Name: impact of intracardiac neurons on cardiac electrophysiology and arrhythmogenesis in an ex vivo langendorff system
Uploaded: 2018-05-22T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Impact of Intracardiac Neurons on Cardiac Electrophysiology and Arrhythmogenesis in an Ex Vivo Langendorff System at JoVE.com

Die Autoren möchten Hartwig Wieboldt für seine hervorragenden technischen Betreuung und dem UKE Microscopy Imaging Facility (Umif) der des Universitätsklinikums Hamburg-Eppendorf für die Mikroskope und Unterstützung zu danken. Diese Forschung wurde finanzierte Bythe Förderverein des Universitären Herzzentrums Hamburg e.V. und durch das DZHK (Deutsches Zentrum für Herz-Kreislauf-Forschung) [FKZ 81Z4710141].

Alle Verfahren, die Tiere wurden von den lokalen Behörden das Hamburg, Universität Hamburg Tierbetreuung und Nutzung Ausschüsse genehmigt.
1. Vorbereitung des Apparates Langendorff
Hinweis: Ein handelsübliches Langendorff Perfusion System wird verwendet.
<ol><li>Bereiten Sie eine modifizierte Krebs-Henseleit-Lösung (119 mM von Natrium-Chlorid, 25 mM von Natriumbicarbonat, 4,6 mM Kaliumchlorid, 1,2 mM von Kalium Phosphat monobasic, 1,1 mM von Magnesiumsulfat, ...

