Name: isolation of enteric glial cells from the submucosa and lamina propria of the adult mouse
Uploaded: 2018-08-15T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Enteric Glial Cells from the Submucosa and Lamina Propria of the Adult Mouse at JoVE.com

Yazarlar R37 DK045729 (JLM için) R01 AR060837 (için HX) ve University of Michigan Gastrointestinal araştırma merkezi moleküler çekirdek P30 DK034933 destek kabul etmek istiyorum.

Açıklanan tüm hayvan deneyleri kullanımı ve bakımı hayvanların University of Michigan'ın Komitesi tarafından kabul edildi.
1. steril Poly-D-lizin (PDL) ve Laminin çözümleri hazırlanması
<ol><li>En az bir gün önce hücre izolasyon, poli-D-lizin (PDL) ve laminin kaplamalı plakalar hazırlayın. Not: 6-şey ve 12-iyi plakaları bağlı olarak deneysel gol hazırlanmıştır. Tipik olarak, 12-şey plakaları kantitatif Batı açıkları kullanarak analiz için kullanılmış...

<ol>
	<li>Grubisic, V., Gulbransen, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enteric+glia:+the+most+alimentary+of+all+glia.">Enteric glia: the most alimentary of all glia.</a> Journal of Physiology. 595 (2), 557-570 (2017).</li><li>Gulbransen, B. D., Sharkey, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+functional+roles+for+enteric+glia+in+the+gastrointestinal+tract.">Novel functional roles for enteric glia in the gastrointestinal tract.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 9 (11), 625-632 (2012).</li><li>Rao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enteric+Glia+Regulate+Gastrointestinal+Motility+but+Are+Not+Required+for+Maintenance+of+the+Epithelium+in+Mice.">Enteric Glia Regulate Gastrointestinal Motility but Are Not Required for Maintenance of the Epithelium in Mice.</a> Gastroenterology. 153 (4), 1068-1081 (2017).</li><li>Rao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enteric+glia+express+proteolipid+protein+1+and+are+a+transcriptionally+unique+population+of+glia+in+the+mammalian+nervous+system.">Enteric glia express proteolipid protein 1 and are a transcriptionally unique population of glia in the mammalian nervous system.</a> Glia. , (2015).</li><li>McClain, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca2++responses+in+enteric+glia+are+mediated+by+connexin-43+hemichannels+and+modulate+colonic+transit+in+mice.">Ca2+ responses in enteric glia are mediated by connexin-43 hemichannels and modulate colonic transit in mice.</a> Gastroenterology. 146 (2), 497-507 (2014).</li><li>Cunha Franceschi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enteric+glial+reactivity+to+systemic+LPS+administration+Changes+in+GFAP+and+S100B+protein.">Enteric glial reactivity to systemic LPS administration Changes in GFAP and S100B protein.</a> Neuroscience Research. 119, 15-23 (2017).</li><li>Kabouridis, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota+controls+the+homeostasis+of+glial+cells+in+the+gut+lamina+propria.">Microbiota controls the homeostasis of glial cells in the gut lamina propria.</a> Neuron. 85 (2), 289-295 (2015).</li><li>Yu, Y. B., Li, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enteric+glial+cells+and+their+role+in+the+intestinal+epithelial+barrier.">Enteric glial cells and their role in the intestinal epithelial barrier.</a> World Journal of Gastroenterology. 20 (32), 11273-11280 (2014).</li><li>Clairembault, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enteric+GFAP+expression+and+phosphorylation+in+Parkinson's+disease.">Enteric GFAP expression and phosphorylation in Parkinson's disease.</a> Journal of Neurochemistry. 130 (6), 805-815 (2014).</li><li>Sundaresan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gastrin+Induces+Nuclear+Export+and+Proteasome+Degradation+of+Menin+in+Enteric+Glial+Cells.">Gastrin Induces Nuclear Export and Proteasome Degradation of Menin in Enteric Glial Cells.</a> Gastroenterology. 153, 1555-1567 (2017).</li><li>Gulbransen, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enteric+Glia:+The+Origin+of+Duodenal+Gastrinomas?.">Enteric Glia: The Origin of Duodenal Gastrinomas?.</a> Gastroenterology. , (2017).</li><li>Smith, T. H., Ngwainmbi, J., Grider, J. R., Dewey, W. L., Akbarali, H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vitro+preparation+of+isolated+enteric+neurons+and+glia+from+the+myenteric+plexus+of+the+adult+mouse.">An in vitro preparation of isolated enteric neurons and glia from the myenteric plexus of the adult mouse.