Name: intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin and pain tests in mice
Uploaded: 2020-09-02T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice at JoVE.com

Alla de experimentella protokoll som används här godkändes av Animal Care and Use Committee of Musashino University. Manliga ddY-möss (SLC, Shizuoka, Japan) hölls i minst 7 dagar under en 12-h ljus/mörk cykel före experiment med vatten och mat ad libitum. 5- eller 6 veckor gamla möss användes för experimenten.
1. Beredning av droger
<ol><li>
Rtx OBS: Alkoholhaltiga RTX lösning kan orsaka svåra brännskador på huden och ögonskador. Se till att använda gummih...

<ol>
	<li>Cavanaugh, D. J., Chesler, A. T., Braz, J. M., Shah, N. M., Julius, D., Basbaum, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restriction+of+transient+receptor+potential+vanilloid-1+to+the+peptidergic+subset+of+primary+afferent+neurons+follows+its+developmental+downregulation+in+nonpeptidergic+neurons.">Restriction of transient receptor potential vanilloid-1 to the peptidergic subset of primary afferent neurons follows its developmental downregulation in nonpeptidergic neurons.</a> J Neurosci. 31 (28), 10119-10127 (2011).</li><li>Caterina, M. J., Schumacher, M. A., Tominaga, M., Rosen, T. A., Levine, J. D., Julius, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+capsaicin+receptor:+a+heat-activated+ion+channel+in+the+pain+pathway.">The capsaicin receptor: a heat-activated ion channel in the pain pathway.</a> Nature. 389 (6653), 816-824 (1997).</li><li>Caterina, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+nociception+and+pain+sensation+in+mice+lacking+the+capsaicin+receptor.">Impaired nociception and pain sensation in mice lacking the capsaicin receptor.</a> Science. 288 (5464), 306-313 (2000).</li><li>Starowicz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tonic+endovanilloid+facilitation+of+glutamate+release+in+brainstem+descending+antinociceptive+pathways.">Tonic endovanilloid facilitation of glutamate release in brainstem descending antinociceptive pathways.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (50), 13739-13749 (2007).</li><li>Gavva, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vanilloid+receptor+TRPV1+is+tonically+activated+in+vivo+and+involved+in+body+temperature+regulation.">The vanilloid receptor TRPV1 is tonically activated in vivo and involved in body temperature regulation.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (13), 3366-3374 (2007).</li><li>Marsch, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+anxiety,+conditioned+fear,+and+hippocampal+long-term+potentiation+in+transient+receptor+potential+vanilloid+type+1+receptor-deficient+mice.">Reduced anxiety, conditioned fear, and hippocampal long-term potentiation in transient receptor potential vanilloid type 1 receptor-deficient mice.</a> Journal of Neuroscience. 27 (4), 832-839 (2007).</li><li>Tzavara, E. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocannabinoids+activate+transient+receptor+potential+vanilloid+1+receptors+to+reduce+hyperdopaminergia-related+hyperactivity:+Therapeutic+implications.">Endocannabinoids activate transient receptor potential vanilloid 1 receptors to reduce hyperdopaminergia-related hyperactivity: Therapeutic implications.</a> Biological Psychiatry. 59 (6), 508-515 (2006).</li><li>Naz&#305;ro&#287;lu, M., &#214;vey, &. #. 3. 0. 4. ;. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+apoptosis+and+calcium+accumulation+through+TRPV1+channels+in+neurobiology+of+epilepsy.">Involvement of apoptosis and calcium accumulation through TRPV1 channels in neurobiology of epilepsy.</a> Neuroscience. 293, 55-66 (2015).</li><li>Mallet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPV1+in+brain+is+involved+in+acetaminophen-induced+antinociception.">TRPV1 in brain is involved in acetaminophen-induced antinociception.</a> PloS one. 5 (9), 1-11 (2010).</li><li>Barri&#232;re, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+amide+hydrolase-dependent+generation+of+antinociceptive+drug+metabolites+acting+on+TRPV1+in+the+brain.">Fatty acid amide hydrolase-dependent generation of antinociceptive drug metabolites acting on TRPV1 in the brain.</a> PloS one. 8 (8), e70690 (2013).</li><li>Jancs&#243;, G., Kiraly, E., Jancs&#243;-G&#225;bor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologically+induced+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+neurones.">Pharmacologically induced selective degeneration of chemosensitive primary sensory neurones.</a> Nature. 270 (5639), 741-743 (1977).