<ol>
	<li>Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrograde+heart+perfusion:+the+Langendorff+technique+of+isolated+heart+perfusion.">Retrograde heart perfusion: the Langendorff technique of isolated heart perfusion.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50 (6), 940-950 (2011).</li><li>Sutherland, F. J., Hearse, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+blood+and+perfusion+fluid+perfused+heart.">The isolated blood and perfusion fluid perfused heart.</a> Pharmacological Research. 41 (6), 613-627 (2000).</li><li>Hearse, D. J., Sutherland, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+for+the+study+of+cardiovascular+function+and+disease.">Experimental models for the study of cardiovascular function and disease.</a> Pharmacological Research. 41 (6), 597-603 (2000).</li><li>Valentin, J. P., Hoffmann, P., De Clerck, F., Hammond, T. G., Hondeghem, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+the+predictive+value+of+the+Langendorff+heart+model+(Screenit+system)+in+assessing+the+proarrhythmic+potential+of+drugs.">Review of the predictive value of the Langendorff heart model (Screenit system) in assessing the proarrhythmic potential of drugs.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 49 (3), 171-181 (2004).</li><li>Skrzypiec-Spring, M., Grotthus, B., Szelag, A., Schulz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolated+heart+perfusion+according+to+Langendorff-still+viable+in+the+new+millennium.">Isolated heart perfusion according to Langendorff-still viable in the new millennium.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 55 (2), 113-126 (2007).</li><li>Langendorff, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+the+living+mammalian+heart.">Investigation of the living mammalian heart.</a> Pfl&#252;gers Archiv. 61, 291-332 (1895).</li><li>Matsumoto-Ida, M., Akao, M., Takeda, T., Kato, M., Kita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+2-photon+imaging+of+mitochondrial+function+in+perfused+rat+hearts+subjected+to+ischemia/reperfusion.">Real-time 2-photon imaging of mitochondrial function in perfused rat hearts subjected to ischemia/reperfusion.</a> Circulation. 114 (14), 1497-1503 (2006).</li><li>Rassaf, T., Totzeck, M., Hendgen-Cotta, U. B., Shiva, S., Heusch, G., Kelm, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+nitrite+contributes+to+cardioprotection+by+remote+ischemic+preconditioning.">Circulating nitrite contributes to cardioprotection by remote ischemic preconditioning.</a> Circulation Research. 114 (10), 1601-1610 (2014).</li><li>Schechter, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+isolated+working+heart+system+for+large+animal+models.">An isolated working heart system for large animal models.</a> Journal of Visualized Experiments. 88 (88), 51671 (2014).</li><li>Stockigt, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+beta-adrenoceptor+knockout+slows+conduction+and+reduces+inducible+arrhythmias+in+the+mouse+heart.">Total beta-adrenoceptor knockout slows conduction and reduces inducible arrhythmias in the mouse heart.</a> PLoS One. 7 (11), e49203 (2012).</li><li>Berul, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+phenotyping+in+genetically+engineered+mice.">Electrophysiological phenotyping in genetically engineered mice.</a> Physiological Genomics. 13 (3), 207-216 (2003).</li><li>Curtis, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Lambeth+Conventions+(II):+guidelines+for+the+study+of+animal+and+human+ventricular+and+supraventricular+arrhythmias.">The Lambeth Conventions (II): guidelines for the study of animal and human ventricular and supraventricular arrhythmias.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 139 (2), 213-248 (2013).</li><li>Schrickel, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+heterogeneity+of+myocardial+conduction+and+severe+cardiac+electrical+instability+in+annexin+A7-deficient+mice.">Enhanced heterogeneity of myocardial conduction and severe cardiac electrical instability in annexin A7-deficient mice.</a> Cardiovascular Research. 76 (2), 257-268 (2007).</li><li>Rudolph, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloperoxidase+acts+as+a+profibrotic+mediator+of+atrial+fibrillation.">Myeloperoxidase acts as a profibrotic mediator of atrial fibrillation.</a> Nature Medicine. 16 (4), 470-474 (2010).</li><li>Jungen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+cardiac+cholinergic+neurons+enhances+susceptibility+to+ventricular+arrhythmias.">Disruption of cardiac cholinergic neurons enhances susceptibility to ventricular arrhythmias.</a> Nature Communications. 8, 14155 (2017).</li><li>Calebiro, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+cAMP-signals+triggered+by+internalized+G-protein-coupled+receptors.">Persistent cAMP-signals triggered by internalized G-protein-coupled receptors.</a> PLoS Biology. 7 (8), e1000172 (2009).</li><li>Sprenger, J. U., Perera, R. K., G&#246;tz, K. R., Nikolaev, V. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FRET+microscopy+for+real-time+monitoring+of+signaling+events+in+live+cells+using+unimolecular+biosensors.">FRET microscopy for real-time monitoring of signaling events in live cells using unimolecular biosensors.</a> Journal of Visualized Experiments. (66), e4081 (2012).</li><li>Alanentalo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tomographic+molecular+imaging+and+3D+quantification+within+adult+mouse+organs.">Tomographic molecular imaging and 3D quantification within adult mouse organs.</a> Nature Methods. 4 (1), 31-33 (2007).</li><li>Whittington, N. C., Wray, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+red+blood+cell+autofluorescence+for+immunocytochemistry+on+fixed+embryonic+mouse+tissue.">Suppression of red blood cell autofluorescence for immunocytochemistry on fixed embryonic mouse tissue.</a> Current Protocols in Neuroscience. 81, 2.28.1-2.28.12 (2017).</li><li>Fukuda, K., Kanazawa, H., Aizawa, Y., Ardell, J. L., Shivkumar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+innervation+and+sudden+cardiac+death.">Cardiac innervation and sudden cardiac death.</a> Circulation Research. 116 (12), 2005-2019 (2015).</li><li>Wengrowski, A. M., Wang, X., Tapa, S., Posnack, N. G., Mendelowitz, D., Kay, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+release+of+norepinephrine+from+cardiac+sympathetic+neurons+alters+mechanical+and+electrical+function.">Optogenetic release of norepinephrine from cardiac sympathetic neurons alters mechanical and electrical function.</a> Cardiovascular Research. 105 (2), 143-150 (2015).</li><li>Rivinius, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+cardiac+chronotropic+function+in+patients+after+heart+transplantation:+effects+of+ivabradine+and+metoprolol+succinate+on+resting+heart+rate+in+the+denervated+heart.">Control of cardiac chronotropic function in patients after heart transplantation: effects of ivabradine and metoprolol succinate on resting heart rate in the denervated heart.</a> Clinical Research in Cardiology. , (2017).</li><li>Ajijola, O. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmentation+of+cardiac+sympathetic+tone+by+percutaneous+low-level+stellate+ganglion+stimulation+in+humans:+a+feasibility+study.">Augmentation of cardiac sympathetic tone by percutaneous low-level stellate ganglion stimulation in humans: a feasibility study.</a> Physiological Reports. 3 (3), e12328 (2015).</li></ol>

