Name: intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin and pain tests in mice
Uploaded: 2020-09-02T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice at JoVE.com

وقد وافقت لجنة رعاية واستخدام الحيوانات التابعة لجامعة موساشينو على جميع البروتوكولات التجريبية المستخدمة هنا. تم الاحتفاظ بالفئران DdY الذكور (SLC, Shizuoka, Japan) لمدة 7 أيام على الأقل تحت دورة ضوء/داكنة 12-h قبل إجراء تجارب مع الماء والغذاء الإعلان libitum. 5- فئران عمرها 6 أسابيع استخدمت للتجارب.
<p cl...

<ol>
	<li>Cavanaugh, D. J., Chesler, A. T., Braz, J. M., Shah, N. M., Julius, D., Basbaum, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restriction+of+transient+receptor+potential+vanilloid-1+to+the+peptidergic+subset+of+primary+afferent+neurons+follows+its+developmental+downregulation+in+nonpeptidergic+neurons.">Restriction of transient receptor potential vanilloid-1 to the peptidergic subset of primary afferent neurons follows its developmental downregulation in nonpeptidergic neurons.</a> J Neurosci. 31 (28), 10119-10127 (2011).</li><li>Caterina, M. J., Schumacher, M. A., Tominaga, M., Rosen, T. A., Levine, J. D., Julius, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+capsaicin+receptor:+a+heat-activated+ion+channel+in+the+pain+pathway.">The capsaicin receptor: a heat-activated ion channel in the pain pathway.</a> Nature. 389 (6653), 816-824 (1997).</li><li>Caterina, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+nociception+and+pain+sensation+in+mice+lacking+the+capsaicin+receptor.">Impaired nociception and pain sensation in mice lacking the capsaicin receptor.</a> Science. 288 (5464), 306-313 (2000).</li><li>Starowicz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tonic+endovanilloid+facilitation+of+glutamate+release+in+brainstem+descending+antinociceptive+pathways.">Tonic endovanilloid facilitation of glutamate release in brainstem descending antinociceptive pathways.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (50), 13739-13749 (2007).</li><li>Gavva, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vanilloid+receptor+TRPV1+is+tonically+activated+in+vivo+and+involved+in+body+temperature+regulation.">The vanilloid receptor TRPV1 is tonically activated in vivo and involved in body temperature regulation.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (13), 3366-3374 (2007).</li><li>Marsch, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+anxiety,+conditioned+fear,+and+hippocampal+long-term+potentiation+in+transient+receptor+potential+vanilloid+type+1+receptor-deficient+mice.">Reduced anxiety, conditioned fear, and hippocampal long-term potentiation in transient receptor potential vanilloid type 1 receptor-deficient mice.</a> Journal of Neuroscience. 27 (4), 832-839 (2007).</li><li>Tzavara, E. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocannabinoids+activate+transient+receptor+potential+vanilloid+1+receptors+to+reduce+hyperdopaminergia-related+hyperactivity:+Therapeutic+implications.">Endocannabinoids activate transient receptor potential vanilloid 1 receptors to reduce hyperdopaminergia-related hyperactivity: Therapeutic implications.</a> Biological Psychiatry. 59 (6), 508-515 (2006).</li><li>Naz&#305;ro&#287;lu, M., &#214;vey, &. #. 3. 0. 4. ;. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+apoptosis+and+calcium+accumulation+through+TRPV1+channels+in+neurobiology+of+epilepsy.">Involvement of apoptosis and calcium accumulation through TRPV1 channels in neurobiology of epilepsy.</a> Neuroscience. 293, 55-66 (2015).</li><li>Mallet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPV1+in+brain+is+involved+in+acetaminophen-induced+antinociception.">TRPV1 in brain is involved in acetaminophen-induced antinociception.</a> PloS one. 5 (9), 1-11 (2010).</li><li>Barri&#232;re, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+amide+hydrolase-dependent+generation+of+antinociceptive+drug+metabolites+acting+on+TRPV1+in+the+brain.">Fatty acid amide hydrolase-dependent generation of antinociceptive drug metabolites acting on TRPV1 in the brain.</a> PloS one. 8 (8), e70690 (2013).</li><li>Jancs&#243;, G., Kiraly, E., Jancs&#243;-G&#225;bor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologically+induced+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+neurones.">Pharmacologically induced selective degeneration of chemosensitive primary sensory neurones.</a> Nature. 270 (5639), 741-743 (1977).</li><li>Szallasi, A., Blumberg, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vanilloid+receptor+loss+in+rat+sensory+ganglia+associated+with+long+term+desensitization+to+resiniferatoxin.">Vanilloid receptor loss in rat sensory ganglia associated with long term desensitization to resiniferatoxin.