Name: impact of intracardiac neurons on cardiac electrophysiology and arrhythmogenesis in an ex vivo langendorff system
Uploaded: 2018-05-22T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Impact of Intracardiac Neurons on Cardiac Electrophysiology and Arrhythmogenesis in an Ex Vivo Langendorff System at JoVE.com

Gli autori vorrei ringraziare Hartwig Wieboldt per la sua ottima assistenza tecnica e l'UKE microscopia Imaging Facility (Umif) della University Medical Center Hamburg-Eppendorf per fornire supporto e microscopi. Questa ricerca è stata finanziata bythe Förderverein des Universitären Herzzentrums Hamburg e.V. e di DZHK (centro tedesco per la ricerca cardiovascolare) [FKZ 81Z4710141].

Tutte le procedure che coinvolgono gli animali sono state approvate dalle autorità locali, di stato di Amburgo, la cura degli animali Università di Amburgo e comitati di uso.
1. preparazione dell'apparato di Langendorff
Nota: Viene utilizzato un sistema di perfusione di Langendorff commercialmente disponibile.
<ol><li>Preparare una soluzione modificata di Krebs-Henseleit (119 mM di cloruro di sodio, 25mm di bicarbonato di sodio, 4,6 mM di cloruro di potassio, 1,...

<ol>
	<li>Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrograde+heart+perfusion:+the+Langendorff+technique+of+isolated+heart+perfusion.">Retrograde heart perfusion: the Langendorff technique of isolated heart perfusion.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50 (6), 940-950 (2011).</li><li>Sutherland, F. J., Hearse, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+blood+and+perfusion+fluid+perfused+heart.">The isolated blood and perfusion fluid perfused heart.</a> Pharmacological Research. 41 (6), 613-627 (2000).</li><li>Hearse, D. J., Sutherland, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+for+the+study+of+cardiovascular+function+and+disease.">Experimental models for the study of cardiovascular function and disease.</a> Pharmacological Research. 41 (6), 597-603 (2000).</li><li>Valentin, J. P., Hoffmann, P., De Clerck, F., Hammond, T. G., Hondeghem, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+the+predictive+value+of+the+Langendorff+heart+model+(Screenit+system)+in+assessing+the+proarrhythmic+potential+of+drugs.">Review of the predictive value of the Langendorff heart model (Screenit system) in assessing the proarrhythmic potential of drugs.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 49 (3), 171-181 (2004).</li><li>Skrzypiec-Spring, M., Grotthus, B., Szelag, A., Schulz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolated+heart+perfusion+according+to+Langendorff-still+viable+in+the+new+millennium.">Isolated heart perfusion according to Langendorff-still viable in the new millennium.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 55 (2), 113-126 (2007).</li><li>Langendorff, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+the+living+mammalian+heart.">Investigation of the living mammalian heart.</a> Pfl&#252;gers Archiv. 61, 291-332 (1895).</li><li>Matsumoto-Ida, M., Akao, M., Takeda, T., Kato, M., Kita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+2-photon+imaging+of+mitochondrial+function+in+perfused+rat+hearts+subjected+to+ischemia/reperfusion.">Real-time 2-photon imaging of mitochondrial function in perfused rat hearts subjected to ischemia/reperfusion.</a> Circulation. 114 (14), 1497-1503 (2006).</li><li>Rassaf, T., Totzeck, M., Hendgen-Cotta, U. B., Shiva, S., Heusch, G., Kelm, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+nitrite+contributes+to+cardioprotection+by+remote+ischemic+preconditioning.">Circulating nitrite contributes to cardioprotection by remote ischemic preconditioning.</a> Circulation Research. 114 (10), 1601-1610 (2014).</li><li>Schechter, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+isolated+working+heart+system+for+large+animal+models.">An isolated working heart system for large animal models.</a> Journal of Visualized Experiments. 88 (88), 51671 (2014).</li><li>Stockigt, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+beta-adrenoceptor+knockout+slows+conduction+and+reduces+inducible+arrhythmias+in+the+mouse+heart.">Total beta-adrenoceptor knockout slows conduction and reduces inducible arrhythmias in the mouse heart.</a> PLoS One. 7 (11), e49203 (2012).