Name: impact of intracardiac neurons on cardiac electrophysiology and arrhythmogenesis in an ex vivo langendorff system
Uploaded: 2018-05-22T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Impact of Intracardiac Neurons on Cardiac Electrophysiology and Arrhythmogenesis in an Ex Vivo Langendorff System at JoVE.com

Les auteurs aimeraient remercier Hartwig Wieboldt pour son excellente assistance technique et l’UKE Microscopy Imaging Facility (Umif) du centre médical universitaire Hamburg-Eppendorf de fournir microscopes et soutien. Cette recherche a été financée bythe Förderverein des universitaire Herzzentrums Hamburg e.V. et par le DZHK (Centre allemand de recherche cardiovasculaire) [FKZ 81Z4710141].

Toutes les procédures impliquant des animaux ont été approuvées par les autorités locales des comités de l’utilisation, soins aux animaux de l’Université de Hambourg et l’état de Hambourg.
1. préparation de l’appareil de Langendorff
NOTE : Un système de perfusion Langendorff commercialement disponible est utilisé.
<ol><li>Préparer une solution de Krebs-Henseleit modifiée (119 mM de 25 mM de bicarbonate de sodium, 4,6 mM de 1,2 mM de phosphate...

<ol>
	<li>Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrograde+heart+perfusion:+the+Langendorff+technique+of+isolated+heart+perfusion.">Retrograde heart perfusion: the Langendorff technique of isolated heart perfusion.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50 (6), 940-950 (2011).</li><li>Sutherland, F. J., Hearse, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+blood+and+perfusion+fluid+perfused+heart.">The isolated blood and perfusion fluid perfused heart.</a> Pharmacological Research. 41 (6), 613-627 (2000).</li><li>Hearse, D. J., Sutherland, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+for+the+study+of+cardiovascular+function+and+disease.">Experimental models for the study of cardiovascular function and disease.</a> Pharmacological Research. 41 (6), 597-603 (2000).</li><li>Valentin, J. P., Hoffmann, P., De Clerck, F., Hammond, T. G., Hondeghem, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+the+predictive+value+of+the+Langendorff+heart+model+(Screenit+system)+in+assessing+the+proarrhythmic+potential+of+drugs.">Review of the predictive value of the Langendorff heart model (Screenit system) in assessing the proarrhythmic potential of drugs.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 49 (3), 171-181 (2004).</li><li>Skrzypiec-Spring, M., Grotthus, B., Szelag, A., Schulz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolated+heart+perfusion+according+to+Langendorff-still+viable+in+the+new+millennium.">Isolated heart perfusion according to Langendorff-still viable in the new millennium.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 55 (2), 113-126 (2007).</li><li>Langendorff, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+the+living+mammalian+heart.">Investigation of the living mammalian heart.</a> Pfl&#252;gers Archiv. 61, 291-332 (1895).</li><li>Matsumoto-Ida, M., Akao, M., Takeda, T., Kato, M., Kita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+2-photon+imaging+of+mitochondrial+function+in+perfused+rat+hearts+subjected+to+ischemia/reperfusion.">Real-time 2-photon imaging of mitochondrial function in perfused rat hearts subjected to ischemia/reperfusion.</a> Circulation. 114 (14), 1497-1503 (2006).</li><li>Rassaf, T., Totzeck, M., Hendgen-Cotta, U. B., Shiva, S., Heusch, G., Kelm, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+nitrite+contributes+to+cardioprotection+by+remote+ischemic+preconditioning.">Circulating nitrite contributes to cardioprotection by remote ischemic preconditioning.</a> Circulation Research. 114 (10), 1601-1610 (2014).</li><li>Schechter, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+isolated+working+heart+system+for+large+animal+models.">An isolated working heart system for large animal models.</a> Journal of Visualized Experiments. 88 (88), 51671 (2014).</li><li>Stockigt, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+beta-adrenoceptor+knockout+slows+conduction+and+reduces+inducible+arrhythmias+in+the+mouse+heart.">Total beta-adrenoceptor knockout slows conduction and reduces inducible arrhythmias in the mouse heart.</a> PLoS One. 7 (11), e49203 (2012).