</a> Journal of Visualized Experiments. (78), (2013).</li><li>Fried, D. E., Gulbransen, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+Ca2++imaging+of+the+enteric+nervous+system.">In situ Ca2+ imaging of the enteric nervous system.</a> Journal of Visualized Experiments. (95), (2015).</li><li>Bernstein, C. N., Vidrich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+identification,+and+culture+of+normal+mouse+colonic+glia.">Isolation, identification, and culture of normal mouse colonic glia.</a> Glia. 12 (2), 108-116 (1994).</li><li>Jaeger, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+enteric+ganglia+from+the+myenteric+plexus+of+adult+rats.">Isolation of enteric ganglia from the myenteric plexus of adult rats.</a> Journal of Neural Transplantation &amp; Plasticity. 5 (4), 223-232 (1995).</li><li>Almond, S., Lindley, R. M., Kenny, S. E., Connell, M. G., Edgar, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+and+transplantation+of+enteric+nervous+system+progenitor+cells.">Characterisation and transplantation of enteric nervous system progenitor cells.</a> Gut. 56 (4), 489-496 (2007).</li><li>Ruhl, A., Trotter, J., Stremmel, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+enteric+glia+and+establishment+of+transformed+enteroglial+cell+lines+from+the+myenteric+plexus+of+adult+rat.">Isolation of enteric glia and establishment of transformed enteroglial cell lines from the myenteric plexus of adult rat.</a> Neurogastroenterology &amp; Motility. 13 (1), 95-106 (2001).</li><li>Boyen, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+enteric+glia+and+GDNF+during+gut+inflammation.">Distribution of enteric glia and GDNF during gut inflammation.</a> BMC Gastroenterology. 11, 3 (2011).</li><li>Rosenbaum, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Myenteric+Glia+during+Acute+Inflammation+In+Vitro+and+In+Vivo.">Activation of Myenteric Glia during Acute Inflammation In Vitro and In Vivo.</a> Public Library of Science One. 11 (3), e0151335 (2016).</li><li>Zhuo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=hGFAP-cre+transgenic+mice+for+manipulation+of+glial+and+neuronal+function+in+vivo.">hGFAP-cre transgenic mice for manipulation of glial and neuronal function in vivo.</a> Genesis. 31 (2), 85-94 (2001).</li><li>Boesmans, W., Lasrado, R., Vanden Berghe, P., Pachnis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+and+phenotypic+plasticity+of+glial+cells+in+the+mammalian+enteric+nervous+system.">Heterogeneity and phenotypic plasticity of glial cells in the mammalian enteric nervous system.</a> Glia. 63 (2), 229-241 (2015).</li><li>Shaner, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+monomeric+red,+orange+and+yellow+fluorescent+proteins+derived+from+Discosoma+sp.+red+fluorescent+protein.">Improved monomeric red, orange and yellow fluorescent proteins derived from Discosoma sp. red fluorescent protein.</a> Nature Biotechnology. 22 (12), 1567-1572 (2004).</li><li>Madisen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+robust+and+high-throughput+Cre+reporting+and+characterization+system+for+the+whole+mouse+brain.">A robust and high-throughput Cre reporting and characterization system for the whole mouse brain.</a> Nature Neuroscience. 13 (1), 133-140 (2010).</li><li>Kabouridis, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+gut+microbiota+keeps+enteric+glial+cells+on+the+move;+prospective+roles+of+the+gut+epithelium+and+immune+system.">The gut microbiota keeps enteric glial cells on the move; prospective roles of the gut epithelium and immune system.</a> Gut Microbes. 6 (6), 398-403 (2015).</li><li>Pomeranz, H. D., Sherman, D. L., Smalheiser, N. R., Tennyson, V. M., Gershon, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+a+neurally+related+laminin+binding+protein+by+neural+crest-derived+cells+that+colonize+the+gut:+relationship+to+the+formation+of+enteric+ganglia.">Expression of a neurally related laminin binding protein by neural crest-derived cells that colonize the gut: relationship to the formation of enteric ganglia.</a> The Journal of Comparative Neurology. 313 (4), 625-642 (1991).</li></ol>

