Name: intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin and pain tests in mice
Uploaded: 2020-09-02T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice at JoVE.com

אף לא אחד .

כל הפרוטוקולים הניסיוניים המשמשים כאן אושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים ושימוש של אוניברסיטת Musashino. עכברי ddY זכר (SLC, Shizuoka, יפן) הוחזקו לפחות 7 ימים תחת מחזור אור / כהה 12 שעות לפני ניסויים עם מים ומזון אד libitum. עכברים בני 5 או 6 שבועות שימשו לניסויים.
1. הכנת סמים
<ol><li>
RTX מח?...

<ol>
	<li>Cavanaugh, D. J., Chesler, A. T., Braz, J. M., Shah, N. M., Julius, D., Basbaum, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restriction+of+transient+receptor+potential+vanilloid-1+to+the+peptidergic+subset+of+primary+afferent+neurons+follows+its+developmental+downregulation+in+nonpeptidergic+neurons.">Restriction of transient receptor potential vanilloid-1 to the peptidergic subset of primary afferent neurons follows its developmental downregulation in nonpeptidergic neurons.</a> J Neurosci. 31 (28), 10119-10127 (2011).</li><li>Caterina, M. J., Schumacher, M. A., Tominaga, M., Rosen, T. A., Levine, J. D., Julius, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+capsaicin+receptor:+a+heat-activated+ion+channel+in+the+pain+pathway.">The capsaicin receptor: a heat-activated ion channel in the pain pathway.</a> Nature. 389 (6653), 816-824 (1997).</li><li>Caterina, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+nociception+and+pain+sensation+in+mice+lacking+the+capsaicin+receptor.">Impaired nociception and pain sensation in mice lacking the capsaicin receptor.</a> Science. 288 (5464), 306-313 (2000).</li><li>Starowicz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tonic+endovanilloid+facilitation+of+glutamate+release+in+brainstem+descending+antinociceptive+pathways.">Tonic endovanilloid facilitation of glutamate release in brainstem descending antinociceptive pathways.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (50), 13739-13749 (2007).</li><li>Gavva, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vanilloid+receptor+TRPV1+is+tonically+activated+in+vivo+and+involved+in+body+temperature+regulation.">The vanilloid receptor TRPV1 is tonically activated in vivo and involved in body temperature regulation.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (13), 3366-3374 (2007).</li><li>Marsch, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+anxiety,+conditioned+fear,+and+hippocampal+long-term+potentiation+in+transient+receptor+potential+vanilloid+type+1+receptor-deficient+mice.">Reduced anxiety, conditioned fear, and hippocampal long-term potentiation in transient receptor potential vanilloid type 1 receptor-deficient mice.</a> Journal of Neuroscience. 27 (4), 832-839 (2007).</li><li>Tzavara, E. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocannabinoids+activate+transient+receptor+potential+vanilloid+1+receptors+to+reduce+hyperdopaminergia-related+hyperactivity:+Therapeutic+implications.">Endocannabinoids activate transient receptor potential vanilloid 1 receptors to reduce hyperdopaminergia-related hyperactivity: Therapeutic implications.</a> Biological Psychiatry. 59 (6), 508-515 (2006).</li><li>Naz&#305;ro&#287;lu, M., &#214;vey, &. #. 3. 0. 4. ;. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+apoptosis+and+calcium+accumulation+through+TRPV1+channels+in+neurobiology+of+epilepsy.">Involvement of apoptosis and calcium accumulation through TRPV1 channels in neurobiology of epilepsy.</a> Neuroscience. 293, 55-66 (2015).</li><li>Mallet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPV1+in+brain+is+involved+in+acetaminophen-induced+antinociception.">TRPV1 in brain is involved in acetaminophen-induced antinociception.</a> PloS one. 5 (9), 1-11 (2010).</li><li>Barri&#232;re, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+amide+hydrolase-dependent+generation+of+antinociceptive+drug+metabolites+acting+on+TRPV1+in+the+brain.">Fatty acid amide hydrolase-dependent generation of antinociceptive drug metabolites acting on TRPV1 in the brain.</a> PloS one. 8 (8), e70690 (2013).</li><li>Jancs&#243;, G., Kiraly, E., Jancs&#243;-G&#225;bor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologically+induced+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+neurones.">Pharmacologically induced selective degeneration of chemosensitive primary sensory neurones.</a> Nature. 270 (5639), 741-743 (1977).</li><li>Szallasi, A., Blumberg, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vanilloid+receptor+loss+in+rat+sensory+ganglia+associated+with+long+term+desensitization+to+resiniferatoxin.">Vanilloid receptor loss in rat sensory ganglia associated with long term desensitization to resiniferatoxin.