</li><li>Berul, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+phenotyping+in+genetically+engineered+mice.">Electrophysiological phenotyping in genetically engineered mice.</a> Physiological Genomics. 13 (3), 207-216 (2003).</li><li>Curtis, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Lambeth+Conventions+(II):+guidelines+for+the+study+of+animal+and+human+ventricular+and+supraventricular+arrhythmias.">The Lambeth Conventions (II): guidelines for the study of animal and human ventricular and supraventricular arrhythmias.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 139 (2), 213-248 (2013).</li><li>Schrickel, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+heterogeneity+of+myocardial+conduction+and+severe+cardiac+electrical+instability+in+annexin+A7-deficient+mice.">Enhanced heterogeneity of myocardial conduction and severe cardiac electrical instability in annexin A7-deficient mice.</a> Cardiovascular Research. 76 (2), 257-268 (2007).</li><li>Rudolph, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloperoxidase+acts+as+a+profibrotic+mediator+of+atrial+fibrillation.">Myeloperoxidase acts as a profibrotic mediator of atrial fibrillation.</a> Nature Medicine. 16 (4), 470-474 (2010).</li><li>Jungen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+cardiac+cholinergic+neurons+enhances+susceptibility+to+ventricular+arrhythmias.">Disruption of cardiac cholinergic neurons enhances susceptibility to ventricular arrhythmias.</a> Nature Communications. 8, 14155 (2017).</li><li>Calebiro, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+cAMP-signals+triggered+by+internalized+G-protein-coupled+receptors.">Persistent cAMP-signals triggered by internalized G-protein-coupled receptors.</a> PLoS Biology. 7 (8), e1000172 (2009).</li><li>Sprenger, J. U., Perera, R. K., G&#246;tz, K. R., Nikolaev, V. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FRET+microscopy+for+real-time+monitoring+of+signaling+events+in+live+cells+using+unimolecular+biosensors.">FRET microscopy for real-time monitoring of signaling events in live cells using unimolecular biosensors.</a> Journal of Visualized Experiments. (66), e4081 (2012).</li><li>Alanentalo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tomographic+molecular+imaging+and+3D+quantification+within+adult+mouse+organs.">Tomographic molecular imaging and 3D quantification within adult mouse organs.</a> Nature Methods. 4 (1), 31-33 (2007).</li><li>Whittington, N. C., Wray, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+red+blood+cell+autofluorescence+for+immunocytochemistry+on+fixed+embryonic+mouse+tissue.">Suppression of red blood cell autofluorescence for immunocytochemistry on fixed embryonic mouse tissue.</a> Current Protocols in Neuroscience. 81, 2.28.1-2.28.12 (2017).</li><li>Fukuda, K., Kanazawa, H., Aizawa, Y., Ardell, J. L., Shivkumar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+innervation+and+sudden+cardiac+death.">Cardiac innervation and sudden cardiac death.</a> Circulation Research. 116 (12), 2005-2019 (2015).</li><li>Wengrowski, A. M., Wang, X., Tapa, S., Posnack, N. G., Mendelowitz, D., Kay, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+release+of+norepinephrine+from+cardiac+sympathetic+neurons+alters+mechanical+and+electrical+function.">Optogenetic release of norepinephrine from cardiac sympathetic neurons alters mechanical and electrical function.</a> Cardiovascular Research. 105 (2), 143-150 (2015).</li><li>Rivinius, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+cardiac+chronotropic+function+in+patients+after+heart+transplantation:+effects+of+ivabradine+and+metoprolol+succinate+on+resting+heart+rate+in+the+denervated+heart.">Control of cardiac chronotropic function in patients after heart transplantation: effects of ivabradine and metoprolol succinate on resting heart rate in the denervated heart.</a> Clinical Research in Cardiology. , (2017).</li><li>Ajijola, O. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmentation+of+cardiac+sympathetic+tone+by+percutaneous+low-level+stellate+ganglion+stimulation+in+humans:+a+feasibility+study.">Augmentation of cardiac sympathetic tone by percutaneous low-level stellate ganglion stimulation in humans: a feasibility study.</a> Physiological Reports. 3 (3), e12328 (2015).</li></ol>

