Name: intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin and pain tests in mice
Uploaded: 2020-09-02T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice at JoVE.com

Alle de eksperimentelle protokoller, der anvendes her blev godkendt af Animal Care and Use Committee of Musashino University. Mandlige ddY mus (SLC, Shizuoka, Japan) blev holdt i mindst 7 dage under en 12-h lys / mørk cyklus før eksperimenter med vand og mad ad libitum. 5- eller 6 uger gamle mus blev brugt til forsøgene.
1. Fremstilling af narkotika
<ol><li>
Rtx BEMÆRK: Alkoholisk RTX-opløsning kan forårsage alvorlige forbrændinger af huden og øjenskader. Sørg fo...

<ol>
	<li>Cavanaugh, D. J., Chesler, A. T., Braz, J. M., Shah, N. M., Julius, D., Basbaum, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restriction+of+transient+receptor+potential+vanilloid-1+to+the+peptidergic+subset+of+primary+afferent+neurons+follows+its+developmental+downregulation+in+nonpeptidergic+neurons.">Restriction of transient receptor potential vanilloid-1 to the peptidergic subset of primary afferent neurons follows its developmental downregulation in nonpeptidergic neurons.</a> J Neurosci. 31 (28), 10119-10127 (2011).</li><li>Caterina, M. J., Schumacher, M. A., Tominaga, M., Rosen, T. A., Levine, J. D., Julius, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+capsaicin+receptor:+a+heat-activated+ion+channel+in+the+pain+pathway.">The capsaicin receptor: a heat-activated ion channel in the pain pathway.</a> Nature. 389 (6653), 816-824 (1997).</li><li>Caterina, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+nociception+and+pain+sensation+in+mice+lacking+the+capsaicin+receptor.">Impaired nociception and pain sensation in mice lacking the capsaicin receptor.</a> Science. 288 (5464), 306-313 (2000).</li><li>Starowicz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tonic+endovanilloid+facilitation+of+glutamate+release+in+brainstem+descending+antinociceptive+pathways.">Tonic endovanilloid facilitation of glutamate release in brainstem descending antinociceptive pathways.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (50), 13739-13749 (2007).</li><li>Gavva, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vanilloid+receptor+TRPV1+is+tonically+activated+in+vivo+and+involved+in+body+temperature+regulation.">The vanilloid receptor TRPV1 is tonically activated in vivo and involved in body temperature regulation.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (13), 3366-3374 (2007).</li><li>Marsch, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+anxiety,+conditioned+fear,+and+hippocampal+long-term+potentiation+in+transient+receptor+potential+vanilloid+type+1+receptor-deficient+mice.">Reduced anxiety, conditioned fear, and hippocampal long-term potentiation in transient receptor potential vanilloid type 1 receptor-deficient mice.</a> Journal of Neuroscience. 27 (4), 832-839 (2007).</li><li>Tzavara, E. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocannabinoids+activate+transient+receptor+potential+vanilloid+1+receptors+to+reduce+hyperdopaminergia-related+hyperactivity:+Therapeutic+implications.">Endocannabinoids activate transient receptor potential vanilloid 1 receptors to reduce hyperdopaminergia-related hyperactivity: Therapeutic implications.</a> Biological Psychiatry. 59 (6), 508-515 (2006).</li><li>Naz&#305;ro&#287;lu, M., &#214;vey, &. #. 3. 0. 4. ;. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+apoptosis+and+calcium+accumulation+through+TRPV1+channels+in+neurobiology+of+epilepsy.">Involvement of apoptosis and calcium accumulation through TRPV1 channels in neurobiology of epilepsy.</a> Neuroscience. 293, 55-66 (2015).</li><li>Mallet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPV1+in+brain+is+involved+in+acetaminophen-induced+antinociception.">TRPV1 in brain is involved in acetaminophen-induced antinociception.</a> PloS one. 5 (9), 1-11 (2010).</li><li>Barri&#232;re, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+amide+hydrolase-dependent+generation+of+antinociceptive+drug+metabolites+acting+on+TRPV1+in+the+brain.">Fatty acid amide hydrolase-dependent generation of antinociceptive drug metabolites acting on TRPV1 in the brain.</a> PloS one. 8 (8), e70690 (2013).</li><li>Jancs&#243;, G., Kiraly, E., Jancs&#243;-G&#225;bor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologically+induced+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+neurones.">Pharmacologically induced selective degeneration of chemosensitive primary sensory neurones.</a> Nature. 270 (5639), 741-743 (1977).