Name: intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin and pain tests in mice
Uploaded: 2020-09-02T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice at JoVE.com

Alle eksperimentelle protokoller som brukes her ble godkjent av Animal Care and Use Committee of Musashino University. HanndY mus (SLC, Shizuoka, Japan) ble holdt i minst 7 dager under en 12-h lys / mørk syklus før eksperimenter med vann og mat ad libitum. 5- eller 6 uker gamle mus ble brukt til forsøkene.
1. Utarbeidelse av narkotika
<ol><li>
RTX (andre MERK: Alkoholholdig RTX-oppløsning kan forårsake alvorlige hudforbrenninger og øyeskader. Pass på at du bruker g...

<ol>
	<li>Cavanaugh, D. J., Chesler, A. T., Braz, J. M., Shah, N. M., Julius, D., Basbaum, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restriction+of+transient+receptor+potential+vanilloid-1+to+the+peptidergic+subset+of+primary+afferent+neurons+follows+its+developmental+downregulation+in+nonpeptidergic+neurons.">Restriction of transient receptor potential vanilloid-1 to the peptidergic subset of primary afferent neurons follows its developmental downregulation in nonpeptidergic neurons.</a> J Neurosci. 31 (28), 10119-10127 (2011).</li><li>Caterina, M. J., Schumacher, M. A., Tominaga, M., Rosen, T. A., Levine, J. D., Julius, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+capsaicin+receptor:+a+heat-activated+ion+channel+in+the+pain+pathway.">The capsaicin receptor: a heat-activated ion channel in the pain pathway.</a> Nature. 389 (6653), 816-824 (1997).</li><li>Caterina, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+nociception+and+pain+sensation+in+mice+lacking+the+capsaicin+receptor.">Impaired nociception and pain sensation in mice lacking the capsaicin receptor.</a> Science. 288 (5464), 306-313 (2000).</li><li>Starowicz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tonic+endovanilloid+facilitation+of+glutamate+release+in+brainstem+descending+antinociceptive+pathways.">Tonic endovanilloid facilitation of glutamate release in brainstem descending antinociceptive pathways.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (50), 13739-13749 (2007).</li><li>Gavva, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vanilloid+receptor+TRPV1+is+tonically+activated+in+vivo+and+involved+in+body+temperature+regulation.">The vanilloid receptor TRPV1 is tonically activated in vivo and involved in body temperature regulation.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (13), 3366-3374 (2007).</li><li>Marsch, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+anxiety,+conditioned+fear,+and+hippocampal+long-term+potentiation+in+transient+receptor+potential+vanilloid+type+1+receptor-deficient+mice.">Reduced anxiety, conditioned fear, and hippocampal long-term potentiation in transient receptor potential vanilloid type 1 receptor-deficient mice.</a> Journal of Neuroscience. 27 (4), 832-839 (2007).</li><li>Tzavara, E. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocannabinoids+activate+transient+receptor+potential+vanilloid+1+receptors+to+reduce+hyperdopaminergia-related+hyperactivity:+Therapeutic+implications.">Endocannabinoids activate transient receptor potential vanilloid 1 receptors to reduce hyperdopaminergia-related hyperactivity: Therapeutic implications.</a> Biological Psychiatry. 59 (6), 508-515 (2006).</li><li>Naz&#305;ro&#287;lu, M., &#214;vey, &. #. 3. 0. 4. ;. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+apoptosis+and+calcium+accumulation+through+TRPV1+channels+in+neurobiology+of+epilepsy.">Involvement of apoptosis and calcium accumulation through TRPV1 channels in neurobiology of epilepsy.</a> Neuroscience. 293, 55-66 (2015).</li><li>Mallet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPV1+in+brain+is+involved+in+acetaminophen-induced+antinociception.">TRPV1 in brain is involved in acetaminophen-induced antinociception.</a> PloS one. 5 (9), 1-11 (2010).</li><li>Barri&#232;re, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+amide+hydrolase-dependent+generation+of+antinociceptive+drug+metabolites+acting+on+TRPV1+in+the+brain.">Fatty acid amide hydrolase-dependent generation of antinociceptive drug metabolites acting on TRPV1 in the brain.</a> PloS one. 8 (8), e70690 (2013).</li><li>Jancs&#243;, G., Kiraly, E., Jancs&#243;-G&#225;bor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologically+induced+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+neurones.">Pharmacologically induced selective degeneration of chemosensitive primary sensory neurones.</a> Nature. 270 (5639), 741-743 (1977).