</a> Neuroscience Letters. 140 (1), 51-54 (1992).</li><li>Cavanaugh, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+subsets+of+unmyelinated+primary+sensory+fibers+mediate+behavioral+responses+to+noxious+thermal+and+mechanical+stimuli.">Distinct subsets of unmyelinated primary sensory fibers mediate behavioral responses to noxious thermal and mechanical stimuli.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (22), 9075-9080 (2009).</li><li>Jeffry, J. A., Yu, S. Q., Sikand, P., Parihar, A., Evans, M. S., Premkumar, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+targeting+of+TRPV1+expressing+sensory+nerve+terminals+in+the+spinal+cord+for+long+lasting+analgesia.">Selective targeting of TRPV1 expressing sensory nerve terminals in the spinal cord for long lasting analgesia.</a> PLoS ONE. 4 (9), e7021 (2009).</li><li>Jancs&#243;, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracisternal+capsaicin:+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+afferents+in+the+adult+rat.">Intracisternal capsaicin: selective degeneration of chemosensitive primary sensory afferents in the adult rat.</a> Neuroscience letters. 27 (1), 41-45 (1981).</li><li>Gamse, R., Saria, A., Lundberg, J. M., Theodorsson-Norheim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+neurochemical+changes+after+intracisternal+capsaicin+treatment+of+the+guinea+pig.">Behavioral and neurochemical changes after intracisternal capsaicin treatment of the guinea pig.</a> Neuroscience Letters. 64 (3), 287-292 (1986).</li><li>Neubert, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+mouse+orofacial+pain+and+the+effects+of+lesioning+TRPV1-expressing+neurons+on+operant+behavior.">Characterization of mouse orofacial pain and the effects of lesioning TRPV1-expressing neurons on operant behavior.</a> Molecular pain. 4, 43 (2008).</li><li>Karai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+vanilloid+receptor+1-expressing+primary+afferent+neurons+for+pain+control.">Deletion of vanilloid receptor 1-expressing primary afferent neurons for pain control.</a> The Journal of clinical investigation. 113 (9), 1344-1352 (2004).</li><li>Fukushima, A., Mamada, K., Iimura, A., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supraspinal-selective+TRPV1+desensitization+induced+by+intracerebroventricular+treatment+with+resiniferatoxin.">Supraspinal-selective TRPV1 desensitization induced by intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin.</a> Scientific reports. 7 (1), 12452 (2017).</li><li>Haley, T. J., McCormick, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+effects+produced+by+intracerebral+injection+of+drugs+in+the+conscious+mouse.">Pharmacological effects produced by intracerebral injection of drugs in the conscious mouse.</a> British journal of pharmacology and chemotherapy. 12 (1), 12-15 (1957).</li><li>Tj&#248;lsen, A., Berge, O. G., Hunskaar, S., Rosland, J. H., Hole, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+formalin+test:+an+evaluation+of+the+method.">The formalin test: an evaluation of the method.</a> Pain. 51 (1), 5-17 (1992).</li><li>Ohsawa, M., Miyabe, Y., Katsu, H., Yamamoto, S., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+sensory+nerve+fiber+responsible+for+lysophosphatidic+acid-induced+allodynia+in+mice.">Identification of the sensory nerve fiber responsible for lysophosphatidic acid-induced allodynia in mice.</a> Neuroscience. 247, 65-74 (2013).</li><li>Tanabe, M., Tokuda, Y., Takasu, K., Ono, K., Honda, M., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+synthetic+TRH+analogue+taltirelin+exerts+modality-specific+antinociceptive+effects+via+distinct+descending+monoaminergic+systems.">The synthetic TRH analogue taltirelin exerts modality-specific antinociceptive effects via distinct descending monoaminergic systems.</a> British journal of pharmacology. 150 (4), 403-414 (2007).</li><li>Ono, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+in+sympathetic+nerve+activity+as+a+possible+mechanism+for+the+hypothermic+effect+of+oseltamivir,+an+anti-influenza+virus+drug,+in+normal+mice.">Reduction in sympathetic nerve activity as a possible mechanism for the hypothermic effect of oseltamivir, an anti-influenza virus drug, in normal mice.</a> Basic &amp; clinical pharmacology &amp; toxicology. 113 (1), 25-30 (2013).</li><li>Kauer, J. A., Gibson, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hot+flash:+TRPV+channels+in+the+brain.">Hot flash: TRPV channels in the brain.</a> Trends in neurosciences. 32 (4), 215-224 (2009).</li></ol>