</a> Neuroscience Letters. 140 (1), 51-54 (1992).</li><li>Cavanaugh, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+subsets+of+unmyelinated+primary+sensory+fibers+mediate+behavioral+responses+to+noxious+thermal+and+mechanical+stimuli.">Distinct subsets of unmyelinated primary sensory fibers mediate behavioral responses to noxious thermal and mechanical stimuli.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (22), 9075-9080 (2009).</li><li>Jeffry, J. A., Yu, S. Q., Sikand, P., Parihar, A., Evans, M. S., Premkumar, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+targeting+of+TRPV1+expressing+sensory+nerve+terminals+in+the+spinal+cord+for+long+lasting+analgesia.">Selective targeting of TRPV1 expressing sensory nerve terminals in the spinal cord for long lasting analgesia.</a> PLoS ONE. 4 (9), e7021 (2009).</li><li>Jancs&#243;, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracisternal+capsaicin:+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+afferents+in+the+adult+rat.">Intracisternal capsaicin: selective degeneration of chemosensitive primary sensory afferents in the adult rat.</a> Neuroscience letters. 27 (1), 41-45 (1981).</li><li>Gamse, R., Saria, A., Lundberg, J. M., Theodorsson-Norheim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+neurochemical+changes+after+intracisternal+capsaicin+treatment+of+the+guinea+pig.">Behavioral and neurochemical changes after intracisternal capsaicin treatment of the guinea pig.</a> Neuroscience Letters. 64 (3), 287-292 (1986).</li><li>Neubert, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+mouse+orofacial+pain+and+the+effects+of+lesioning+TRPV1-expressing+neurons+on+operant+behavior.">Characterization of mouse orofacial pain and the effects of lesioning TRPV1-expressing neurons on operant behavior.</a> Molecular pain. 4, 43 (2008).</li><li>Karai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+vanilloid+receptor+1-expressing+primary+afferent+neurons+for+pain+control.">Deletion of vanilloid receptor 1-expressing primary afferent neurons for pain control.</a> The Journal of clinical investigation. 113 (9), 1344-1352 (2004).</li><li>Fukushima, A., Mamada, K., Iimura, A., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supraspinal-selective+TRPV1+desensitization+induced+by+intracerebroventricular+treatment+with+resiniferatoxin.">Supraspinal-selective TRPV1 desensitization induced by intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin.</a> Scientific reports. 7 (1), 12452 (2017).</li><li>Haley, T. J., McCormick, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+effects+produced+by+intracerebral+injection+of+drugs+in+the+conscious+mouse.">Pharmacological effects produced by intracerebral injection of drugs in the conscious mouse.</a> British journal of pharmacology and chemotherapy. 12 (1), 12-15 (1957).</li><li>Tj&#248;lsen, A., Berge, O. G., Hunskaar, S., Rosland, J. H., Hole, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+formalin+test:+an+evaluation+of+the+method.">The formalin test: an evaluation of the method.</a> Pain. 51 (1), 5-17 (1992).</li><li>Ohsawa, M., Miyabe, Y., Katsu, H., Yamamoto, S., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+sensory+nerve+fiber+responsible+for+lysophosphatidic+acid-induced+allodynia+in+mice.">Identification of the sensory nerve fiber responsible for lysophosphatidic acid-induced allodynia in mice.</a> Neuroscience. 247, 65-74 (2013).</li><li>Tanabe, M., Tokuda, Y., Takasu, K., Ono, K., Honda, M., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+synthetic+TRH+analogue+taltirelin+exerts+modality-specific+antinociceptive+effects+via+distinct+descending+monoaminergic+systems.">The synthetic TRH analogue taltirelin exerts modality-specific antinociceptive effects via distinct descending monoaminergic systems.</a> British journal of pharmacology. 150 (4), 403-414 (2007).</li><li>Ono, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+in+sympathetic+nerve+activity+as+a+possible+mechanism+for+the+hypothermic+effect+of+oseltamivir,+an+anti-influenza+virus+drug,+in+normal+mice.">Reduction in sympathetic nerve activity as a possible mechanism for the hypothermic effect of oseltamivir, an anti-influenza virus drug, in normal mice.</a> Basic &amp; clinical pharmacology &amp; toxicology. 113 (1), 25-30 (2013).</li><li>Kauer, J. A., Gibson, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hot+flash:+TRPV+channels+in+the+brain.">Hot flash: TRPV channels in the brain.</a> Trends in neurosciences. 32 (4), 215-224 (2009).</li></ol>

