Name: intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin and pain tests in mice
Uploaded: 2020-09-02T12:30:00
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Tutti i protocolli sperimentali qui utilizzati sono stati approvati dal Comitato per la cura e l'uso degli animali dell'Università di Musashino. I topi maschi ddY (SLC, Shizuoka, Giappone) sono stati tenuti per almeno 7 giorni in un ciclo di 12-h luce/scuro prima di esperimenti con acqua e cibo ad libitum. Per gli esperimenti sono stati utilizzati topi di 5 o 6 settimane.
1. Preparazione dei farmaci
<ol><li>
Rtx NOTA: La soluzione alcolica RTX può causare gravi ustioni ...

<ol>
	<li>Cavanaugh, D. J., Chesler, A. T., Braz, J. M., Shah, N. M., Julius, D., Basbaum, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restriction+of+transient+receptor+potential+vanilloid-1+to+the+peptidergic+subset+of+primary+afferent+neurons+follows+its+developmental+downregulation+in+nonpeptidergic+neurons.">Restriction of transient receptor potential vanilloid-1 to the peptidergic subset of primary afferent neurons follows its developmental downregulation in nonpeptidergic neurons.</a> J Neurosci. 31 (28), 10119-10127 (2011).</li><li>Caterina, M. J., Schumacher, M. A., Tominaga, M., Rosen, T. A., Levine, J. D., Julius, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+capsaicin+receptor:+a+heat-activated+ion+channel+in+the+pain+pathway.">The capsaicin receptor: a heat-activated ion channel in the pain pathway.</a> Nature. 389 (6653), 816-824 (1997).</li><li>Caterina, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+nociception+and+pain+sensation+in+mice+lacking+the+capsaicin+receptor.">Impaired nociception and pain sensation in mice lacking the capsaicin receptor.</a> Science. 288 (5464), 306-313 (2000).</li><li>Starowicz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tonic+endovanilloid+facilitation+of+glutamate+release+in+brainstem+descending+antinociceptive+pathways.">Tonic endovanilloid facilitation of glutamate release in brainstem descending antinociceptive pathways.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (50), 13739-13749 (2007).</li><li>Gavva, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vanilloid+receptor+TRPV1+is+tonically+activated+in+vivo+and+involved+in+body+temperature+regulation.">The vanilloid receptor TRPV1 is tonically activated in vivo and involved in body temperature regulation.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (13), 3366-3374 (2007).</li><li>Marsch, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+anxiety,+conditioned+fear,+and+hippocampal+long-term+potentiation+in+transient+receptor+potential+vanilloid+type+1+receptor-deficient+mice.">Reduced anxiety, conditioned fear, and hippocampal long-term potentiation in transient receptor potential vanilloid type 1 receptor-deficient mice.</a> Journal of Neuroscience. 27 (4), 832-839 (2007).</li><li>Tzavara, E. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocannabinoids+activate+transient+receptor+potential+vanilloid+1+receptors+to+reduce+hyperdopaminergia-related+hyperactivity:+Therapeutic+implications.">Endocannabinoids activate transient receptor potential vanilloid 1 receptors to reduce hyperdopaminergia-related hyperactivity: Therapeutic implications.</a> Biological Psychiatry. 59 (6), 508-515 (2006).</li><li>Naz&#305;ro&#287;lu, M., &#214;vey, &. #. 3. 0. 4. ;. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+apoptosis+and+calcium+accumulation+through+TRPV1+channels+in+neurobiology+of+epilepsy.">Involvement of apoptosis and calcium accumulation through TRPV1 channels in neurobiology of epilepsy.</a> Neuroscience. 293, 55-66 (2015).</li><li>Mallet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPV1+in+brain+is+involved+in+acetaminophen-induced+antinociception.">TRPV1 in brain is involved in acetaminophen-induced antinociception.</a> PloS one. 5 (9), 1-11 (2010).</li><li>Barri&#232;re, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+amide+hydrolase-dependent+generation+of+antinociceptive+drug+metabolites+acting+on+TRPV1+in+the+brain.">Fatty acid amide hydrolase-dependent generation of antinociceptive drug metabolites acting on TRPV1 in the brain.</a> PloS one. 8 (8), e70690 (2013).</li><li>Jancs&#243;, G., Kiraly, E., Jancs&#243;-G&#225;bor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologically+induced+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+neurones.">Pharmacologically induced selective degeneration of chemosensitive primary sensory neurones.</a> Nature. 270 (5639), 741-743 (1977).