Name: molecular analysis of endothelial-mesenchymal transition induced by transforming growth factor-&#946; signaling
Uploaded: 2018-08-03T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Molecular Analysis of Endothelial-mesenchymal Transition Induced by Transforming Growth Factor-ÃŽÂ² Signaling at JoVE.com

우리 지 시 Borok와 고헤이 Miyazono 원고 준비에 대 한 감사. 당사와 수소 우에하라 기념 재단 연구 친교에 의해 지원 되 고 당사 해외 유학에 대 한 수정 Hayaishi 기념 장학금에 의해 지원 됩니다. 이 작품은 다케다 과학 재단 (A.S.)에서 교부 금에 의해 지원 되었다.

1입니다. EndMT의 유도
<ol><li>표준 문화 조건에 MS-1 세포를 유지 하 고 confluency을 피하기 위해. MS-1 셀의 소스 테이블의 자료에 설명 되어 있습니다. MS-1 셀에 10% 태아 종 아리 혈 청 (FCS), 50 U/mL 페니실린, 및 50 μ g/mL 스 최소 필수 매체-α (MEM-α)를 사용 합니다.</li>
	<li>10 cm에 씻어 MS-1 셀 버퍼링 하는 인산 염 (PBS) x 1 접시 하 고 접시에 trypsin의 1.0 mL를 추가 합니다. 37 ° c.에 5 분 동안 품 어</...

