Name: a gpc3-targeting bispecific antibody, gpc3-s-fab, with potent cytotoxicity
Uploaded: 2018-07-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A GPC3-targeting Bispecific Antibody, GPC3-S-Fab, with Potent Cytotoxicity at JoVE.com

यह काम गुआंग्डोंग प्रांत (पीआर चाइना) (2016A050503028) के अनुसंधान एवं विकास योजना द्वारा वित्तीय रूप से समर्थित था ।

मानव रक्त संग्रह सहित प्रक्रियाओं के सभी सूर्य यत्-सेन विश्वविद्यालय नीतिशास्त्र समिति द्वारा अनुमोदित किया गया ।
1. GPC3-एस-फैब डिजाइन रणनीति
<ol><li>विरोधी के एक फैब-GPC3 (मानवतावादी GC3313) एक ...

<ol>
	<li>Weiner, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Building+better+monoclonal+antibody-based+therapeutics.">Building better monoclonal antibody-based therapeutics.</a> Nature Reviews Cancer. 15 (6), 361-370 (2015).</li><li>Rathi, C., Meibohm, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+pharmacology+of+bispecific+antibody+constructs.">Clinical pharmacology of bispecific antibody constructs.</a> The Journal of Clinical Pharmacology. 55, S21-S28 (2015).</li><li>Weidle, U. H., Kontermann, R. 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Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+CD16a,+the+surface+receptor+of+Kupffer+cells,+on+the+growth+of+hepatocellular+carcinoma+cells.">Effect of CD16a, the surface receptor of Kupffer cells, on the growth of hepatocellular carcinoma cells.</a> International Journal of Molecular Medicine. 37 (6), 1465-1474 (2016).</li><li>Fiala, G. J., Schamel, W. W., Blumenthal, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blue+native+polyacrylamide+gel+electrophoresis+(BN-PAGE)+for+analysis+of+multiprotein+complexes+from+cellular+lysates.">Blue native polyacrylamide gel electrophoresis (BN-PAGE) for analysis of multiprotein complexes from cellular lysates.</a> Journal of Visualized Experiments. (48), (2011).</li><li>Hwang, A. C., Grey, P. H., Cuddy, K., Oppenheimer, D. 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R., Reinhard, C., Pruszak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry+protocols+for+surface+and+intracellular+antigen+analyses+of+neural+cell+types.">Flow cytometry protocols for surface and intracellular antigen analyses of neural cell types.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), (2014).</li><li>Feng, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutically+targeting+glypican-3+via+a+conformation-specific+single-domain+antibody+in+hepatocellular+carcinoma.">Therapeutically targeting glypican-3 via a conformation-specific single-domain antibody in hepatocellular carcinoma.</a> Proceedings of the National Academy of Science U S A. 110 (12), E1083-E1091 (2013).</li></ol>

इस अध्ययन में, हम bsAbs, GPC3-एस-फैब, जो NK कोशिकाओं GPC3 सकारात्मक ट्यूमर कोशिकाओं लक्ष्यीकरण की भर्ती कर सकते है के एक नए स्वरूप का निर्माण करने के लिए एक रणनीति पेश करते हैं । एस फैब एक विरोधी CD16 VHH11,<sup cla...