EGCs gut homeostazı önemli rol oynarlar ve yalıtmak ve onları içinde vitroçalışma için önemlidir. Bu protokol için EGCs yetişkin fare bağırsak lamina propria izole için basit bir yöntem enterik gliyal işlev eğitim için kullanılmaya başlandı.
Yapisan bıçaklanmasından ve LMMP ile bir pamuklu çubukla kaldırma bazı boyuna ve dairesel kas arasında ikamet eden Inter-myenteric glia ortadan kaldırır, arabellek submucosal yüzeye erişilebilirliğini artırır ve...

Enterik Gliyal hücreler (EGCs) fonksiyonu ilgi giderek tanınan rolleri olarak gut bütünlüğü ve homeostasis1,2nedeniyle artmıştır. Buna ek olarak, EGCs GI yolu3,4uzunluğu boyunca konumlarına göre değişiklik gösterir. EGCs, gliyal hücre kaynaklı nörotrofik faktör (GDNF) de dahil olmak üzere çeşitli trofik faktörler bırakın hareketliliği1,5 delik deşik ve mikrobiyal yan6,7' ye yanıt vermek için katkıda bulunmak. Çalışmalar EGC nüfus türdeş olmayan ve işlevlerine onlar submucosal veya myenteric pleksus1,7içinde bulunan bağlı olarak değişir belirttiler. Örneğin, EGCs submukoza içinde sıkı kavşak8' e katkıda bulunur. Diferansiyel GFAP'nin ifade ve EGCs fosforilasyon Parkinson hastaligi, gut fenotip Bu bozukluk9olası onların bağlantı telkin için bağlantılı olmuştur. Son zamanlarda, nükleer protein menin EGCs izole kültürlerin proksimal bağırsak submukoza üzerinden kaybı hormon gastrin10ifade ikna etmek yeterli görülmüştür. Sonuç olarak, EGCs duodenal gastrinomas, nöroendokrin tümör10türü kökeni olabilir önerildi. Toplu olarak, bu örnekler nöropatik bozuklukları ve kanser11izole EGCs işlevini ve davranış eğitimi alaka altını çiziyor.
Alan mücadelesine nasıl yalıtmak ve birini veya her ikisini EGC nüfus vitroçalışma kalır. Soy izleme deneyleri EGCs submukoza ve lamina propria progenitör hücre myenteric pleksus7kaynaklanan gösterdi. Birkaç yayımlanmış yalıtım protokol myenteric EGCs12,13,14,15,16,17kültürleri oluşturmaya uygun olmakla birlikte, 18,19, hiçbiri özellikle yalıtım submucosal/lamina propria EGC nüfusunun hedefleyen. Varolan iletişim kuralları EGC yalıtım için özellikle bir arada mekanik ayrılması veya sonunda mukozal hücre katmanı atarak enzimatik ayrılma ile birlikte düz kas mikrodiseksiyon kullanır.
Bu el yazması non-enzimatik lamina propria vitro çalışmalar için gelen birincil EGCs yalıtmak için adımları göstermek için hedeftir. Özellikle myenteric EGCs ayırt alanındaki bu submukoza hiçbir işaretleri olduğundan, düz kas kayma ayrılması epitel Fibromu submucosal EGCs yalıtmak için istismar edildi. Buna ek olarak, EDTA şelasyon enzimatik olmayan ayrılma ile birleştirerek, EGCs ilişkili Inter-myenteric EGCs ile birlikte atıldı düz kas aksine submukoza yalıtılmış. Submukoza ve lamina propria EGCs daha fazla ayrılması gliyal cep dostu yüzeylerde, Örneğin, poli-D-lizin ve laminin hücre kültürü çalışmalarının tarafından oluştu.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Poly-D lysine (1 mg/ml stock)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A-003-E</td>
			<td>Dilute 1:10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin (0.5 mg/ml stock)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L4544</td>
			<td>Dilute to 10 &#181;g/mL on ICE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA (0.5M)</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>51201</td>
			<td>Dilute 1:100 in DPBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES (1 M)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>36216004</td>
			<td>Dilute 1:100 in DPBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Recovery Solution</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline (DPBS)</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30028.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11320033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (100X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin (50mg/mL stock)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15750060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GDNF (10 &#181;g stock)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SRP3200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine (200 mM stock)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken anti-GFAP</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>PA1-10004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-a-Smooth Muscle Actin&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab112022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-Pgp9.5&#160;</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NB600-1160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-E-cadherin&#160;</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>AF748</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit S100&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab34686</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse p75 NTR&#160;</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB5592</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 Goat Anti-Chicken IgY</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 Donkey Anti-Goat IgG</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 Donkey Anti-Rabbit IgG</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>R-37119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Gold antifade Reagent with DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>P36931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fungizone (Amphotericin B) 250 &#181;g/ml</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15290-018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Fura-2-AM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>F-14201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CCK peptide</td>
			<td>Anaspec, Fremont, CA</td>
			<td>AS-20741</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gastrin peptide (Gastrin-17)</td>
			<td>Abbiotec, Bloomington, IN</td>
			<td>350188</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon Mesh Celll Strainer (100 &#181;m)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon Mesh Celll Strainer (40 &#181;m)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Serologic Pipet 5 ml</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-11D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% Trypsin-EDTA (1X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>25200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of enteric glial cells from the submucosa and lamina propria of the adult mouse