الخطوة الأكثر أهمية في هذه التجارب هو نجاح حقن i.c.v. تقنية الحقن i.c.v. المستخدمة هنا بسيطة جدا ولكنها تتطلب بعض الممارسة. قبل التجارب، ينصح ممارسة مع الأصباغ (على سبيل المثال 0.5٪ trypan الأزرق في المالحة). إذا تم إجراء الحقن بشكل صحيح ، يجب أن تكون علامة الإبرة واضحة على خياطة الإكليل وينبغي أن تكو...

تتلقى الحيوانات العديد من المحفزات الفيزيائية والكيميائية من بيئتها من خلال أجهزة الاستشعار على الأعصاب الطرفية. مستقبلات عابرة المحتملة نوع الفانيليا 1 (TRPV1) هي واحدة من الترسيمترية، قنوات الموجبة غير انتقائية التي تعمل كمستشعرات الحرارة1،2، ومن المعروف تفعيل و / أو تعديل TRPV1 لتكون خطوة رئيسية لالنابية في كل من السياقات العادية والتهابات3. على الرغم من أن نمط التعبير العام مثير للجدل ، فإن التعبير عن TRPV1 قد اقترح أيضًا في المناطق فوق مستوى العمود الفقري ، حيث يشارك في أنشطة مختلفة في الدماغ (بما في ذلك nociception4، thermoregulation5، القلق6، اضطراب فرط النشاط في عجز الانتباه7، والصرع8). وعلاوة على ذلك، فقد اقترح مؤخرا أن اسيتامينوفين، وهو مسكن للألم المستخدمة على نطاق واسع، يتوسط تفعيل TRPV1 المركزية لانتزاع عملها مسكن9،10.
إدارة ناهض TRPV1 الزائدة بما في ذلك الكابسايسين وراتنجيفراتوشين (RTX) إلى الحيوانات يؤدي إلى موت الخلايا العصبية TRPV1 إيجابية وطويلة الأمد إزالة الحساسية لناهضات TRPV111,12. جنبا إلى جنب مع التطبيق المحلي (داخلthecal13،14، intracisternal15،16،17، و intraganglional18) ، وقد وفرت هذه الطريقة الاستئصال الكيميائية وسيلة بديلة للتحقيق في الوظائف الفسيولوجية من TRPV1. لقد أبلغنا مؤخرا أن حقن intracerebrobrotricular (i.c.v.) من RTX يمنع تأثير مسكن من الأسيتامينوفين في الفئران، مما يشير إلى أن الحساسية TRPV1 فوق مستوىانتقائية 19. في هذه المخطوطة، نقدم البروتوكول الدقيق لحقن i.c.v. واختبارات الألم اللاحقة.
الحقن المباشر للأدوية في البطينين في الدماغ يجعل من الممكن لدراسة آثارها المركزية في حين الحد من أي آثار هامشية. إجراء الحقن i.c.v. المقدمة هنا هو تعديل للطريقة التي ذكرتها هالي وماكورميك20. هذه الطريقة بسيطة تنطوي على إدخال إبرة الحقن في البطينين الجانبي من خلال خياطة الإكلين ولا تتطلب أي معدات خاصة أو إجراءات جراحية للتكبيل.
التطبيق المحلي المحيطي لـ TRPV1 يثير إحساسًا بألم حارق والتهاب عصبي. الفئران التي يتم التعامل معها بشكل نظامي مع RTX، و الفأر TRPV1-KO، غير حساسة لهذا التحفيز13. لقد قمنا بالحقن داخل محطة الإذاعة والتلفزيون (RTX) لتأكيد الحفاظ على TRPV1 الطرفية في RTX-i.c.v. الفئران. هذا الأسلوب هو تعديل للتقليدية formalin اختبار21.
وقد أفيد أن الفئران تعامل بشكل نظامي مع RTX و TRPV1- KO الفئران تظهر عتبة طبيعية للمحفزات الميكانيكية11,13,22. هنا نقدم إجراء لاختبار ضغط الذيل لاختبار التغييرات في تأثير مسكن أسيتامينوفين.
كل هذه الإجراءات هي الأرثوذكسية وتنوعا، ويمكن تطبيقها على دراسات الأدوية الأخرى.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="872">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Resiniferatoxin</td>
			<td style="width:191px;">LKT Laboratories</td>
			<td style="width:117px;">R1774</td>
			<td style="width:319px;">used for s.c./i.c.v. pretreatments and the RTX test</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">Acetaminophen</td>
			<td style="width:191px;">IWAKI SEIYAKU</td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td style="width:319px;">gifted from IWAKI SEIYAKU</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">Pentobarbital sodium salt</td>
			<td style="width:191px;">Tokyo Chemical Industry</td>
			<td style="width:117px;">P0776</td>
			<td style="width:319px;">used for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Ethanol (99.5)</td>
			<td style="width:191px;">Wako Pure Chemical Industries</td>
			<td style="width:117px;">057-00456</td>
			<td style="width:319px;">used for dissolving RTX</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monooleate</td>
			<td style="width:191px;">Wako Pure Chemical Industries</td>
			<td style="width:117px;">161-21621</td>
			<td style="width:319px;">used for dissolving RTX</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">25 mL microsyringe</td>
			<td style="width:191px;">Hamilton</td>
			<td style="width:117px;">1702LT</td>
			<td style="width:319px;">used for i.c.v. injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">100 mL microsyringe</td>
			<td style="width:191px;">Hamilton</td>
			<td style="width:117px;">1710LT</td>
			<td style="width:319px;">used for intraplantar injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">26-gauge disposable needle</td>
			<td style="width:191px;">TERUMO</td>
			<td style="width:117px;">NN-2613S</td>
			<td style="width:319px;">used for i.c.v. injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">30-gauge disposable needle</td>
			<td style="width:191px;">NIPRO</td>
			<td style="width:117px;">01134</td>
			<td style="width:319px;">used for intraplantar injection</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Pressure meter</td>
			<td style="width:191px;">Ugo Basile</td>
			<td style="width:117px;">Analgesy-Meter Type 7200</td>
			<td style="width:319px;">used for tail pressure test</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin and pain tests in mice