</li><li>Berul, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+phenotyping+in+genetically+engineered+mice.">Electrophysiological phenotyping in genetically engineered mice.</a> Physiological Genomics. 13 (3), 207-216 (2003).</li><li>Curtis, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Lambeth+Conventions+(II):+guidelines+for+the+study+of+animal+and+human+ventricular+and+supraventricular+arrhythmias.">The Lambeth Conventions (II): guidelines for the study of animal and human ventricular and supraventricular arrhythmias.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 139 (2), 213-248 (2013).</li><li>Schrickel, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+heterogeneity+of+myocardial+conduction+and+severe+cardiac+electrical+instability+in+annexin+A7-deficient+mice.">Enhanced heterogeneity of myocardial conduction and severe cardiac electrical instability in annexin A7-deficient mice.</a> Cardiovascular Research. 76 (2), 257-268 (2007).</li><li>Rudolph, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloperoxidase+acts+as+a+profibrotic+mediator+of+atrial+fibrillation.">Myeloperoxidase acts as a profibrotic mediator of atrial fibrillation.</a> Nature Medicine. 16 (4), 470-474 (2010).</li><li>Jungen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+cardiac+cholinergic+neurons+enhances+susceptibility+to+ventricular+arrhythmias.">Disruption of cardiac cholinergic neurons enhances susceptibility to ventricular arrhythmias.</a> Nature Communications. 8, 14155 (2017).</li><li>Calebiro, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+cAMP-signals+triggered+by+internalized+G-protein-coupled+receptors.">Persistent cAMP-signals triggered by internalized G-protein-coupled receptors.</a> PLoS Biology. 7 (8), e1000172 (2009).</li><li>Sprenger, J. U., Perera, R. K., G&#246;tz, K. R., Nikolaev, V. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FRET+microscopy+for+real-time+monitoring+of+signaling+events+in+live+cells+using+unimolecular+biosensors.">FRET microscopy for real-time monitoring of signaling events in live cells using unimolecular biosensors.</a> Journal of Visualized Experiments. (66), e4081 (2012).</li><li>Alanentalo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tomographic+molecular+imaging+and+3D+quantification+within+adult+mouse+organs.">Tomographic molecular imaging and 3D quantification within adult mouse organs.</a> Nature Methods. 4 (1), 31-33 (2007).</li><li>Whittington, N. C., Wray, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+red+blood+cell+autofluorescence+for+immunocytochemistry+on+fixed+embryonic+mouse+tissue.">Suppression of red blood cell autofluorescence for immunocytochemistry on fixed embryonic mouse tissue.</a> Current Protocols in Neuroscience. 81, 2.28.1-2.28.12 (2017).</li><li>Fukuda, K., Kanazawa, H., Aizawa, Y., Ardell, J. L., Shivkumar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+innervation+and+sudden+cardiac+death.">Cardiac innervation and sudden cardiac death.</a> Circulation Research. 116 (12), 2005-2019 (2015).</li><li>Wengrowski, A. M., Wang, X., Tapa, S., Posnack, N. G., Mendelowitz, D., Kay, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+release+of+norepinephrine+from+cardiac+sympathetic+neurons+alters+mechanical+and+electrical+function.">Optogenetic release of norepinephrine from cardiac sympathetic neurons alters mechanical and electrical function.</a> Cardiovascular Research. 105 (2), 143-150 (2015).</li><li>Rivinius, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+cardiac+chronotropic+function+in+patients+after+heart+transplantation:+effects+of+ivabradine+and+metoprolol+succinate+on+resting+heart+rate+in+the+denervated+heart.">Control of cardiac chronotropic function in patients after heart transplantation: effects of ivabradine and metoprolol succinate on resting heart rate in the denervated heart.</a> Clinical Research in Cardiology. , (2017).</li><li>Ajijola, O. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmentation+of+cardiac+sympathetic+tone+by+percutaneous+low-level+stellate+ganglion+stimulation+in+humans:+a+feasibility+study.">Augmentation of cardiac sympathetic tone by percutaneous low-level stellate ganglion stimulation in humans: a feasibility study.</a> Physiological Reports. 3 (3), e12328 (2015).</li></ol>