</li><li>Szallasi, A., Blumberg, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vanilloid+receptor+loss+in+rat+sensory+ganglia+associated+with+long+term+desensitization+to+resiniferatoxin.">Vanilloid receptor loss in rat sensory ganglia associated with long term desensitization to resiniferatoxin.</a> Neuroscience Letters. 140 (1), 51-54 (1992).</li><li>Cavanaugh, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+subsets+of+unmyelinated+primary+sensory+fibers+mediate+behavioral+responses+to+noxious+thermal+and+mechanical+stimuli.">Distinct subsets of unmyelinated primary sensory fibers mediate behavioral responses to noxious thermal and mechanical stimuli.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (22), 9075-9080 (2009).</li><li>Jeffry, J. A., Yu, S. Q., Sikand, P., Parihar, A., Evans, M. S., Premkumar, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+targeting+of+TRPV1+expressing+sensory+nerve+terminals+in+the+spinal+cord+for+long+lasting+analgesia.">Selective targeting of TRPV1 expressing sensory nerve terminals in the spinal cord for long lasting analgesia.</a> PLoS ONE. 4 (9), e7021 (2009).</li><li>Jancs&#243;, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracisternal+capsaicin:+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+afferents+in+the+adult+rat.">Intracisternal capsaicin: selective degeneration of chemosensitive primary sensory afferents in the adult rat.</a> Neuroscience letters. 27 (1), 41-45 (1981).</li><li>Gamse, R., Saria, A., Lundberg, J. M., Theodorsson-Norheim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+neurochemical+changes+after+intracisternal+capsaicin+treatment+of+the+guinea+pig.">Behavioral and neurochemical changes after intracisternal capsaicin treatment of the guinea pig.</a> Neuroscience Letters. 64 (3), 287-292 (1986).</li><li>Neubert, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+mouse+orofacial+pain+and+the+effects+of+lesioning+TRPV1-expressing+neurons+on+operant+behavior.">Characterization of mouse orofacial pain and the effects of lesioning TRPV1-expressing neurons on operant behavior.</a> Molecular pain. 4, 43 (2008).</li><li>Karai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+vanilloid+receptor+1-expressing+primary+afferent+neurons+for+pain+control.">Deletion of vanilloid receptor 1-expressing primary afferent neurons for pain control.</a> The Journal of clinical investigation. 113 (9), 1344-1352 (2004).</li><li>Fukushima, A., Mamada, K., Iimura, A., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supraspinal-selective+TRPV1+desensitization+induced+by+intracerebroventricular+treatment+with+resiniferatoxin.">Supraspinal-selective TRPV1 desensitization induced by intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin.</a> Scientific reports. 7 (1), 12452 (2017).</li><li>Haley, T. J., McCormick, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+effects+produced+by+intracerebral+injection+of+drugs+in+the+conscious+mouse.">Pharmacological effects produced by intracerebral injection of drugs in the conscious mouse.</a> British journal of pharmacology and chemotherapy. 12 (1), 12-15 (1957).</li><li>Tj&#248;lsen, A., Berge, O. G., Hunskaar, S., Rosland, J. H., Hole, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+formalin+test:+an+evaluation+of+the+method.">The formalin test: an evaluation of the method.</a> Pain. 51 (1), 5-17 (1992).</li><li>Ohsawa, M., Miyabe, Y., Katsu, H., Yamamoto, S., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+sensory+nerve+fiber+responsible+for+lysophosphatidic+acid-induced+allodynia+in+mice.">Identification of the sensory nerve fiber responsible for lysophosphatidic acid-induced allodynia in mice.</a> Neuroscience. 247, 65-74 (2013).</li><li>Tanabe, M., Tokuda, Y., Takasu, K., Ono, K., Honda, M., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+synthetic+TRH+analogue+taltirelin+exerts+modality-specific+antinociceptive+effects+via+distinct+descending+monoaminergic+systems.">The synthetic TRH analogue taltirelin exerts modality-specific antinociceptive effects via distinct descending monoaminergic systems.</a> British journal of pharmacology. 150 (4), 403-414 (2007).</li><li>Ono, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+in+sympathetic+nerve+activity+as+a+possible+mechanism+for+the+hypothermic+effect+of+oseltamivir,+an+anti-influenza+virus+drug,+in+normal+mice.">Reduction in sympathetic nerve activity as a possible mechanism for the hypothermic effect of oseltamivir, an anti-influenza virus drug, in normal mice.</a> Basic &amp; clinical pharmacology &amp; toxicology. 113 (1), 25-30 (2013).</li><li>Kauer, J. A., Gibson, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hot+flash:+TRPV+channels+in+the+brain.">Hot flash: TRPV channels in the brain.</a> Trends in neurosciences. 32 (4), 215-224 (2009).</li></ol>