</li><li>Szallasi, A., Blumberg, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vanilloid+receptor+loss+in+rat+sensory+ganglia+associated+with+long+term+desensitization+to+resiniferatoxin.">Vanilloid receptor loss in rat sensory ganglia associated with long term desensitization to resiniferatoxin.</a> Neuroscience Letters. 140 (1), 51-54 (1992).</li><li>Cavanaugh, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+subsets+of+unmyelinated+primary+sensory+fibers+mediate+behavioral+responses+to+noxious+thermal+and+mechanical+stimuli.">Distinct subsets of unmyelinated primary sensory fibers mediate behavioral responses to noxious thermal and mechanical stimuli.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (22), 9075-9080 (2009).</li><li>Jeffry, J. A., Yu, S. Q., Sikand, P., Parihar, A., Evans, M. S., Premkumar, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+targeting+of+TRPV1+expressing+sensory+nerve+terminals+in+the+spinal+cord+for+long+lasting+analgesia.">Selective targeting of TRPV1 expressing sensory nerve terminals in the spinal cord for long lasting analgesia.</a> PLoS ONE. 4 (9), e7021 (2009).</li><li>Jancs&#243;, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracisternal+capsaicin:+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+afferents+in+the+adult+rat.">Intracisternal capsaicin: selective degeneration of chemosensitive primary sensory afferents in the adult rat.</a> Neuroscience letters. 27 (1), 41-45 (1981).</li><li>Gamse, R., Saria, A., Lundberg, J. M., Theodorsson-Norheim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+neurochemical+changes+after+intracisternal+capsaicin+treatment+of+the+guinea+pig.">Behavioral and neurochemical changes after intracisternal capsaicin treatment of the guinea pig.</a> Neuroscience Letters. 64 (3), 287-292 (1986).</li><li>Neubert, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+mouse+orofacial+pain+and+the+effects+of+lesioning+TRPV1-expressing+neurons+on+operant+behavior.">Characterization of mouse orofacial pain and the effects of lesioning TRPV1-expressing neurons on operant behavior.</a> Molecular pain. 4, 43 (2008).</li><li>Karai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+vanilloid+receptor+1-expressing+primary+afferent+neurons+for+pain+control.">Deletion of vanilloid receptor 1-expressing primary afferent neurons for pain control.</a> The Journal of clinical investigation. 113 (9), 1344-1352 (2004).</li><li>Fukushima, A., Mamada, K., Iimura, A., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supraspinal-selective+TRPV1+desensitization+induced+by+intracerebroventricular+treatment+with+resiniferatoxin.">Supraspinal-selective TRPV1 desensitization induced by intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin.</a> Scientific reports. 7 (1), 12452 (2017).</li><li>Haley, T. J., McCormick, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+effects+produced+by+intracerebral+injection+of+drugs+in+the+conscious+mouse.">Pharmacological effects produced by intracerebral injection of drugs in the conscious mouse.</a> British journal of pharmacology and chemotherapy. 12 (1), 12-15 (1957).</li><li>Tj&#248;lsen, A., Berge, O. G., Hunskaar, S., Rosland, J. H., Hole, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+formalin+test:+an+evaluation+of+the+method.">The formalin test: an evaluation of the method.</a> Pain. 51 (1), 5-17 (1992).</li><li>Ohsawa, M., Miyabe, Y., Katsu, H., Yamamoto, S., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+sensory+nerve+fiber+responsible+for+lysophosphatidic+acid-induced+allodynia+in+mice.">Identification of the sensory nerve fiber responsible for lysophosphatidic acid-induced allodynia in mice.</a> Neuroscience. 247, 65-74 (2013).</li><li>Tanabe, M., Tokuda, Y., Takasu, K., Ono, K., Honda, M., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+synthetic+TRH+analogue+taltirelin+exerts+modality-specific+antinociceptive+effects+via+distinct+descending+monoaminergic+systems.">The synthetic TRH analogue taltirelin exerts modality-specific antinociceptive effects via distinct descending monoaminergic systems.</a> British journal of pharmacology. 150 (4), 403-414 (2007).</li><li>Ono, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+in+sympathetic+nerve+activity+as+a+possible+mechanism+for+the+hypothermic+effect+of+oseltamivir,+an+anti-influenza+virus+drug,+in+normal+mice.">Reduction in sympathetic nerve activity as a possible mechanism for the hypothermic effect of oseltamivir, an anti-influenza virus drug, in normal mice.</a> Basic &amp; clinical pharmacology &amp; toxicology. 113 (1), 25-30 (2013).</li><li>Kauer, J. A., Gibson, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hot+flash:+TRPV+channels+in+the+brain.">Hot flash: TRPV channels in the brain.</a> Trends in neurosciences. 32 (4), 215-224 (2009).</li></ol>