In questo manoscritto, sistema di perfusione la Langendorff ben noto ex vivo cuore è presentato come uno strumento per studiare l'impatto dei neuroni intracardiaci elettrofisiologia cardiaca e aritmogenesi utilizzando mapping diverso e tecniche di stimolazione inclusi gli approcci endocardial e dell'epicardio.
Parecchie parti del protocollo sono cruciali per l'installazione. In primo luogo, è importante utilizzare una tecnica di preparazione in cui i cuscinetti adiposi atriali riman...

Il sistema di perfusione Langendorff ex vivo cuore continua ad essere uno strumento rilevante per l'esecuzione di un ampio spettro di fisiologici, biochimici, morfologici e studi farmacologici in centrale denervato cuori1,2 ,3,4,5 sin dalla sua invenzione nel tardo 19th secolo6. Ad oggi, questo sistema è ancora ampiamente usato per vari argomenti (ad es., ischemia riperfusione) o per lo studio cardiaco farmacologico effetti7,8ed è uno strumento fondamentale nella ricerca cardiovascolare. La longevità di questo metodo risultati da diversi vantaggi (ad es., le misure sono eseguite senza l'influenza del sistema nervoso centrale o altri organi, la circolazione sistemica o ormoni circolanti). Se necessario, prodotti farmaceutici possono essere aggiunto in modo controllato il buffer di aspersione o applicati direttamente alle strutture specifiche. Gli esperimenti sono riproducibili, e un numero relativamente elevato di esperimenti può essere eseguito in un breve periodo di tempo. La natura aperta (in parte) dell'installazione può rendere difficile la regolazione della temperatura e deve essere presa in considerazione. Anche se il sistema di Langendorff è utilizzato anche in più grandi specie9, animali più piccoli vengono utilizzati principalmente come la messa a punto sperimentale è meno complesso e una maggiore variabilità biologica (ad es., transgenici modelli murini) può essere utilizzato.
Nel setup sperimentale del presente protocollo, è l'influenza del sistema nervoso autonomo intracardiaco su parametri elettrofisiologici di base, aritmogenesi ventricolare, conduzione dell'epicardio e dinamiche dell'adenosina monofosfato ciclico (cAMP) valutati. Un gran numero di gangli intracardiaci, che sono situate principalmente nei cuscinetti adiposi atriali e si sono affermati per il controllo indipendente dal controllo neurale centrale di elettrofisiologia cardiaca, è che sia lasciato intatto o manualmente rimosso con attenzione meccanica dissezione. Una modulazione farmacologica del sistema nervoso autonomo viene eseguito a livello globale con l'aggiunta di prodotti farmaceutici nel buffer di aspersione o localmente da modulazione mirata dei gangli atriali. Dopo gli esperimenti, i cuori sono adatti per una valutazione immunohistological come tutte le cellule del sangue sono stati rimossi a causa di aspersione di continuo, che può aumentare la qualità della colorazione.
L'obiettivo generale delle tecniche descritte è di offrire nuove prospettive per gli studi dettagliati per quanto riguarda l'impatto del sistema nervoso autonomo sulla elettrofisiologia cardiaca e aritmogenesi nel cuore del mouse. Un motivo per utilizzare questa tecnica è che è possibile studiare e alterare il sistema nervoso autonomo senza l'impatto del sistema nervoso centrale. Uno dei principali vantaggi è l'occupazione facile degli esperimenti farmacologici, in quali potenziali proprietà pro - o antiaritmico di vecchi e nuovi agenti possono essere testati. Inoltre, modelli murini transgenici e knockout di varie malattie cardiache sono disponibili per studiare i meccanismi alla base di aritmie, infarto o malattie metaboliche. Questo approccio ha migliorato la nostra comprensione di come il sistema nervoso autonomo a livello atriale possono avere un impatto elettrofisiologia cardiaca ventricolare e l'induzione di aritmie.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3014</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydrogencarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>401676</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5405</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5655</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M1880</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C7902</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G5767</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate bioXtra</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P8574</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen (95% O2 / 5% CO2)</td>
			<td colspan="2">SOL-Group, TMG Technische und Medizinische Gas GmbH, Krefeld, Gersthofen, Germany</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile filter steritop-GP 0.22</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>SCGPT05RE</td>
			<td>Modified Krebs-Henleit solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A0257</td>
			<td>Neuromodulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexamethonium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H2138</td>
			<td>Neuromodulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotine free base 98-100%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N3876</td>
			<td>Neuromodulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution neutral buffered 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(hydroxymethyl)aminomethane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>252859</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34860</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen peroxide solution 30% (w/w) in H2O</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>H1009</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>D8418</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline tablets</td>
			<td>Gibco / Invitrogen</td>
			<td>18912-014</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-x-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8787</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin bovine fraction V</td>
			<td>Biomol, Hamburg, Germany</td>