הצעד הקריטי ביותר בניסויים אלה הוא ההצלחה של הזרקת I.C.V. טכניקת הזרקת I.c.v. בשימוש כאן הוא די פשוט אבל דורש קצת תרגול. לפני ניסויים, מומלץ להתאמן עם צבעים (למשל 0.5% טריפאן כחול בתמיסת מלח). אם הזריקה מבוצעת כראוי, סימן מחט צריך להיות ניכר על תפר הקורונה ואת הצבע המוזרק צריך להיות נוכח בחדר ההתפלה ...

בעלי חיים מקבלים גירויים פיזיים וכימיים שונים מהסביבה שלהם באמצעות חיישנים על העצבים ההיקפיים. קולטן ארעי פוטנציאל vanilloid סוג 1 (TRPV1) הוא אחד התרמוזים, לא בחירה cation ערוצים הפועלים כמו חיישניחום 1,2, והפעלה ו / או אפנון של TRPV1 ידוע להיות צעד מפתח עבור nociception בהקשרים נורמליים ודלקתיים3. למרות דפוס הביטוי הכולל הוא שנוי במחלוקת, ביטוי של TRPV1 הוצע גם באזורים על-שדרתיים, להיות מעורב בפעילויות מוח שונות (כולל nociception4, thermoregulation5,חרדה 6, הפרעת קשבוריכוז 7, ואפילפסיה8). יתר על כן, לאחרונה הוצע כי פרצטמול, משכך כאבים בשימוש נרחב, מתווכת את ההפעלה של TRPV1 המרכזי כדי לעורר את פעולת משכךהכאבים שלה 9,10.
ניהול עודף TRPV1 אגוניסט כולל קפסאיצין ו resiniferatoxin (RTX) לבעלי חיים מוביל למותם של נוירונים TRPV1 חיובי ו desensitization לטווח ארוך אנטגוניסטים TRPV111,12. בשילוב עם היישום המקומי(תוך-תקל 13,,14,תוך-15,,16,,17ו-intraganglional18),גישה זו של אבלציה כימית סיפקה דרך חלופית לחקור את הפונקציות הפיזיולוגיות של TRPV1. לאחרונה דיווחנו כי הזרקת intracerebroventricular (i.c.v.) של RTX מעכב את ההשפעה משכך כאבים של פרצטמול בעכברים, מציע supraspinal סלקטיבי TRPV1 desensitization19. בכתב היד הזה, אנו מציגים את הפרוטוקול המדויק להזרקת I.C.V. ובדיקות כאב עוקבות.
הזרקה ישירה של תרופות לחדרי המוח מאפשרת ללמוד את ההשפעות המרכזיות שלהם תוך מינימליזציה של כל השפעות היקפיות. הליך ההזרקה i.c.v. המוצג כאן הוא שינוי של השיטה שדווחה על ידי היילי ומקקורמיק20. שיטה זו היא פשוטה הכרוכה החדרה של מחט הזרקה לתוך החדרים לחוץ דרך תפר הקורונה ואינה דורשת כל ציוד מיוחד או הליכים כירורגיים עבור קנטוריה.
יישום מקומי היקפי של אגוניסטים TRPV1 מעורר תחושת כאב בוער ודלקת נוירוגנית. עכברים שטופלו באופן שיטתי בעכברי RTX ו- TRPV1-KO אינם רגישים לגירוי זה13. ביצענו הזרקת תוך פלנטר של RTX (בדיקת RTX) כדי לאשר את השימור של TRPV1 היקפי ב RTX-i.c.v. עכברים . שיטה זו היא שינוי של מבחן פורמלין קונבנציונלי21.
דווח כי עכברים שטופלו באופן שיטתי בעכברי RTX ו- TRPV1-KO מראים סף רגיללגירוייםמכניים 11,13,22. כאן אנו מציגים הליך לבדיקת לחץ הזנב לבדיקת שינויים באפקט משכך כאבים של פרצטמול.
כל ההליכים הללו הם אורתודוקסיים ורב-תכליתיים, ותוכלים ליישם אותם במחקרים של תרופות אחרות.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="872">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Resiniferatoxin</td>
			<td style="width:191px;">LKT Laboratories</td>
			<td style="width:117px;">R1774</td>
			<td style="width:319px;">used for s.c./i.c.v. pretreatments and the RTX test</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">Acetaminophen</td>
			<td style="width:191px;">IWAKI SEIYAKU</td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td style="width:319px;">gifted from IWAKI SEIYAKU</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">Pentobarbital sodium salt</td>
			<td style="width:191px;">Tokyo Chemical Industry</td>
			<td style="width:117px;">P0776</td>
			<td style="width:319px;">used for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Ethanol (99.5)</td>
			<td style="width:191px;">Wako Pure Chemical Industries</td>
			<td style="width:117px;">057-00456</td>
			<td style="width:319px;">used for dissolving RTX</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monooleate</td>
			<td style="width:191px;">Wako Pure Chemical Industries</td>
			<td style="width:117px;">161-21621</td>
			<td style="width:319px;">used for dissolving RTX</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">25 mL microsyringe</td>
			<td style="width:191px;">Hamilton</td>
			<td style="width:117px;">1702LT</td>
			<td style="width:319px;">used for i.c.v. injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">100 mL microsyringe</td>
			<td style="width:191px;">Hamilton</td>
			<td style="width:117px;">1710LT</td>
			<td style="width:319px;">used for intraplantar injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">26-gauge disposable needle</td>
			<td style="width:191px;">TERUMO</td>
			<td style="width:117px;">NN-2613S</td>
			<td style="width:319px;">used for i.c.v. injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">30-gauge disposable needle</td>
			<td style="width:191px;">NIPRO</td>
			<td style="width:117px;">01134</td>
			<td style="width:319px;">used for intraplantar injection</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Pressure meter</td>
			<td style="width:191px;">Ugo Basile</td>
			<td style="width:117px;">Analgesy-Meter Type 7200</td>
			<td style="width:319px;">used for tail pressure test</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin and pain tests in mice

