Name: intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin and pain tests in mice
Uploaded: 2020-09-02T12:30:00
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여기에 사용되는 모든 실험 프로토콜은 무사시노 대학의 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었다. 수컷 ddY 마우스(SLC, 시즈오카, 일본)는 물과 음식 광고 리비툼을 실험하기 전에 12h 빛/어두운 주기하에서 적어도 7일 동안 보관하였다. 5-6주 된 마우스는 실험을 위해 사용되었다.
1. 마약 제제
<ol><li>
Rtx 참고: 알코올 RTX 용액은 심한 피부 화상과 눈 손상을 일...

<ol>
	<li>Cavanaugh, D. J., Chesler, A. T., Braz, J. M., Shah, N. M., Julius, D., Basbaum, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restriction+of+transient+receptor+potential+vanilloid-1+to+the+peptidergic+subset+of+primary+afferent+neurons+follows+its+developmental+downregulation+in+nonpeptidergic+neurons.">Restriction of transient receptor potential vanilloid-1 to the peptidergic subset of primary afferent neurons follows its developmental downregulation in nonpeptidergic neurons.</a> J Neurosci. 31 (28), 10119-10127 (2011).</li><li>Caterina, M. J., Schumacher, M. A., Tominaga, M., Rosen, T. A., Levine, J. D., Julius, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+capsaicin+receptor:+a+heat-activated+ion+channel+in+the+pain+pathway.">The capsaicin receptor: a heat-activated ion channel in the pain pathway.</a> Nature. 389 (6653), 816-824 (1997).</li><li>Caterina, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+nociception+and+pain+sensation+in+mice+lacking+the+capsaicin+receptor.">Impaired nociception and pain sensation in mice lacking the capsaicin receptor.</a> Science. 288 (5464), 306-313 (2000).</li><li>Starowicz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tonic+endovanilloid+facilitation+of+glutamate+release+in+brainstem+descending+antinociceptive+pathways.">Tonic endovanilloid facilitation of glutamate release in brainstem descending antinociceptive pathways.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (50), 13739-13749 (2007).</li><li>Gavva, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vanilloid+receptor+TRPV1+is+tonically+activated+in+vivo+and+involved+in+body+temperature+regulation.">The vanilloid receptor TRPV1 is tonically activated in vivo and involved in body temperature regulation.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (13), 3366-3374 (2007).</li><li>Marsch, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+anxiety,+conditioned+fear,+and+hippocampal+long-term+potentiation+in+transient+receptor+potential+vanilloid+type+1+receptor-deficient+mice.">Reduced anxiety, conditioned fear, and hippocampal long-term potentiation in transient receptor potential vanilloid type 1 receptor-deficient mice.</a> Journal of Neuroscience. 27 (4), 832-839 (2007).</li><li>Tzavara, E. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocannabinoids+activate+transient+receptor+potential+vanilloid+1+receptors+to+reduce+hyperdopaminergia-related+hyperactivity:+Therapeutic+implications.">Endocannabinoids activate transient receptor potential vanilloid 1 receptors to reduce hyperdopaminergia-related hyperactivity: Therapeutic implications.</a> Biological Psychiatry. 59 (6), 508-515 (2006).</li><li>Naz&#305;ro&#287;lu, M., &#214;vey, &. #. 3. 0. 4. ;. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+apoptosis+and+calcium+accumulation+through+TRPV1+channels+in+neurobiology+of+epilepsy.">Involvement of apoptosis and calcium accumulation through TRPV1 channels in neurobiology of epilepsy.</a> Neuroscience. 293, 55-66 (2015).</li><li>Mallet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPV1+in+brain+is+involved+in+acetaminophen-induced+antinociception.">TRPV1 in brain is involved in acetaminophen-induced antinociception.</a> PloS one. 5 (9), 1-11 (2010).</li><li>Barri&#232;re, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+amide+hydrolase-dependent+generation+of+antinociceptive+drug+metabolites+acting+on+TRPV1+in+the+brain.">Fatty acid amide hydrolase-dependent generation of antinociceptive drug metabolites acting on TRPV1 in the brain.</a> PloS one. 8 (8), e70690 (2013).</li><li>Jancs&#243;, G., Kiraly, E., Jancs&#243;-G&#225;bor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologically+induced+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+neurones.">Pharmacologically induced selective degeneration of chemosensitive primary sensory neurones.</a> Nature. 270 (5639), 741-743 (1977).</li><li>Szallasi, A., Blumberg, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vanilloid+receptor+loss+in+rat+sensory+ganglia+associated+with+long+term+desensitization+to+resiniferatoxin.">Vanilloid receptor loss in rat sensory ganglia associated with long term desensitization to resiniferatoxin.