In diesem Manuskript ist das bekannte Langendorff ex Vivo Herz Perfusion System als Instrument zur Untersuchung der Auswirkungen von intrakardialen Neuronen auf kardiale Elektrophysiologie und Arrhythmogenesis mit unterschiedlichen Mapping und stimulationstechniken vorgestellt. einschließlich endokardialen und epicardial Ansätze.
Mehrere Teile des Protokolls sind entscheidend für das Setup. Erstens ist es wichtig, eine Vorbereitung Technik zu verwenden, in der das Vorhofflimmern Fe...

Langendorff ex Vivo Herz Perfusion System weiter zu einem wichtigen Instrument für die Durchführung eines breiten Spektrums an morphologische, physiologische, Biochemische und pharmakologische Studien in Zentral denervierten Herzen1,2 ,3,4,5 seit ihrer Erfindung in den späten 19th Jahrhundert6. Bis heute ist dieses System noch weit verbreitet zu verschiedenen Themen (zB., Ischämie Reperfusion) oder zum Studium Herz-pharmakologische Effekte7,8, und ist ein grundlegendes Instrument in der Herz-Kreislauf-Forschung. Die Langlebigkeit dieser Methode ergibt sich aus mehrere Vorteile (zB., Messungen ohne den Einfluss des zentralen Nervensystems oder anderer Organe, systemischen Kreislauf oder zirkulierenden Hormone). Bei Bedarf können Arzneimittel kontrolliert Perfusion Puffer hinzugefügt oder direkt an bestimmte Strukturen angewendet werden. Experimente sind reproduzierbar und eine relativ hohe Anzahl von Experimenten kann in kurzer Zeit durchgeführt werden. Die (teilweise) offene Natur des Setups machen Temperaturregulierung schwierig und muss berücksichtigt werden. Obwohl das Langendorff-System auch in größeren Arten9verwendet wird, kleinere Tiere dienen in erster Linie als der experimentelle Aufbau weniger komplex und eine größere biologische Variabilität ist (zB., transgenen Maus Modelle) verwendet werden.
In der Versuchsanordnung dieses Protokolls ist der Einfluss des intrakardialen Nervensystem auf elektrophysiologische Grundparameter, ventrikuläre Arrhythmogenesis, epicardial Wärmeleitung und zyklische Adenosin Monophosphate (cAMP) Dynamik ausgewertet. Eine große Anzahl von intrakardialen Ganglien, die befinden sich hauptsächlich in der atrial Fettpolster und sind nun bekannt, kardiale Elektrophysiologie unabhängig von zentralen neuronalen Kontrolle zu kontrollieren, sind entweder intakt oder manuell entfernt mit sorgfältigen mechanischen Links Dissektion. Eine pharmakologische Modulation des autonomen Nervensystems wird weltweit durch Zugabe von Arzneimitteln auf den Puffer, Perfusion oder lokal durch gezielte Modulation von Vorhofflimmern Ganglien durchgeführt. Nach den Experimenten sind die Herzen gut geeignet für eine immunohistologische Bewertung, wie alle Blutzellen durch die kontinuierliche Perfusion entfernt worden sind, die wodurch die Qualität der Färbung erhöht werden kann.
Das übergeordnete Ziel der beschriebenen Techniken ist es, neuartige Perspektiven für detaillierte Studien über die Auswirkungen des autonomen Nervensystems auf kardiale Elektrophysiologie und Arrhythmogenesis im Herzen Maus bieten. Ein Grund für die Verwendung dieser Technik ist, dass es möglich ist, zu studieren und das vegetative Nervensystem ohne Auswirkungen auf das zentrale Nervensystem zu ändern. Ein großer Vorteil ist die einfache Beschäftigung pharmakologische Experimente, in welche möglichen pro- oder antiarrhythmische Eigenschaften des alten und neuen Agenten können getestet werden. Darüber hinaus stehen transgenen und Knockout Maus-Modellen der verschiedenen Herzerkrankungen untersuchen die Mechanismen, Herzrhythmusstörungen, Herzinsuffizienz oder Stoffwechselerkrankungen. Dieser Ansatz wurde erweitert unser Verständnis der Auswirkungen des autonomen Nervensystems auf das Vorhofflimmern Niveau auf ventrikulären kardialen Elektrophysiologie und die Induktion von Arrhythmien.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3014</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydrogencarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>401676</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5405</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5655</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M1880</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C7902</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G5767</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate bioXtra</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P8574</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen (95% O2 / 5% CO2)</td>
			<td colspan="2">SOL-Group, TMG Technische und Medizinische Gas GmbH, Krefeld, Gersthofen, Germany</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile filter steritop-GP 0.22</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>SCGPT05RE</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A0257</td>
			<td>Neuromodulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexamethonium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H2138</td>
			<td>Neuromodulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotine free base 98-100%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N3876</td>
			<td>Neuromodulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution neutral buffered 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(hydroxymethyl)aminomethane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>252859</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34860</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen peroxide solution 30% (w/w) in H2O</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>H1009</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>D8418</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline tablets</td>
			<td>Gibco / Invitrogen</td>
			<td>18912-014</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-x-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8787</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin bovine fraction V</td>
			<td>Biomol, Hamburg, Germany</td>