ومن المعروف أن مستقبلات عابرة من النوع الفانيليا 1 (TRPV1)، قناة الموجبة الحرارية، لتحريك الألم في الأعصاب الطرفية. بالإضافة إلى وظيفتها الطرفية، وقد اقترح أيضا مشاركتها في وظائف الدماغ. وقد عرف Resiniferatoxin (RTX) ، وهو ناهض TRPV1 فائقة القدرة ، للحث على إزالة الحساسية على المدى الطويل من TRPV1 ، وكان هذا إزالة الحساسية نهجا بديلا للتحقيق في الأهمية الفسيولوجية للخلايا التعبير عن TRPV1. هنا نحن وصف بروتوكول لعلاج intracerebrobrotricular (i.c.v.) مع RTX في الفئران. يتم وصف الإجراءات لاختبار nociception لحفز TRPV1 الطرفية (اختبار RTX) والتحفيز الميكانيكي (اختبار ضغط الذيل) ثم اتبع. على الرغم من أن الاستجابات nociceptive من الفئران التي كانت تدار RTX i.c.v. كانت مماثلة لتلك التي من مجموعات التحكم، كانت الفئران RTX-i.c.v.تدار غير حساسة للتأثير مسكن من اسيتامينوفين، مما يشير إلى أن i.c.v. العلاج RTX يمكن أن تحفز إزالة الحساسية TRPV1 فوق مستوى الجنين انتقائية. ويمكن استخدام هذا النموذج الماوس كنظام تجريبي مناسب لدراسة دور TRPV1 في وظيفة الدماغ / فوق مستوى العمود الفقري. ويمكن أيضا تطبيق هذه التقنيات على دراسات الإجراءات المركزية للأدوية الأخرى.

لا تظهر الفئران المعالجة بالـ i.c.v.- أي تشوهات ظاهرة في مظهرها، وأنشطتها العفوية، ووزن الجسم19 ودرجة حرارة الجسم الأساسية (المجموعة المعالجة بالمركبات، 38.4 ± 0.3 درجة مئوية، ن = 6؛ مجموعة معالجة RTX، 38.7 ± 0.2 درجة مئوية، ن = 6).
<strong class="x...