</li><li>Szallasi, A., Blumberg, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vanilloid+receptor+loss+in+rat+sensory+ganglia+associated+with+long+term+desensitization+to+resiniferatoxin.">Vanilloid receptor loss in rat sensory ganglia associated with long term desensitization to resiniferatoxin.</a> Neuroscience Letters. 140 (1), 51-54 (1992).</li><li>Cavanaugh, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+subsets+of+unmyelinated+primary+sensory+fibers+mediate+behavioral+responses+to+noxious+thermal+and+mechanical+stimuli.">Distinct subsets of unmyelinated primary sensory fibers mediate behavioral responses to noxious thermal and mechanical stimuli.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (22), 9075-9080 (2009).</li><li>Jeffry, J. A., Yu, S. Q., Sikand, P., Parihar, A., Evans, M. S., Premkumar, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+targeting+of+TRPV1+expressing+sensory+nerve+terminals+in+the+spinal+cord+for+long+lasting+analgesia.">Selective targeting of TRPV1 expressing sensory nerve terminals in the spinal cord for long lasting analgesia.</a> PLoS ONE. 4 (9), e7021 (2009).</li><li>Jancs&#243;, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracisternal+capsaicin:+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+afferents+in+the+adult+rat.">Intracisternal capsaicin: selective degeneration of chemosensitive primary sensory afferents in the adult rat.</a> Neuroscience letters. 27 (1), 41-45 (1981).</li><li>Gamse, R., Saria, A., Lundberg, J. M., Theodorsson-Norheim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+neurochemical+changes+after+intracisternal+capsaicin+treatment+of+the+guinea+pig.">Behavioral and neurochemical changes after intracisternal capsaicin treatment of the guinea pig.</a> Neuroscience Letters. 64 (3), 287-292 (1986).</li><li>Neubert, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+mouse+orofacial+pain+and+the+effects+of+lesioning+TRPV1-expressing+neurons+on+operant+behavior.">Characterization of mouse orofacial pain and the effects of lesioning TRPV1-expressing neurons on operant behavior.</a> Molecular pain. 4, 43 (2008).</li><li>Karai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+vanilloid+receptor+1-expressing+primary+afferent+neurons+for+pain+control.">Deletion of vanilloid receptor 1-expressing primary afferent neurons for pain control.</a> The Journal of clinical investigation. 113 (9), 1344-1352 (2004).</li><li>Fukushima, A., Mamada, K., Iimura, A., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supraspinal-selective+TRPV1+desensitization+induced+by+intracerebroventricular+treatment+with+resiniferatoxin.">Supraspinal-selective TRPV1 desensitization induced by intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin.</a> Scientific reports. 7 (1), 12452 (2017).</li><li>Haley, T. J., McCormick, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+effects+produced+by+intracerebral+injection+of+drugs+in+the+conscious+mouse.">Pharmacological effects produced by intracerebral injection of drugs in the conscious mouse.</a> British journal of pharmacology and chemotherapy. 12 (1), 12-15 (1957).</li><li>Tj&#248;lsen, A., Berge, O. G., Hunskaar, S., Rosland, J. H., Hole, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+formalin+test:+an+evaluation+of+the+method.">The formalin test: an evaluation of the method.</a> Pain. 51 (1), 5-17 (1992).</li><li>Ohsawa, M., Miyabe, Y., Katsu, H., Yamamoto, S., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+sensory+nerve+fiber+responsible+for+lysophosphatidic+acid-induced+allodynia+in+mice.">Identification of the sensory nerve fiber responsible for lysophosphatidic acid-induced allodynia in mice.</a> Neuroscience. 247, 65-74 (2013).</li><li>Tanabe, M., Tokuda, Y., Takasu, K., Ono, K., Honda, M., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+synthetic+TRH+analogue+taltirelin+exerts+modality-specific+antinociceptive+effects+via+distinct+descending+monoaminergic+systems.">The synthetic TRH analogue taltirelin exerts modality-specific antinociceptive effects via distinct descending monoaminergic systems.</a> British journal of pharmacology. 150 (4), 403-414 (2007).</li><li>Ono, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+in+sympathetic+nerve+activity+as+a+possible+mechanism+for+the+hypothermic+effect+of+oseltamivir,+an+anti-influenza+virus+drug,+in+normal+mice.">Reduction in sympathetic nerve activity as a possible mechanism for the hypothermic effect of oseltamivir, an anti-influenza virus drug, in normal mice.</a> Basic &amp; clinical pharmacology &amp; toxicology. 113 (1), 25-30 (2013).</li><li>Kauer, J. A., Gibson, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hot+flash:+TRPV+channels+in+the+brain.">Hot flash: TRPV channels in the brain.</a> Trends in neurosciences. 32 (4), 215-224 (2009).</li></ol>