Det mest kritiske skridt i disse eksperimenter er succesen af i.c.v. injektion. Den i.c.v. injektion teknik, der anvendes her er ganske enkel, men kræver nogle praksis. Før forsøg anbefales praksis med farvestoffer (f.eks. 0,5 % trypanblå i saltvand). Hvis injektionen udføres korrekt, skal der være et nålemærke på koronalsuturen, og det injicerede farvestof skal være til stede i den kontralaterale ventrikel og den tredje ventrikel. Desuden bør tvungen indsættelse undgås under injektionen. Hvis nålespidsen e...

Dyr modtager forskellige fysiske og kemiske stimuli fra deres miljø gennem sensorer på de perifere nerver. Den forbigående receptor potentielle vanilloid type 1 (TRPV1) er en af de termofølsomme, ikke-selektive kationkanaler, der fungerer somvarmesensorer 1,2, og aktivering og / eller graduering af TRPV1 er kendt for at være et vigtigt skridt for nociception i både normale og inflammatoriske sammenhænge3. Selv om det overordnede udtryk mønster er kontroversielt, udtryk for TRPV1 er også blevet foreslået i supraspinal regioner, der er involveret i forskellige hjerneaktiviteter (herunder nociception4, termoregulering5, angst6, opmærksomhed underskud hyperaktivitet lidelse7, og epilepsi8). Desuden er det for nylig blevet foreslået, at acetaminophen, en udbredt smertestillende, formidler aktivering af centrale TRPV1 at fremkalde sin smertestillende virkning9,10.
Administration af overskydende TRPV1 agonist herunder capsaicin og harpiksiniferatoxin (RTX) til dyr fører til død TRPV1-positive neuroner og langvarig desensibilisering til TRPV1 agonister11,12. Kombineret med den lokale anvendelse (intrathecal13,14, intracisternal15,16,,17, og intraganglional18),denne kemiske ablation tilgang har givet en alternativ måde at undersøge de fysiologiske funktioner TRPV1. Vi har for nylig rapporteret, at intracerebroventricular (i.c.v.) injektion af RTX hæmmer den smertestillende virkning af acetaminophen i mus, hvilket tyder på supraspinal-selektiv TRPV1 desensibilisering19. I dette manuskript præsenterer vi den præcise protokol for i.c.v. injektion og efterfølgende smertetest.
Direkte injektion af lægemidler i hjertekamrene i hjernen gør det muligt at studere deres centrale virkninger, mens minimalisering eventuelle perifere virkninger. Den i.c.v. injektion procedure præsenteret her er en ændring af den metode, der indberettes af Haley og McCormick20. Denne metode er enkel involverer indsættelse af en injektion nål i laterale ventrikler gennem koronale sutur og kræver ikke noget særligt udstyr eller kirurgiske procedurer for cannulation.
Perifer lokal anvendelse af TRPV1 agonister fremkalder en brændende smerte fornemmelse og neurogen inflammation. Mus, der er systemisk behandlet med RTX, og TRPV1-KO mus, er ufølsomme over for denne stimulation13. Vi har udført intraplantar injektion af RTX (RTX test) for at bekræfte bevarelsen af perifere TRPV1 i RTX-i.c.v. Mus. Denne metode er en ændring af den konventionelle formalin test21.
Det er blevet rapporteret, at mus systemisk behandlet med RTX og TRPV1-KO mus viser en normal tærskel til mekaniske stimuli11,13,22. Her præsenterer vi en procedure for haletryktest til test af ændringer i acetaminophens smertestillende virkning.
Alle disse procedurer er ortodokse og alsidige, og kan anvendes til undersøgelser af andre lægemidler.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="872">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Resiniferatoxin</td>
			<td style="width:191px;">LKT Laboratories</td>