</a> Neuroscience Letters. 140 (1), 51-54 (1992).</li><li>Cavanaugh, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+subsets+of+unmyelinated+primary+sensory+fibers+mediate+behavioral+responses+to+noxious+thermal+and+mechanical+stimuli.">Distinct subsets of unmyelinated primary sensory fibers mediate behavioral responses to noxious thermal and mechanical stimuli.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (22), 9075-9080 (2009).</li><li>Jeffry, J. A., Yu, S. Q., Sikand, P., Parihar, A., Evans, M. S., Premkumar, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+targeting+of+TRPV1+expressing+sensory+nerve+terminals+in+the+spinal+cord+for+long+lasting+analgesia.">Selective targeting of TRPV1 expressing sensory nerve terminals in the spinal cord for long lasting analgesia.</a> PLoS ONE. 4 (9), e7021 (2009).</li><li>Jancs&#243;, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracisternal+capsaicin:+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+afferents+in+the+adult+rat.">Intracisternal capsaicin: selective degeneration of chemosensitive primary sensory afferents in the adult rat.</a> Neuroscience letters. 27 (1), 41-45 (1981).</li><li>Gamse, R., Saria, A., Lundberg, J. M., Theodorsson-Norheim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+neurochemical+changes+after+intracisternal+capsaicin+treatment+of+the+guinea+pig.">Behavioral and neurochemical changes after intracisternal capsaicin treatment of the guinea pig.</a> Neuroscience Letters. 64 (3), 287-292 (1986).</li><li>Neubert, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+mouse+orofacial+pain+and+the+effects+of+lesioning+TRPV1-expressing+neurons+on+operant+behavior.">Characterization of mouse orofacial pain and the effects of lesioning TRPV1-expressing neurons on operant behavior.</a> Molecular pain. 4, 43 (2008).</li><li>Karai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+vanilloid+receptor+1-expressing+primary+afferent+neurons+for+pain+control.">Deletion of vanilloid receptor 1-expressing primary afferent neurons for pain control.</a> The Journal of clinical investigation. 113 (9), 1344-1352 (2004).</li><li>Fukushima, A., Mamada, K., Iimura, A., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supraspinal-selective+TRPV1+desensitization+induced+by+intracerebroventricular+treatment+with+resiniferatoxin.">Supraspinal-selective TRPV1 desensitization induced by intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin.</a> Scientific reports. 7 (1), 12452 (2017).</li><li>Haley, T. J., McCormick, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+effects+produced+by+intracerebral+injection+of+drugs+in+the+conscious+mouse.">Pharmacological effects produced by intracerebral injection of drugs in the conscious mouse.</a> British journal of pharmacology and chemotherapy. 12 (1), 12-15 (1957).</li><li>Tj&#248;lsen, A., Berge, O. G., Hunskaar, S., Rosland, J. H., Hole, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+formalin+test:+an+evaluation+of+the+method.">The formalin test: an evaluation of the method.</a> Pain. 51 (1), 5-17 (1992).</li><li>Ohsawa, M., Miyabe, Y., Katsu, H., Yamamoto, S., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+sensory+nerve+fiber+responsible+for+lysophosphatidic+acid-induced+allodynia+in+mice.">Identification of the sensory nerve fiber responsible for lysophosphatidic acid-induced allodynia in mice.</a> Neuroscience. 247, 65-74 (2013).</li><li>Tanabe, M., Tokuda, Y., Takasu, K., Ono, K., Honda, M., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+synthetic+TRH+analogue+taltirelin+exerts+modality-specific+antinociceptive+effects+via+distinct+descending+monoaminergic+systems.">The synthetic TRH analogue taltirelin exerts modality-specific antinociceptive effects via distinct descending monoaminergic systems.</a> British journal of pharmacology. 150 (4), 403-414 (2007).</li><li>Ono, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+in+sympathetic+nerve+activity+as+a+possible+mechanism+for+the+hypothermic+effect+of+oseltamivir,+an+anti-influenza+virus+drug,+in+normal+mice.">Reduction in sympathetic nerve activity as a possible mechanism for the hypothermic effect of oseltamivir, an anti-influenza virus drug, in normal mice.</a> Basic &amp; clinical pharmacology &amp; toxicology. 113 (1), 25-30 (2013).</li><li>Kauer, J. A., Gibson, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hot+flash:+TRPV+channels+in+the+brain.">Hot flash: TRPV channels in the brain.</a> Trends in neurosciences. 32 (4), 215-224 (2009).</li></ol>