			<td>11924.03</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken anti neurofilament</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB5539</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti tyrosine hydroxylase</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB152</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti choline acetyltransferase</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AP144P</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey &#945; rabbit IgG Alexa 488</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A21206</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey &#945; goat IgG Alexa 568</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A11057</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey &#945; chicken IgY Alexa 647</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>AP194SA6</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin-conjugated donkey &#945; rabbit igG</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>AP182B</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin-conjugated donkey &#945; goat igG</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>AP192P</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin-conjugated goat &#945; chicken igY</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>BAD010</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectashield mounting medium</td>
			<td>Vector laboratories, Burlingame, CA, USA</td>
			<td>H-1000</td>
			<td>Immunohistochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectastain ABC kit</td>
			<td>Vector laboratories, Burlingame, CA, USA</td>
			<td>PK-4000</td>
			<td>Immunohistochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steady DAB/Plus</td>
			<td>Abcam plc, Cambridge, UK</td>
			<td>ab103723</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoClear</td>
			<td>DiaTec, Bamberg, Germany</td>
			<td>HS2002</td>
			<td>Immunohistochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BisBenzimide H33342 trihydrochloride (Hoechst)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>B2261</td>
			<td>Immunohistochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectashield HardSet mounting medium</td>
			<td>Vector laboratories, Burlingame, CA, USA</td>
			<td>VEC-H-1400</td>
			<td>Immunohistochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion system</td>
			<td>HUGO SACHS ELEKTRONIK - HARVARD APPARATUS GmbH, March-Hugstetten, Germany</td>
			<td>&#160;73-4343</td>
			<td>Langendorff apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data acquisition system and corresponding software for catheter and physiological parameter</td>
			<td>Powerlab 8/30 &#38; Labchart, ADInstruments, Dunedin, New Zealand</td>
			<td>PL3508 PowerLab 8/35</td>
			<td>Langendorff setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Octapolar catheter</td>
			<td>CIB&#8217;ER Mouse, NuMed Inc., Hopkinton, NY, USA</td>
			<td>custom</td>
			<td>Langendorff setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stimulus generator</td>
			<td>STG4002, Multi Channel Systems, Reutlingen, Germany</td>
			<td>STG4002-160&#181;A</td>
			<td>Stimulation setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stimulation software</td>
			<td>Multi Channel Systems, Reutlingen, Germany</td>
			<td>MC_Stimulus II</td>
			<td>Stimulation setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data acquisition system and corresponding software for epicardial electrograms</td>
			<td>ME128-FAI-MPA-System, Multi Channel Systems, Reutlingen, Germany</td>
			<td>USB-ME128-System</td>
			<td>MEA setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-electrode array</td>
			<td>MEA, EcoFlexMEA36, Multi Channel Systems, Reutlingen, Germany</td>
			<td>EcoFlexMEA36</td>
			<td>MEA setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-electrode array recording software</td>
			<td>Multi Channel Systems, Reutlingen, Germany</td>
			<td>MC_Rack</td>
			<td>MEA setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring scissors</td>
			<td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>15003-08</td>
			<td>Heart Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Strabismus Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>14575-09</td>
			<td>Heart Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>14110-15</td>
			<td>Heart Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont SS Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>11203-25</td>
			<td>Heart Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>London Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>11080-02</td>
			<td>Heart Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Narrow Pattern Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>11003-13</td>
			<td>Heart Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Wrap</td>
			<td>Parafilm M, Bemis NA, based in Neenah, WI, United States</td>
			<td></td>
			<td>Consumable Materials</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica M165FC; Leica Microsystems GmbH, Wetzlar, Germany</td>
			<td></td>
			<td>FRET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED</td>
			<td>CoolLED, Andover, UK</td>
			<td>pE-100</td>
			<td>FRET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DualView</td>
			<td>Photometrics, Tucson, AZ, USA</td>
			<td>DV2-SYS</td>
			<td>FRET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DualView filter set</td>
			<td>Photometrics, Tucson, AZ, USA</td>
			<td>05-EM</td>
			<td>FRET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>optiMOS scientific CMOS camera</td>
			<td>Qimaging, Surrey, BC, Canada</td>
			<td>01-OPTIMOS-R-M-16-C</td>
			<td>FRET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging software &#160;</td>
			<td>Micro-Manager; Vale Lab, University of California San Francisco, CA, USA</td>
			<td></td>
			<td>FRET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analysis Software</td>
			<td>Image J software; Public Domain, NIH, USA</td>
			<td></td>
			<td>FRET</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