			<td style="width:117px;">R1774</td>
			<td style="width:319px;">used for s.c./i.c.v. pretreatments and the RTX test</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">Acetaminophen</td>
			<td style="width:191px;">IWAKI SEIYAKU</td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td style="width:319px;">gifted from IWAKI SEIYAKU</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">Pentobarbital sodium salt</td>
			<td style="width:191px;">Tokyo Chemical Industry</td>
			<td style="width:117px;">P0776</td>
			<td style="width:319px;">used for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Ethanol (99.5)</td>
			<td style="width:191px;">Wako Pure Chemical Industries</td>
			<td style="width:117px;">057-00456</td>
			<td style="width:319px;">used for dissolving RTX</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monooleate</td>
			<td style="width:191px;">Wako Pure Chemical Industries</td>
			<td style="width:117px;">161-21621</td>
			<td style="width:319px;">used for dissolving RTX</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">25 mL microsyringe</td>
			<td style="width:191px;">Hamilton</td>
			<td style="width:117px;">1702LT</td>
			<td style="width:319px;">used for i.c.v. injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">100 mL microsyringe</td>
			<td style="width:191px;">Hamilton</td>
			<td style="width:117px;">1710LT</td>
			<td style="width:319px;">used for intraplantar injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">26-gauge disposable needle</td>
			<td style="width:191px;">TERUMO</td>
			<td style="width:117px;">NN-2613S</td>
			<td style="width:319px;">used for i.c.v. injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">30-gauge disposable needle</td>
			<td style="width:191px;">NIPRO</td>
			<td style="width:117px;">01134</td>
			<td style="width:319px;">used for intraplantar injection</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Pressure meter</td>
			<td style="width:191px;">Ugo Basile</td>
			<td style="width:117px;">Analgesy-Meter Type 7200</td>
			<td style="width:319px;">used for tail pressure test</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin and pain tests in mice

Den forbigående receptor potentielle vanilloid type 1 (TRPV1), en termofølsom kation kanal, er kendt for at udløse smerter i de perifere nerver. Ud over sin perifere funktion, dens engagement i hjernens funktioner er også blevet foreslået. Harpiksiniferatoxin (RTX), en ultrapotent TRPV1 agonist, har været kendt for at fremkalde langsigtet desensibilisering af TRPV1, og denne desensibilisering har været en alternativ metode til at undersøge den fysiologiske relevans af TRPV1-udtrykkende celler. Her beskriver vi en protokol for intracerebroventricular (i.c.v.) behandling med RTX hos mus. Procedurer er beskrevet for test nociception til perifer TRPV1 stimulation (RTX test) og mekanisk stimulation (hale tryktest) derefter følge. Selv om de nociceptive reaktioner fra mus, der var blevet administreret RTX i.c.v. var sammenlignelige med de kontrolgrupper, RTX-i.c.v.-administreret mus var ufølsomme over for den smertestillende virkning af acetaminophen, hvilket tyder på, at i.c.v. RTX behandling kan fremkalde supraspinal-selektiv TRPV1 desensibilisering. Denne musemodel kan bruges som et praktisk eksperimentelt system til at studere TRPV1's rolle i hjernen/supraspinal funktion. Disse teknikker kan også anvendes på undersøgelser af andre stoffers centrale handlinger.