Nöronlar ve düz kas duvar, submukoza ve lamina propria içinde bulunan enterik Gliyal hücreler (EGCs) enterik sinir sistemi (ENS) oluşur. EGCs gut homeostazı çeşitli trofik faktörler sürümü ile önemli rol oynarlar ve epitel bariyer bütünlüğünü katkıda bulunmak. Birincil enterik gliyal kültürlerin en çalışmaları myenteric pleksus sonra enzimatik ayrılma izole hücreler kullanın. Burada, ayırmak ve bağırsak submukoza ve lamina propria EGCs kültür enzimatik olmayan bir yöntemi açıklanmıştır. Sonra el kaldırma boyuna kas tabakasının EGCs lamina propria ve piyasada bulunan enzimatik olmayan hücre kurtarma çözümü kuluçka ardından sıralı HEPES tampon EDTA incubations kullanarak submukoza kurtarılmış. EDTA incubations gelen submucosal EGCs kurtarmak hücre kurtarma çözümü sağlayan lamina propria epitelyal mukoza çoğunu şerit yeterliydi. Herhangi bir kalıntı lamina propria ve düz kas myenteric glia birlikte atılır. EGCs kolayca gliyal fibrillary asidik protein (GFAP'nin) hızlı yeteneğini tarafından tespit edilmiştir. Hücre süspansiyon sadece yaklaşık % 50 GFAP'nin + hücrelerin doku incubations tamamladıktan sonra ve poli-D-lizin/laminin substrat üzerine kaplama öncesi bulunan. Ancak, gliyal hücre kaynaklı nörotrofik faktör (GDNF) hücre kültürü çalışmalarının 3 gün sonra-oluşan yüzey kaplamalı plakalar kalarak hücre nüfus kültür ortamı içeren, > % 95 enterik glia. Biz bir melez fare çizgi hGFAP-Cre fare endojen hücre floresans kullanarak GFAP'nin + hücre yüzdesini izlemek için ROSA-tdTomato muhabir hattına ıslahı tarafından oluşturdu. Böylece, myenteric enterik glia enzimatik olmayan yöntemlerle izole ve en az 5 gün için kültürlü.