Dans ce manuscrit, le système de perfusion du Langendorff ex vivo coeur bien connu est présenté comme un outil pour étudier l’impact des neurones intracardiaques sur l’électrophysiologie cardiaque et arythmogenèse en utilisant la cartographie différente et les techniques de stimulation y compris les approches endocardiques et épicardiques.
Plusieurs parties du protocole sont cruciales pour le programme d’installation. Tout d’abord, il est important d’utiliser une tec...

Le système de perfusion Langendorff ex vivo le cœur continue d’être un outil pertinent pour effectuer un large éventail de morphologiques, biochimiques et physiologiques, et des études pharmacologiques dans dénervé centralement coeurs1,2 ,3,4,5 depuis son invention en fin 19ème siècle6. A ce jour, ce système est encore largement utilisé pour divers sujets (p. ex.., ischémie reperfusion) ou étudier cardiaque pharmacologique effets7,8et est un outil de base en recherche cardiovasculaire. La longévité de cette méthode résulte de plusieurs avantages (p. ex.., les mesures sont effectuées sans l’influence du système nerveux central ou autres organes, circulation systémique ou hormones circulantes). Si nécessaire, produits pharmaceutiques peuvent être ajoutés de façon contrôlée dans la mémoire tampon de perfusion ou appliqués directement à des structures spécifiques. Des expériences sont reproductibles, et un nombre relativement élevé d’expériences peut être effectué dans un court laps de temps. La nature ouverte (en partie) de l’installation peut faire la régulation de la température difficile et doit être pris en compte. Bien que le système de Langendorff est également utilisé dans la plus grande espèce9, petits animaux sont principalement utilisés comme le montage expérimental est moins complexe et une plus grande variabilité biologique (p. ex.., transgéniques modèles murins) peut être utilisé.
Le dispositif expérimental du présent protocole, l’influence du système nerveux autonome intracardiaque sur base paramètres électrophysiologiques, arythmogenèse ventriculaire, conduction épicardique et dynamique de l’adénosine monophosphate cyclique (AMPc) est évalué. Un grand nombre de ganglions intracardiaques, qui sont principalement situées dans les coussinets adipeux auriculaires et sont désormais bien connus pour contrôler l’électrophysiologie cardiaque indépendant de contrôle nerveux central, est que soit laissés intacts ou supprimé manuellement avec soin mécanique dissection. Une modulation pharmacologique du système nerveux autonome est réalisée à l’échelle mondiale en ajoutant des produits pharmaceutiques vers le tampon de perfusion ou localement par modulation ciblée des ganglions auriculaires. Après les expériences, les coeurs sont bien adaptés pour une évaluation immunohistological comme toutes les cellules sanguines ont été supprimées en raison de la perfusion continue, qui permet d’augmenter la qualité de la coloration.
L’objectif global des techniques décrites est d’offrir de nouvelles perspectives pour des études détaillées concernant l’incidence du système nerveux autonome sur l’électrophysiologie cardiaque et arythmogenèse dans le coeur de souris. Une raison d’utiliser cette technique est qu’il est possible d’étudier et de modifier le système nerveux sans l’impact du système nerveux central. Un avantage majeur est l’emploi facile des expériences pharmacologiques, dans quelles propriétés antiarythmiques ou pro - potentielles de vieux et nouveaux agents peuvent être testés. En outre, des modèles de souris transgéniques et knock-out de diverses maladies cardiaques sont disponibles pour étudier les mécanismes qui sous-tendent les arythmies, insuffisance cardiaque ou des maladies métaboliques. Cette approche a amélioré notre compréhension de la façon dont le système nerveux autonome au niveau auriculaire peut avoir des répercussions électrophysiologie cardiaque ventriculaire et l’induction des arythmies.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3014</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydrogencarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>401676</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5405</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5655</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M1880</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C7902</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G5767</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate bioXtra</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P8574</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen (95% O2 / 5% CO2)</td>
			<td colspan="2">SOL-Group, TMG Technische und Medizinische Gas GmbH, Krefeld, Gersthofen, Germany</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile filter steritop-GP 0.22</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>SCGPT05RE</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A0257</td>
			<td>Neuromodulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexamethonium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H2138</td>
			<td>Neuromodulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotine free base 98-100%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N3876</td>
			<td>Neuromodulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution neutral buffered 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(hydroxymethyl)aminomethane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>252859</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34860</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen peroxide solution 30% (w/w) in H2O</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>H1009</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>D8418</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline tablets</td>
			<td>Gibco / Invitrogen</td>
			<td>18912-014</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-x-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8787</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin bovine fraction V</td>
			<td>Biomol, Hamburg, Germany</td>
