Name: intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin and pain tests in mice
Uploaded: 2020-09-02T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice at JoVE.com

Burada kullanılan tüm deneysel protokoller Musashino Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır. Erkek ddY fareler (SLC, Shizuoka, Japonya) su ve gıda reklam libitum ile deneyler önce 12-h ışık / karanlık döngüsü altında en az 7 gün tutuldu. Deneylerde 5 veya 6 haftalık fareler kullanıldı.
1. İlaçLarın Hazırlanması
<ol><li>
Rtx NOT: Alkollü RTX çözeltisi ciddi cilt yanıkları ve göz hasarına neden olabilir. Ku...

<ol>
	<li>Cavanaugh, D. J., Chesler, A. T., Braz, J. M., Shah, N. M., Julius, D., Basbaum, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restriction+of+transient+receptor+potential+vanilloid-1+to+the+peptidergic+subset+of+primary+afferent+neurons+follows+its+developmental+downregulation+in+nonpeptidergic+neurons.">Restriction of transient receptor potential vanilloid-1 to the peptidergic subset of primary afferent neurons follows its developmental downregulation in nonpeptidergic neurons.</a> J Neurosci. 31 (28), 10119-10127 (2011).</li><li>Caterina, M. J., Schumacher, M. A., Tominaga, M., Rosen, T. A., Levine, J. D., Julius, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+capsaicin+receptor:+a+heat-activated+ion+channel+in+the+pain+pathway.">The capsaicin receptor: a heat-activated ion channel in the pain pathway.</a> Nature. 389 (6653), 816-824 (1997).</li><li>Caterina, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+nociception+and+pain+sensation+in+mice+lacking+the+capsaicin+receptor.">Impaired nociception and pain sensation in mice lacking the capsaicin receptor.</a> Science. 288 (5464), 306-313 (2000).</li><li>Starowicz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tonic+endovanilloid+facilitation+of+glutamate+release+in+brainstem+descending+antinociceptive+pathways.">Tonic endovanilloid facilitation of glutamate release in brainstem descending antinociceptive pathways.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (50), 13739-13749 (2007).</li><li>Gavva, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vanilloid+receptor+TRPV1+is+tonically+activated+in+vivo+and+involved+in+body+temperature+regulation.">The vanilloid receptor TRPV1 is tonically activated in vivo and involved in body temperature regulation.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (13), 3366-3374 (2007).</li><li>Marsch, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+anxiety,+conditioned+fear,+and+hippocampal+long-term+potentiation+in+transient+receptor+potential+vanilloid+type+1+receptor-deficient+mice.">Reduced anxiety, conditioned fear, and hippocampal long-term potentiation in transient receptor potential vanilloid type 1 receptor-deficient mice.</a> Journal of Neuroscience. 27 (4), 832-839 (2007).</li><li>Tzavara, E. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocannabinoids+activate+transient+receptor+potential+vanilloid+1+receptors+to+reduce+hyperdopaminergia-related+hyperactivity:+Therapeutic+implications.">Endocannabinoids activate transient receptor potential vanilloid 1 receptors to reduce hyperdopaminergia-related hyperactivity: Therapeutic implications.</a> Biological Psychiatry. 59 (6), 508-515 (2006).</li><li>Naz&#305;ro&#287;lu, M., &#214;vey, &. #. 3. 0. 4. ;. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+apoptosis+and+calcium+accumulation+through+TRPV1+channels+in+neurobiology+of+epilepsy.">Involvement of apoptosis and calcium accumulation through TRPV1 channels in neurobiology of epilepsy.</a> Neuroscience. 293, 55-66 (2015).</li><li>Mallet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPV1+in+brain+is+involved+in+acetaminophen-induced+antinociception.">TRPV1 in brain is involved in acetaminophen-induced antinociception.</a> PloS one. 5 (9), 1-11 (2010).</li><li>Barri&#232;re, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+amide+hydrolase-dependent+generation+of+antinociceptive+drug+metabolites+acting+on+TRPV1+in+the+brain.">Fatty acid amide hydrolase-dependent generation of antinociceptive drug metabolites acting on TRPV1 in the brain.</a> PloS one. 8 (8), e70690 (2013).</li><li>Jancs&#243;, G., Kiraly, E., Jancs&#243;-G&#225;bor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologically+induced+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+neurones.">Pharmacologically induced selective degeneration of chemosensitive primary sensory neurones.</a> Nature. 270 (5639), 741-743 (1977).</li><li>Szallasi, A., Blumberg, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vanilloid+receptor+loss+in+rat+sensory+ganglia+associated+with+long+term+desensitization+to+resiniferatoxin.">Vanilloid receptor loss in rat sensory ganglia associated with long term desensitization to resiniferatoxin.