</li><li>Szallasi, A., Blumberg, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vanilloid+receptor+loss+in+rat+sensory+ganglia+associated+with+long+term+desensitization+to+resiniferatoxin.">Vanilloid receptor loss in rat sensory ganglia associated with long term desensitization to resiniferatoxin.</a> Neuroscience Letters. 140 (1), 51-54 (1992).</li><li>Cavanaugh, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+subsets+of+unmyelinated+primary+sensory+fibers+mediate+behavioral+responses+to+noxious+thermal+and+mechanical+stimuli.">Distinct subsets of unmyelinated primary sensory fibers mediate behavioral responses to noxious thermal and mechanical stimuli.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (22), 9075-9080 (2009).</li><li>Jeffry, J. A., Yu, S. Q., Sikand, P., Parihar, A., Evans, M. S., Premkumar, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+targeting+of+TRPV1+expressing+sensory+nerve+terminals+in+the+spinal+cord+for+long+lasting+analgesia.">Selective targeting of TRPV1 expressing sensory nerve terminals in the spinal cord for long lasting analgesia.</a> PLoS ONE. 4 (9), e7021 (2009).</li><li>Jancs&#243;, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracisternal+capsaicin:+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+afferents+in+the+adult+rat.">Intracisternal capsaicin: selective degeneration of chemosensitive primary sensory afferents in the adult rat.</a> Neuroscience letters. 27 (1), 41-45 (1981).</li><li>Gamse, R., Saria, A., Lundberg, J. M., Theodorsson-Norheim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+neurochemical+changes+after+intracisternal+capsaicin+treatment+of+the+guinea+pig.">Behavioral and neurochemical changes after intracisternal capsaicin treatment of the guinea pig.</a> Neuroscience Letters. 64 (3), 287-292 (1986).</li><li>Neubert, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+mouse+orofacial+pain+and+the+effects+of+lesioning+TRPV1-expressing+neurons+on+operant+behavior.">Characterization of mouse orofacial pain and the effects of lesioning TRPV1-expressing neurons on operant behavior.</a> Molecular pain. 4, 43 (2008).</li><li>Karai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+vanilloid+receptor+1-expressing+primary+afferent+neurons+for+pain+control.">Deletion of vanilloid receptor 1-expressing primary afferent neurons for pain control.</a> The Journal of clinical investigation. 113 (9), 1344-1352 (2004).</li><li>Fukushima, A., Mamada, K., Iimura, A., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supraspinal-selective+TRPV1+desensitization+induced+by+intracerebroventricular+treatment+with+resiniferatoxin.">Supraspinal-selective TRPV1 desensitization induced by intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin.</a> Scientific reports. 7 (1), 12452 (2017).</li><li>Haley, T. J., McCormick, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+effects+produced+by+intracerebral+injection+of+drugs+in+the+conscious+mouse.">Pharmacological effects produced by intracerebral injection of drugs in the conscious mouse.</a> British journal of pharmacology and chemotherapy. 12 (1), 12-15 (1957).</li><li>Tj&#248;lsen, A., Berge, O. G., Hunskaar, S., Rosland, J. H., Hole, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+formalin+test:+an+evaluation+of+the+method.">The formalin test: an evaluation of the method.</a> Pain. 51 (1), 5-17 (1992).</li><li>Ohsawa, M., Miyabe, Y., Katsu, H., Yamamoto, S., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+sensory+nerve+fiber+responsible+for+lysophosphatidic+acid-induced+allodynia+in+mice.">Identification of the sensory nerve fiber responsible for lysophosphatidic acid-induced allodynia in mice.</a> Neuroscience. 247, 65-74 (2013).</li><li>Tanabe, M., Tokuda, Y., Takasu, K., Ono, K., Honda, M., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+synthetic+TRH+analogue+taltirelin+exerts+modality-specific+antinociceptive+effects+via+distinct+descending+monoaminergic+systems.">The synthetic TRH analogue taltirelin exerts modality-specific antinociceptive effects via distinct descending monoaminergic systems.</a> British journal of pharmacology. 150 (4), 403-414 (2007).</li><li>Ono, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+in+sympathetic+nerve+activity+as+a+possible+mechanism+for+the+hypothermic+effect+of+oseltamivir,+an+anti-influenza+virus+drug,+in+normal+mice.">Reduction in sympathetic nerve activity as a possible mechanism for the hypothermic effect of oseltamivir, an anti-influenza virus drug, in normal mice.</a> Basic &amp; clinical pharmacology &amp; toxicology. 113 (1), 25-30 (2013).</li><li>Kauer, J. A., Gibson, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hot+flash:+TRPV+channels+in+the+brain.">Hot flash: TRPV channels in the brain.</a> Trends in neurosciences. 32 (4), 215-224 (2009).</li></ol>