<ol>
	<li>Sanchez-Duffhues, G., Garcia de Vinuesa, A., Ten Dijke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial-to-mesenchymal+transition+in+cardiovascular+diseases:+Developmental+signaling+pathways+gone+awry.">Endothelial-to-mesenchymal transition in cardiovascular diseases: Developmental signaling pathways gone awry.</a> Developmental Dynamics. , (2017).</li><li>Markwald, R. R., Fitzharris, T. P., Smith, W. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+analysis+of+endocardial+cytodifferentiation.">Structural analysis of endocardial cytodifferentiation.</a> Developmental Biology. 42 (1), 160-180 (1975).</li><li>Eisenberg, L. M., Markwald, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+regulation+of+atrioventricular+valvuloseptal+morphogenesis.">Molecular regulation of atrioventricular valvuloseptal morphogenesis.</a> Circulation Research. 77 (1), 1-6 (1995).</li><li>Chen, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cells+are+progenitors+of+cardiac+pericytes+and+vascular+smooth+muscle+cells.">Endothelial cells are progenitors of cardiac pericytes and vascular smooth muscle cells.</a> Nature Communications. 7, 12422 (2016).</li><li>DeRuiter, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+endothelial+cells+transdifferentiate+into+mesenchymal+cells+expressing+smooth+muscle+actins+in+vivo+and+in+vitro.">Embryonic endothelial cells transdifferentiate into mesenchymal cells expressing smooth muscle actins in vivo and in vitro.</a> Circulation Research. 80 (4), 444-451 (1997).</li><li>Arciniegas, E., Neves, C. Y., Carrillo, L. M., Zambrano, E. A., Ramirez, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial-mesenchymal+transition+occurs+during+embryonic+pulmonary+artery+development.">Endothelial-mesenchymal transition occurs during embryonic pulmonary artery development.</a> Endothelium. 12 (4), 193-200 (2005).</li><li>Welch-Reardon, K. M., Wu, N., Hughes, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+partial+endothelial-mesenchymal+transitions+in+angiogenesis.">A role for partial endothelial-mesenchymal transitions in angiogenesis.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 35 (2), 303-308 (2015).</li><li>Zeisberg, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial-to-mesenchymal+transition+contributes+to+cardiac+fibrosis.">Endothelial-to-mesenchymal transition contributes to cardiac fibrosis.</a> Nature Medicine. 13 (8), 952-961 (2007).</li><li>Chen, P. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial-to-mesenchymal+transition+drives+atherosclerosis+progression.">Endothelial-to-mesenchymal transition drives atherosclerosis progression.</a> Journal of Clinical Investigation. 125 (12), 4514-4528 (2015).</li><li>Bostrom, K. I., Yao, J., Guihard, P. J., Blazquez-Medela, A. M., Yao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial-mesenchymal+transition+in+atherosclerotic+lesion+calcification.">Endothelial-mesenchymal transition in atherosclerotic lesion calcification.</a> Atherosclerosis. , 124-127 (2016).</li><li>Qiao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+fate+mapping+in+mice+with+pulmonary+hypertension.">Endothelial fate mapping in mice with pulmonary hypertension.</a> Circulation. 129 (6), 692-703 (2014).</li><li>Ranchoux, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial-to-mesenchymal+transition+in+pulmonary+hypertension.">Endothelial-to-mesenchymal transition in pulmonary hypertension.</a> Circulation. 131 (11), 1006-1018 (2015).</li><li>Maddaluno, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EndMT+contributes+to+the+onset+and+progression+of+cerebral+cavernous+malformations.">EndMT contributes to the onset and progression of cerebral cavernous malformations.</a> Nature. 498 (7455), 492-496 (2013).</li><li>Krenning, G., Zeisberg, E. M., Kalluri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origin+of+fibroblasts+and+mechanism+of+cardiac+fibrosis.">The origin of fibroblasts and mechanism of cardiac fibrosis.</a> Journal of Cell Physiology. 225 (3), 631-637 (2010).</li><li>Cooley, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-beta+signaling+mediates+endothelial-to-mesenchymal+transition+(EndMT)+during+vein+graft+remodeling.">TGF-beta signaling mediates endothelial-to-mesenchymal transition (EndMT) during vein graft remodeling.