</a> Neuroscience Letters. 140 (1), 51-54 (1992).</li><li>Cavanaugh, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+subsets+of+unmyelinated+primary+sensory+fibers+mediate+behavioral+responses+to+noxious+thermal+and+mechanical+stimuli.">Distinct subsets of unmyelinated primary sensory fibers mediate behavioral responses to noxious thermal and mechanical stimuli.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (22), 9075-9080 (2009).</li><li>Jeffry, J. A., Yu, S. Q., Sikand, P., Parihar, A., Evans, M. S., Premkumar, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+targeting+of+TRPV1+expressing+sensory+nerve+terminals+in+the+spinal+cord+for+long+lasting+analgesia.">Selective targeting of TRPV1 expressing sensory nerve terminals in the spinal cord for long lasting analgesia.</a> PLoS ONE. 4 (9), e7021 (2009).</li><li>Jancs&#243;, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracisternal+capsaicin:+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+afferents+in+the+adult+rat.">Intracisternal capsaicin: selective degeneration of chemosensitive primary sensory afferents in the adult rat.</a> Neuroscience letters. 27 (1), 41-45 (1981).</li><li>Gamse, R., Saria, A., Lundberg, J. M., Theodorsson-Norheim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+neurochemical+changes+after+intracisternal+capsaicin+treatment+of+the+guinea+pig.">Behavioral and neurochemical changes after intracisternal capsaicin treatment of the guinea pig.</a> Neuroscience Letters. 64 (3), 287-292 (1986).</li><li>Neubert, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+mouse+orofacial+pain+and+the+effects+of+lesioning+TRPV1-expressing+neurons+on+operant+behavior.">Characterization of mouse orofacial pain and the effects of lesioning TRPV1-expressing neurons on operant behavior.</a> Molecular pain. 4, 43 (2008).</li><li>Karai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+vanilloid+receptor+1-expressing+primary+afferent+neurons+for+pain+control.">Deletion of vanilloid receptor 1-expressing primary afferent neurons for pain control.</a> The Journal of clinical investigation. 113 (9), 1344-1352 (2004).</li><li>Fukushima, A., Mamada, K., Iimura, A., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supraspinal-selective+TRPV1+desensitization+induced+by+intracerebroventricular+treatment+with+resiniferatoxin.">Supraspinal-selective TRPV1 desensitization induced by intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin.</a> Scientific reports. 7 (1), 12452 (2017).</li><li>Haley, T. J., McCormick, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+effects+produced+by+intracerebral+injection+of+drugs+in+the+conscious+mouse.">Pharmacological effects produced by intracerebral injection of drugs in the conscious mouse.</a> British journal of pharmacology and chemotherapy. 12 (1), 12-15 (1957).</li><li>Tj&#248;lsen, A., Berge, O. G., Hunskaar, S., Rosland, J. H., Hole, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+formalin+test:+an+evaluation+of+the+method.">The formalin test: an evaluation of the method.</a> Pain. 51 (1), 5-17 (1992).</li><li>Ohsawa, M., Miyabe, Y., Katsu, H., Yamamoto, S., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+sensory+nerve+fiber+responsible+for+lysophosphatidic+acid-induced+allodynia+in+mice.">Identification of the sensory nerve fiber responsible for lysophosphatidic acid-induced allodynia in mice.</a> Neuroscience. 247, 65-74 (2013).</li><li>Tanabe, M., Tokuda, Y., Takasu, K., Ono, K., Honda, M., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+synthetic+TRH+analogue+taltirelin+exerts+modality-specific+antinociceptive+effects+via+distinct+descending+monoaminergic+systems.">The synthetic TRH analogue taltirelin exerts modality-specific antinociceptive effects via distinct descending monoaminergic systems.</a> British journal of pharmacology. 150 (4), 403-414 (2007).</li><li>Ono, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+in+sympathetic+nerve+activity+as+a+possible+mechanism+for+the+hypothermic+effect+of+oseltamivir,+an+anti-influenza+virus+drug,+in+normal+mice.">Reduction in sympathetic nerve activity as a possible mechanism for the hypothermic effect of oseltamivir, an anti-influenza virus drug, in normal mice.</a> Basic &amp; clinical pharmacology &amp; toxicology. 113 (1), 25-30 (2013).</li><li>Kauer, J. A., Gibson, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hot+flash:+TRPV+channels+in+the+brain.">Hot flash: TRPV channels in the brain.</a> Trends in neurosciences. 32 (4), 215-224 (2009).</li></ol>