Watch this Scientific Journal Video about Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice at JoVE.com

Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice

وقد اقترح مستقبلات عابرة نوع الفانيليايد المحتملة 1 (TRPV1) في المنطقة فوق مستوى السكان للعب بعض الأدوار في وظيفة الدماغ. هو موضح هنا بروتوكول للحقن intracerebrobrotricular من resiniferatoxin لتجاوز مستوى الحساسية TRPV1 في الفئران. كما يتم عرض إجراءات لبعض اختبارات الألم.

العلاج البطيني داخل المنظار مع Resiniferatoxin واختبارات الألم في الفئران

The transient receptor potential vanilloid type 1 (TRPV1), a thermosensitive cation channel, is known to trigger pain in the peripheral nerves. In ...

والهدف العام من هذا المعالجة المسبقة هو توليد الفئران وأن قنوات TRPV1 غير متحسسة في المناطق فوق مستوى العالم. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الأدوية العصبية. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن إزالة الحساسية من TRPV1 الانتقائية فوق اللبونية يمكن أن تُستحث بطريقة بسيطة للغاية.لبدء هذا الإجراء، تخدير الماوس مع pentobarbital intraperitoneally الصوديوم والتحقق من فقدان رد الفعل الصحيح. لعلاج تحت الجلد، حقن RTX في 20 ميكروغرام في المليلتر في الجزء الخلفي من الرقبة في حجم 0.1 ملليلتر لكل 10 غرام من وزن الجسم. بالنسبة لمجموعة التحكم، قم بحقن السيارة بنفس الطريقة.تمرير إبرة قياس 27 المتاح من خلال أنبوب معدني لفضح 3 إلى 3.5 ملليمتر طرف الإبرة. ثم عقد العظام squamosal من الفأرة بحزم مع الأصابع. نقل الإبرة بشكلٍ عرضي على فروة الرأس والعثور على خياطة القوس حيث يتم توصيل طرف الإبرة على الغرزة.نقل طرف حوالي ملليمتر واحد إلى اليمين، ثم نقل طرف rostrally للعثور على خياطة التاجية. بعد ذلك، أدخل الإبرة ببطء وعموديا. حقن حل RTX على مدى 10 ثانية وعقد عليه لمدة 10 ثانية أخرى بعد ذلك.في وقت لاحق، سحب الإبرة ببطء والعودة إلى قفصها الرئيسية. بعد أسبوع واحد من حقن RTX، قبل 60 دقيقة على الأقل من الاختبار، قم بنقل الماوس إلى غرفة الاختبار. قبل 30 دقيقة على الأقل من الاختبار، ضع الماوس في قفص زجاج شبكي للسماح لها بالتأقلم مع البيئة.ثم قبل 20 دقيقة من الاختبار، وإدارة الأسيتامينوفين في 300 ملليغرام للكيلوغرام الواحد إلى intraperitoneally الماوس. عقد الماوس فضفاضة في كيس من القماش الصغيرة وإدراج إبرة قياس 30 في كعب مخلب الخلفي الأيمن. تقدم الإبرة تحت الجلد إلى قرب وسادة المشي وحقن 20 ميكرولتر من حل RTX في 0.05 ميكروغرام لكل ملليلتر.في وقت لاحق، وقياس فترة لعق والعض السلوك في منطقة جلابرووس من مخلب المتضررة في كل كتلة لمدة خمس دقائق. بعد أسبوع واحد من حقن RTX، قم بنقل الماوس إلى غرفة الاختبار. ضع الماوس في قفص زجاج شبكي.ضع علامة على البقع على 1.5 و 2.5 سنتيمتر من قاعدة الذيل. المقبل، عقد الماوس فضفاضة في كيس من القماش الصغيرة وتطبيق الضغط على البقع مع مسبار حادة. يرجى ملاحظة أن يتم فرض ضغط قطع من 250 غرام لتجنب تلف الأنسجة.تحديد الضغط المطلوب لانتزاع سلوك الهروب وحساب عتبة nociceptive عن طريق متوسط الضغط المحدد في البقعتين. كرر الإجراءات كل 15 دقيقة. بعد الحصول على خط الأساس، وإدارة الأسيتامينوفين في 300 ميكروغرام لكل كيلوغرام إلى intraperitoneally الماوس، ثم كرر اختبار ضغط الذيل كل 15 دقيقة حتى تصل إلى 90 دقيقة.هذان الرقمان تظهران استجابة فئران SC أو ICV المعالجة لحقن داخل الزرع RTX. كان سلوك اللعق والعض للفئران المعالجة بالمركبات رائعًا في الدقائق العشر الأولى. على الرغم من أن الفئران SC المعالجة مسبقًا لم تظهر سلوك اللعق والعض على الإطلاق ، إلا أن الفئران المعالجة المسبقة لـ ICV استجابت عادة لحقن البلونتار من RTX.وعلاوة على ذلك، إدارة داخل الصفاون من الأسيتامينوفين خفض لعق والعض السلوك من الفئران ICV معالجة مركبة، ولكن ليس في RTX ICV فئران المعالجة. يُظهر هذا الرسم البياني التأثيرات المُهَسّنة لاسيتامينوفين عند 300 ميكروغرام لكل كيلوغرام في اختبار ضغط الذيل. قلل الأسيتامينوفين من الاستجابة الناظرية للفئران المعالجة مسبقًا للمركبة في كلا الاختبارين ، ولكن تم تثبيط الآثار مسكن الأسيتامينوفين في الفئران التي تم معالجة ICV مسبقًا مع RTX.يتقن مرة واحدة, هذا الحقن ICV تقنية يمكن تطبيقها على أدوية أخرى. لا ننسى أن العمل مع Resiniferatoxin يمكن أن تكون خطرة للغاية وتأكد من استخدام قفازات مطاطية ونظارات للحماية عند التعامل معها.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