קולטן ארעי פוטנציאל vanilloid סוג 1 (TRPV1), ערוץ cation תרמוסיבי, ידוע לעורר כאב בעצבים ההיקפיים. בנוסף לתפקוד ההיקפי שלה, מעורבותה בתפקודי המוח הוצעה גם. Resiniferatoxin (RTX), אגוניסט TRPV1 אולטרהpotent, כבר ידוע לגרום לדה-רגישות לטווח ארוך של TRPV1, וdesensitization זה כבר גישה חלופית לחקירת הרלוונטיות הפיזיולוגית של תאים המביעים TRPV1. כאן אנו מתארים פרוטוקול לטיפול תוך-ברוונטרי (i.c.v. ) עם RTX בעכברים. הליכים מתוארים לבדיקת nociception לגירוי TRPV1 היקפי (בדיקת RTX) וגירוי מכני (בדיקת לחץ זנב) ולאחר מכן בצע. למרות התגובות nociceptive של עכברים שניתנו RTX i.c.v. היו דומים לאלה של קבוצות הבקרה, RTX-i.c.v.-מנוהל עכברים היו רגישים לאפקט משכך כאבים של פרצטמול, מציע כי טיפול RTX i.c.v. יכול לגרום לדה-רגישות TRPV1 סלקטיבית על-טבעית. מודל עכבר זה יכול לשמש כמערכת ניסיונית נוחה ללימוד התפקיד של TRPV1 בתפקוד המוח/על-שדרתי. טכניקות אלה ניתן להחיל גם על מחקרים של הפעולות המרכזיות של תרופות אחרות.

העכברים שטופלו ב-i.c.v. לא מראים חריגות ניכרות במראה שלהם, פעילויות ספונטניות,משקל גוף 19 וטמפרטורת גוף ליבה (קבוצת רכב מטופל, 38.4 ± 0.3 ° C, n = 6; קבוצת RTX שטופלה, 38.7 ± 0.2 °C, n = 6).
איור 2A-B מראה את ההיענות של עכברים...