Il passo più critico in questi esperimenti è il successo dell'iniezione i.c.v. La tecnica di iniezione i.c.v. utilizzata qui è abbastanza semplice, ma richiede una certa pratica. Prima degli esperimenti, si raccomanda la pratica con coloranti (ad es. 0,5% di blu di prova in salina). Se l'iniezione viene eseguita correttamente, un segno di ago deve essere evidente sulla sutura coronale e il colorante iniettato deve essere presente nel ventricolo contralaterale e nel terzo ventricolo. Inoltre, l'inserimento forzato deve...

Gli animali ricevono vari stimoli fisici e chimici dal loro ambiente attraverso sensori sui nervi periferici. Il recettore transitorio potenziale vanilloide di tipo 1 (TRPV1) è uno dei canali termosensibili, non selezionativi che agiscono come sensori di calore1,2e l'attivazione e/o modulazione di TRPV1 è noto per essere un passo chiave per la nociception in entrambi i contesti normali e infiammatori3. Anche se il modello di espressione generale è controverso, l'espressione di TRPV1 è stata suggerita anche nelle regioni sovraspinali, essendo coinvolta in varie attività cerebrali (tra cui nocezione4, termoregolazione5,ansia 6, disordine di iperattività di deficitdi attenzione 7e epilessia8). Inoltre, è stato recentemente suggerito che l'acetaminofene, un antidolorifico ampiamente usato, media l'attivazione del TRPV1 centrale per suscitare la sua azione analgesica9,10.
La somministrazione di agonisti TRPV1 in eccesso, tra cui capsaicina e resiniferatoxin (RTX) agli animali porta alla morte di neuroni TRPV1-positivi e desecizione di lunga durata a TRPV1 agonisti11,12. In combinazione con l'applicazione locale (intrathecal13,14, intracisternale15,16,17e intraganglional18), questo approccio di ablazione chimica ha fornito un modo alternativo per indagare le funzioni fisiologiche di TRPV1. Recentemente abbiamo riferito che l'iniezione intracerebroventricolare (i.c.v.) di RTX inibisce l'effetto analgesico dell'acetaminofene nei topi, suggerendo la desegnibilità TRPV1 sovraspinale-selettiva19. In questo manoscritto, presentiamo il protocollo preciso per l'iniezione i.c.v. e i successivi test del dolore.
L'iniezione diretta di farmaci nei ventricoli del cervello permette di studiare i loro effetti centrali, minimizzando eventuali effetti periferici. La procedura di iniezione i.c.v. presentata qui è una modifica del metodo riportato da Haley e McCormick20. Questo metodo è semplice che comporta l'inserimento di un ago di iniezione nei ventricoli successivi attraverso la sutura coronale e non richiede alcuna attrezzatura speciale o procedure chirurgiche per la cannulation.
L'applicazione locale periferica degli agonisti TRPV1 evoca una sensazione di dolore bruciante e infiammazione neurogenica. I topi trattati sistemicamente con RTX e topi TRPV1-KO sono insensibili a questa stimolazione13. Abbiamo eseguito l'iniezione intraplantar di RTX (test RTX) per confermare la conservazione della periferica TRPV1 in RTX-i.c.v. Topi. Questo metodo è una modifica del test formalina convenzionale21.
È stato riferito che i topi trattati sistemicamente con topi RTX e TRPV1-KO mostrano una soglia normale agli stimoli meccanici11,13,22. Qui presentiamo una procedura per il test di pressione della coda per testare i cambiamenti nell'effetto analgesico dell'acetaminofene.
Tutte queste procedure sono ortodosse e versatili, e possono essere applicate agli studi di altri farmaci.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="872">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Resiniferatoxin</td>
			<td style="width:191px;">LKT Laboratories</td>