मोनोक्लोनल एंटीबॉडी अब मोटे तौर पर कैंसर के इलाज के लिए इस्तेमाल कर रहे है1। एंटीबॉडी के लचीलेपन के कारण विभिन्न एंटीबॉडी आधारित स्वरूपों का सक्रिय रूप से पता लगाया गया है । मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के साथ तुलना में, bsAbs दो अलग प्रतिजन बाध्यकारी मॉड्यूल है, उन्हें एक साथ दो विभिन्न लक्ष्यों को पहचानने के लिए सक्षम करने और कुशलतापूर्वक लक्ष्य और ट्यूमर कोशिकाओं को मारने के लिए प्रतिरक्षा प्रभाव कोशिकाओं की भर्ती को ट्रिगर2.
वर्तमान रिकॉमबिनेंट bsAb स्वरूपों आम तौर पर दो वर्गों को सौंपा जा सकता है: एफसी एक एफसी क्षेत्र के बिना bsAbs और bsAbs युक्त । एफसी के साथ तुलना स्वरूपों कि ज्यादातर स्तनधारी कोशिकाओं में उत्पादित कर रहे हैं, एक एफसी क्षेत्र के बिना bsAbs छोटे आकार के फायदे हैं, और अधिक आसानी से सूक्ष्मजीवों अभिव्यक्ति प्रणालियों में उत्पादित कर रहे हैं, और ट्यूमर के ऊतकों और अधिक कुशलता से प्रवेश कर सकते है 3.
एक एफसी क्षेत्र के बिना bsAbs सामांयतः एकल श्रृंखला चर टुकड़े (scFvs) या Fabs3के रूप में व्यक्तिगत बाध्यकारी moieties, जोड़ने के द्वारा बनाई गई हैं । स्थिर डोमेन के बिना, bsAbs scFv टुकड़े पर आधारित अक्सर थर्मल स्थिरता समझौता किया है, कम घुलनशीलता, या एकत्रीकरण के लिए एक वृद्धि की क्षमता4,5. इसके विपरीत, फैब आधारित bsAbs की heterodimerization के कारण अधिक स्थिर हैं और देशी फैब moiety4,6में CH1 और सीएल है ।
भारी श्रृंखला से चर डोमेन-केवल एंटीबॉडी (VHHs, भी एक डोमेन एंटीबॉडी के रूप में संदर्भित) सक्रिय प्रतिजन-प्राकृतिक भारी श्रृंखला एंटीबॉडी7के टुकड़े बाध्यकारी हैं । VHHs उच्च समानता, पारंपरिक IgGs8, कम immunogenicity की विशिष्टता, और बैक्टीरियल अभिव्यक्ति9में उच्च पैदावार की विशेषताओं है । Fv टुकड़े के साथ तुलना में, VHHs उच्च थर्मल स्थिरता10है । फैब moieties की तुलना में, VHHs में CH1 और सीएल की कमी के कारण छोटे आकार होते हैं । इस प्रकार, एस फैब, bsAb एक डोमेन एंटीबॉडी, VHH के साथ फैब जोड़ने के द्वारा प्राप्त स्वरूप, डिजाइन और इसके विरोधी ट्यूमर प्रभाव11,12के लिए अध्ययन किया गया था ।
इस अध् ययन में GPC3-एस-फैब को hGC3313 के फैब को एक एंटी-CD16a VHH14 के साथ जोडऩे के द्वारा निर्माण का वर्णन किया गया । GPC3-एस-फैब कुशलतापूर्वक ई कोलाई (ई. कोलाई)में periplasmic अभिव्यक्ति द्वारा उत्पादित किया जा सकता है । GPC3 के कार्यात्मक अध्ययन-एस फैब का सुझाव दिया है कि GPC3-एस-फैब जिगर कैंसर थेरेपी के लिए एक आशाजनक रणनीति है । इस प्रकार, पिछले अध्ययनों के लागू संदर्भों के साथ वैकल्पिक तकनीकों पर GPC3-S-फैब के लाभ आसान उत्पादन और शुद्धि, और अधिक स्थिर bsAbs शामिल हैं ।
BsAbs के विभिन्न स्वरूपों को व्यक्त करने के लिए स्तनधारी एक्सप्रेशन सिस्टम और prokaryotic एक्सप्रेशन सिस्टम का इस्तेमाल किया गया है । स्तनधारी अभिव्यक्ति प्रणालियों के विपरीत, ई. कोलाईआधारित प्रोटीन अभिव्यक्ति प्रणालियों उच्च पैदावार, कम लागत और श्रम की बचत, आनुवंशिक जोड़तोड़ की आसानी, और उच्च परिवर्तन दक्षता15सहित कई लाभ, है । ई. कोलाईमें bsAbs अभिव्यक्ति के लिए, वहां दो बुनियादी रणनीतियों रहे हैं: कोशिका द्रव्य और बाह्य कोशिका झिल्ली15के बीच periplasm में कोशिका द्रव्य और अभिव्यक्ति में अभिव्यक्ति । कोशिका द्रव्य के कम करने के वातावरण की तुलना में, periplasm एक अधिक ऑक्सीकरण वातावरण है, जो सही तह और प्रोटीन की सह अभिव्यक्ति को बढ़ावा देता है16. सही तह घुलनशीलता, स्थिरता और bsAbs के समारोह पीढ़ी में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है । इसलिए, एक संकेत अनुक्रम pelB ई. कोलाई17के periplasm के लिए प्रत्यक्ष स्राव करने के लिए एस-फैब के एन-टर्मिनस के लिए जोड़ा गया था । सही तह, घुलनशीलता, थर्मल स्थिरता सुनिश्चित करने के लिए, और संरचना स्थिरता, जटिलता को कम करने और एक एंटीबॉडी के आकार अक्सर16कार्यरत है । एस फैब प्रारूप एक फैब और एक VHH है, जो बहुत अच्छी तरह से बैक्टीरिया की संभावना सरल संरचना और छोटे आकार के कारण प्रणालियों में व्यक्त की है के होते हैं ।
GPC3 को इस GPC3-एस-फैब bispecific एंटीबॉडी फॉर्मेट में चुना गया था । Glypican-3 (GPC3) हेपरिन सल्फेट (एच एस) proteoglycan परिवार है कि glycosylphosphatidylinositol (जीपीआई)18के माध्यम से सेल की सतह के लिए लंगर का एक सदस्य है । GPC3 hepatocellular कार्सिनोमा (HCC) मामलों, जो जिगर कैंसर के बहुमत के लिए खाते19,20,21,22के ७०% में व्यक्त की है । क्योंकि GPC3 शायद ही कभी सामांय ऊतकों में व्यक्त की है, GPC3 HCC के लिए एक संभावित लक्ष्य के रूप में प्रस्तावित किया गया है । एकाधिक माउस mAbs GPC3 के खिलाफ उत्पादन किया गया है । हालांकि, केवल GC33 सीमित विरोधी ट्यूमर गतिविधि का प्रदर्शन 22, और यह रोगियों में नैदानिक प्रभावकारिता प्रदर्शित करने में विफल । इस अध्ययन में, GPC3-एस-फैब को NK कोशिकाओं को GPC3 ट्यूमर कोशिकाओं को मारने के लिए भर्ती करने में सक्षम दिखाया गया था14.
NK कोशिकाओं की भर्ती के लिए एंटी CD16 VHH का इस्तेमाल किया गया । CD16a एक कम समानता आईजीजी रिसेप्टर, प्राकृतिक हत्यारा पर मुख्य रूप से व्यक्त (NK) कोशिकाओं, मैक्रोफेज, monocytes और टी कोशिकाओं के कुछ उपप्रकार है. यह एंटीबॉडी-निर्भर सेल cytotoxicity (ADCC) में शामिल है NK कोशिकाओं द्वारा23। मानव NK कोशिकाओं को दो प्रकार से वर्गीकृत किया जा सकता है, CD56-CD16 + और CD56 + CD16-. CD56 + CD16 − NK कोशिकाओं के विपरीत, CD56-CD16 + NK कोशिकाओं perforin और granzyme बी के उच्च स्तर जारी कर सकते हैं और इस तरह एक मजबूत cytotoxicity24मौजूद हैं । Kupffer कोशिकाओं (केसीएस), व्यक्त CD16a, जिगर में निवासी मैक्रोफेज हैं. Kupffer कोशिकाओं जिगर कैंसर25के दमन में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं । इस प्रकार, bsAbs लक्ष्यीकरण CD16a जिगर कैंसर के खिलाफ टी कोशिकाओं उलझाने से एक अधिक आशाजनक रणनीति हो सकती है ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Shaking incubator</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>MAXQ 4000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaking incubator</td>
			<td>Zhicheng</td>
			<td>ZWYR-D2402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Cence</td>
			<td>GL-10MD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Beckman coulter</td>
			<td>Avanti j-26S XPI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>5810R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultraviolet spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>Nanodrop</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical polyacrylamide gel electrophoresis apparatus</td>
			<td>Mini-PROTEAN&#174; Tetra</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trans-blot apparatus</td>