			<td>11924.03</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken anti neurofilament</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB5539</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti tyrosine hydroxylase</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB152</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti choline acetyltransferase</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AP144P</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey &#945; rabbit IgG Alexa 488</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A21206</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey &#945; goat IgG Alexa 568</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A11057</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey &#945; chicken IgY Alexa 647</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>AP194SA6</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin-conjugated donkey &#945; rabbit igG</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>AP182B</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin-conjugated donkey &#945; goat igG</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>AP192P</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin-conjugated goat &#945; chicken igY</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>BAD010</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectashield mounting medium</td>
			<td>Vector laboratories, Burlingame, CA, USA</td>
			<td>H-1000</td>
			<td>Immunohistochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectastain ABC kit</td>
			<td>Vector laboratories, Burlingame, CA, USA</td>
			<td>PK-4000</td>
			<td>Immunohistochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steady DAB/Plus</td>
			<td>Abcam plc, Cambridge, UK</td>
			<td>ab103723</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoClear</td>
			<td>DiaTec, Bamberg, Germany</td>
			<td>HS2002</td>
			<td>Immunohistochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BisBenzimide H33342 trihydrochloride (Hoechst)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>B2261</td>
			<td>Immunohistochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectashield HardSet mounting medium</td>
			<td>Vector laboratories, Burlingame, CA, USA</td>
			<td>VEC-H-1400</td>
			<td>Immunohistochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion system</td>
			<td>HUGO SACHS ELEKTRONIK - HARVARD APPARATUS GmbH, March-Hugstetten, Germany</td>
			<td>&#160;73-4343</td>
			<td>Langendorff apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data acquisition system and corresponding software for catheter and physiological parameter</td>
			<td>Powerlab 8/30 &#38; Labchart, ADInstruments, Dunedin, New Zealand</td>
			<td>PL3508 PowerLab 8/35</td>
			<td>Langendorff setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Octapolar catheter</td>
			<td>CIB&#8217;ER Mouse, NuMed Inc., Hopkinton, NY, USA</td>
			<td>custom</td>
			<td>Langendorff setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stimulus generator</td>
			<td>STG4002, Multi Channel Systems, Reutlingen, Germany</td>
			<td>STG4002-160&#181;A</td>
			<td>Stimulation setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stimulation software</td>
			<td>Multi Channel Systems, Reutlingen, Germany</td>
			<td>MC_Stimulus II</td>
			<td>Stimulation setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data acquisition system and corresponding software for epicardial electrograms</td>
			<td>ME128-FAI-MPA-System, Multi Channel Systems, Reutlingen, Germany</td>
			<td>USB-ME128-System</td>
			<td>MEA setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-electrode array</td>
			<td>MEA, EcoFlexMEA36, Multi Channel Systems, Reutlingen, Germany</td>
			<td>EcoFlexMEA36</td>
			<td>MEA setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-electrode array recording software</td>
			<td>Multi Channel Systems, Reutlingen, Germany</td>
			<td>MC_Rack</td>
			<td>MEA setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring scissors</td>
			<td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>15003-08</td>
			<td>Heart Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Strabismus Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>14575-09</td>
			<td>Heart Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>14110-15</td>
			<td>Heart Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont SS Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>11203-25</td>
			<td>Heart Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>London Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>11080-02</td>
			<td>Heart Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Narrow Pattern Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>11003-13</td>
			<td>Heart Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Wrap</td>
			<td>Parafilm M, Bemis NA, based in Neenah, WI, United States</td>
			<td></td>
			<td>Consumable Materials</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica M165FC; Leica Microsystems GmbH, Wetzlar, Germany</td>
			<td></td>
			<td>FRET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED</td>
			<td>CoolLED, Andover, UK</td>
			<td>pE-100</td>
			<td>FRET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DualView</td>
			<td>Photometrics, Tucson, AZ, USA</td>
			<td>DV2-SYS</td>
			<td>FRET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DualView filter set</td>
			<td>Photometrics, Tucson, AZ, USA</td>
			<td>05-EM</td>
			<td>FRET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>optiMOS scientific CMOS camera</td>
			<td>Qimaging, Surrey, BC, Canada</td>
			<td>01-OPTIMOS-R-M-16-C</td>
			<td>FRET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging software &#160;</td>
			<td>Micro-Manager; Vale Lab, University of California San Francisco, CA, USA</td>
			<td></td>
			<td>FRET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analysis Software</td>
			<td>Image J software; Public Domain, NIH, USA</td>
			<td></td>
			<td>FRET</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