</a> Science Translational Medicine. 6 (227), 227ra234 (2014).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transforming+Growth+Factor-beta1+Induces+Endothelial-to-Mesenchymal+Transition+via+Akt+Signaling+Pathway+in+Renal+Transplant+Recipients+with+Chronic+Allograft+Dysfunction.">Transforming Growth Factor-beta1 Induces Endothelial-to-Mesenchymal Transition via Akt Signaling Pathway in Renal Transplant Recipients with Chronic Allograft Dysfunction.</a> Annals of Transplantation. 21, 775-783 (2016).</li><li>Xu-Dubois, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Markers+of+Endothelial-to-Mesenchymal+Transition:+Evidence+for+Antibody-Endothelium+Interaction+during+Antibody-Mediated+Rejection+in+Kidney+Recipients.">Markers of Endothelial-to-Mesenchymal Transition: Evidence for Antibody-Endothelium Interaction during Antibody-Mediated Rejection in Kidney Recipients.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 27 (1), 324-332 (2016).</li><li>Zeisberg, E. M., Potenta, S., Xie, L., Zeisberg, M., Kalluri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery+of+endothelial+to+mesenchymal+transition+as+a+source+for+carcinoma-associated+fibroblasts.">Discovery of endothelial to mesenchymal transition as a source for carcinoma-associated fibroblasts.</a> Cancer Research. 67 (21), 10123-10128 (2007).</li><li>Pardali, E., Sanchez-Duffhues, G., Gomez-Puerto, M. C., Ten Dijke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-beta-Induced+Endothelial-Mesenchymal+Transition+in+Fibrotic+Diseases.">TGF-beta-Induced Endothelial-Mesenchymal Transition in Fibrotic Diseases.</a> International Journal of Molecular Sciences. 18 (10), (2017).</li><li>Mihira, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-beta-induced+mesenchymal+transition+of+MS-1+endothelial+cells+requires+Smad-dependent+cooperative+activation+of+Rho+signals+and+MRTF-A.">TGF-beta-induced mesenchymal transition of MS-1 endothelial cells requires Smad-dependent cooperative activation of Rho signals and MRTF-A.</a> Journal of Biochemistry. 151 (2), 145-156 (2012).</li><li>Hashimoto, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial-mesenchymal+transition+in+bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis.">Endothelial-mesenchymal transition in bleomycin-induced pulmonary fibrosis.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 43 (2), 161-172 (2010).</li><li>Suzuki, H. I., Miyazono, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+microRNA+biogenesis:+crosstalk+between+p53+network+and+microRNA+processing+pathway.">Dynamics of microRNA biogenesis: crosstalk between p53 network and microRNA processing pathway.</a> Journal of Molecular Medicine (Berl). 88 (11), 1085-1094 (2010).</li><li>Suzuki, H. I., Miyazono, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+complexity+of+microRNA+generation+cascades.">Emerging complexity of microRNA generation cascades.</a> Journal of Biochemistry. 149 (1), 15-25 (2011).</li><li>Nicoloso, M. S., Spizzo, R., Shimizu, M., Rossi, S., Calin, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs--the+micro+steering+wheel+of+tumour+metastases.">MicroRNAs--the micro steering wheel of tumour metastases.</a> Nature Reviews Cancer. 9 (4), 293-302 (2009).</li><li>Lagendijk, A. K., Goumans, M. J., Burkhard, S. B., Bakkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA-23+restricts+cardiac+valve+formation+by+inhibiting+Has2+and+extracellular+hyaluronic+acid+production.">MicroRNA-23 restricts cardiac valve formation by inhibiting Has2 and extracellular hyaluronic acid production.</a> Circulation Research. 109 (6), 649-657 (2011).</li><li>Katsura, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA-31+is+a+positive+modulator+of+endothelial-mesenchymal+transition+and+associated+secretory+phenotype+induced+by+TGF-beta.">MicroRNA-31 is a positive modulator of endothelial-mesenchymal transition and associated secretory phenotype induced by TGF-beta.</a> Genes Cells. 21 (1), 99-116 (2016).</li><li>Suzuki, H. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+TGF-beta-mediated+endothelial-mesenchymal+transition+by+microRNA-27.">Regulation of TGF-beta-mediated endothelial-mesenchymal transition by microRNA-27.</a> Journal of Biochemistry. 161 (5), 417-420 (2017).</li><li>Camenisch, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+and+distinct+TGFbeta+ligand+requirements+during+mouse+and+avian+endocardial+cushion+morphogenesis.">Temporal and distinct TGFbeta ligand requirements during mouse and avian endocardial cushion morphogenesis.</a> Developmental Biology. 248 (1), 170-181 (2002).</li><li>Krenning, G., Moonen, J. R., van Luyn, M. J., Harmsen, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+smooth+muscle+cells+for+use+in+vascular+tissue+engineering+obtained+by+endothelial-to-mesenchymal+transdifferentiation+(EnMT)+on+collagen+matrices.">Vascular smooth muscle cells for use in vascular tissue engineering obtained by endothelial-to-mesenchymal transdifferentiation (EnMT) on collagen matrices.</a> Biomaterials. 29 (27), 3703-3711 (2008).</li><li>Medici, D., Potenta, S., Kalluri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transforming+growth+factor-beta2+promotes+Snail-mediated+endothelial-mesenchymal+transition+through+convergence+of+Smad-dependent+and+Smad-independent+signalling.">Transforming growth factor-beta2 promotes Snail-mediated endothelial-mesenchymal transition through convergence of Smad-dependent and Smad-independent signalling.</a> Biochemical Journal. 437 (3), 515-520 (2011).</li><li>Krizbai, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial-mesenchymal+transition+of+brain+endothelial+cells:+possible+role+during+metastatic+extravasation.">Endothelial-mesenchymal transition of brain endothelial cells: possible role during metastatic extravasation.</a> PLoS One. 10 (3), e0119655 (2015).</li><li>Arciniegas, E., Sutton, A. B., Allen, T. D., Schor, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transforming+growth+factor+beta+1+promotes+the+differentiation+of+endothelial+cells+into+smooth+muscle-like+cells+in+vitro.">Transforming growth factor beta 1 promotes the differentiation of endothelial cells into smooth muscle-like cells in vitro.</a> Journal of Cell Science. 103 (Pt 2), 521-529 (1992).</li><li>Deissler, H., Deissler, H., Lang, G. K., Lang, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGFbeta+induces+transdifferentiation+of+iBREC+to+alphaSMA-expressing+cells.">TGFbeta induces transdifferentiation of iBREC to alphaSMA-expressing cells.</a> International Journal of Molecular Medicine. 18 (4), 577-582 (2006).</li><li>Paranya, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aortic+valve+endothelial+cells+undergo+transforming+growth+factor-beta-mediated+and+non-transforming+growth+factor-beta-mediated+transdifferentiation+in+vitro.">Aortic valve endothelial cells undergo transforming growth factor-beta-mediated and non-transforming growth factor-beta-mediated transdifferentiation in vitro.</a> American Journal of Pathology. 159 (4), 1335-1343 (2001).</li><li>Maleszewska, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-1beta+and+TGFbeta2+synergistically+induce+endothelial+to+mesenchymal+transition+in+an+NFkappaB-dependent+manner.">IL-1beta and TGFbeta2 synergistically induce endothelial to mesenchymal transition in an NFkappaB-dependent manner.</a> Immunobiology. 218 (4), 443-454 (2013).</li><li>Ubil, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal-endothelial+transition+contributes+to+cardiac+neovascularization.">Mesenchymal-endothelial transition contributes to cardiac neovascularization.</a> Nature. 514 (7524), 585-590 (2014).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+balance+of+aberrant+Rasal1+promoter+methylation+and+hydroxymethylation+regulates+cardiac+fibrosis.">Epigenetic balance of aberrant Rasal1 promoter methylation and hydroxymethylation regulates cardiac fibrosis.</a> Cardiovasc Research. 105 (3), 279-291 (2015).</li><li>Xiao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+Endothelial+Cells+with+Distinct+Patterns+of+TGFbeta-Driven+Endothelial-to-Mesenchymal+Transition.">Tumor Endothelial Cells with Distinct Patterns of TGFbeta-Driven Endothelial-to-Mesenchymal Transition.</a> Cancer Research. 75 (7), 1244-1254 (2015).</li></ol>