impact of intracardiac neurons on cardiac electrophysiology and arrhythmogenesis in an ex vivo langendorff system

Seit seiner Erfindung imspäten 19 Jahrhundert weiter Langendorff ex Vivo Herz-Perfusions-System zu einem wichtigen Instrument für das Studium eines breiten Spektrums an physiologische, biochemische, morphologische und pharmakologischen Parameter in Zentral denervierten Herzen. Hier beschreiben wir eine Setup für die Modulation der intrakardialen vegetative Nervensystem und die Bewertung ihres Einflusses auf grundlegende Elektrophysiologie, Arrhythmogenesis und zyklische Adenosin Monophosphate (cAMP) Dynamik. Die intrakardiale vegetative Nervensystem moduliert durch die mechanische Zerlegung von Vorhofflimmern Fett Pads-in welche murinen Ganglien sich hauptsächlich befinden — oder durch die Nutzung des globalen sowie gezielte pharmakologische Interventionen. Ein Octapolar elektrophysiologische Katheter wird in den rechten Vorhof und der rechten Herzkammer eingeführt, und epicardial platziert Multi-Elektroden (MEA) für hochauflösende Abbildung dienen, kardiale Elektrophysiologie und Arrhythmogenesis zu bestimmen. Förster Resonanz Energietransfer (FRET) imaging wird für die Echtzeit-Überwachung von cAMP Ebenen in verschiedenen kardialen Regionen durchgeführt. Neuromorphology wird untersucht mittels Antikörper-basierten Färbung von ganzem Herzen mit neuronalen Marker, um die Identifikation und Modulation der spezifischen Ziele des intrakardialen Nervensystem in den durchgeführten Studien zu führen. Das ex-Vivo Langendorff Setup ermöglicht eine hohe Anzahl von reproduzierbare Experimente in kurzer Zeit. Dennoch, der teilweise offene Charakter des Setups (zB., während MEA Messungen) Konstante Temperaturregelung erschwert und sollte auf ein Minimum gehalten werden. Das beschriebene Verfahren ermöglicht es, zu analysieren und zu modulieren die intrakardiale vegetative Nervensystem in dezentralen Herzen.

Abbildung 1 zeigt ein Bild von Langendorff Setup inklusive 2 Multi-Elektroden (MEAs). Vor dem Experiment ist der intrakardiale Katheter positioniert, in der Nähe der Kanüle, eine schnelle und einfache Einfügung in den rechten Atrium/rechten Ventrikel zu erleichtern und eine kurze Zeit bis die Gleichgewichtherstellung anfangen kann zu gewährleisten. Der untere Teil der Kammer kann (siehe die Pfeile in Abbildung 1) erhöht werd...