			<td style="width:117px;">R1774</td>
			<td style="width:319px;">used for s.c./i.c.v. pretreatments and the RTX test</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">Acetaminophen</td>
			<td style="width:191px;">IWAKI SEIYAKU</td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td style="width:319px;">gifted from IWAKI SEIYAKU</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">Pentobarbital sodium salt</td>
			<td style="width:191px;">Tokyo Chemical Industry</td>
			<td style="width:117px;">P0776</td>
			<td style="width:319px;">used for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Ethanol (99.5)</td>
			<td style="width:191px;">Wako Pure Chemical Industries</td>
			<td style="width:117px;">057-00456</td>
			<td style="width:319px;">used for dissolving RTX</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monooleate</td>
			<td style="width:191px;">Wako Pure Chemical Industries</td>
			<td style="width:117px;">161-21621</td>
			<td style="width:319px;">used for dissolving RTX</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">25 mL microsyringe</td>
			<td style="width:191px;">Hamilton</td>
			<td style="width:117px;">1702LT</td>
			<td style="width:319px;">used for i.c.v. injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">100 mL microsyringe</td>
			<td style="width:191px;">Hamilton</td>
			<td style="width:117px;">1710LT</td>
			<td style="width:319px;">used for intraplantar injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">26-gauge disposable needle</td>
			<td style="width:191px;">TERUMO</td>
			<td style="width:117px;">NN-2613S</td>
			<td style="width:319px;">used for i.c.v. injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">30-gauge disposable needle</td>
			<td style="width:191px;">NIPRO</td>
			<td style="width:117px;">01134</td>
			<td style="width:319px;">used for intraplantar injection</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Pressure meter</td>
			<td style="width:191px;">Ugo Basile</td>
			<td style="width:117px;">Analgesy-Meter Type 7200</td>
			<td style="width:319px;">used for tail pressure test</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin and pain tests in mice

Il recettore transitorio potenziale vanilloide di tipo 1 (TRPV1), un canale termosensibile, è noto per innescare dolore nei nervi periferici. Oltre alla sua funzione periferica, è stato suggerito anche il suo coinvolgimento nelle funzioni cerebrali. Resiniferatoxin (RTX), un agonista TRPV1 ultrapotente, è stato conosciuto per indurre la dese riesensibilità a lungo termine di TRPV1, e questa desesensibilità è stato un approccio alternativo per studiare la rilevanza fisiologica delle cellule che esprimono TRPV1. Qui descriviamo un protocollo per il trattamento intracerebroventricolare (i.c.v.) con RTX nei topi. Le procedure sono descritte per il test della stimolazione TRPV1 periferica (test RTX) e la stimolazione meccanica (test di pressione della coda) quindi seguire. Anche se le risposte nocicettive dei topi che erano stati somministrati RTX i.c.v. erano paragonabili a quelle dei gruppi di controllo, i topi somministrati da RTX-i.c.v. erano insensibili all'effetto analgesico dell'acetaminofene, suggerendo che il trattamento i.c.v. RTX può indurre la desensitizzazione trPV1 sovraspinal-selettiva. Questo modello murino può essere utilizzato come un comodo sistema sperimentale per studiare il ruolo di TRPV1 nella funzione cerebrale/sovraspinale. Queste tecniche possono anche essere applicate agli studi sulle azioni centrali di altri farmaci.