Det mest kritiska steget i dessa experiment är framgången för i.c.v. injektionen. Den i.c.v. injektionsteknik som används här är ganska enkel men kräver lite övning. Före experiment rekommenderas övning med färgämnen (t.ex. 0,5 % trypanblå i saltlösning). Om injektionen utförs korrekt ska ett nålmärke vara uppenbart på koronasuturen och det injicerade färgämnet ska finnas i kontralateralkammaren och den tredje ventrikeln. Dessutom bör tvångsinföring undvikas under injektionen. Om nålspetsen är ko...

Djur får olika fysiska och kemiska stimuli från sin omgivning genom sensorer på de perifera nerverna. Den transienta receptorn potentiella vanilloid typ 1 (TRPV1) är en av de termosensiösa, icke-selectiv katjonkanaler som fungerar somvärmesensorer 1,2 , ochaktiveringoch/eller modulering av TRPV1 är känt för att vara ett viktigt steg för nociception i både normala och inflammatoriska sammanhang3. Även om det övergripande uttrycket mönstret är kontroversiellt, har uttryck för TRPV1 också föreslagits i supraspinal regioner, att vara involverad i olika hjärnaktiviteter (inklusive nociception4, termoreglering5, ångest6, attention deficit hyperactivity disorder7, och epilepsi8). Dessutom har det nyligen föreslagits att paracetamol, en allmänt använd smärtstillande medel, förmedlar aktivering av centrala TRPV1 att framkalla dess smärtstillande åtgärder9,10.
Administrering av överskott TRPV1 agonist inklusive capsaicin och resiniferatoxin (RTX) till djur leder till döden av TRPV1-positiva nervceller och långvarig desensibilisering till TRPV1-agonister11,12. Kombinerat med den lokala applikationen (intratekal13,14, intracisternal15,16,17, och intraganglional18), har denna kemiska ablationsmetod gett ett alternativt sätt att undersöka de fysiologiska funktionerna hos TRPV1. Vi har nyligen rapporterat att intracerebroventricular (i.c.v.) injektion av RTX hämmar den smärtstillande effekten av paracetamol hos möss, vilket tyder på supraspinal-selektiv TRPV1 desensibilisering19. I detta manuskript presenterar vi det exakta protokollet för i.c.v. injektion och efterföljande smärttester.
Direkt injektion av läkemedel i hjärnans ventriklar gör det möjligt att studera deras centrala effekter samtidigt som de minimaliserar eventuella perifera effekter. Den i.c.v. injektion förfarande som presenteras här är en modifiering av den metod som rapporterats av Haley och McCormick20. Denna metod är enkel som innebär införande av en injektionsnål i de laterala ventriklarna genom koronasuturen och kräver inte någon speciell utrustning eller kirurgiska ingrepp för kanylering.
Perifera lokala tillämpningen av TRPV1 agonister framkallar en brännande smärta sensation och neurogena inflammation. Möss som är systembehandlade med RTX, och TRPV1-KO-möss, är okänsliga för denna stimulering13. Vi har utfört intraplantar injektion av RTX (RTX test) för att bekräfta bevarandet av perifera TRPV1 i RTX-i.c.v. Möss. Denna metod är en modifiering av det konventionella formalintestet21.
Det har rapporterats att möss som behandlas systemiskt med RTX och TRPV1-KO-möss uppvisar en normal tröskel till mekaniska stimuli11,13,22. Här presenterar vi ett förfarande för svansen trycktest för provning av förändringar i den smärtstillande effekten av paracetamol.
Alla dessa förfaranden är ortodoxa och mångsidiga, och kan tillämpas på studier av andra läkemedel.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="872">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Resiniferatoxin</td>