			<td>Criterion</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging system</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>chemidoc tm XRS+</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Protein Liquid chromatogram</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>AKTA avant</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GF column</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>28-9909-44 Superdex 200 Increase 10/300 GL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow Cytometer</td>
			<td>Beckman coulter</td>
			<td>FC500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>5702R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Envision plate reader</td>
			<td>TECAN</td>
			<td>Infinite F50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti His-tag</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>14-6657-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Flag-tag</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F1804</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-human(H&#38;L)-488</td>
			<td>A11013</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse IgG HRP-linked antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>7076S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ni-NTA-Agarose</td>
			<td>Tribioscience</td>
			<td>TBS9202-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG-CH1 affinity resin</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>194320005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll-Plaque Plus</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-1440-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NK cell enrichment kit</td>
			<td>Stemcell</td>
			<td>19055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnet</td>
			<td>Stemcell</td>
			<td>18000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CCK8 kit</td>
			<td>Dojindo</td>
			<td>CK04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>C11995500CP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>C11875500CP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F2442</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15050-057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard marker</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>MWGF200</td>
			<td>Gel filtration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl-b-D-thio-galactopyranoside (IPTG)</td>
			<td>VWR chemicals</td>
			<td>VWRC0487-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis tubing</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D0655-100FT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Knanamycine</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRC0408-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRC0339-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>LP0042B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>LP0021B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A100241</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma base</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T6791-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>V900106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>aladdin</td>
			<td>A110752-500g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>aladdin</td>
			<td>P112134-500g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>V900020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A505255-0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phosphate, Monobasic Anhydrous (KH2PO4)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>7778-77-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate, Dibasic, Anhydrous (Na2HPO4)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>7558-79-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>60-24-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylmethyl Sulfonyl Fluoride (PMSF)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>329-98-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lysozyme</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>L6876-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td><a name="RANGE!A50">Coomassie Brilliant Blue R250</a></td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRC0472-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bromophenol blue</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A500922-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRC0332-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>V900122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100mm x 20mm plastic dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25cm2 flask</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430639</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well cell culture cluster</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3599</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A610498-0005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHO</td>
			<td>the Type Culture Collection of the Chinese Academy of Sciences</td>
			<td>GNHa 3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MHCC-97H</td>
			<td>the Type Culture Collection of the Chinese Academy of Sciences</td>
			<td>SCSP-528</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HepG2</td>
			<td>the Type Culture Collection of the Chinese Academy of Sciences</td>
			<td>TCHu 72</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Huh7</td>
			<td>the Type Culture Collection of the Chinese Academy of Sciences</td>
			<td>TCHu182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hep3B</td>
			<td>the Type Culture Collection of the Chinese Academy of Sciences</td>
			<td>TCHu106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NK92</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL2408</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a gpc3-targeting bispecific antibody, gpc3-s-fab, with potent cytotoxicity