Watch this Scientific Journal Video about Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice at JoVE.com

Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice

קולטן ארעי פוטנציאל vanilloid סוג 1 (TRPV1) באזור העל-שדרתי הוצע לשחק כמה תפקידים בתפקוד המוח. מתואר כאן הוא פרוטוקול להזרקה intracerebroventricular של resiniferatoxin עבור desensitization TRPV1 על-שדרתי בעכברים. כמו כן, מוצגים הליכים לבדיקות כאב מסוימות.

טיפול תוך-ברובני עם בדיקות Resiniferatoxin וכאב בעכברים

The transient receptor potential vanilloid type 1 (TRPV1), a thermosensitive cation channel, is known to trigger pain in the peripheral nerves. In ...

המטרה הכוללת של טיפול מקדים זה היא ליצור עכברים, כי ערוצי TRPV1 הם רגישות באזורים supraspinal. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הנוירופארמה. היתרון העיקרי של טכניקה זו היא כי רגישות סלקטיבית supraspinal TRPV1 יכול להיות המושרה על ידי דרך פשוטה למדי.כדי להתחיל בהליך זה, הרדמה של עכבר עם נתרן pentobarbital תוך-לידתי ולבדוק אובדן של רפלקס הזכות. לטיפול תת עורי, להזריק RTX ב 20 מיקרוגרם למיליליטר לתוך החלק האחורי של הצוואר בנפח של 0.1 מיליליטר לכל 10 גרם משקל גוף. עבור קבוצת הביקורת, להזריק את הרכב באותו אופן.להעביר מחט חד פעמית 27 מד דרך צינור מתכת כדי לחשוף 3 עד 3.5 קצה מילימטר של המחט. ואז להחזיק את עצמות squamosal של העכבר בחוזקה עם האצבעות. להזיז את המחט באופן מאוחר על הקרקפת ולמצוא את התפר sagittal כמו קצה המחט מכור על התפר.להזיז את הקצה על מילימטר אחד ימינה, ולאחר מכן להזיז את הקצה rostrally כדי למצוא את התפר התותח. לאחר מכן, להכניס את המחט לאט ובה אנכית. להזריק את פתרון RTX מעל 10 שניות ולהחזיק אותו עוד 10 שניות לאחר מכן.לאחר מכן, למשוך את המחט לאט ולהחזיר את העכבר לכלוב הבית שלה. שבוע לאחר הזרקת RTX, לפחות 60 דקות לפני הבדיקה, להעביר את העכבר לחדר הבדיקה. לפחות 30 דקות לפני הבדיקה, מניחים את העכבר בכלוב פרספקס כדי לאפשר לו להתאקלם לסביבה.ואז 20 דקות לפני הבדיקה, לנהל פרצטמול ב 300 מיליגרם לקילוגרם לעכבר תוך-לידתי. החזק את העכבר באופן רופף בשקית בד קטנה והכנס מחט 30 מד לתוך העקב של הכף האחורית הימנית. לקדם את המחט תת עורית ליד כרית ההליכה ולהזריק 20 microliters של פתרון RTX ב 0.05 מיקרוגרם למיליליטר.לאחר מכן, למדוד את התקופה של ליקוק והתנהגות נושכת באזור glabrous של הכף המושפעת בכל בלוק חמש דקות. שבוע לאחר הזרקת RTX, להעביר את העכבר לחדר הבדיקה. הנח את העכבר בכלוב פרספקס.סמן את הנקודות ב-1.5 ו-2.5 ס"מ מבסיס הזנב. לאחר מכן, להחזיק את העכבר באופן רופף בשקית בד קטנה ולהחיל לחץ על כתמים עם בדיקה קהה. שים לב כי לחץ ניתוק של 250 גרם מוטל כדי למנוע נזק לרקמות.לקבוע את הלחץ הנדרש כדי להפוך את התנהגות הבריחה ולחשב את הסף nociceptive על ידי ממוצע הלחץ שנקבע בשני המקומות. חזור על ההליכים כל 15 דקות. לאחר קבלת הבסיס, לנהל פרצטמול ב 300 מיקרוגרם לקילוגרם לעכבר תוך ניתוחי, ולאחר מכן לחזור על מבחן לחץ הזנב כל 15 דקות עד שהוא מגיע 90 דקות.שתי דמויות אלה מראות את ההיענות של עכברים שטופלו ב- SC או ICV להזרקה האינטרפלנטרית של RTX. התנהגות הליקוק והנשנוך של עכברים שטופלו ברכב הייתה יוצאת דופן ב-10 הדקות הראשונות. למרות שהעכברים שטופלו מראש SC לא הראו התנהגות מלקקת וננשכת בכלל, העכברים שטופלו מראש ICV הגיבו בדרך כלל להזרקת plantar של RTX.יתר על כן, ניהול תוך-פרטי של פרצטמול הפחית את התנהגות הליקוק והנשכים של עכברים שטופלו ב- ICV ברכב, אך לא בעכברים שטופלו ב- RTX ICV. גרף זה מראה את ההשפעות משככי כאבים של פרצטמול ב 300 מיקרוגרם לקילוגרם במבחן לחץ הזנב. Acetaminophen הפחית את התגובה nociceptive של עכברים pretreated רכב בשתי הבדיקות, אבל ההשפעות משככי כאבים של פרצטמול היו מעוכבים בעכברים כי היו ICV pretreated עם RTX.לאחר השליטה, טכניקה זו הזרקת ICV ניתן ליישם עבור תרופות אחרות. אל תשכח כי עבודה עם Resiniferatoxin יכול להיות מסוכן מאוד ולוודא להשתמש כפפות גומי ומשקפיים להגנה בעת הטיפול.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