이러한 실험에서 가장 중요한 단계는 i.c.v. 주입의 성공입니다. 여기에 사용되는 i.c.v. 주입 기술은 매우 간단하지만 몇 가지 연습이 필요합니다. 실험 전에염료(예: 식염수의 0.5% 트라이팬 블루)를 사용해 보세요. 주사가 올바르게 수행되는 경우, 바늘 마크는 관상 봉합사에 분명해야하며 주입 된 염료는 금방 심실및 세 번째 심실에 존재해야합니다. 또한 주입 중에 강제 삽입을 피해야합니다. 바늘...

동물은 말초 신경에 센서를 통해 자신의 환경에서 다양한 물리적 및 화학 자극을받습니다. 과도 수용체 전위 바노이드 타입 1(TRPV1)은 열 센서1,2,2및 TRPV1의 활성화 및/또는 변조역할을 하는 열민감성 비선택적 양이온 채널 중 하나이며 정상 및 염증성 문맥3모두에서 노치프션을 위한 핵심 단계로 알려져 있다. 전반적인 발현 패턴은 논란의 여지가 있지만, TRPV1의 발현은 또한 다양한 뇌 활동(nociception4,온도 조절5,불안6,주의력 결핍 과잉 행동 장애7및 간질8)에관여하는 등 다양한 뇌 활동에 관여하는 등 초라척추 지역에서도 제안되고 있다. 더욱이, 최근에는 널리 사용되는 진통제인 아세트아미노펜이 중앙 TRPV1의 활성화를 중재하여 진통 작용9,,10을유도하는 것이 제안되고 있다.
동물에 대한 캡사이신 및 수지독소(RTX)를 포함한 과잉 TRPV1 작용제의 투여는 TRPV1 양성 뉴런의 죽음과 TRPV1 작용제에 대한 장기간 둔감화를 초래한다11,,12. 국소 적용(인트라더칼13,,14,인종 차별성15,,16, 17,및 및 대간절내18)과결합된 이 화학 절제 접근법은 TRPV1의 생리적 기능을 조사하는 대안을 제공하고 있다.17 우리는 최근에 RTX의 intracerebroventricular (즉, v.) 주사가 마우스에서 아세트아미노펜의 진통 효과를 억제한다는 것을 보고했으며, 이는 수프라스피날 선택적 TRPV1 둔감화19를시사한다. 이 원고에서는 i.c.v. 주입 및 후속 통증 검사를 위한 정확한 프로토콜을 제시합니다.
뇌의 심실로 약물을 직접 주입하면 주변 효과를 최소화하면서 중앙 효과를 연구 할 수 있습니다. 여기에 제시된 i.c.v. 주입 절차는 헤일리와맥코믹(20)에의해 보고된 방법의 수정이다. 이 방법은 관상 봉합사를 통해 측면 심실에 주입 바늘을 삽입하는 것을 포함하고 수통을 위한 특별한 장비 또는 외과 적 절차를 필요로하지 않습니다.
TRPV1 작용제의 주변 지역 응용 프로그램은 불타는 통증 감각과 신경 유발 염증을 불러 일으킵니다. RTX및 TRPV1-KO 마우스로 체계적으로 처리되는 마우스는, 이자극(13)에민감하지 않습니다. 우리는 RTX-i.c.v에서 주변 TRPV1의 보존을 확인하기 위해 RTX (RTX 테스트)의 인트라 플라네타르 주입을 수행했습니다. 마우스. 이 방법은 종래의 포르말린시험(21)을수정하는 것이다.
RTX와 TRPV1-KO 마우스로 체계적으로 처리된 마우스가 기계적자극(11,13,22)에대한 정상임계값을나타낸다는것이 보고되었다. 여기서 우리는 아세트 아미노펜의 진통 효과의 변화를 테스트하기위한 꼬리 압력 테스트 절차를 제시한다.
이러한 절차의 모든 정통 하 고 다양 한, 그리고 다른 약물의 연구에 적용할 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="872">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Resiniferatoxin</td>
			<td style="width:191px;">LKT Laboratories</td>
			<td style="width:117px;">R1774</td>
			<td style="width:319px;">used for s.c./i.c.v. pretreatments and the RTX test</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">Acetaminophen</td>
			<td style="width:191px;">IWAKI SEIYAKU</td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td style="width:319px;">gifted from IWAKI SEIYAKU</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">Pentobarbital sodium salt</td>
			<td style="width:191px;">Tokyo Chemical Industry</td>
			<td style="width:117px;">P0776</td>
			<td style="width:319px;">used for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Ethanol (99.5)</td>
			<td style="width:191px;">Wako Pure Chemical Industries</td>
			<td style="width:117px;">057-00456</td>
			<td style="width:319px;">used for dissolving RTX</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monooleate</td>
			<td style="width:191px;">Wako Pure Chemical Industries</td>
			<td style="width:117px;">161-21621</td>
			<td style="width:319px;">used for dissolving RTX</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">25 mL microsyringe</td>
			<td style="width:191px;">Hamilton</td>
			<td style="width:117px;">1702LT</td>
			<td style="width:319px;">used for i.c.v. injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">100 mL microsyringe</td>
			<td style="width:191px;">Hamilton</td>
			<td style="width:117px;">1710LT</td>
			<td style="width:319px;">used for intraplantar injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">26-gauge disposable needle</td>
			<td style="width:191px;">TERUMO</td>
			<td style="width:117px;">NN-2613S</td>
			<td style="width:319px;">used for i.c.v. injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">30-gauge disposable needle</td>
			<td style="width:191px;">NIPRO</td>
			<td style="width:117px;">01134</td>
			<td style="width:319px;">used for intraplantar injection</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Pressure meter</td>
			<td style="width:191px;">Ugo Basile</td>
			<td style="width:117px;">Analgesy-Meter Type 7200</td>
			<td style="width:319px;">used for tail pressure test</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin and pain tests in mice

