Name: injections of lipopolysaccharide into mice to mimic entrance of microbial-derived products after intestinal barrier breach
Uploaded: 2018-05-02T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Injections of Lipopolysaccharide into Mice to Mimic Entrance of Microbial-derived Products After Intestinal Barrier Breach at JoVE.com

JHN wordt ondersteund door de Zwitserse nationale Stichting (SNSF 310030_146290).

Muizen werden gefokt en gehouden onder specifieke pathogenen vrije (SPF) omstandigheden in het dier faciliteit van het departement van medische biologie, Universiteit van Basel (Basel, Zwitserland). Alle muis experimenten werden uitgevoerd overeenkomstig de Zwitserse federale en kantonnale regelgeving (dierlijke protocolnummer 2816 [Canton Basel-Stadt]).
1. bereiding van LPS-oplossing
<ol><li>Open de voorraad van LPS gezuiverd van Escherichia coli 0111:B4 onder steriele omstandighed...

<ol>
	<li>Backhed, F., Ley, R. E., Sonnenburg, J. L., Peterson, D. A., Gordon, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-bacterial+mutualism+in+the+human+intestine.">Host-bacterial mutualism in the human intestine.</a> Science. 307, 1915-1920 (2005).</li><li>Abreu, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+NOD2+are+associated+with+fibrostenosing+disease+in+patients+with+Crohn's+disease.">Mutations in NOD2 are associated with fibrostenosing disease in patients with Crohn's disease.</a> Gastroenterology. 123, 679-688 (2002).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunocytochemical+evidence+of+Listeria,+Escherichia+coli,+and+Streptococcus+antigens+in+Crohn's+disease.">Immunocytochemical evidence of Listeria, Escherichia coli, and Streptococcus antigens in Crohn's disease.</a> Gastroenterology. 108, 1396-1404 (1995).</li><li>Schaffer, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-Saccharomyces+cerevisiae+mannan+antibodies+(ASCA)+of+Crohn's+patients+crossreact+with+mannan+from+other+yeast+strains,+and+murine+ASCA+IgM+can+be+experimentally+induced+with+Candida+albicans.">Anti-Saccharomyces cerevisiae mannan antibodies (ASCA) of Crohn's patients crossreact with mannan from other yeast strains, and murine ASCA IgM can be experimentally induced with Candida albicans.</a> Inflamm Bowel Dis. 13, 1339-1346 (2007).</li><li>Sellon, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resident+enteric+bacteria+are+necessary+for+development+of+spontaneous+colitis+and+immune+system+activation+in+interleukin-10-deficient+mice.">Resident enteric bacteria are necessary for development of spontaneous colitis and immune system activation in interleukin-10-deficient mice.</a> Infect Immun. 66, 5224-5231 (1998).</li><li>Gkouskou, K. K., Deligianni, C., Tsatsanis, C., Eliopoulos, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+gut+microbiota+in+mouse+models+of+inflammatory+bowel+disease.">The gut microbiota in mouse models of inflammatory bowel disease.</a> Front Cell Infect Microbiol. 4, 28 (2014).</li><li>Schaubeck, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysbiotic+gut+microbiota+causes+transmissible+Crohn's+disease-like+ileitis+independent+of+failure+in+antimicrobial+defence.">Dysbiotic gut microbiota causes transmissible Crohn's disease-like ileitis independent of failure in antimicrobial defence.</a> Gut. 65, 225-237 (2016).</li><li>Steinert, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Stimulation+of+Macrophages+with+TLR+Ligands+Supports+Increased+IL-19+Expression+in+Inflammatory+Bowel+Disease+Patients+and+in+Colitis+Models.">The Stimulation of Macrophages with TLR Ligands Supports Increased IL-19 Expression in Inflammatory Bowel Disease Patients and in Colitis Models.</a> J Immunol. 199, 2570-2584 (2017).</li><li>Gabele, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DSS+induced+colitis+increases+portal+LPS+levels+and+enhances+hepatic+inflammation+and+fibrogenesis+in+experimental+NASH.">DSS induced colitis increases portal LPS levels and enhances hepatic inflammation and fibrogenesis in experimental NASH.</a> J Hepatol. 55, 1391-1399 (2011).</li><li>Saunders, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C-type+lectin+SIGN-R1+has+a+role+in+experimental+colitis+and+responsiveness+to+lipopolysaccharide.">C-type lectin SIGN-R1 has a role in experimental colitis and responsiveness to lipopolysaccharide.</a> J Immunol. 184, 2627-2637 (2010).</li><li>Spadoni, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+gut-vascular+barrier+controls+the+systemic+dissemination+of+bacteria.">A gut-vascular barrier controls the systemic dissemination of bacteria.</a> Science. 350, 830-834 (2015).