그것은 24 h에 대 한 활성화 된 Ras 및 TGF-β 치료에 MS-1 셀, EndMT 유도 TGF-β 혼자21이 짧은 기간 EndMT를 유도 하는 데 실패 하는 동안 보고 되었습니다. 지속적으로, 우리는 TGF-β 실질적으로 유도 EndMT 더 이상 치료 (48-72 h) 후 MS-1 셀20에 관찰. 인간의 배꼽 등 다양 한 내 피 세포에서 TGF-β (2-6 일)와 장기 치료 정 맥 내 피 세포 (HUVEC), 인간의 피부 microvascular 내 피 세포 (HC...

내 피 엽 전환 (EndMT)는 차별화 된 내 피 세포 다양 한 섬유 아 세포와 같은 mesenchymal 세포1의 결과로 분자 변화를 겪 습 하는 과정입니다. EndMT 처음 심장2,3의 개발 하는 동안 내 피 세포 변환으로 설명 했다. 초기 심장 개발, 심장 관 내부 endocardium 및 외부 심근 구성 됩니다. 이 두 개의 레이어 심장 젤리 라고 하는 세포 외 매트릭스의 계층으로 구분 됩니다. 내 피 세포 마커를 획득, 배아 endocardial 셀 중간 엽 세포로 환승, 기본 심장 젤리, 침략 및 것 밸브 및 심장에 대 한 기초를 제공 하는 심장 쿠션의 형성을 촉진 그리고 semilunar 밸브입니다. 또한, EndMT 관상 동맥 혈관, 복 부 대동맥 및 폐 동맥4,,56을 포함 하 여 다른 배아 혈관 시스템에 pericytes 및 혈관 평활 근 세포의 소스를 되도록 제안 되었습니다. 또한, EndMT7돋 아 생리 신생에 연루 이다.
증거를 축적 하는 것은 EndMT도 여러 심혈 관 질환과 다른 질병1,8에 관련 된 것을 제안 했다. EndMT 관련 된 조건이 포함 혈관 석 회화, 동맥 경화 증, 폐 동맥 고혈압, 동굴 같은 기형, 기관 섬유 증, 정 맥 이식 개장, 이식 부전 신장 이식과 암8, 9,10,11,12,13,14,15,,1617, 18. 최근 보고서 설명 여러 분자 EndMT 마커 신장 이식17에서 신장 이식 부전의 진단 및 예 후 예측에 대 한 도구가 될 수 있습니다. EndMT 관련 세포 신호 통로의 변조 표시 되었습니다 심장 섬유 증을 포함 하 여 몇몇 질병 상태를 개량 하 고8,15모델 동물에 정 맥 이식 개장. 따라서, 메커니즘을 이해 기본 EndMT는 EndMT를 대상으로 하는 진단 및 치료 전략을 개발 해야 합니다.
EndMT-셀 접합, 철새 가능성, VE cadherin 같은 내 피 관련 유전자의 downregulation α-부드러운 근육 걸 (α-SMA)를 포함 한 엽 유전자의 upregulation의 손실에 의해 특징입니다. 또한, EndMT 및 상피 엽 전환 (응급), 중간 엽 세포, 상피 세포를 변환 하는 비슷한 과정 변경 된 생산의 발전에 기여할 수 있습니다 다양 한 세포 외 매트릭스 구성 요소와 연결 된 조직의 섬유 증8,19의.
최근, 여러 생체 외에서 연구 EndMT의 EndMT15,20의 분자 메커니즘의 세부 사항을 해명 했습니다. EndMT 변형 성장 인자 (TGF) 등 다양 한 신호 통로 의해 유도-β, Wnt,1단계 고. 그 중 TGF-β 응급 및 EndMT의 유도에서 중추적인 역할을 재생합니다. EndMT에 짧은 노출 부족21나타납니다 동안 노출 EndMT 다양 한 내 피 세포에서 TGF-β에 연장 한다. 우리는 여기 EndMT 유도, 어떤 마일 스벤 1 (MS-1)에서 마우스 췌 microvascular 내 피 세포 받 다 생체 외에서 EndMT TGF-β20에 장기간된 노출 후에 대 한 간단한 프로토콜을 설명 합니다. 이 모델에서 여러 다운스트림 분석 형태 변경, 내 피 마커의 downregulation 엽 마커 및 염증 성 유전자, cytoskeletal의 upregulation 포함 하 여 EndMT의 특징 기능 조사를 수행할 수 있습니다. 재배열, 및 콜라겐 수축 젤.
MicroRNAs (miRNAs)는 22 ~ nt 다양 한 mRNA 대상22,23posttranscriptional 억압을 직접 작은 규제 RNAs. 씨앗 시퀀스 중재 대상 인식, 통해 miRNAs 대상 유전자의 수백을 억제 하 고 세포 분화, 확산, 운동 성 등 다양 한 세포 기능을 조절. 이 구급 대 및 EndMT, 규제에 대 한 경우 이며 또한 몇몇 miRNAs 응급 및 EndMT,2425의 레 귤 레이 터로 보고 되었습니다. 이 검토에서 제시 하는 EndMT 모델 EndMT에서 miRNAs의 역할을 테스트 하려면 미르 변조 절차와 쉽게 결합할 수 있습니다. 현재 검토 MS-1 세포에서 TGF-β-유도 EndMT를 조사 하기 위해 우리의 실험 절차를 요약 하 고 또한 다른 내 피 세포에서 TGF-β에 의해 EndMT 유도의 조건의 비교를 포함 한다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1435px;" width="1434">
	<tbody>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:361px;">MS-1 cells</td>
			<td style="width:289px;">American Type Culture Collection</td>
			<td style="width:593px;">CRL-2279</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">MEM-alpha</td>
			<td style="width:289px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:593px;">32571036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">TGF-beta2</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td style="width:593px;">302-B2-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">4 well Lab-Tek II Chamber Slide</td>
			<td style="width:289px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:593px;">154526</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Y-27632&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:593px;">Y0503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Blocking One</td>
			<td style="width:289px;">nacalai tesque</td>
			<td style="width:593px;">03953-95</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">phalloidin-tetramethylrhodamine B isothiocyanate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1951</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">TOTO-3 iodide</td>
			<td style="width:289px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:593px;">T3604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">VE cadherin monoclonal antibody (BV13)</td>
			<td style="width:289px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14-1441-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">alpha-SMA Cy3 monoclonal antibody (1A4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C6198</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Alexa Fluor 488 goat anti-mouse IgG (H+L)</td>
			<td style="width:289px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:593px;">A-11001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Cover slip</td>
			<td style="width:289px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>174934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Collagen solution</td>
			<td style="width:289px;">Nitta gelatin Inc.</td>
			<td>Cellmatrix I-P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:361px;">Collagen dilution buffer</td>
			<td style="width:289px;">Nitta gelatin Inc.</td>
			<td>Cellmatrix I-P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">LNA miRNA inhibitor</td>
			<td>EXIQON&#160;</td>
			<td colspan="2">miRCURY LNAmicroRNA Power Inhibitor (Negative Control B and target miRNA)</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">synthetic miRNA duplex</td>
			<td>Qiagen&#160;</td>
			<td>miScript miRNA Mimic</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Lipofectamine RNAiMAX</td>
			<td style="width:289px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:593px;">13778030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Lipofectamine 2000</td>
			<td style="width:289px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:593px;">11668027</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