			<td style="width:191px;">LKT Laboratories</td>
			<td style="width:117px;">R1774</td>
			<td style="width:319px;">used for s.c./i.c.v. pretreatments and the RTX test</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">Acetaminophen</td>
			<td style="width:191px;">IWAKI SEIYAKU</td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td style="width:319px;">gifted from IWAKI SEIYAKU</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">Pentobarbital sodium salt</td>
			<td style="width:191px;">Tokyo Chemical Industry</td>
			<td style="width:117px;">P0776</td>
			<td style="width:319px;">used for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Ethanol (99.5)</td>
			<td style="width:191px;">Wako Pure Chemical Industries</td>
			<td style="width:117px;">057-00456</td>
			<td style="width:319px;">used for dissolving RTX</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monooleate</td>
			<td style="width:191px;">Wako Pure Chemical Industries</td>
			<td style="width:117px;">161-21621</td>
			<td style="width:319px;">used for dissolving RTX</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">25 mL microsyringe</td>
			<td style="width:191px;">Hamilton</td>
			<td style="width:117px;">1702LT</td>
			<td style="width:319px;">used for i.c.v. injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">100 mL microsyringe</td>
			<td style="width:191px;">Hamilton</td>
			<td style="width:117px;">1710LT</td>
			<td style="width:319px;">used for intraplantar injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">26-gauge disposable needle</td>
			<td style="width:191px;">TERUMO</td>
			<td style="width:117px;">NN-2613S</td>
			<td style="width:319px;">used for i.c.v. injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">30-gauge disposable needle</td>
			<td style="width:191px;">NIPRO</td>
			<td style="width:117px;">01134</td>
			<td style="width:319px;">used for intraplantar injection</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Pressure meter</td>
			<td style="width:191px;">Ugo Basile</td>
			<td style="width:117px;">Analgesy-Meter Type 7200</td>
			<td style="width:319px;">used for tail pressure test</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin and pain tests in mice

Den transienta receptorn potentiella vanilloid typ 1 (TRPV1), en termokänslig katjonkanal, är känd för att utlösa smärta i de perifera nerverna. Förutom dess perifera funktion, dess engagemang i hjärnans funktioner har också föreslagits. Resiniferatoxin (RTX), en ultrapotent TRPV1-agonist, har varit känt för att inducera långvarig desensibilisering av TRPV1, och denna desensibilisering har varit en alternativ metod för att undersöka den fysiologiska relevansen av TRPV1-uttrycker celler. Här beskriver vi ett protokoll för intracerebroventricular (i.c.v.) behandling med RTX i möss. Procedurer beskrivs för testning nociception till perifera TRPV1 stimulering (RTX test) och mekanisk stimulering (svans tryck test) sedan följa. Även om de nociceptiva svaren från möss som hade administrerats RTX i.c.v. var jämförbara med de som kontrollgrupperna, RTX-i.c.v.-administrerade möss var okänsliga för den smärtstillande effekten av paracetamol, vilket tyder på att i.c.v. RTX behandling kan framkalla supraspinal-selektiv TRPV1 desensibilisering. Denna musmodell kan användas som ett bekvämt experimentellt system för att studera TRPV1s roll i hjärnans/supraspinalfunktionens funktion. Dessa tekniker kan också tillämpas på studier av andra drogers centrala åtgärder.