</li><li>Balmer, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+liver+may+act+as+a+firewall+mediating+mutualism+between+the+host+and+its+gut+commensal+microbiota.">The liver may act as a firewall mediating mutualism between the host and its gut commensal microbiota.</a> Sci Transl Med. 6, 237ra266 (2014).</li><li>Maier, R. V., Mathison, J. C., Ulevitch, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+of+bacterial+lipopolysaccharides+with+tissue+macrophages+and+plasma+lipoproteins.">Interactions of bacterial lipopolysaccharides with tissue macrophages and plasma lipoproteins.</a> Prog Clin Biol Res. 62, 133-155 (1981).</li><li>Lu, Y. C., Yeh, W. C., Ohashi, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LPS/TLR4+signal+transduction+pathway.">LPS/TLR4 signal transduction pathway.</a> Cytokine. 42, 145-151 (2008).</li><li>Deng, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide+clearance,+bacterial+clearance,+and+systemic+inflammatory+responses+are+regulated+by+cell+type-specific+functions+of+TLR4+during+sepsis.">Lipopolysaccharide clearance, bacterial clearance, and systemic inflammatory responses are regulated by cell type-specific functions of TLR4 during sepsis.</a> J Immunol. 190, 5152-5160 (2013).</li><li>Kagan, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRAM+couples+endocytosis+of+Toll-like+receptor+4+to+the+induction+of+interferon-beta.">TRAM couples endocytosis of Toll-like receptor 4 to the induction of interferon-beta.</a> Nat Immunol. 9, 361-368 (2008).</li><li>Akira, S., Uematsu, S., Takeuchi, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogen+recognition+and+innate+immunity.">Pathogen recognition and innate immunity.</a> Cell. 124, 783-801 (2006).</li><li>Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immunopathogenesis+of+sepsis.">The immunopathogenesis of sepsis.</a> Nature. 420, 885-891 (2002).</li><li>Suffredini, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+recombinant+dimeric+TNF+receptor+on+human+inflammatory+responses+following+intravenous+endotoxin+administration.">Effects of recombinant dimeric TNF receptor on human inflammatory responses following intravenous endotoxin administration.</a> J Immunol. 155, 5038-5045 (1995).</li><li>Fink, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+sepsis.">Animal models of sepsis.</a> Virulence. 5, 143-153 (2014).</li><li>Poltorak, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+LPS+signaling+in+C3H/HeJ+and+C57BL/10ScCr+mice:+mutations+in+Tlr4+gene.">Defective LPS signaling in C3H/HeJ and C57BL/10ScCr mice: mutations in Tlr4 gene.</a> Science. 282, 2085-2088 (1998).</li><li>Hoshino, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+Toll-like+receptor+4+(TLR4)-deficient+mice+are+hyporesponsive+to+lipopolysaccharide:+evidence+for+TLR4+as+the+Lps+gene+product.">Cutting edge: Toll-like receptor 4 (TLR4)-deficient mice are hyporesponsive to lipopolysaccharide: evidence for TLR4 as the Lps gene product.</a> J Immunol. 162, 3749-3752 (1999).</li><li>Corral, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+lipopolysaccharide+and+cecal+ligation+and+puncture+on+blood+coagulation+and+inflammation+in+sensitive+and+resistant+mice+models.">Role of lipopolysaccharide and cecal ligation and puncture on blood coagulation and inflammation in sensitive and resistant mice models.</a> Am J Pathol. 166, 1089-1098 (2005).</li><li>Shrum, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+robust+scoring+system+to+evaluate+sepsis+severity+in+an+animal+model.">A robust scoring system to evaluate sepsis severity in an animal model.</a> BMC Res Notes. 7, 233 (2014).</li><li>Brandwein, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneously+colitic+C3H/HeJBir+mice+demonstrate+selective+antibody+reactivity+to+antigens+of+the+enteric+bacterial+flora.">Spontaneously colitic C3H/HeJBir mice demonstrate selective antibody reactivity to antigens of the enteric bacterial flora.</a> J Immunol. 159, 44-52 (1997).</li><li>Macpherson, A. J., McCoy, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardised+animal+models+of+host+microbial+mutualism.">Standardised animal models of host microbial mutualism.</a> Mucosal Immunol. 8, 476-486 (2015).</li><li>Masopust, D., Sivula, C. P., Jameson, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+Mice,+Dirty+Mice,+and+Men:+Using+Mice+To+Understand+Human+Immunology.">Of Mice, Dirty Mice, and Men: Using Mice To Understand Human Immunology.</a> J Immunol. 199, 383-388 (2017).</li><li>Wirtz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+from+lethal+septic+peritonitis+by+neutralizing+the+biological+function+of+interleukin+27.">Protection from lethal septic peritonitis by neutralizing the biological function of interleukin 27.</a> J Exp Med. 203, 1875-1881 (2006).</li></ol>