impact of intracardiac neurons on cardiac electrophysiology and arrhythmogenesis in an ex vivo langendorff system

Depuis son invention à la fin du 19ème siècle, le système de perfusion Langendorff ex vivo le cœur continue d’être un outil pertinent pour étudier un large éventail de paramètres physiologiques, morphologiques, biochimiques et pharmacologiques coeurs au centre dénervés. Nous décrivons ici une configuration pour la modulation du système nerveux autonome intracardiaque et l’évaluation de son influence sur l’électrophysiologie fondamentale, arythmogenèse et dynamique de l’adénosine monophosphate cyclique (AMPc). Système nerveux autonome intracardiaque est modulé par la dissection mécanique de graisse auriculaire tampons-dans les ganglions murines sont situées principalement — ou par l’utilisation d’interventions pharmacologiques ciblées mais aussi mondiales. Un cathéter électrophysiologiques octapolar est introduit dans l’oreillette droite et le ventricule droit et tableaux multi-électrode épicardique placés (MEA) pour la cartographie à haute résolution sont utilisés pour déterminer l’arythmogenèse et électrophysiologie cardiaque. Transfert d’énergie par résonance Förster (FRET) d’imagerie est réalisée pour la surveillance en temps réel du taux d’AMPc dans différentes régions cardiaques. Neuromorphology est étudié au moyen d’anticorps-basée la coloration des coeurs entiers à l’aide de marqueurs neurones pour guider l’identification et la modulation des objectifs spécifiques du système nerveux autonome intracardiaque dans les études effectuées. La configuration de Langendorff ex vivo permet pour un grand nombre d’expériences reproductibles en peu de temps. Néanmoins, la nature en partie ouverte de l’installation (p. ex.., pendant les mesures de la MEA) contrôle de température constante est difficile et doit être maintenue à un minimum. Cette méthode décrite permet d’analyser et de moduler l’intracardiaque système nerveux dans les coeurs décentralisé.

La figure 1 montre une image de l’installation de Langendorff dont 2 rangées d’électrodes multiples (AME). Avant l’expérience, le cathéter intracardiaque est positionné à proximité de la canule pour faciliter une insertion rapide et facile dans le ventricule droit atrium/droit tout en assurant une courte période de temps jusqu'à ce que l’équilibration peut commencer. La partie inférieure de la chambre peut être accrue (voir les flèches da...