과도 수용체 잠재적 인 바닐라노이드 유형 1 (TRPV1), 열민감성 양이온 채널, 말초 신경에 통증을 트리거하는 것으로 알려져있다. 주변 기능 외에도 뇌 기능에 대한 참여도 제안되었습니다. 수지압창신(RTX)은 TRPV1의 장기 둔감화를 유도하는 것으로 알려져 있으며, 이러한 둔감은 TRPV1 표현 세포의 생리적 관련성을 조사하기 위한 대안적인 접근법이었다. 여기에서 우리는 마우스에 있는 RTX를 가진 intracerebroventricular (i.c.v.) 처리를 위한 프로토콜을 기술합니다. 절차는 주변 TRPV1 자극 (RTX 테스트) 및 기계적 자극 (꼬리 압력 테스트)에 고드름을 테스트하기 위해 설명된 다음 다음과 같습니다. RTX i.c.v.를 투여한 마우스의 단각 반응은 대조군의 반응과 비교할 수 있었지만, RTX-i.c.v.-투여된 마우스는 아세트아미노펜의 진통 효과에 민감하지 않았으며, i.c.v. RTX 치료가 수척추 선택적 TRPV1 desensit화를 유도할 수 있음을 시사한다. 이 마우스 모델은 뇌/수피척추 기능에서 TRPV1의 역할을 연구하기 위한 편리한 실험 시스템으로 사용할 수 있습니다. 이러한 기술은 또한 다른 약물의 중심 행동의 연구에 적용 될 수 있습니다.

i.c.v.-treated 마우스는 외모, 자발적활동, 체중19 및 코어 체온(차량 처리군, 38.4±0.3°C, n=6; RTX 처리 군, 38.7 ± 0.2 °C, n = 6).
도2A-B는 RTX의 인트라플라터 주입에 s.c.- 또는 i.c.v.-treated 마우스의 반응성을 나타낸다. Figure 2A 차량 처리 마우스의 핥기/물기 동작은 처음 10 분<sup class="xr...