Dit protocol bootst immunologische processen die zich na de invasie door microbiële afkomstige producten voordoen. Kritische stappen in het protocol zijn de keuze van de lijn van de muis, de status van de hygiëne van de muizen, de dosis van LPS, de controle van de dieren ten behoeve van het voorkomen van endotoxemia, en het tijdstip van beëindiging van het experiment. Belangrijker nog, moet de genetische achtergrond van de muis stam worden beschouwd. Verschillende muis stammen hebben verschillende gevoeligheid voor LP...

De menselijke darm is gekoloniseerd met een groot consortium van micro-organismen die vormt de microbiota, die een wederzijds voordelige relatie met de host tijdens de evolutie heeft ontwikkeld. In deze relatie voorziet de host een veilige niche de microbiota, overwegende dat de microbiota levert vitaminen, nutriënten spijsvertering en bescherming tegen ziektekiemen naar de host, waar de microbiota1 verblijft. Wanneer deze heilzame relatie tussen de host en de microbiota wordt verstoord, kunnen ziekten ontwikkelen, zoals inflammatory bowel disease (IBD). IBD is een multifactoriële chronische ontstekingsziekte van de darm veroorzaakt door genetische en ecologische factoren die in twee belangrijke vormen, ziekte van Crohn (CD) en colitis ulcerosa (UC optreden). Ondanks de gelijkenissen tussen de twee vormen van IBD, worden ze gekenmerkt door bepaalde verschillen in de locatie en de aard van de wijzigingen van de inflammatoire. CD is een recidiverende Transmurale inflammatoire aandoening die potentieel uit te tot elk deel van het maagdarmkanaal, breiden kan terwijl UC niet-Transmurale is en is beperkt tot de dikke darm. Bovendien, mutaties in Nucleotide-bindende oligomerisatie domein-bevattende eiwitten 2 (NOD2), een patroon erkenning receptor (PRR) die muramyl dipeptide (MDP), een onderdeel van de celwand van gram-positieve en meest - negatieve bacteriën herkent, is CD2is gekoppeld. Bovendien, Escherichia coli (E. coli), Listeria , streptokokken en hun producten alle bleken binnen macrofagen in CD-patiënten die de gastheer hebt ingevoerd nadat een barrière inbreuk op3. Wanneer bacteriën of naar hun producten de host tijdens de ontwikkeling van CD invoert, ontwikkelt het immuunsysteem een reactie die leidt tot de productie van circulerende antilichamen anti-bacteriële4. Misschien de meest overtuigende bewijs voor de rol van de microbiota in de pathogenese van IBD vloeit voort uit Muismodellen. Wanneer dieren worden behandeld met antibiotica, of wanneer de muizen zijn bewaard in kiem-gratis (GF) omstandigheden, is de ernst van de ziekte verlaagd in de meeste colitis modellen, zoals in de IL-10-/-muizen die geen colitis in GF voorzieningen5,6 ontwikkelen. Colitis verstoort bovendien ook de samenstelling van de microbiota, die wordt gekenmerkt door een onevenwichtige samenstelling en verminderd rijkdom genaamd dysbiosis7. Het gevolg van IBD kunnen een verhoogde intestinale permeabiliteit die tot de ingang van microben en microbiële afkomstige producten in de gastheer leiden kan.
In dieren induceert de toepassing van Dextran natriumsulfaat (DSS) een intestinale epitheliale inbreuk leidt tot een verhoogde doorlaatbaarheid van de epitheliale barrière-8. Portal LPS concentraties zijn verheven in dieren met DSS colitis9. Interessant is dat zijn dieren ontbreekt de C type lectine receptor specifieke intracellulaire adhesie molecuul-3 grijpen nonintegrin homolog-gerelateerde 1 (teken-R1) beschermd tegen DSS colitis en LPS-geïnduceerde endotoxemia10. Ter verdere verspreiding van de in de gastheer, moeten bacteriën of bacteriën afgeleide producten passeren de vasculaire barrière11, de peritoneale Holte, waarin de kleine en grote darm bevindt, de mesenterische lymfeklieren en/of de lever12. Verklein de complexiteit van dit systeem en werd een gedefinieerde bacteriële afkomstige omheind gebruikt. LPS, waardoor endotoxemia na intraperitoneale (i.p.) of intraveneuze (IV) injectie13 werd geïnjecteerd in muizen, de uitdrukking van de interleukins Il6 en Ilb en het cytokine Tnfa in reactie op LP's te bestuderen.