			<td>11924.03</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken anti neurofilament</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB5539</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti tyrosine hydroxylase</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB152</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti choline acetyltransferase</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AP144P</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey &#945; rabbit IgG Alexa 488</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A21206</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey &#945; goat IgG Alexa 568</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A11057</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey &#945; chicken IgY Alexa 647</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>AP194SA6</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin-conjugated donkey &#945; rabbit igG</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>AP182B</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin-conjugated donkey &#945; goat igG</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>AP192P</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin-conjugated goat &#945; chicken igY</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>BAD010</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectashield mounting medium</td>
			<td>Vector laboratories, Burlingame, CA, USA</td>
			<td>H-1000</td>
			<td>Immunohistochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectastain ABC kit</td>
			<td>Vector laboratories, Burlingame, CA, USA</td>
			<td>PK-4000</td>
			<td>Immunohistochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steady DAB/Plus</td>
			<td>Abcam plc, Cambridge, UK</td>
			<td>ab103723</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoClear</td>
			<td>DiaTec, Bamberg, Germany</td>
			<td>HS2002</td>
			<td>Immunohistochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BisBenzimide H33342 trihydrochloride (Hoechst)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>B2261</td>
			<td>Immunohistochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectashield HardSet mounting medium</td>
			<td>Vector laboratories, Burlingame, CA, USA</td>
			<td>VEC-H-1400</td>
			<td>Immunohistochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion system</td>
			<td>HUGO SACHS ELEKTRONIK - HARVARD APPARATUS GmbH, March-Hugstetten, Germany</td>
			<td>&#160;73-4343</td>
			<td>Langendorff apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data acquisition system and corresponding software for catheter and physiological parameter</td>
			<td>Powerlab 8/30 &#38; Labchart, ADInstruments, Dunedin, New Zealand</td>
			<td>PL3508 PowerLab 8/35</td>
			<td>Langendorff setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Octapolar catheter</td>
			<td>CIB&#8217;ER Mouse, NuMed Inc., Hopkinton, NY, USA</td>
			<td>custom</td>
			<td>Langendorff setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stimulus generator</td>
			<td>STG4002, Multi Channel Systems, Reutlingen, Germany</td>
			<td>STG4002-160&#181;A</td>
			<td>Stimulation setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stimulation software</td>
			<td>Multi Channel Systems, Reutlingen, Germany</td>
			<td>MC_Stimulus II</td>
			<td>Stimulation setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data acquisition system and corresponding software for epicardial electrograms</td>
			<td>ME128-FAI-MPA-System, Multi Channel Systems, Reutlingen, Germany</td>
			<td>USB-ME128-System</td>
			<td>MEA setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-electrode array</td>
			<td>MEA, EcoFlexMEA36, Multi Channel Systems, Reutlingen, Germany</td>
			<td>EcoFlexMEA36</td>
			<td>MEA setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-electrode array recording software</td>
			<td>Multi Channel Systems, Reutlingen, Germany</td>
			<td>MC_Rack</td>
			<td>MEA setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring scissors</td>
			<td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>15003-08</td>
			<td>Heart Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Strabismus Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>14575-09</td>
			<td>Heart Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>14110-15</td>
			<td>Heart Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont SS Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>11203-25</td>
			<td>Heart Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>London Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>11080-02</td>
			<td>Heart Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Narrow Pattern Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td>11003-13</td>
			<td>Heart Preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Wrap</td>
			<td>Parafilm M, Bemis NA, based in Neenah, WI, United States</td>
			<td></td>
			<td>Consumable Materials</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica M165FC; Leica Microsystems GmbH, Wetzlar, Germany</td>
			<td></td>
			<td>FRET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED</td>
			<td>CoolLED, Andover, UK</td>
			<td>pE-100</td>
			<td>FRET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DualView</td>
			<td>Photometrics, Tucson, AZ, USA</td>
			<td>DV2-SYS</td>
			<td>FRET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DualView filter set</td>
			<td>Photometrics, Tucson, AZ, USA</td>
			<td>05-EM</td>
			<td>FRET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>optiMOS scientific CMOS camera</td>
			<td>Qimaging, Surrey, BC, Canada</td>
			<td>01-OPTIMOS-R-M-16-C</td>
			<td>FRET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging software &#160;</td>
			<td>Micro-Manager; Vale Lab, University of California San Francisco, CA, USA</td>
			<td></td>
			<td>FRET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analysis Software</td>
			<td>Image J software; Public Domain, NIH, USA</td>
			<td></td>
			<td>FRET</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