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Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice

수프라스피날 영역에서 일시적인 수용체 잠재적 인 바닐라 노이드 유형 1 (TRPV1)은 뇌 기능에 있는 몇몇 역할을 하기 위하여 건의되었습니다. 여기에 설명된 마우스에서 수지 척추 TRPV1 둔감화를 위한 수지성 관절 의 주입을 위한 프로토콜이 설명되어 있다. 일부 통증 검사에 대한 절차도 제시됩니다.

수지 성 소와 쥐의 통증 검사를 가진 뇌경치료

The transient receptor potential vanilloid type 1 (TRPV1), a thermosensitive cation channel, is known to trigger pain in the peripheral nerves. In ...

이 전처리의 전반적인 목표는 마우스를 생성하는 것이고 TRPV1 채널은 초피척추 지역에서 둔감하다는 것입니다. 이 방법은 신경 약리학 분야의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 초피탈 선택적 TRPV1 둔감이 매우 간단한 방법으로 유도 될 수 있다는 것입니다.이 절차를 시작하려면, 펜토바르비탈 나트륨과 마우스를 인트라테톤으로 마취하고 오른쪽 반사의 손실을 확인합니다. 피하 치료를 위해, 10 그램 체중 당 0.1 밀리리터의 부피로 목 뒤쪽에 밀리리터 당 20 마이크로 그램의 RTX를 주입하십시오. 대조군의 경우 동일한 방법으로 차량을 주입합니다.일회용 27 게이지 바늘을 금속 튜브를 통과하여 바늘의 3~3.5밀리미터 끝을 노출시합니다. 그런 다음 손가락으로 마우스의 적개 뼈를 단단히 잡습니다. 바늘을 두피에 측면으로 옮기고 바늘 끝이 봉합사에 매여 있는 동안 처진 봉합사를 찾습니다.팁을 오른쪽으로 약 1밀리미터 이동한 다음 장밋빛으로 팁을 이동하여 관상 봉합사를 찾습니다. 그 후 바늘을 천천히 수직으로 삽입합니다. RTX 용액을 10초 이상 주입하고 10초 동안 더 길게 누를 수 있습니다.그 후, 천천히 바늘을 철회하고 홈 케이지에 마우스를 반환합니다. RTX 주입 후 1 주일, 테스트 하기 전에 적어도 60 분, 테스트 룸에 마우스를 전송. 테스트 30분 이상 전에 마우스를 플렉시유리 케이지에 배치하여 환경에 적응할 수 있도록 합니다.그런 다음 테스트 20 분 전에, 마우스 내역에 킬로그램 당 300 밀리그램에서 아세트 아미노펜을 투여하십시오. 마우스를 작은 천 가방에 느슨하게 잡고 오른쪽 뒷발의 발 뒤꿈치에 30 게이지 바늘을 삽입합니다. 바늘을 보행 패드 근처로 피하하여 밀리리터당 0.05 마이크로그램으로 RTX 용액 20마이크로리터를 주입합니다.그 후, 각 5분 블록에서 영향을 받는 발의 글래브로스 영역에서 핥고 물고 있는 동작의 기간을 측정한다. RTX 주입 후 1 주일, 테스트 룸에 마우스를 전송. 마우스를 플렉시글라스 케이지에 놓습니다.꼬리 의 기지에서 1.5 및 2.5 센티미터에서 반점을 표시합니다. 다음으로, 작은 천 가방에 마우스를 느슨하게 잡고 무딘 프로브로 반점에 압력을 가합니다. 조직 손상을 피하기 위해 250그램의 차단 압력이 부과됩니다.탈출 동작을 유도하는 데 필요한 압력을 결정하고 두 지점에서 결정된 압력을 평균화하여 모각 임계값을 계산합니다. 15분마다 절차를 반복합니다. 기준선을 얻은 후, 킬로그램당 300 마이크로그램에서 마우스 내역으로 아세트아미노펜을 투여한 다음, 90분에 도달할 때까지 15분마다 꼬리 압력 테스트를 반복합니다.이 두 수치는 RTX의 인트라플라타르 주입에 대한 SC 또는 ICV 처리마우스의 반응성을 보여준다. 차량 처리 마우스의 핥기 및 물어 뜯는 행동은 처음 10 분에서 놀랍습니다. SC 전처리된 마우스는 핥기 및 물기 행동을 전혀 보여주지 않았지만, ICV 전처리된 마우스는 일반적으로 RTX의 발바닥 주입에 반응했습니다.더욱이, 아세트아미노펜의 복막 투여는 차량 ICV 처리 마우스의 핥기 및 물기 행동을 감소시키지만 RTX ICV 처리 마우스에서는 감소시키지 않았다. 이 그래프는 꼬리 압력 테스트에서 킬로그램당 300 마이크로그램에서 아세트아미노펜의 진통 효과를 보여줍니다. 아세트아미노펜은 두 테스트에서 전처리된 마우스의 자각 반응을 감소시켰지만, 아세트아미노펜의 진통 효과는 RTX로 ICV를 전치료한 마우스에서 억제되었다.일단 마스터, 이 ICV 주입 기술은 다른 약물에 대 한 적용 될 수 있습니다. 수지포톡신으로 작업하는 것은 매우 위험할 수 있으며 취급 시 보호를 위해 고무 장갑과 안경을 사용해야 한다는 것을 잊지 마십시오.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