والشعيرية والتعامل مع الاختبارات Capellini : تدابير كمية بسيطة من وظيفة forepaw حاذق في الجرذان والفئران

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended ...

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

قياس العمود الفقري قبل المشبكي في الفئران عن طريق تثبيط الظهرية جذر تسجيل المحتملة<em&gt; في فيفو</em

Presynaptic inhibition is one of the most powerful inhibitory mechanisms in the spinal cord. The underlying physiological mechanism is a depolarization of ...

Intracerebroventricular Viral Injection of the Neonatal Mouse Brain for Persistent and Widespread Neuronal Transduction

حقن الفيروسي Intracerebroventricular من حديثي الولادة ماوس الدماغ للاستمرار وانتشار تنبيغ العصبية

With the pace of scientific advancement accelerating rapidly, new methods are needed for experimental neuroscience to quickly and easily manipulate gene ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

طريقة بسيطة وغير مكلفة لتحديد الباردة الحساسية والتكيف في الفئران

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-&#946; Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-ÃƒÅ½Ã‚Â² Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

حقن Intracerebroventricular من الببتيدات اميلويد β في الفئران العادية للحث تماما العجز الإدراكي الزهايمر تشبه

Amyloid-&#946; (A&#946;) is a major pathological mediator of both familial and sporadic Alzheimer's disease (AD). In the brains of AD patients, ...

Intracranial Pharmacotherapy and Pain Assays in Rodents

العلاج الصيدلاني داخل الجمجمة وفحوصات الألم في القوارض

Pain is a salient sensory experience with affective and cognitive dimensions. However, central mechanisms for pain remain poorly understood, hindering the ...

Comprehensive Autopsy Program for Individuals with Multiple Sclerosis

برنامج التشريح الشامل للأفراد الذين يعانون من التصلب المتعدد

We describe a rapid tissue donation program for individuals with multiple sclerosis (MS) that requires scientists and technicians to be on-call 24/7, 365 ...

Burn Injury-Induced Pain and Depression-Like Behavior in Mice

حرق الألم الناجم عن الإصابة والسلوك الشبيه بالاكتئاب في الفئران

Scalding water is the most common cause of burn injury in both elderly and young populations. It is one of the major clinical challenges because of the ...

Dural Stimulation and Periorbital von Frey Testing in Mice As a Preclinical Model of Headache

تحفيز الجافية واختبار فون فراي حول الحجاج في الفئران كنموذج قبل سريري للصداع

The cranial meninges, comprised of the dura mater, arachnoid, and pia mater, are thought to primarily serve structural functions for the nervous system.  ...

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

فحص ميكانيكي لتجنب الصراع لقياس سلوك الألم في الفئران

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...