Bu deneylerdeki en kritik adım i.c.v. enjeksiyonunun başarısıdır. Burada kullanılan i.c.v. enjeksiyon tekniği oldukça basittir ancak bazı pratik ler gerektirir. Deneylerden önce boyalarla pratik yapmak (örn. tuzluda %0,5 trypan mavisi) önerilir. Enjeksiyon doğru yapılırsa, koronal sütür üzerinde bir iğne izi belirgin olmalı ve enjekte edilen boya kontralateral ventrikül ve üçüncü ventrikül de bulunmalıdır. Ayrıca enjeksiyon sırasında zorla takılmaktan kaçınılmalıdır. İğne ucu korona...

Hayvanlar çevre sinirlerindeki sensörler aracılığıyla çevrelerinden çeşitli fiziksel ve kimyasal uyaranlar alırlar. Geçici reseptör potansiyel vanilloid tip 1 (TRPV1) ısı sensörleri1,,2olarak hareket eden termoduyar, selektif olmayan katyon kanallarından biridir ve TRPV1'in aktivasyonu ve/veya modülasyonunun hem normal hem de inflamatuar bağlamlarda nosisepsiyon için önemli bir adım olduğu bilinmektedir3. Genel ifade deseni tartışmalı olmasına rağmen, TRPV1 ekspresyonu da supraspinal bölgelerde önerilmiştir, çeşitli beyin aktivitelerine dahil olmak (nosiceptiondahil 4, termoregülasyon5, anksiyete6, dikkat eksikliği hiperaktivite bozukluğu7, ve epilepsi8). Ayrıca, son zamanlarda asetaminofen, yaygın olarak kullanılan ağrı kesici, merkezi TRPV1 aktivasyonu aracılık onun analjezik eylem ortaya çıkarmak için ileri sürülmüştür9,10.
Kapsaisin ve resiniferatoksin (RTX) dahil olmak üzere aşırı TRPV1 agonist uygulanması TRPV1-pozitif nöronların ölümüne ve TRPV1 agonistleri için uzun süreli duyarsızlaştırma11yol açar,12. Lokal uygulama ile birlikte (intrathecal13,14, intrasisternal15,16,17, ve intraganglional18), Bu kimyasal ablasyon yaklaşımı TRPV1 fizyolojik fonksiyonlarını araştırmak için alternatif bir yol sağlamıştır. Yakın zamanda RTX intracerebroventricular (i.c.v.) enjeksiyonunun farelerde asetaminofenin analjezik etkisini inhibe ettiğini, supraspinal-selektif TRPV1 duyarsızlaştırmayı önerdiğini bildirdik19. Bu yazıda i.c.v. enjeksiyonu ve sonraki ağrı testleri için kesin protokolü satıyoruz.
Beynin ventriküllerine doğrudan ilaç enjeksiyonu, herhangi bir çevresel etkiyi en aza iken onların merkezi etkilerini incelemeyi mümkün kılar. Burada sunulan i.c.v. enjeksiyon prosedürü Haley ve McCormick20tarafından bildirilen yöntemin bir değişikliktir. Bu yöntem koronal sütür yoluyla lateral ventriküliçine bir enjeksiyon iğnesi takılması içeren basit ve kanülasyon için herhangi bir özel ekipman veya cerrahi prosedürler gerektirmez.
TRPV1 agonistlerin periferik lokal uygulama yanma ağrı hissi ve nörojenik inflamasyon çağrıştırıyor. RTX ve TRPV1-KO fareler ile sistemsel olarak tedavi edilen fareler, bu uyarıma duyarsızdır13. RTX-i.c.v'de periferik TRPV1'in korunmasını doğrulamak için rtx (RTX testi) intraplantar enjeksiyonu yaptık. Fare. Bu yöntem konvansiyonel formalin testi21bir değişikliktir.
Bu fareler sistematik RTX ve TRPV1-KO fareler ile tedavi mekanik uyaranlara normal bir eşik göstermek bildirilmiştir11,13,22. Burada asetaminofen in analjezik etkisi değişiklikleri test etmek için kuyruk basınç testi için bir prosedür salıyoruz.
Tüm bu prosedürler ortodoks ve çok yönlüdür ve diğer ilaçların çalışmalarına uygulanabilir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="872">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Resiniferatoxin</td>
			<td style="width:191px;">LKT Laboratories</td>
			<td style="width:117px;">R1774</td>
			<td style="width:319px;">used for s.c./i.c.v. pretreatments and the RTX test</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">Acetaminophen</td>
			<td style="width:191px;">IWAKI SEIYAKU</td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td style="width:319px;">gifted from IWAKI SEIYAKU</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">Pentobarbital sodium salt</td>
			<td style="width:191px;">Tokyo Chemical Industry</td>
			<td style="width:117px;">P0776</td>
			<td style="width:319px;">used for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Ethanol (99.5)</td>
			<td style="width:191px;">Wako Pure Chemical Industries</td>
			<td style="width:117px;">057-00456</td>
			<td style="width:319px;">used for dissolving RTX</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monooleate</td>
			<td style="width:191px;">Wako Pure Chemical Industries</td>
			<td style="width:117px;">161-21621</td>
			<td style="width:319px;">used for dissolving RTX</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">25 mL microsyringe</td>
			<td style="width:191px;">Hamilton</td>
			<td style="width:117px;">1702LT</td>
			<td style="width:319px;">used for i.c.v. injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">100 mL microsyringe</td>
			<td style="width:191px;">Hamilton</td>
			<td style="width:117px;">1710LT</td>
			<td style="width:319px;">used for intraplantar injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">26-gauge disposable needle</td>
			<td style="width:191px;">TERUMO</td>
			<td style="width:117px;">NN-2613S</td>
			<td style="width:319px;">used for i.c.v. injection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">30-gauge disposable needle</td>
			<td style="width:191px;">NIPRO</td>
			<td style="width:117px;">01134</td>
			<td style="width:319px;">used for intraplantar injection</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:247px;">Pressure meter</td>
			<td style="width:191px;">Ugo Basile</td>
			<td style="width:117px;">Analgesy-Meter Type 7200</td>
			<td style="width:319px;">used for tail pressure test</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin and pain tests in mice