I topi trattati con i.c.v. non mostrano anomalie apparenti nel loro aspetto, attività spontanee, pesocorporeo 19 e temperatura corporea del nucleo (gruppo trattato con veicolo, 38,4 x 0,3 gradi centigradi, n - 6; Gruppo trattato da RTX, 38,7 x 0,2 gradi centigradi, n - 6).
Figura 2A-B mostra la reattività dei topi trattati con s.c.- o i.c.v. all'iniezione i...

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Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice

Il potenziale vanilloide di tipo 1 (TRPV1) nella regione sovraspinale è stato suggerito di svolgere alcuni ruoli nella funzione cerebrale. Descritto qui è un protocollo per l'iniezione intracerebroventricolare di resiniferatoxin per la desecizione trPV1 sovraspinale nei topi. Vengono inoltre presentate le procedure per alcuni esami del dolore.

Trattamento intracerebroventricolare con Resiniferatoxin e test del dolore nei topi

The transient receptor potential vanilloid type 1 (TRPV1), a thermosensitive cation channel, is known to trigger pain in the peripheral nerves. In ...

L'obiettivo generale di questo pretrattamento è quello di generare topi e che i canali TRPV1 siano desensibilizzati nelle regioni sovraspinali. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo neurofarmacologico. Il vantaggio principale di questa tecnica è che la desensibilizzazione selettiva sopraspinale TRPV1 può essere indotta in un modo abbastanza semplice.Per iniziare questa procedura, anestetizzare un topo con sodio pentobarbitale intraperitonealmente e verificare la perdita del riflesso di destra. Per il trattamento sottocutaneo, iniettare RTX a 20 microgrammi per millilitro nella parte posteriore del collo con un volume di 0,1 millilitro per 10 grammi di peso corporeo. Per il gruppo di controllo, iniettare il veicolo nello stesso modo.Passa un ago monouso calibro 27 attraverso un tubo metallico per esporre la punta dell'ago da 3 a 3,5 millimetri. Quindi tenere saldamente le ossa squamose del mouse con le dita. Spostare l'ago lateralmente sul cuoio capelluto e trovare la sutura sagittale mentre la punta dell'ago è agganciata sulla sutura.Spostare la punta di circa un millimetro verso destra, quindi spostare la punta rostralmente per trovare la sutura coronale. Successivamente, inserire l'ago lentamente e verticalmente. Iniettare la soluzione RTX per 10 secondi e tenerla per altri 10 secondi dopo.Successivamente, ritirare lentamente l'ago e riportare il mouse nella gabbia di casa. Una settimana dopo l'iniezione RTX, almeno 60 minuti prima del test, trasferire il mouse nella sala prove. Almeno 30 minuti prima della prova, posizionare il mouse in una gabbia di plexiglass per consentirgli di acclimatarsi all'ambiente.Quindi, 20 minuti prima del test, somministrare acetaminofene a 300 milligrammi per chilogrammo al mouse per via intraperitoneale. Tenere il mouse liberamente in una piccola borsa di stoffa e inserire un ago calibro 30 nel tallone della zampa posteriore destra. Far avanzare l'ago per via sottocutanea verso il cuscinetto da passeggio e iniettare 20 microlitri di soluzione RTX a 0,05 microgrammi per millilitro.Successivamente, misurare il periodo di leccare e mordere il comportamento nella regione glabro della zampa interessata in ogni blocco di cinque minuti. Una settimana dopo l'iniezione RTX, trasferire il mouse nella sala prove. Posizionare il mouse in una gabbia di plexiglass.Contrassegnare le macchie a 1,5 e 2,5 centimetri dalla base della coda. Quindi, tenere il mouse liberamente in un piccolo sacchetto di stoffa e applicare pressione sulle macchie con una sonda smussata. Si prega di notare che viene imposta una pressione di taglio di 250 grammi per evitare danni ai tessuti.Determinare la pressione necessaria per suscitare il comportamento di fuga e calcolare la soglia nocicettiva calcolando la media della pressione determinata nei due punti. Ripetere le procedure ogni 15 minuti. Dopo aver ottenuto la linea di base, somministrare acetaminofene a 300 microgrammi per chilogrammo al mouse per via intraperitoneale, quindi ripetere il test di pressione della coda ogni 15 minuti fino a raggiungere i 90 minuti.Queste due cifre mostrano la reattività dei topi trattati con SC o ICV all'iniezione intraplantare di RTX. Il comportamento leccare e mordere dei topi trattati con veicoli è stato notevole nei primi 10 minuti. Sebbene i topi pretrattati SC non mostravano affatto un comportamento leccare e mordere, i topi pretrattati ICV normalmente rispondevano all'iniezione plantare di RTX.Inoltre, la somministrazione intraperitoneale di acetaminofene ha ridotto il comportamento leccare e mordere dei topi trattati con ICV del veicolo, ma non nei topi trattati con ICV RTX. Questo grafico mostra gli effetti analgesici dell'acetaminofene a 300 microgrammi per chilogrammo nel test di pressione della coda. Acetaminofene ha ridotto la risposta nocicettiva dei topi pretrattati del veicolo in entrambi i test, ma gli effetti analgesici dell'acetaminofene sono stati inibiti nei topi che sono stati pretrattati ICV con RTX.Una volta padroneggiata, questa tecnica di iniezione ICV può essere applicata per altri farmaci. Non dimenticare che lavorare con resiniferatoxina può essere estremamente pericoloso e assicurarsi di utilizzare guanti e occhiali di gomma per la protezione durante la manipolazione.