베르 미 첼리와 Capellini 처리 시험 : 쥐 및 생쥐의 손재주가 앞발 기능의 단순 양적 측정

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended ...

연구

신경과학

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

배근 잠재적 기록하여 생쥐의 척수 시냅스 억제를 측정<em&gt; 생체</em

Presynaptic inhibition is one of the most powerful inhibitory mechanisms in the spinal cord. The underlying physiological mechanism is a depolarization of ...

Intracerebroventricular Viral Injection of the Neonatal Mouse Brain for Persistent and Widespread Neuronal Transduction

영구와 광범위한 신경 세포의 형질 도입에 대한 신생아 마우스 뇌의 뇌실 바이러스 감염

With the pace of scientific advancement accelerating rapidly, new methods are needed for experimental neuroscience to quickly and easily manipulate gene ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

마우스에 콜드 민감도 및 적응을 결정하기위한 간단하고 저렴한 방법

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-&#946; Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-ÃƒÅ½Ã‚Â² Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

일반 마우스의 아밀로이드-β의 펩티드의 뇌 실내 주사는 급성 치매와 같은인지 적자를 유도합니다

Amyloid-&#946; (A&#946;) is a major pathological mediator of both familial and sporadic Alzheimer's disease (AD). In the brains of AD patients, ...

Intracranial Pharmacotherapy and Pain Assays in Rodents

Intracranial Pharmacotherapy 및 설치류에서 고통 분석

Pain is a salient sensory experience with affective and cognitive dimensions. However, central mechanisms for pain remain poorly understood, hindering the ...

Comprehensive Autopsy Program for Individuals with Multiple Sclerosis

다발성 경화증을 가진 개별을 위한 포괄적인 부검 프로그램

We describe a rapid tissue donation program for individuals with multiple sclerosis (MS) that requires scientists and technicians to be on-call 24/7, 365 ...

Burn Injury-Induced Pain and Depression-Like Behavior in Mice

화상 부상으로 인한 통증과 생쥐의 우울증과 같은 행동

Scalding water is the most common cause of burn injury in both elderly and young populations. It is one of the major clinical challenges because of the ...

Dural Stimulation and Periorbital von Frey Testing in Mice As a Preclinical Model of Headache

The cranial meninges, comprised of the dura mater, arachnoid, and pia mater, are thought to primarily serve structural functions for the nervous system.  ...

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

마우스의 통증 행동을 측정하기위한 기계적 충돌 회피 분석

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...