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Impact of Intracardiac Neurons on Cardiac Electrophysiology and Arrhythmogenesis in an Ex Vivo Langendorff System

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll für die Modulation der intrakardialen vegetative Nervensystem und die Bewertung ihres Einflusses auf grundlegende Elektrophysiologie, Arrhythmogenesis und Lager Dynamik mit einem ex-Vivo Langendorff Setup.

Auswirkungen der intrakardialen Neuronen auf kardiale Elektrophysiologie und Arrhythmogenesis in einem Ex-Vivo -Langendorff-System

Since its invention in the late 19th century, the Langendorff ex vivo heart perfusion system continues to be a relevant tool for studying a broad spectrum ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Impact of Intracardiac Neurons on Cardiac Electrophysiology and Arrhythmogenesis in an Ex Vivo Langendorff System

An Investigation of the Effects of Sports-related Concussion in Youth Using Functional Magnetic Resonance Imaging and the Head Impact Telemetry System

Eine Untersuchung der Auswirkungen von Sport-bezogene Gehirnerschütterung in Youth Mit Functional Magnetic Resonance Imaging und der Head Impact Telemetrie-System

One of the most commonly reported injuries in children who participate in sports is concussion or mild traumatic brain injury (mTBI)1. Children and youth ...

Forschung

Medizin

Remote Magnetic Navigation for Accurate, Real-time Catheter Positioning and Ablation in Cardiac Electrophysiology Procedures

Remote-Magnetic Navigation für präzise, ​​Echtzeit-Positionierung und Katheter Ablation in Cardiac Elektrophysiologie Procedures

New remote navigation systems have been developed to improve current limitations of conventional manually guided catheter ablation in complex cardiac ...

Direct Pressure Monitoring Accurately Predicts Pulmonary Vein Occlusion During Cryoballoon Ablation

Direkte Pressure Monitoring genau vorhersagt Pulmonary Vein Occlusion Während Kryoballon Ablation

Cryoballoon  ablation (CBA) is an established therapy for atrial fibrillation (AF).  Pulmonary vein (PV) occlusion is essential for achieving antral ...

A Method to Study the Impact of Chemically-induced Ovarian Failure on Exercise Capacity and Cardiac Adaptation in Mice

Eine Methode, um die Auswirkungen der Chemisch-induzierte Ovarialinsuffizienz on Exercise Cardiac Kapazität und Anpassung in Mäusen untersucht

The risk of cardiovascular disease (CVD) increases in post-menopausal women, yet, the role of exercise, as a preventative measure for CVD risk in ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

Ein<em&gt; Ex-vivo-</em&gt; Modell um die Hormonwirkung in der menschlichen Brust Studieren

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

Induktion und Beurteilung der Ischämie-Reperfusion Injury in Langendorff-perfundierten Rattenherzen

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

Depletion von Maus-Zellen aus menschlichem Tumorxenografte deutlich verbessert Downstream-Analyse von Zielzellen

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Breast Milk Enhances Growth of Enteroids: An Ex Vivo Model of Cell Proliferation

Breast Milk Enhances Growth of Enteroids: An Ex Vivo Model of Cell Proliferation

Muttermilch fördert Wachstum der Enteroids: ein Ex-Vivo -Modell der Zellproliferation

Human small intestinal enteroids are derived from the crypts and when grown in a stem cell niche contain all of the epithelial cell types. The ability to ...

Normothermic Ex Situ Heart Perfusion in Working Mode: Assessment of Cardiac Function and Metabolism

Normothermic Ex-Situ Herz Perfusion im Arbeitsmodus: Beurteilung der Herzfunktion und Stoffwechsel

The current standard method for organ preservation (cold storage, CS), exposes the heart to a period of cold ischemia that limits the safe preservation ...

An Ex Vivo Tissue Culture Model for Fibrovascular Complications in Proliferative Diabetic Retinopathy

Ein Ex-Vivo-Gewebekultur-Modell für fibrovaskulärem Komplikationen bei proliferativer diabetischer Retinopathie

Diabetic retinopathy (DR) is the most common microvascular complication of diabetes and one of the leading causes of blindness in working-age adults. No ...