impact of intracardiac neurons on cardiac electrophysiology and arrhythmogenesis in an ex vivo langendorff system

Sin dalla sua invenzione nel tardo 19° secolo, il sistema di perfusione Langendorff ex vivo cuore continua ad essere uno strumento rilevante per lo studio di un ampio spettro di parametri fisiologici, biochimici, morfologici e farmacologici in cuore centrale denervato. Qui, descriviamo una configurazione per la modulazione del sistema nervoso autonomo intracardiaco e la valutazione della sua influenza su base elettrofisiologia, aritmogenesi e le dinamiche dell'adenosina monofosfato ciclico (cAMP). Il sistema nervoso autonomo intracardiaco è modulato da dissezione meccanica di grasso atriale pastiglie-in cui gangli murini si trovano principalmente — o dall'utilizzo degli interventi farmacologici globali, nonché mirati. Un catetere elettrofisiologici di octapolar è stato introdotto in atrio destro e ventricolo destro, e dell'epicardio-disposto multi-elettrodo matrici (MEA) per la mappatura ad alta risoluzione vengono utilizzate per determinare aritmogenesi ed elettrofisiologia cardiaca. Trasferimento di energia di risonanza di Förster (FRET) imaging viene eseguito per il monitoraggio in tempo reale dei livelli di cAMP in diverse regioni cardiache. Neuromorphology è studiato per mezzo di anticorpo-basato colorazione dei cuori interi usando marcatori neuronali per guidare l'identificazione e la modulazione degli obiettivi specifici del sistema nervoso autonomo intracardiaco negli studi eseguiti. L'impostazione di Langendorff ex vivo permette per un elevato numero di esperimenti riproducibili in breve tempo. Tuttavia, la natura in parte aperta del setup (ad es., durante le misurazioni MEA) rende difficile il controllo costante della temperatura e deve essere mantenuto al minimo. Questo metodo descritto rende possibile analizzare e modulano il sistema nervoso autonomo intracardiaco nei cuori decentralizzati.

La figura 1 Mostra un'immagine dell'installazione Langendorff comprese 2 matrici multi-elettrodo (MEA). Prima dell'esperimento, il catetere intracardiaco è posizionato vicino la cannula per facilitare una rapida e facile inserimento nel ventricolo di destra atrio/destra e garantire un breve periodo di tempo fino a quando l'equilibrazione può iniziare. La parte inferiore della camera può essere intensificata (vedere le frecce nella Figu...