Det mest kritiske trinnet i disse eksperimentene er suksessen til i.c.v. injeksjon. I.c.v. injeksjon teknikk som brukes her er ganske enkel, men krever litt praksis. Før eksperimenter anbefales trening med fargestoffer (f.eks. 0,5 % trypan blå i saltvann). Hvis injeksjonen utføres riktig, bør et nålemerke være tydelig på koronarsuturen og det injiserte fargestoffet skal være tilstede i den kontralaterale ventrikkelen og den tredje ventrikkelen. Videre bør tvangsinnsetting unngås under injeksjon. Hvis nålespiss...

Dyr får ulike fysiske og kjemiske stimuli fra sitt miljø gjennom sensorer på perifere nerver. Den forbigående reseptoren potensielle vanilloid type 1 (TRPV1) er en av de termosensitive, ikke-selektive kationkanaler som fungerer somvarmesensorer 1,,2,og aktivering og / eller modulering av TRPV1 er kjent for å være et viktig skritt for nociception i både normale og inflammatoriske sammenhenger3. Selv om det generelle uttrykksmønsteret er kontroversielt, har uttrykk for TRPV1 også blitt foreslått i supraspinalregioner, som er involvert i ulike hjerneaktiviteter (inkludert nociception4,termoregulering5,angst6,oppmerksomhetssvikt hyperaktivitetsforstyrrelse7og epilepsi8). Videre har det nylig blitt foreslått at paracetamol, et mye brukt smertestillende middel, formidler aktiveringen av sentrale TRPV1 for å fremkalle sin smertestillende virkning9,10.
Administrasjon av overflødig TRPV1 agonist inkludert capsaicin og harpiksiferatoxin (RTX) til dyr fører til død av TRPV1-positive nevroner og langvarig desensibilisering til TRPV1 agonister11,12. Kombinert med lokal applikasjon (intratekal13,14, intraisternal15,,16,,17og intraganglional18),har denne kjemiske ablasjontilnærmingen gitt en alternativ måte å undersøke de fysiologiske funksjonene til TRPV1. Vi har nylig rapportert at intracerebroventrikulær (i.c.v.) injeksjon av RTX hemmer den smertestillende effekten av paracetamol hos mus, noe som tyder på supraspinal-selektiv TRPV1 desensibilisering19. I dette manuskriptet presenterer vi den nøyaktige protokollen for i.c.v. injeksjon og påfølgende smertetester.
Direkte injeksjon av legemidler i hjernens ventrikkler gjør det mulig å studere sine sentrale effekter samtidig som de minimaliserer perifere effekter. I.c.v. injeksjon prosedyren presentert her er en endring av metoden rapportert av Haley og McCormick20. Denne metoden er enkel å involvere innsetting av en injeksjonsnål i laterale ventriklene gjennom koronal sutur og krever ikke noe spesielt utstyr eller kirurgiske prosedyrer for hermetikk.
Perifer lokal bruk av TRPV1 agonister fremkaller en brennende smertefølelse og nevrogen betennelse. Mus som behandles systemisk med RTX, og TRPV1-KO-mus, er ufølsomme for dennestimuleringen 13. Vi har utført intraplantarinjeksjon av RTX (RTX-test) for å bekrefte bevaring av perifer TRPV1 i RTX-i.c.v. mus. Denne metoden er en modifikasjon av den konvensjonelle formalin test21.
Det har blitt rapportert at mus systemisk behandlet med RTX og TRPV1-KO mus viser en normal terskel for mekaniske stimuli11,,13,,22. Her presenterer vi en prosedyre for haletrykktesten for testing av endringer i den smertestillende effekten av paracetamol.
Alle disse prosedyrene er ortodokse og allsidige, og kan brukes på studier av andre stoffer.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="872">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Resiniferatoxin</td>
			<td style="width:191px;">LKT Laboratories</td>