Geçici reseptör potansiyel vanilloid tip 1 (TRPV1), bir termosensit katyon kanalı, periferik sinirlerde ağrı tetiklediği bilinmektedir. Periferik işlevine ek olarak, beyin fonksiyonlarında katılımı da önerilmiştir. Ultragüçlü bir TRPV1 agonisti olan Resiniferatoksinin (RTX), TRPV1'in uzun süreli duyarsızlaşmasına neden olduğu bilinmektedir ve bu duyarsızlaştırma, TRPV1 ifade eden hücrelerin fizyolojik önemini araştırmak için alternatif bir yaklaşım olmuştur. Burada farelerde RTX ile intracerebroventricular (i.c.v.) tedavisi için bir protokol açıklıyoruz. Periferik TRPV1 stimülasyonu (RTX testi) ve mekanik stimülasyon (kuyruk basınç testi) sonra takip nosiception test etmek için prosedürler açıklanmıştır. RTX i.c.v. uygulanan farelerin nosiseptif yanıtları kontrol gruplarınınkilerle karşılaştırılabilir olmasına rağmen, RTX-i.c.v.-uygulanan fareler asetaminofenin analjezik etkisine duyarsız dı, bu da i.c.v. RTX tedavisinin supraspinal-selektif TRPV1 duyarsızlaşmasına neden olabileceğini düşündürmektedir. Bu fare modeli beyin / supraspinal fonksiyon TRPV1 rolünü incelemek için uygun bir deneysel sistem olarak kullanılabilir. Bu teknikler diğer ilaçların merkezi eylemlerinin çalışmalarına da uygulanabilir.