LPS is een pathogeen-geassocieerde moleculaire patroon (PAMP) uitgedrukt als een celwand onderdeel van gram-negatieve bacteriën, die uit een lipide-A bestaat (de belangrijkste PAMP in de structuur van LPS), een kern-oligosaccharide en een O kant keten14. Toll-like receptor 4 (TLR4) uitgedrukt door dendritische cellen, macrofagen en epitheliale cellen herkent LPS15, waarvoor co receptoren voor de juiste binding. De acute fase eiwit LPS-bindend-proteïne (LBP) bindt LPS vormen een complex dat de overdracht van LPS aan het cluster van differentiatie 14 (CD14), een glycosylphosphatidylinositol-verankerd membraan eiwit. CD14 verder shuttles LPS lymfocyt antigeen 96 of ook wel bekend als MD-2, die is gekoppeld aan de extracellulaire domein van TLR4. De binding van LPS naar MD-2 vergemakkelijkt de dimerisatie van TLR4/MD-2 voor het opwekken van conformationele wijzigingen in het werven van intracellulaire adapter moleculen om te activeren van de stroomafwaartse signalering traject14, waarin de primaire myeloïde differentiatie reactie gene 88 (MyD88) - afhankelijke traject en de TIR domein-bevattende adapter-inducerende interferon-β (TRIF) - afhankelijke traject16. De erkenning van LPS door TLR4 vervolgens activeert de NF-recombination pathway en induceert de uitdrukking van proinflammatoire cytokines, als TNFα, IL-6, IL-1β17.
In het bijzonder wanneer LPS wordt geïnjecteerd in de dieren, de concentratie van LPS gegeven om de dieren, moet de genetische achtergrond van het dier en het dieet worden beschouwd. Hoge concentraties van LPS leidt tot een septische shock, gekenmerkt door hypotensie en meerdere orgel stroomstoringen, en ten slotte aan dood18. Muizen zijn minder gevoelig voor LPS ten opzichte van mensen, waar LPS concentraties van 2-4 ng/kg lichaamsgewicht (BW) kunnen voor het opwekken van een cytokine storm19. Voor muizen, de letale dosis (LD50), die dood in de helft van de muizen varieert van 10-25 mg/kg BW20 afhankelijk van de gebruikte muis stam induceert. Voor de meest gebruikte muis stammen, C57Bl/6 en BALB/c, is de 50% van letale dosis (LD50) 10 mg/kg BW. In tegenstelling, worden de stammen C3H/HeJ en C57BL/10ScCr beschermd tegen LPS geïnduceerde endotoxemia, dat te wijten aan mutaties in Tlr421 is. Bijgevolg zijn Tlr4-deficiënte muizen hyporesponsive aan injecties met LPS22. Andere genetisch gemodificeerde muis lijnen, zoals PARP1-/-muizen23 resistent zijn tegen LPS-geïnduceerde toxische shock.
Het muismodel beschreven gebruikt hier een subletale dosis van LPS systemisch toegediend om na te bootsen de gevolgen van de verspreiding van de LPS na een schending van de barrière van het lichaam van de oppervlakken. De gekozen LPS concentratie (2 mg/kg BW) heeft geen veroorzaken sterfte in C56Bl/6 muizen, maar de geïnduceerde release van pro-inflammatoire cytokines.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="896">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">DreamTaq Green PCR Master Mix (2x)</td>
			<td style="width:303px;">Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA</td>
			<td style="width:119px;">K1081</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit,</td>
			<td style="width:303px;">Applied Biosystems, Foster City, CA, USA</td>
			<td>4368813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RNase-Free DNase Set,</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>79254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LPS Escherichia coli O111:B4</td>
			<td>Invivogen, San Diego, CA, USA.</td>
			<td>tlrl-eblps</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Omnican 50 Single-use insulin syringe</td>
			<td>B. Braun Melsungen, Melsungen, Germany</td>
			<td>9151125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bioanalyzer 2100</td>
			<td>Agilent Technologie, Santa Clara, USA</td>
			<td style="width:119px;">not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge 5430</td>
			<td>Eppendorf, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:119px;">not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge Mikro 220R</td>
			<td>Hettich, Kirchlengern, Germany</td>
			<td style="width:119px;">not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissection tools</td>
			<td>Aesculap, Tuttlingen, Germany</td>
			<td style="width:119px;">not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fast-Prep-24 5G Sample Preparation System</td>
			<td>M.P. Biomedicals, Santa Ana, CA, USA</td>
			<td style="width:119px;">not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NanoDrop ND-1000</td>
			<td>NanoDrop Products, Wilmington, DE, USA</td>
			<td style="width:119px;">not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TRI Reagent</td>
			<td>Zymo Research, Irvine, CA, USA</td>
			<td>R2050-1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