			<td style="width:117px;">R1774</td>
			<td style="width:319px;">used for s.c./i.c.v. pretreatments and the RTX test</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">Acetaminophen</td>
			<td style="width:191px;">IWAKI SEIYAKU</td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td style="width:319px;">gifted from IWAKI SEIYAKU</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">Pentobarbital sodium salt</td>
			<td style="width:191px;">Tokyo Chemical Industry</td>
			<td style="width:117px;">P0776</td>
			<td style="width:319px;">used for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Ethanol (99.5)</td>
			<td style="width:191px;">Wako Pure Chemical Industries</td>
			<td style="width:117px;">057-00456</td>
			<td style="width:319px;">used for dissolving RTX</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monooleate</td>
			<td style="width:191px;">Wako Pure Chemical Industries</td>
			<td style="width:117px;">161-21621</td>
			<td style="width:319px;">used for dissolving RTX</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">25 mL microsyringe</td>
			<td style="width:191px;">Hamilton</td>
			<td style="width:117px;">1702LT</td>
			<td style="width:319px;">used for i.c.v. injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">100 mL microsyringe</td>
			<td style="width:191px;">Hamilton</td>
			<td style="width:117px;">1710LT</td>
			<td style="width:319px;">used for intraplantar injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">26-gauge disposable needle</td>
			<td style="width:191px;">TERUMO</td>
			<td style="width:117px;">NN-2613S</td>
			<td style="width:319px;">used for i.c.v. injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">30-gauge disposable needle</td>
			<td style="width:191px;">NIPRO</td>
			<td style="width:117px;">01134</td>
			<td style="width:319px;">used for intraplantar injection</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Pressure meter</td>
			<td style="width:191px;">Ugo Basile</td>
			<td style="width:117px;">Analgesy-Meter Type 7200</td>
			<td style="width:319px;">used for tail pressure test</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin and pain tests in mice

Den forbigående reseptoren potensielle vanilloid type 1 (TRPV1), en termosensitiv kation kanal, er kjent for å utløse smerter i perifere nerver. I tillegg til sin perifere funksjon har dets engasjement i hjernefunksjoner også blitt foreslått. Harpiksiferatoxin (RTX), en ultrapotent TRPV1 agonist, har vært kjent for å indusere langsiktig desensibilisering av TRPV1, og denne desensibiliseringen har vært en alternativ tilnærming for å undersøke den fysiologiske relevansen av TRPV1-uttrykkende celler. Her beskriver vi en protokoll for intracerebroventrikulær (i.c.v.) behandling med RTX hos mus. Prosedyrer er beskrevet for testing av nociception til perifer TRPV1 stimulering (RTX test) og mekanisk stimulering (haletrykktest) deretter følge. Selv om de nociceptive responsene til mus som hadde blitt administrert RTX i.c.v. var sammenlignbare med de av kontrollgruppene, var RTX-i.c.v.-administrerte mus ufølsomme for den smertestillende effekten av paracetamol, noe som tyder på at RTX-behandling kan indusere suppinrasal-selektiv TRPV1 desensibilisering. Denne musemodellen kan brukes som et praktisk eksperimentelt system for å studere rollen som TRPV1 i hjernen / supraspinalfunksjonen. Disse teknikkene kan også brukes på studier av andre legemidlers sentrale handlinger.