De i.c.v.-behandlede mus udviser ingen synlige abnormiteter i deres udseende, spontane aktiviteter,kropsvægt 19 og kernekroptemperatur (køretøjsbehandlet gruppe, 38,4 ± 0,3 °C, n = 6; RTX-behandlet gruppe, 38,7 ± 0,2 °C, n = 6).
Figur 2A-B viser, at s.c.- eller i.c.v.-behandlede mus reagerer på intraplantar-injektionen af RTX. Den slikke / bidende adf...

Watch this Scientific Journal Video about Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice at JoVE.com

Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice

Den forbigående receptor potentielle vanilloid type 1 (TRPV1) i supraspinal regionen er blevet foreslået at spille nogle roller i hjernefunktionen. Beskrevet her er en protokol for intracerebroventricular injektion af harpiksiiferatoxin for supraspinal TRPV1 desensibilisering i mus. Procedurer for nogle smerte test er også præsenteret.

Intracerebroventricular behandling med resiniferatoxin og smertetest hos mus

The transient receptor potential vanilloid type 1 (TRPV1), a thermosensitive cation channel, is known to trigger pain in the peripheral nerves. In ...

Det overordnede mål med denne forbehandling er at generere mus, og at TRPV1 kanaler er desensibiliseret på supraspinal regioner. Denne metode kan hjælpe med at besvare centrale spørgsmål i det neurofarmumatiske område. Den største fordel ved denne teknik er, at supraspinal selektiv TRPV1 desensibilisering kan induceres ved en ganske enkel måde.For at begynde denne procedure, bedøve en mus med pentobarbital natrium intraperitoneally og kontrollere for tab af rette refleks. Til subkutan behandling injiceres RTX ved 20 mikrogram pr. milliliter i nakkens bagdel ved et volumen på 0,1 milliliter pr. 10 gram kropsvægt. For kontrolgruppen skal køretøjet injiceres på samme måde.Før en engangsnål på 27 måler gennem et metalrør for at udsætte 3 til 3,5 millimeter spidsen af nålen. Hold derefter den squamosale knogler af musen fast med fingrene. Flyt nålen sidelæns på hovedbunden og finde sagittal sutur som nålen spidsen er hooked på suturen.Flyt spidsen omkring en millimeter til højre, og flyt derefter spidsen rostrally at finde koronale sutur. Derefter sættes nålen langsomt og lodret. Indsprøjt RTX-opløsningen over 10 sekunder, og hold den nede i yderligere 10 sekunder bagefter.Træk derefter nålen langsomt tilbage og vend musen tilbage til sit hjembur. En uge efter RTX-injektionen overføres musen mindst 60 minutter før testen til testrummet. Mindst 30 minutter før testen skal musen sættes i et plexiglasbur, så den kan vænne sig til miljøet.Derefter 20 minutter før testen, administrere acetaminophen på 300 mg / kg til musen intraperitoneally. Hold musen løst i en lille klud pose og indsætte en 30 gauge nål i hælen på højre bagpote. Før nålen subkutant i nærheden af gåpuden og indsprøjt 20 mikroliter RTX-opløsning ved 0,05 mikrogram pr. milliliter.Efterfølgende måle perioden med slikke og bidende adfærd i glabrous regionen af de berørte pote i hver fem minutters blok. En uge efter RTX injektion, overføre musen til testrummet. Placer musen i en plexiglas bur.Marker pletterne på 1,5 og 2,5 centimeter fra bunden af halen. Hold derefter musen løst i en lille kludpose og tryk på pletterne med en stump sonde. Bemærk, at der pålægges et afskæringstryk på 250 gram for at undgå vævsskader.Bestem det tryk, der kræves for at fremkalde flugt adfærd og beregne nociceptive tærskel ved gennemsnit det tryk, der bestemmes på de to steder. Gentag procedurerne hvert 15. Efter at have opnået baseline, administrere acetaminophen på 300 mikrogram pr kg til musen intraperitoneally, derefter gentage halen tryktest hver 15 minutter, indtil den når 90 minutter.Disse to tal viser, at SC- eller ICV-behandlede mus er lydhør over for intraplantar-injektionen af RTX. Den slikke og bidende adfærd køretøj-behandlede mus var bemærkelsesværdig i de første 10 minutter. Selv om SC forbehandlede mus ikke viste slikke og bidende adfærd på alle, ICV forbehandlede mus normalt reageret på plantar injektion af RTX.Desuden reducerede intraperitoneal administration af acetaminophen den slikkende og bidende adfærd af køretøjs ICV behandlede mus, men ikke i RTX ICV behandlede mus. Denne graf viser de smertestillende virkninger af acetaminophen ved 300 mikrogram pr. kg i haletryktesten. Acetaminophen reducerede den nociceptive respons af forbehandlede mus i begge tests, men de smertestillende virkninger af acetaminophen blev hæmmet hos mus, der blev forbehandlet ICV med RTX.Når mestrer, denne ICV injektion teknik kan anvendes til andre lægemidler. Glem ikke, at arbejde med Resiniferatoxin kan være yderst farligt, og sørg for at bruge gummihandsker og briller til beskyttelse ved håndtering.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended ...