इस प्रोटोकॉल में एक bispecific एंटीबॉडी (bsAb), GPC3-एस-फैब के निर्माण और कार्यात्मक अध्ययन का वर्णन है । bsAbs अपने दो अलग हथियारों के माध्यम से दो अलग epitopes पहचान सकते हैं । bsAbs सक्रिय रूप से अपने को सीधे प्रतिरक्षा कोशिकाओं को भर्ती करने के लिए ट्यूमर कोशिकाओं को मारने की क्षमता के लिए अध्ययन किया गया है । वर्तमान में, bsAbs के बहुमत रिकॉमबिनेंट प्रोटीन के रूप में उत्पादित कर रहे हैं, या तो एफसी के रूप में bsAbs युक्त या एफसी क्षेत्र के बिना छोटे bsAb डेरिवेटिव के रूप में । इस अध्ययन में, GPC3-एस-फैब, एक एंटीबॉडी अंश (फैब) आधारित bispecific एंटीबॉडी, एंटी-GPC3 एंटीबॉडी GC33 के फैब को एंटी-CD16 एकल डोमेन एंटीबॉडी के साथ लिंक करके डिज़ाइन किया गया था । GPC3-एस-फैब ई कोलाई में व्यक्त किया जा सकता है और दो अपनत्व chromatographies द्वारा शुद्ध । शुद्ध GPC3-एस-फैब विशेष रूप से करने के लिए और प्राकृतिक हत्यारा कोशिकाओं की भर्ती द्वारा GPC3 सकारात्मक जिगर कैंसर की कोशिकाओं को मारने के लिए बाध्य कर सकते हैं, जिगर कैंसर थेरेपी में GPC3 एस-फैब के एक संभावित अनुप्रयोग का सुझाव ।