De i.c.v.-behandlede musene viser ingen tilsynelatende abnormiteter i utseende, spontane aktiviteter,kroppsvekt 19 og kjernekroppstemperatur (Kjøretøybehandlet gruppe, 38,4 ± 0,3 °C, n = 6; rtx-behandlet gruppe, 38,7 ± 0,2 °C, n = 6).
Figur 2A-B viser responsen til s.c.- eller i.c.v.-behandlede mus til intraplantarinjeksjonen av RTX. Slikking / biting o...

Watch this Scientific Journal Video about Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice at JoVE.com

Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice

Den forbigående reseptoren potensielle vanilloid type 1 (TRPV1) i supraspinal regionen har blitt foreslått å spille noen roller i hjernefunksjonen. Beskrevet her er en protokoll for intracerebroventrikulær injeksjon av harpiksiferatoxin for supraspinal TRPV1 desensibilisering hos mus. Prosedyrer for noen smertetester presenteres også.

Intracerebroventrikulær behandling med harpiksiferatoxin og smertetester hos mus

The transient receptor potential vanilloid type 1 (TRPV1), a thermosensitive cation channel, is known to trigger pain in the peripheral nerves. In ...

Det overordnede målet med denne forbehandlingen er å generere mus og at TRPV1-kanaler desensibiliseres ved supraspinalregioner. Denne metoden kan bidra til å svare på viktige spørsmål i det nevrofarmalogiske feltet. Den største fordelen med denne teknikken er at supraspinal selektiv TRPV1 desensibilisering kan induseres på en ganske enkel måte.For å begynne denne prosedyren, bedøve en mus med pentobarbital natrium intraperitoneally og se etter tap av retterefleks. For subkutan behandling, injiser RTX ved 20 mikrogram per milliliter i baksiden av nakken med et volum på 0,1 milliliter per 10 gram kroppsvekt. For kontrollgruppen, injiser kjøretøyet på samme måte.Pass en engangs 27 gauge nål gjennom et metallrør for å utsette 3 til 3,5 millimeter tuppen av nålen. Hold deretter squamosal bein av musen fast med fingrene. Flytt nålen sideveis i hodebunnen og finn sagittalsugningen når nålespissen er hekta på suturen.Flytt spissen omtrent en millimeter til høyre, og flytt deretter spissen rostrally for å finne koronal sutur. Deretter setter du nålen sakte og vertikalt. Injiser RTX-oppløsningen over 10 sekunder og hold den inne i ytterligere 10 sekunder etterpå.Deretter trekker du nålen sakte og returnerer musen til sitt hjem bur. En uke etter RTX-injeksjon, minst 60 minutter før testen, overfører du musen til testrommet. Minst 30 minutter før testen, plasser musen i et plexiglassbur for å tillate det å akklimatisere seg til miljøet.Deretter 20 minutter før testen, administrere paracetamol på 300 milligram per kilo til musen intraperitoneally. Hold musen løst i en liten klut pose og sett en 30 gauge nål inn i hælen på høyre bakpote. Før nålen subkutant til nær gangputen og injiser 20 mikroliter RTX-oppløsning ved 0,05 mikrogram per milliliter.Deretter måler du perioden med slikking og bitende oppførsel i den glabrous regionen av den berørte poten i hver fem minutters blokk. En uke etter RTX injeksjon, overføre musen til testrommet. Plasser musen i et plexiglassbur.Merk flekkene på 1,5 og 2,5 centimeter fra bunnen av halen. Deretter holder du musen løst i en liten klutpose og legger press på flekkene med en stump sonde. Vær oppmerksom på at cutoff trykk på 250 gram er pålagt for å unngå vevskader.Bestem trykket som kreves for å fremkalle rømningsatferd og beregne den merkbare terskelen ved å snitte trykket som bestemmes på de to stedene. Gjenta prosedyrene hvert 15. Etter å ha oppnådd baseline, administrer paracetamol ved 300 mikrogram per kilo til musen intraperitonealt, og gjenta deretter haletrykktesten hvert 15.Disse to figurene viser responsen til SC- eller ICV-behandlede mus til intraplantarinjeksjonen av RTX. Slikking og bitende oppførsel av kjøretøybehandlede mus var bemerkelsesverdig i de første 10 minuttene. Selv om SC-forbehandlede mus ikke viste slikking og bitende oppførsel i det hele tatt, reagerte ICV-forbehandlede mus normalt på plantarinjeksjonen av RTX.Videre reduserte intraperitoneal administrering av paracetamol slikking og bitende oppførsel av kjøretøy ICV behandlede mus, men ikke hos RTX ICV-behandlede mus. Denne grafen viser de smertestillende effektene av paracetamol ved 300 mikrogram per kilo i haletrykktesten. Paracetamol reduserte den nociceptive responsen av kjøretøyforbehandlede mus i begge testene, men de smertestillende effektene av paracetamol ble hemmet hos mus som var forbehandlet ICV med RTX.Når mestret, denne ICV injeksjon teknikk kan brukes for andre legemidler. Ikke glem at det å arbeide med Harsiniferatoxin kan være ekstremt farlig og sørg for å bruke gummihansker og briller for beskyttelse ved håndtering.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended ...