injections of lipopolysaccharide into mice to mimic entrance of microbial-derived products after intestinal barrier breach

De intestinale epitheliale barrière scheidt de host van de microbiota die normaal wordt getolereerd of genegeerd. De schending van deze barrière leidt tot de ingang van bacteriën of bacteriën afkomstige producten naar de host, toegang tot de host verkeer en binnenorganen leiden tot de ongecontroleerde ontsteking zoals waargenomen bij patiënten met een inflammatoire darmziekte (IBD), die worden gekenmerkt door een toegenomen permeabiliteit voor intestinale epitheliale.
Om na te bootsen de ingang van bacteriële afkomstige verbindingen in de gastheer, een endotoxemia model heeft vastgesteld in welke lipopolysaccharide (LPS), een onderdeel van de buitenste celwand van gram-negatieve bacteriën, waren geïnjecteerd in muizen. In deze studie een subletale dosis van LPS intraperitoneally werd geïnjecteerd en de muizen werden vervolgens gecontroleerd voor 8 h met gebruikmaking van een ziekte-score. Bovendien, de niveaus van de ontsteking cytokinen, Il6, Il1b, en Tnfa werden geanalyseerd in de milt, de lever en de dikke darm door de qPCR op verschillende tijdstippen expressie post LPS injectie. Dit model kan nuttig zijn voor de studies waarbij onderzoek van immuunresponsen na de invasie van micro-organismen of bacteriële afkomstige producten veroorzaakt door een breuk van de barrière van oppervlakken van het lichaam.

Om na te bootsen de gevolgen voor de host na de ingang van bacteriën of bacteriële-afgeleide producten die na de intestinale barrière schending plaatsvindt, LPS werd geïnjecteerd in de C57Bl/6 muizen in een subletale dosis (2 µg/g lichaamsgewicht). Elke enkele muis werd gecontroleerd en scoorde voor het voorkomen van endotoxemia met parameters die worden vermeld in de scorekaart die omvat, het uiterlijk van de muizen, de activiteit van de dieren, de conditie van de ogen, en de ademha...

Watch this Scientific Journal Video about Injections of Lipopolysaccharide into Mice to Mimic Entrance of Microbial-derived Products After Intestinal Barrier Breach at JoVE.com

Injections of Lipopolysaccharide into Mice to Mimic Entrance of Microbial-derived Products After Intestinal Barrier Breach

Hier wordt een protocol om na te bootsen de ingang van bacteriële afkomstige verbindingen na de schending van de intestinale barrière gepresenteerd. Een lage dosis subletale lipopolysaccharide werd systemisch geïnjecteerd in muizen, die werden gecontroleerd voor 24u na injectie. De expressie van pro-ontsteking cytokinen werd vastgesteld op verschillende tijdstippen in de milt, lever en dikke darm.