Eğer GFAP'nin + hücre vermedi bağlı kalmak ve içinde 24 h (Şekil 4A) yaymak preps başarısız kabul edildi. Hücreleri yapıştırılır ve düz toplamları (Şekil 4B) Yayilim kanıt gösterdi gliyal hücre sayısı 24 saat kadar sonra belirlenemedi. Hücre kümeleri kenarında uzun işlemleri genişletmek eğilimi ve Örneğin, GFAP'nin, klasik gliyal işaretleri, S100b ve p75NTR (<strong class="xfig"...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Enteric Glial Cells from the Submucosa and Lamina Propria of the Adult Mouse at JoVE.com

Isolation of Enteric Glial Cells from the Submucosa and Lamina Propria of the Adult Mouse

Burada, bağırsak submukoza divalent katyonlar ve enzimatik olmayan hücre kurtarma çözümü kuluçka şelasyon yapın için sıralı EDTA incubations kullanarak gliyal enterik hücre izolasyon açıklayın. Sonuç hücre süspansiyon poli-D-lizin ve laminin kaplama submucosal Gliyal hücreler fonksiyonel analiz için zenginleştirilmiş bir kültür sonuçlanır.

Submukoza ve Lamina Propria yetişkin fare enterik gliyal hücrelerini izolasyon

The enteric nervous system (ENS) consists of neurons and enteric glial cells (EGCs) that reside within the smooth muscle wall, submucosa and lamina ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

Fare Göz Retina Kök Hücre İzolasyonu

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Isolation and Culture of Cells from the Nephrogenic Zone of the Embryonic Mouse Kidney

Embriyonik Fare Böbrek Nefrojenik Zone Hücreleri İzolasyon ve Kültür

Embryonic development of the kidney has been extensively studied both as a model for epithelial-mesenchymal interaction in organogenesis and  to gain ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

İsteyerek Pluripotent Kök Hücrelerinin Elde Edilen Fare Üretimi

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Yetişkin Fare insizör Diş Epitel Kök Hücreleri İzolasyon ve Kültür

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Isolation of Murine Valve Endothelial Cells

Murin Vana Endotel Hücreleri İzolasyon

Normal valve structures consist of stratified layers of specialized extracellular matrix (ECM) interspersed with valve interstitial cells (VICs) and ...

Isolation and Primary Culture of Mouse Aortic Endothelial Cells

İzolasyon ve Fare aort endotel hücreleri İlköğretim Kültür

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an ...

Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin

Yenidoğan ve Erişkin Fare Ciltlerindeki Primer Fare Keratinositlerin İzolasyonu ve Kültürü

The keratinocyte (KC) is the predominant cell type in the epidermis, the outermost layer of the skin. Epidermal KCs play a critical role in providing skin ...

Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart

Yalıtım, karakterizasyonu ve yetişkin fare kalp kalp kök hücre farklılaşma

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality around the world. A major goal of regenerative medicine is to replenish the dead ...

Isolation of Myoepithelial Cells from Adult Murine Lacrimal and Submandibular Glands

Yetişkin Murine lacrimal ve submandibular bezlerden Myoepitelyal hücrelerin izolasyonu

The lacrimal gland (LG) is an exocrine tubuloacinar gland that secretes an aqueous layer of tear film. The LG epithelial tree is comprised of acinar, ...

Simultaneous Isolation and Culture of Atrial Myocytes, Ventricular Myocytes, and Non-Myocytes from an Adult Mouse Heart

Yetişkin Fare Kalbinden Atriyal Miyositler, Ventrikül Miyositleri ve Miyosit Olmayanların Eşzamanlı İzolasyonu ve Kültürü

The isolation and culturing of cardiac myocytes from mice has been essential for furthering the understanding of cardiac physiology and pathophysiology. ...