molecular analysis of endothelial-mesenchymal transition induced by transforming growth factor-&#946; signaling

내 피 세포의 phenotypic가 소성 기초 심장 혈관 시스템 개발, 심장 혈관 질병, 및 기관 섬유 증과 관련 된 다양 한 조건. 이러한 조건에서 차별화 된 내 피 세포는 엽 같은 고기를 획득. 이 프로세스 내 피 엽 전환 (EndMT) 이라고 하 고 내 피 마커의 downregulation, 엽 마커 및 형태학 상 변화의 upregulation에 의해 특징입니다. EndMT 변형 성장 인자 (TGF)를 포함 하 여 여러 신호 통로 의해 유도-β, Wnt, 및 노치, 그리고 gastrulation, 조직 섬유 증에 대 한 비슷한 상피 엽 전환 (응급) 중요 한 분자 기계 장치에 의해 규제 및 암 전이입니다. EndMT의 메커니즘을 이해 하는 것은 EndMT를 대상으로 하는 진단 및 치료 접근을 개발 해야 합니다. 생체 외에서 EndMT의 강력한 유도 일반적인 유전자 식 서명 특성, druggable 분자 메커니즘을 식별 및 변조기 EndMT의 화면을 유용 합니다. 여기, 우리 EndMT의 유도 대 한 생체 외에서 방법을 설명합니다. MS 1 마우스 췌 microvascular 내 피 세포 TGF-β에 장기간된 노출 후 EndMT를 받아야 하 고 upregulation 엽 마커 및 형태학 적 변화 뿐만 아니라 여러 염증 성 발산 및 cytokines의 유도 보여줍니다. 예측에 관한 (미르) 변조 분석을 위한 방법 또한 포함 되어 있습니다. 이 메서드는 기본 EndMT 및 EndMT miRNAs의 기여 하는 메커니즘을 조사 하는 플랫폼을 제공 합니다.

TGF-β는 다양 한 내 피 세포에서 EndMT의 강력한 유도. 24 시간 치료 후 MS-1 세포에서 TGF-β로, F 걸 대 한 얼룩 말라 스트레스 섬유 (그림 1A)20의 개편을 보여 줍니다. Y-27632 바위 억제제와 전처리 말라 개편20의 유도 억제. MS-1 내 피 세포 클래식 조약돌 모양의 형태에서 TGF-β 치료 (그림 1B)에 따라 ?...