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Impact of Intracardiac Neurons on Cardiac Electrophysiology and Arrhythmogenesis in an Ex Vivo Langendorff System

Qui, presentiamo un protocollo per la modulazione del sistema nervoso autonomo intracardiaco e la valutazione della sua influenza su base elettrofisiologia, aritmogenesi e accampamento dinamica utilizzando un'installazione di Langendorff ex vivo .

Impatto dei neuroni intracardiaci elettrofisiologia cardiaca e aritmogenesi in un sistema di Langendorff Ex Vivo

Since its invention in the late 19th century, the Langendorff ex vivo heart perfusion system continues to be a relevant tool for studying a broad spectrum ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Impact of Intracardiac Neurons on Cardiac Electrophysiology and Arrhythmogenesis in an Ex Vivo Langendorff System

An Investigation of the Effects of Sports-related Concussion in Youth Using Functional Magnetic Resonance Imaging and the Head Impact Telemetry System

Un&#39;indagine degli effetti dello sport legati Commozione cerebrale in gioventù Utilizzando la risonanza magnetica funzionale e l&#39;impatto del sistema di telemetria Testa

One of the most commonly reported injuries in children who participate in sports is concussion or mild traumatic brain injury (mTBI)1. Children and youth ...

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Medicina

Remote Magnetic Navigation for Accurate, Real-time Catheter Positioning and Ablation in Cardiac Electrophysiology Procedures

Navigazione magnetica a distanza per Preciso, posizionamento del catetere in tempo reale e ablazione in Elettrofisiologia Cardiaca Procedure

New remote navigation systems have been developed to improve current limitations of conventional manually guided catheter ablation in complex cardiac ...

Direct Pressure Monitoring Accurately Predicts Pulmonary Vein Occlusion During Cryoballoon Ablation

Pressure Monitoring diretto predice accuratamente occlusione della vena polmonare durante l&#39;ablazione Cryoballoon

Cryoballoon  ablation (CBA) is an established therapy for atrial fibrillation (AF).  Pulmonary vein (PV) occlusion is essential for achieving antral ...

A Method to Study the Impact of Chemically-induced Ovarian Failure on Exercise Capacity and Cardiac Adaptation in Mice

Un metodo per studiare l&#39;impatto delle chimicamente indotta da insufficienza ovarica sulla capacità di esercizio e adattamento cardiaca nei topi

The risk of cardiovascular disease (CVD) increases in post-menopausal women, yet, the role of exercise, as a preventative measure for CVD risk in ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

Un<em&gt; Ex vivo</em&gt; Modello per studiare Hormone azione in seno umano

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

Induzione e valutazione di ischemia-riperfusione Injury in Langendorff-perfusi Hearts Rat

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

L&#39;esaurimento delle cellule di topo da xenotrapianti tumorali umani migliora in modo significativo Analisi A valle delle cellule bersaglio

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Breast Milk Enhances Growth of Enteroids: An Ex Vivo Model of Cell Proliferation

Breast Milk Enhances Growth of Enteroids: An Ex Vivo Model of Cell Proliferation

Latte materno aumenta la crescita di Enteroids: un modello Ex Vivo di proliferazione delle cellule

Human small intestinal enteroids are derived from the crypts and when grown in a stem cell niche contain all of the epithelial cell types. The ability to ...

Normothermic Ex Situ Heart Perfusion in Working Mode: Assessment of Cardiac Function and Metabolism

Normotermica Ex Situ cuore aspersione in modalità di lavoro: valutazione della funzione cardiaca e il metabolismo

The current standard method for organ preservation (cold storage, CS), exposes the heart to a period of cold ischemia that limits the safe preservation ...

An Ex Vivo Tissue Culture Model for Fibrovascular Complications in Proliferative Diabetic Retinopathy

Un modello di coltura del tessuto Ex Vivo per fibrovascolare complicazioni nella retinopatia diabetica proliferativa

Diabetic retinopathy (DR) is the most common microvascular complication of diabetes and one of the leading causes of blindness in working-age adults. No ...