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Impact of Intracardiac Neurons on Cardiac Electrophysiology and Arrhythmogenesis in an Ex Vivo Langendorff System

Nous présentons ici un protocole pour la modulation du système nerveux autonome intracardiaque et l’évaluation de son influence sur l’électrophysiologie fondamentale, arythmogenèse et cAMP dynamique en utilisant une configuration de Langendorff ex vivo .

Impact des neurones intracardiaques sur l’électrophysiologie cardiaque et arythmogenèse dans un système de Langendorff Ex Vivo

Since its invention in the late 19th century, the Langendorff ex vivo heart perfusion system continues to be a relevant tool for studying a broad spectrum ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Impact of Intracardiac Neurons on Cardiac Electrophysiology and Arrhythmogenesis in an Ex Vivo Langendorff System

An Investigation of the Effects of Sports-related Concussion in Youth Using Functional Magnetic Resonance Imaging and the Head Impact Telemetry System

Une enquête sur les effets en matière de sport commotions dans la jeunesse utilisant l&#39;imagerie par résonance magnétique et le système de télémétrie choc de la tête

One of the most commonly reported injuries in children who participate in sports is concussion or mild traumatic brain injury (mTBI)1. Children and youth ...

Recherche

Médecine

Remote Magnetic Navigation for Accurate, Real-time Catheter Positioning and Ablation in Cardiac Electrophysiology Procedures

Navigation magnétique à distance pour exacts, positionnement du cathéter en temps réel et en électrophysiologie cardiaque Ablation Procédures

New remote navigation systems have been developed to improve current limitations of conventional manually guided catheter ablation in complex cardiac ...

Direct Pressure Monitoring Accurately Predicts Pulmonary Vein Occlusion During Cryoballoon Ablation

Surveillance de la pression directe prédit avec précision l&#39;occlusion des veines pulmonaires pendant l&#39;ablation cryocathéter à ballonnet

Cryoballoon  ablation (CBA) is an established therapy for atrial fibrillation (AF).  Pulmonary vein (PV) occlusion is essential for achieving antral ...

A Method to Study the Impact of Chemically-induced Ovarian Failure on Exercise Capacity and Cardiac Adaptation in Mice

Une méthode pour étudier l&#39;impact de l&#39;échec ovarien chimiquement induite sur la capacité d&#39;exercice et cardiaque adaptation chez la souris

The risk of cardiovascular disease (CVD) increases in post-menopausal women, yet, the role of exercise, as a preventative measure for CVD risk in ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

Une<em&gt; Ex vivo</em&gt; Modèle pour étudier action hormone dans le sein humain

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

Induction et de l&#39;évaluation de l&#39;ischémie-reperfusion dans coeurs de rat Langendorff perfusés

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

Appauvrissement des cellules de souris de xénogreffes de tumeurs humaines améliore de manière significative l&#39;analyse en aval des cellules cibles

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Breast Milk Enhances Growth of Enteroids: An Ex Vivo Model of Cell Proliferation

Breast Milk Enhances Growth of Enteroids: An Ex Vivo Model of Cell Proliferation

Le lait maternel stimule la croissance des Enteroids : un modèle Ex Vivo de la prolifération cellulaire

Human small intestinal enteroids are derived from the crypts and when grown in a stem cell niche contain all of the epithelial cell types. The ability to ...

Normothermic Ex Situ Heart Perfusion in Working Mode: Assessment of Cardiac Function and Metabolism

Normothermique Ex Situ coeur Perfusion en Mode de travail : évaluation de la fonction cardiaque et le métabolisme

The current standard method for organ preservation (cold storage, CS), exposes the heart to a period of cold ischemia that limits the safe preservation ...

An Ex Vivo Tissue Culture Model for Fibrovascular Complications in Proliferative Diabetic Retinopathy

Un modèle de Culture tissulaire Ex Vivo pour fibrovasculaire Complications dans la rétinopathie diabétique proliférante

Diabetic retinopathy (DR) is the most common microvascular complication of diabetes and one of the leading causes of blindness in working-age adults. No ...