Injecties van Lipopolysaccharide in muizen om na te bootsen ingang van microbiële afkomstige producten na de schending van de intestinale barrière

The intestinal epithelial barrier separates the host from the microbiota that is normally tolerated or ignored. The breach of this barrier results in the ...

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Biology

Immunology and Infection

Human Biology

Immune System

SCIENTISTS IN ACTION

Purification and Visualization of Lipopolysaccharide from Gram-negative Bacteria by Hot Aqueous-phenol Extraction

Zuivering en Visualisatie van Lipopolysaccharide van Gram-negatieve bacteriën door Hot Waterige-fenolextractie

Lipopolysaccharide (LPS)  is a major component of Gram-negative bacterial outer membranes. It is a tripartite molecule consisting of  lipid A, which is ...

A Method for Generating Pulmonary Neutrophilia Using Aerosolized Lipopolysaccharide

Een methode voor het genereren van Pulmonale neutrofilie behulp Aerosolized Lipopolysaccharide

Acute lung injury (ALI) is a severe disease characterized by alveolar neutrophilia, with limited treatment options and high mortality. Experimental models ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Inductie van Muriene darmontsteking door adoptieve overdracht van effector CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Hoog</sup&gt; T cellen in immunodeficiënte muizen

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Induction of Maternal Immune Activation in Mice at Mid-gestation Stage with Viral Mimic Poly(I:C)

Induction of Maternal Immune Activation in Mice at Mid-gestation Stage with Viral Mimic PolyI:C

Inductie van Maternal Immune Activering in Muizen bij Mid-dracht Podium met Viral Mimic Poly (I: C)

Maternal immune activation (MIA) model is increasingly well appreciated as a rodent model for the environmental risk factor of various psychiatric ...

Immunofluorescence Analysis of Stress Granule Formation After Bacterial Challenge of Mammalian Cells

Immunofluorescentie analyse van stress granule vorming na bacteriële uitdaging van zoogdiercellen

Fluorescent imaging of cellular components is an effective tool to investigate host-pathogen interactions. Pathogens can affect many different features of ...

Generation of Monoclonal Antibodies Against Natural Products

Generatie van monoklonale antistoffen tegen natuurlijke producten

The analysis of the bioactive components present in foods and natural products has become a popular area of study in many fields, including traditional ...

Quantitative Polymerase Chain Reaction-based Analyses of Murine Intestinal Microbiota After Oral Antibiotic Treatment

Kwantitatieve Polymerase Chain Reaction gebaseerde Analyses van lymfkliertest intestinale Microbiota na behandeling met mondelinge antibiotica

The gut microbiota has a central influence on human health. Microbial dysbiosis is associated with many common immunopathologies such as inflammatory ...

Induction of Intestinal Graft-versus-host Disease and Its Mini-endoscopic Assessment in Live Mice

Inductie van intestinale Graft - versus host klauwzeer en haar Mini-Endoscopische beoordeling in levende muizen

Acute graft-versus-host disease (GvHD) represents the most severe complication that patients previously undergoing allogeneic hematopoietic stem cell ...

Mechanistic Insight into the Development of TNBS-Mediated Intestinal Fibrosis and Evaluating the Inhibitory Effects of Rapamycin

Mechanistisch inzicht in de ontwikkeling van TNBS-gemedieerde intestinale fibrose en evaluatie van de remmende effecten van Rapamycine

Significant studies have been carried out to understand effective management of intestinal fibrosis. However, the lack of better knowledge of fibrosis has ...

Differentiation of Monocytes into Phenotypically Distinct Macrophages After Treatment with Human Cord Blood Stem Cell (CB-SC)-Derived Exosomes

Differentiation of Monocytes into Phenotypically Distinct Macrophages After Treatment with Human Cord Blood Stem Cell CB-SC-Derived Exosomes

Differentiatie van monocyten in fenotypisch verschillende macrofagen na behandeling met Human Cord Blood Stem Cell (CB-SC)-Afgeleide Exosomen

Stem Cell Educator (SCE) therapy is a novel clinical approach for the treatment of type 1 diabetes and other autoimmune diseases. SCE therapy circulates ...