De i.c.v.-behandlade mössen uppvisar inga synbara avvikelser i sitt utseende, spontana aktiviteter, kroppsvikt19 och kroppstemperatur (Fordonsbehandlad grupp, 38,4 ± 0,3 °C, n = 6; RTX-behandlad grupp, 38,7 ± 0,2 °C, n = 6).
Bild 2A-B visar s.c.- eller i.c.v.-behandlade mösss reaktionsförmåga till den intraplantarinjektionen av RTX. Den slicka / bita ...

Watch this Scientific Journal Video about Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice at JoVE.com

Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice

Den transienta receptorn potentiella vanilloid typ 1 (TRPV1) i regionen supraspinal har föreslagits att spela några roller i hjärnans funktion. Beskrivs här är ett protokoll för intracerebroventricular injektion av resiniferatoxin för supraspinal TRPV1 desensibilisering hos möss. Förfaranden för vissa smärttester presenteras också.

Intracerebroventricular behandling med resiniferatoxin och smärtprov hos möss

The transient receptor potential vanilloid type 1 (TRPV1), a thermosensitive cation channel, is known to trigger pain in the peripheral nerves. In ...

Det övergripande målet med denna förbehandling är att generera möss och att TRPV1-kanaler är desensibiliserade vid supraspinalregioner. Denna metod kan hjälpa till att besvara viktiga frågor i neurofarmakologiska området. Den största fördelen med denna teknik är att supraspinal selektiv TRPV1 desensibilisering kan induceras av ett ganska enkelt sätt.Till att börja detta förfarande, bedöva en mus med pentobarbital natrium intraperitoneally och kontrollera om förlust av rättande reflex. För subkutan behandling, injicera RTX vid 20 mikrogram per milliliter i nacken med en volym på 0,1 milliliter per 10 gram kroppsvikt. För kontrollgruppen injicerar du fordonet på samma sätt.Passera en engångs 27 gauge nål genom ett metallrör för att exponera 3 till 3,5 millimeter spets av nålen. Håll sedan squamosal ben av musen stadigt med fingrarna. Flytta nålen i laterled på hårbotten och hitta sagittal sutur som nålspetsen är fast på suturen.Flytta spetsen ungefär en millimeter till höger, flytta sedan spetsen rostrally att hitta korona sutur. Efteråt, sätt in nålen långsamt och vertikalt. Injicera RTX-lösningen över 10 sekunder och håll den i ytterligare 10 sekunder efteråt.Därefter dra tillbaka nålen långsamt och tillbaka musen till sin hembur. En vecka efter RTX-injektion, minst 60 minuter före testet, överför musen till testrummet. Minst 30 minuter före testet, placera musen i en plexiglas bur för att tillåta den att acklimatisera sig till miljön.Sedan 20 minuter före testet, administrera paracetamol på 300 milligram per kilo till musen intraperitoneally. Håll musen löst i en liten tygpåse och sätt in en 30 gauge nål i hälen på den högra baktassen. För nålen subkutant till nära gångplattan och injicera 20 mikroliter RTX-lösning vid 0,05 mikrogram per milliliter.Därefter mäta perioden av slicka och bita beteende i glabrous regionen av den drabbade tassen i varje fem minuters block. En vecka efter RTX injektion, överför musen till testrummet. Placera musen i en plexiglas bur.Markera fläckarna på 1,5 och 2,5 centimeter från svansens bas. Därefter håller du musen löst i en liten tygpåse och applicerar tryck på fläckarna med en trubbig sond. Observera att cutoff tryck på 250 gram införs för att undvika vävnadsskador.Bestäm det tryck som krävs för att framkalla flyktbeteende och beräkna den nociceptiva tröskeln genom att medelvärdet av trycket som bestämts vid de två platserna. Upprepa procedurerna var 15:e minut. Efter erhållande av baslinjen, administrera paracetamol vid 300 mikrogram per kilogram till musen intraperitonealt, upprepa sedan testet svanstryck var 15 minuter tills den når 90 minuter.Dessa två siffror visar responsiviteten hos SC- eller ICV-behandlade möss till den intraplantarinjektionen av RTX. Den slicka och bita beteende fordonsbehandlade möss var anmärkningsvärt under de första 10 minuterna. Även om SC pretreated möss inte visade slicka och bita beteende alls, ICV pretreated möss svarade normalt på plantar injektion av RTX.Dessutom minskade intraperitoneal administrering av paracetamol slicka och bita beteende av fordonet ICV behandlade möss, men inte i RTX ICV behandlade möss. Detta diagram visar de smärtstillande effekterna av paracetamol vid 300 mikrogram per kilogram i testet svanstryck. Paracetamol minskade det nociceptiva svaret hos fordonets förbehandlade möss i båda testerna, men de smärtstillande effekterna av paracetamol hämmades hos möss som var förbehandlade ICV med RTX.När behärskar, denna ICV injektionsteknik kan tillämpas för andra droger. Glöm inte att arbeta med Resiniferatoxin kan vara extremt farligt och se till att använda gummihandskar och glasögon för skydd vid hantering.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