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Intracerebroventricular Iniezione virale del cervello neonatale mouse per persistente e diffusa trasduzione neuronale

With the pace of scientific advancement accelerating rapidly, new methods are needed for experimental neuroscience to quickly and easily manipulate gene ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Un metodo semplice e poco costoso per la determinazione fredda sensibilità e adattamento nei topi

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-&#946; Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-ÃƒÅ½Ã‚Â² Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

Iniezione intracerebroventricular dei peptidi beta-amiloide in topi normali per indurre Acutamente Alzheimer-like Deficit cognitivi

Amyloid-&#946; (A&#946;) is a major pathological mediator of both familial and sporadic Alzheimer's disease (AD). In the brains of AD patients, ...

Intracranial Pharmacotherapy and Pain Assays in Rodents

Dosaggi di dolore nei roditori e farmacoterapia intracranica

Pain is a salient sensory experience with affective and cognitive dimensions. However, central mechanisms for pain remain poorly understood, hindering the ...

Comprehensive Autopsy Program for Individuals with Multiple Sclerosis

Programma completo di autopsia per persone con sclerosi multipla

We describe a rapid tissue donation program for individuals with multiple sclerosis (MS) that requires scientists and technicians to be on-call 24/7, 365 ...

Burn Injury-Induced Pain and Depression-Like Behavior in Mice

Dolore indotto da ustioni e comportamento simile alla depressione nei topi

Scalding water is the most common cause of burn injury in both elderly and young populations. It is one of the major clinical challenges because of the ...

Dural Stimulation and Periorbital von Frey Testing in Mice As a Preclinical Model of Headache

Stimolazione durale e test di von Frey periorbitale nei topi come modello preclinico di cefalea

The cranial meninges, comprised of the dura mater, arachnoid, and pia mater, are thought to primarily serve structural functions for the nervous system.  ...

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

Saggio meccanico di prevenzione dei conflitti per misurare il comportamento del dolore nei topi

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...