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Molecular Analysis of Endothelial-mesenchymal Transition Induced by Transforming Growth Factor-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â² Signaling

내 피 엽 전환 (EndMT)는 EndMT에 관련 된 세포 신호 경로 조사 하는 데 유용의 생체 외에서 유도 대 한 프로토콜을 설명 합니다. 이 실험 모델에서 EndMT MS-1 내 피 세포에서 TGF-β와 치료에 의해 유발 됩니다.

내 피 엽 전환 성장 인자-β 신호 변환에 의해 유도 된의 분자 분석

Phenotypic plasticity of endothelial cells underlies cardiovascular system development, cardiovascular diseases, and various conditions associated with ...

Research

JoVE Journal

Biology

Molecular Analysis of Endothelial-mesenchymal Transition Induced by Transforming Growth Factor-&#946; Signaling

Identification of Growth Inhibition Phenotypes Induced by Expression of Bacterial Type III Effectors in Yeast

성장 저해 Phenotypes의 확인은 효모에서 세균의 종류 III Effectors 표현에 의해 유도된

Many Gram-negative pathogenic bacteria use a type III secretion system to translocate a suite of effector proteins into the cytosol of host cells. Within ...

연구

생물학

Video Bioinformatics Analysis of Human Embryonic Stem Cell Colony Growth

비디오 생물 정보학 인간의 배아 줄기 세포 콜로니 성장 분석

Because video data are complex and are comprised of many images, mining information from video material is difficult to do without the aid of computer ...

Herbivore-induced Blueberry Volatiles and Intra-plant Signaling

Herbivore 유도 블루베리 휘발성 물질과 내부 식물 신호

Herbivore-induced plant volatiles (HIPVs) are commonly emitted from plants after herbivore attack1,2.  These HIPVs are mainly regulated by the defensive ...

In Vitro Analysis of PDZ-dependent CFTR Macromolecular Signaling Complexes

In Vitro Analysis of PDZ-dependent CFTR Macromolecular Signaling Complexes

PDZ-의존 CFTR의 Macromolecular 신호 단지의 체외 분석

Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR), a chloride channel located primarily at the apical membranes of epithelial cells, plays a ...

Mechanical Stimulation-induced Calcium Wave Propagation in Cell Monolayers: The Example of Bovine Corneal Endothelial Cells

세포 단일 층의 기계적 자극에 의​​한 칼슘 웨이브 전파 : 소 각막 내피 세포의 예

Intercellular communication is essential for the coordination of physiological processes between cells in a variety of organs and tissues, including the ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

간엽 전환을 유도하고 상피의 분석

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Metabolic Labeling and Membrane Fractionation for Comparative Proteomic Analysis of Arabidopsis thaliana Suspension Cell Cultures

Metabolic Labeling and Membrane Fractionation for Comparative Proteomic Analysis of Arabidopsis thaliana Suspension Cell Cultures

비교 단백체 분석을위한 신진 대사 라벨링 및 막 분별<em&gt; 애기 장대</em&gt; 서스펜션 세포 배양

Plasma membrane microdomains are features based on the physical properties of the lipid and sterol environment and have particular roles in signaling ...

Tracking Drug-induced Changes in Receptor Post-internalization Trafficking by Colocalizational Analysis

Colocalizational 분석에 의한 수용체 후 국제화 인신 매매에 약물 유발의 이동을 추적

The intracellular trafficking of receptors is a collection of complex and highly controlled processes. Receptor trafficking modulates signaling and ...

Fecal Glucocorticoid Analysis: Non-invasive Adrenal Monitoring in Equids

대변​​ 글루코 코르티코이드 분석 : equids는 비 침습적 부신 모니터링

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, ...

Identification of Intracellular Signaling Events Induced in Viable Cells by Interaction with Neighboring Cells Undergoing Apoptotic Cell Death

세포 내 이웃 셀을받은 사멸 세포 죽음과의 상호 작용에 의해 실행 가능한 세포에서 유도 된 이벤트를 시그널링의 식별

Cells dying by apoptosis, also referred to as regulated cell death, acquire multiple new activities that enable them to influence the function of adjacent ...