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

Måling Spinal Præsynaptiske Hæmning i mus ved dorsale Potentiel optagelse<em&gt; In Vivo</em

Presynaptic inhibition is one of the most powerful inhibitory mechanisms in the spinal cord. The underlying physiological mechanism is a depolarization of ...

Intracerebroventricular Viral Injection of the Neonatal Mouse Brain for Persistent and Widespread Neuronal Transduction

Intracerebroventrikulær Viral Injektion af Neonatal Mouse Hjerne for Vedvarende og Udbredt Neuronal transduktion

With the pace of scientific advancement accelerating rapidly, new methods are needed for experimental neuroscience to quickly and easily manipulate gene ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

En enkel og billig metode til bestemmelse Kolde Følsomhed og tilpasning i mus

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-&#946; Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-ÃƒÅ½Ã‚Â² Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

Intracerebroventrikulær Injektion af amyloid-p-peptider i normale mus til Akut Fremkald Alzheimer-lignende kognitive mangler

Amyloid-&#946; (A&#946;) is a major pathological mediator of both familial and sporadic Alzheimer's disease (AD). In the brains of AD patients, ...

Intracranial Pharmacotherapy and Pain Assays in Rodents

Intrakraniel Farmakoterapi og smerte Assays i gnavere

Pain is a salient sensory experience with affective and cognitive dimensions. However, central mechanisms for pain remain poorly understood, hindering the ...

Comprehensive Autopsy Program for Individuals with Multiple Sclerosis

Omfattende obduktions program for personer med multipel sklerose

We describe a rapid tissue donation program for individuals with multiple sclerosis (MS) that requires scientists and technicians to be on-call 24/7, 365 ...

Burn Injury-Induced Pain and Depression-Like Behavior in Mice

Forbrændingsskade-induceret smerte og depression-lignende adfærd hos mus

Scalding water is the most common cause of burn injury in both elderly and young populations. It is one of the major clinical challenges because of the ...

Dural Stimulation and Periorbital von Frey Testing in Mice As a Preclinical Model of Headache

Dural stimulering og periorbital von Frey test hos mus som en præklinisk model af hovedpine

The cranial meninges, comprised of the dura mater, arachnoid, and pia mater, are thought to primarily serve structural functions for the nervous system.  ...

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

Mekanisk konflikt-undgåelsesassay til måling af smerteadfærd hos mus

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...