriert sich auf die Transplantation-Technik durch die intraportal Route weiterhin normale Blutzuckerwerte bei diabetischen Mäusen.

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