Den spån och Capellini Tester Hantering: Enkel kvantitativa mått på händiga framtassarna funktionen hos råttor och möss

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended ...

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

Mätning Spinal Presynaptiska Hämning i möss genom Rygg-rota Potential inspelning<em&gt; In Vivo</em

Presynaptic inhibition is one of the most powerful inhibitory mechanisms in the spinal cord. The underlying physiological mechanism is a depolarization of ...

Intracerebroventricular Viral Injection of the Neonatal Mouse Brain for Persistent and Widespread Neuronal Transduction

Intracerebroventrikulär Viral Injektion av neonatal mus hjärnans för långlivade och Utbredd neuronal Transduktion

With the pace of scientific advancement accelerating rapidly, new methods are needed for experimental neuroscience to quickly and easily manipulate gene ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

En enkel och billig metod för bestämning Cold Känslighet och anpassning hos möss

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-&#946; Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-ÃƒÅ½Ã‚Â² Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

Intracerebroventrikulär Injektion av amyloid-p-peptider hos normala möss att Akut Framkalla Alzheimer-liknande kognitiva brister

Amyloid-&#946; (A&#946;) is a major pathological mediator of both familial and sporadic Alzheimer's disease (AD). In the brains of AD patients, ...

Intracranial Pharmacotherapy and Pain Assays in Rodents

Intrakraniell farmakoterapi och smärta analyser hos gnagare

Pain is a salient sensory experience with affective and cognitive dimensions. However, central mechanisms for pain remain poorly understood, hindering the ...

Comprehensive Autopsy Program for Individuals with Multiple Sclerosis

Omfattande Obduktions program för individer med multipel skleros

We describe a rapid tissue donation program for individuals with multiple sclerosis (MS) that requires scientists and technicians to be on-call 24/7, 365 ...

Burn Injury-Induced Pain and Depression-Like Behavior in Mice

Brännskadeinducerad smärta och depressionsliknande beteende hos möss

Scalding water is the most common cause of burn injury in both elderly and young populations. It is one of the major clinical challenges because of the ...

Dural Stimulation and Periorbital von Frey Testing in Mice As a Preclinical Model of Headache

Dural stimulering och periorbital von Frey-testning hos möss som en preklinisk modell av huvudvärk

The cranial meninges, comprised of the dura mater, arachnoid, and pia mater, are thought to primarily serve structural functions for the nervous system.  ...

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

Mekanisk konfliktundvikande analys för att mäta smärtbeteende hos möss

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...