אטריה ו בדיקות Capellini טיפול: מדדים כמותיים פשוט פונקציה של מיומנות בכפו אצל חולדות ועכברים

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended ...

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

מדידת השדרה Presynaptic עיכוב בעכברים על ידי הקלטה פוטנציאלית הגבי רוט<em&gt; בVivo</em

Presynaptic inhibition is one of the most powerful inhibitory mechanisms in the spinal cord. The underlying physiological mechanism is a depolarization of ...

Intracerebroventricular Viral Injection of the Neonatal Mouse Brain for Persistent and Widespread Neuronal Transduction

הזרקת נגיפי Intracerebroventricular של ילודים עכבר המוח לתמרה עצבית מתמשכת ונרחבת

With the pace of scientific advancement accelerating rapidly, new methods are needed for experimental neuroscience to quickly and easily manipulate gene ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

שיטה פשוטה וזולה לקביעה קרה רגישות והסתגלות בעכברים

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-&#946; Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-ÃƒÅ½Ã‚Â² Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

הזרקת intracerebroventricular של פפטידים עמילואיד-β בעכברים נורמליים כדי לגרום בחריפות גירעונות אלצהיימר דמוי קוגניטיבית

Amyloid-&#946; (A&#946;) is a major pathological mediator of both familial and sporadic Alzheimer's disease (AD). In the brains of AD patients, ...

Intracranial Pharmacotherapy and Pain Assays in Rodents

Pharmacotherapy תוך-גולגולתי, מבחני כאב בחולדות

Pain is a salient sensory experience with affective and cognitive dimensions. However, central mechanisms for pain remain poorly understood, hindering the ...

Comprehensive Autopsy Program for Individuals with Multiple Sclerosis

שלאחר המוות תוכנית מקיפה עבור אנשים עם טרשת נפוצה

We describe a rapid tissue donation program for individuals with multiple sclerosis (MS) that requires scientists and technicians to be on-call 24/7, 365 ...

Burn Injury-Induced Pain and Depression-Like Behavior in Mice

כאב כתוצאה מפציעת כוויות והתנהגות דמוית דיכאון בעכברים

Scalding water is the most common cause of burn injury in both elderly and young populations. It is one of the major clinical challenges because of the ...

Dural Stimulation and Periorbital von Frey Testing in Mice As a Preclinical Model of Headache

גירוי דוראלי ובדיקות פריאורביטל פון פריי בעכברים כמודל פרה-קליני של כאב ראש

The cranial meninges, comprised of the dura mater, arachnoid, and pia mater, are thought to primarily serve structural functions for the nervous system.  ...

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

בדיקת הימנעות מקונפליקט מכני למדידת התנהגות כאב בעכברים

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...