GPC3-एस-फैब शुद्धि
GPC3-S-फैब ई. कोलाई से एक दो कदम अपनत्व शुद्धि द्वारा शुद्ध किया गया था, पहले Ni-ंत्-agarose के साथ, आईजीजी-CH1 अपनत्व शुद्धि के बाद. दो कदम संबध शुद्धि के ब?...

Watch this Scientific Journal Video about A GPC3-targeting Bispecific Antibody, GPC3-S-Fab, with Potent Cytotoxicity at JoVE.com

A GPC3-targeting Bispecific Antibody, GPC3-S-Fab, with Potent Cytotoxicity

यहां, हम ई कोलाई में एक bispecific एंटीबॉडी GPC3-एस-फैब का उत्पादन करने के लिए एक प्रोटोकॉल पेश करते हैं । शुद्ध GPC3-एस फैब GPC3 सकारात्मक जिगर कैंसर की कोशिकाओं के खिलाफ प्रबल cytotoxicity है ।

एक GPC3-लक्ष्यीकरण Bispecific एंटीबॉडी, GPC3-एस-फैब, शक्तिशाली Cytotoxicity के साथ

This protocol describes the construction and functional studies of a bispecific antibody (bsAb), GPC3-S-Fab. bsAbs can recognize two different epitopes ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

ट्यूमर के विकास और मेटास्टेसिस अध्ययन के लिए Traceable पत्रकारों के साथ स्तन कैंसर के रोगी व्युत्पन्न Xenografts की लेबलिंग

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation

Antineoplastic दवाओं द्वारा विरोधी एंटीबॉडी प्रभावकारिता की Potentiation: एंटीबॉडी-ड्रग सिनर्जी संयोजन सूचकांक समीकरण का उपयोग कर का पता लगाने

Potentiation of hostile monoclonal antibodies (mAb) by chemotherapeutic agents constitutes a valuable strategy for designing effective and safer therapy ...

In Vivo Immunofluorescence Localization for Assessment of Therapeutic and Diagnostic Antibody Biodistribution in Cancer Research

कैंसर अनुसंधान में चिकित्सीय और नैदानिक एंटीबॉडी जैव वितरण के आकलन के लिए Vivo इम्यूनोफ्लोरेसेंस स्थानीयकरण में

Monoclonal antibodies (mAbs) are important tools in cancer detection, diagnosis, and treatment. They are used to unravel the role of proteins in ...

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

ऑर्थोटोपिक अग्नाशय ट्यूमर की पीढ़ी और ट्यूमर के पूर्व वीवो लक्षण वर्णन-घुसपैठ टी सेल साइटोटॉक्सिकिटी

In vivo models of pancreatic cancer provide invaluable tools for studying disease dynamics, immune infiltration and new therapeutic strategies. The ...

Analyzing Tumor and Tissue Distribution of Target Antigen Specific Therapeutic Antibody

लक्ष्य एंटीजन विशिष्ट चिकित्सीय एंटीबॉडी के ट्यूमर और ऊतक वितरण का विश्लेषण

Monoclonal antibodies are high affinity multifunctional drugs that work by variable independent mechanisms to eliminate cancer cells. Over the last few ...

An Automated Differential Nuclear Staining Assay for Accurate Determination of Mitocan Cytotoxicity

मिटोकन साइटोटॉक्सीसिटी के सटीक निर्धारण के लिए एक स्वचालित अंतर परमाणु स्टेनिंग परख

The contribution of mitochondria to oncogenic transformation is a subject of wide interest and active study. As the field of cancer metabolism becomes ...

Monitoring Cancer Cell Invasion and T-Cell Cytotoxicity in 3D Culture

3 डी संस्कृति में कैंसर सेल आक्रमण और टी-सेल साइटोटॉक्सिकिटी की निगरानी

Significant progress has been made in treating cancer with immunotherapy, although a large number of cancers remain resistant to treatment. A limited ...

Chemical Conjugation of a Purified DEC-205-Directed Antibody with Full-Length Protein for Targeting Mouse Dendritic Cells In Vitro and In Vivo

Chemical Conjugation of a Purified DEC-205-Directed Antibody with Full-Length Protein for Targeting Mouse Dendritic Cells In Vitro and In Vivo

एक शुद्ध DEC-205-विट्रो में माउस Dendritic कोशिकाओं को लक्षित करने के लिए पूर्ण लंबाई प्रोटीन के साथ एंटीबॉडी निर्देशित और वीवो में रासायनिक Conjugation

Targeted antigen delivery to cross-presenting dendritic cells (DC) in vivo efficiently induces T effector cell responses and displays a valuable approach ...

Experimental Melanoma Immunotherapy Model Using Tumor Vaccination with a Hematopoietic Cytokine

हेमटोपोइएटिक साइटोकिन के साथ ट्यूमर टीकाकरण का उपयोग करके प्रयोगात्मक मेलेनोमा इम्यूनोथेरेपी मॉडल

Fms-like tyrosine kinase 3 ligand (Flt3L) is a hematopoietic cytokine that promotes the survival and differentiation of dendritic cells (DCs). It has been ...

Tracking Bispecific Antibody-Induced T Cell Trafficking Using Luciferase-Transduced Human T Cells

ल्यूसिफेरस-ट्रांसड्यूस्ड मानव टी कोशिकाओं का उपयोग करके द्वि-विशिष्ट एंटीबॉडी-प्रेरित टी सेल तस्करी पर नज़र रखना

T cell-engaging bispecific antibodies (T-BsAbs) are in various stages of preclinical development and clinical testing for solid tumors. Factors such as ...