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

Måling Spinal presynaptiske Hemming i mus ved Dorsal Root Potential Recording<em&gt; I Vivo</em

Presynaptic inhibition is one of the most powerful inhibitory mechanisms in the spinal cord. The underlying physiological mechanism is a depolarization of ...

Intracerebroventricular Viral Injection of the Neonatal Mouse Brain for Persistent and Widespread Neuronal Transduction

Intracerebroventrikulær Viral Injeksjon av Neonatal Mouse Brain for Vedvarende og Utbredt Neuronal Transduksjon

With the pace of scientific advancement accelerating rapidly, new methods are needed for experimental neuroscience to quickly and easily manipulate gene ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

En enkel og rimelig metode for å bestemme Cold Følsomhet og Adaptation i Mus

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-&#946; Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-ÃƒÅ½Ã‚Â² Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

Intracerebroventrikulær Injeksjon av amyloid-beta Peptider i normale mus til Akutt Fremkall Alzheimer-lignende kognitive mangler

Amyloid-&#946; (A&#946;) is a major pathological mediator of both familial and sporadic Alzheimer's disease (AD). In the brains of AD patients, ...

Intracranial Pharmacotherapy and Pain Assays in Rodents

Intrakranielt farmakoterapi og smerte analyser i gnagere

Pain is a salient sensory experience with affective and cognitive dimensions. However, central mechanisms for pain remain poorly understood, hindering the ...

Comprehensive Autopsy Program for Individuals with Multiple Sclerosis

Omfattende obduksjon program for personer med multippel sklerose

We describe a rapid tissue donation program for individuals with multiple sclerosis (MS) that requires scientists and technicians to be on-call 24/7, 365 ...

Burn Injury-Induced Pain and Depression-Like Behavior in Mice

Brenn skadeindusert smerte og depresjonslignende oppførsel hos mus

Scalding water is the most common cause of burn injury in both elderly and young populations. It is one of the major clinical challenges because of the ...

Dural Stimulation and Periorbital von Frey Testing in Mice As a Preclinical Model of Headache

Dural stimulering og periorbital von frey testing hos mus som en preklinisk modell for hodepine

The cranial meninges, comprised of the dura mater, arachnoid, and pia mater, are thought to primarily serve structural functions for the nervous system.  ...

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

Mekanisk konfliktunngåelsesanalyse for å måle smerteatferd hos mus

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...