I.c.v.-tedavi edilen farelerde görünümleri, spontan aktiviteleri, vücut ağırlığı19 ve çekirdek vücut ısılarında belirgin bir anormallik görülmez (Araçla tedavi edilen grup, 38.4 ± 0.3 °C, n = 6; RTX ile işlenmiş grup, 38.7 ± 0.2 °C, n = 6).
Şekil 2A-B, RTX'in intraplantar enjeksiyonuna s.c.- veya i.c.v.-tedavi edilen farelerin duyarlı...

Watch this Scientific Journal Video about Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice at JoVE.com

Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice

Supraspinal bölgede geçici reseptör potansiyel vanilloid tip 1 (TRPV1) beyin fonksiyonubazı roller oynamak için önerilmiştir. Burada açıklanan farelerde supraspinal TRPV1 duyarsızlaştırma için resiniferatoxin intracerebroventriküler enjeksiyon için bir protokoldür. Bazı ağrı testleri için prosedürler de sunulmaktadır.

Farelerde Resiniferatoksin ve Ağrı Testleri ile İntracerebroventriküler Tedavi

The transient receptor potential vanilloid type 1 (TRPV1), a thermosensitive cation channel, is known to trigger pain in the peripheral nerves. In ...

Bu ön tedavinin genel amacı fareler üretmek ve TRPV1 kanallarının supraspinal bölgelerde duyarsızlaştırılmaktır. Bu yöntem nörofarmakolojik alanda anahtar soruları cevapyardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı supraspinal selektif TRPV1 duyarsızlaştırma oldukça basit bir şekilde indüklenen olabilir.Bu prosedüre başlamak için, pentobarbital sodyum intraperitoneally bir fare anestezi ve düzeltme refleks kaybı olup olmadığını kontrol edin. Deri altı tedavi için, 10 gram vücut ağırlığı başına 0,1 mililitre hacminde boynun arkasına mililitre başına 20 mikrogram RTX enjekte edin. Kontrol grubu için, aynı şekilde araç enjekte edin.İğnenin 3 ila 3,5 milimetrelik ucunu ortaya çıkarmak için tek kullanımlık 27 göstergeli iğneyi metal bir tüpten geçirin. Daha sonra farenin squamosal kemiklerini parmaklarınızla sıkıca tutun. İğneyi kafa derisiüzerinde yanal olarak hareket ettirin ve iğne ucu dikişüzerine bağlı olduğu için sagittal sütür bulun.Ucunu yaklaşık bir milimetre sağa taşıyın, sonra uç rostrally koronasütü bulmak için taşıyın. Daha sonra iğneyi yavaşça ve dikey olarak takın. RTX çözeltisini 10 saniyeden fazla enjekte edin ve ardından 10 saniye daha tutun.Daha sonra, yavaş yavaş iğne çekin ve ev kafesi için fare dönün. RTX enjeksiyonundan bir hafta sonra, testten en az 60 dakika önce fareyi test odasına aktarın. Testten en az 30 dakika önce, fareyi çevreye alışması için pleksiglas bir kafese yerleştirin.Testten 20 dakika önce asetaminofeni kilogram başına 300 miligram olarak fareye intraperitoneal olarak verin. Fareyi küçük bir bez torbada gevşek bir şekilde tutun ve sağ arka pençenin topuğunun içine 30 kalibrelik bir iğne yerleştirin. İğneyi subkutan olarak yürüyüş yastığının yakınına doğru ilerletin ve mililitre başına 0,05 mikrogram 20 mikrolitre RTX çözeltisi enjekte edin.Daha sonra, her beş dakikalık bloketkilenen pençe glabrous bölgesinde yalama ve ısırma davranışı dönemini ölçmek. RTX enjeksiyonundan bir hafta sonra fareyi test odasına aktarın. Fareyi pleksiglas bir kafese yerleştirin.Kuyruk tabanından 1,5 ve 2,5 santimetre lik noktaları işaretleyin. Daha sonra fareyi küçük bir bez torbada gevşek bir şekilde tutun ve künt bir sondayla noktalara basınç uygulayın. Doku hasarını önlemek için 250 gram kesme basıncı uygulandığını lütfen unutmayın.Kaçış davranışını ortaya çıkarmak için gereken basıncı belirleyin ve iki noktada belirlenen basıncın ortalamasını alarak nosiseptif eşiği hesaplayın. Prosedürleri her 15 dakikada bir tekrarlayın. Taban çizgisini aldıktan sonra, asetaminofeni kilogram başına 300 mikrogram olarak fareye intraperitoneal olarak verin, ardından 90 dakikaya ulaşana kadar kuyruk basınç testini her 15 dakikada bir tekrarlayın.Bu iki rakam, SC veya ICV tedavi farelerin RTX intraplantar enjeksiyonuna yanıt verme yeteneğini göstermektedir. Araçla tedavi edilen farelerin yalama ve ısırma davranışları ilk 10 dakikada dikkat çekiciydi. SC önceden tedavi edilmiş fareler hiç yalama ve ısırma davranışı göstermemesine rağmen, ICV önceden işlenmiş fareler normalde RTX plantar enjeksiyonuna yanıt verecektir.Ayrıca, asetaminofen intraperitoneal uygulama araç ICV tedavi farelerin yalama ve ısırma davranışını azalttı, ancak RTX ICV tedavi fareler. Bu grafik kuyruk basınç testinde kilogram başına 300 mikrogram asetaminofenin analjezik etkilerini göstermektedir. Asetaminofen her iki testte de araç tedavi edilmiş farelerin nosiceptive yanıtını azalttı, ancak RTX ile önceden tedavi edilen farelerde asetaminofenin analjezik etkileri inhibe edildi.Bir kez hakim, Bu ICV enjeksiyon tekniği diğer ilaçlar için uygulanabilir. Resiniferatoksin ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini unutmayın ve kullanım sırasında koruma için lastik eldiven ve gözlük kullandığınızdan emin olun.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

Şehriye ve Capellini İşleme Testleri: sıçan ve fareler hünerli forepaw fonksiyonu Basit kantitatif tedbirler

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended ...

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

Dorsal Kök Potansiyel Kayıt By Farelerde Spinal Presinaptik Engellenme Ölçme<em&gt; In Vivo</em

Presynaptic inhibition is one of the most powerful inhibitory mechanisms in the spinal cord. The underlying physiological mechanism is a depolarization of ...

Intracerebroventricular Viral Injection of the Neonatal Mouse Brain for Persistent and Widespread Neuronal Transduction

Kalıcı ve yaygın Nöronal İletim için Yenidoğan Fare Beyin intraserooroventriküler Viral Enjeksiyon

With the pace of scientific advancement accelerating rapidly, new methods are needed for experimental neuroscience to quickly and easily manipulate gene ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Fareler Soğuk Hassasiyeti ve Uyum belirlenmesi için Basit ve ucuz Yöntem

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-&#946; Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-ÃƒÅ½Ã‚Â² Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

Normal Farelerde Amiloid-β Peptitler intraserebroventriküler enjeksiyon Akut Alzheimer gibi Bilişsel Açıkları tetikleyebilecek

Amyloid-&#946; (A&#946;) is a major pathological mediator of both familial and sporadic Alzheimer's disease (AD). In the brains of AD patients, ...

Intracranial Pharmacotherapy and Pain Assays in Rodents

Kafa içi farmakoterapi ve ağrı deneyleri Rodents

Pain is a salient sensory experience with affective and cognitive dimensions. However, central mechanisms for pain remain poorly understood, hindering the ...

Comprehensive Autopsy Program for Individuals with Multiple Sclerosis

Multipl skleroz bireyler için kapsamlı otopsi programı

We describe a rapid tissue donation program for individuals with multiple sclerosis (MS) that requires scientists and technicians to be on-call 24/7, 365 ...

Burn Injury-Induced Pain and Depression-Like Behavior in Mice

Farelerde Yanık Yaralanmasına Bağlı Ağrı ve Depresyon Benzeri Davranış

Scalding water is the most common cause of burn injury in both elderly and young populations. It is one of the major clinical challenges because of the ...

Dural Stimulation and Periorbital von Frey Testing in Mice As a Preclinical Model of Headache

Preklinik Bir Baş Ağrısı Modeli Olarak Farelerde Dural Stimülasyon ve Periorbital von Frey Testi

The cranial meninges, comprised of the dura mater, arachnoid, and pia mater, are thought to primarily serve structural functions for the nervous system.  ...

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

Farelerde Ağrı Davranışını Ölçmek için Mekanik Çatışmadan Kaçınma Testi

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...