Name: a protocol to acquire the degenerative tenocyte from humans
Uploaded: 2018-06-09T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Protocol to Acquire the Degenerative Tenocyte from Humans at JoVE.com

Denna forskning stöddes av ett bidrag från Korea hälsa teknik R & D projekt genom den Korea hälsa industri utveckling Institute (KHIDI), som finansierades av ministeriet för hälsa & välfärd, Sydkorea (bevilja nummer: HI16C1559).

Protokollet har genomförts i enlighet med Helsingforsdeklarationen och protokollet godkändes av den institutionella Review Board på CHA Emma Medical Center.
1. degenerativa senan vävnad skörd från patienten
<ol><li>Diagnostisera lateral epikondylit genom att ta en anamnes och använda fysisk undersökning fynd: ömhet över tendinous beskärningen nära den laterala epikondylen; smärta frammanade av motstod förlängning av handleden.</li>
	<li>Använda de följande inklusionskriterie...

<ol>
	<li>Ackermann, P. W., Renstrom, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tendinopathy+in+sport.">Tendinopathy in sport.</a> Sports Health. 4 (3), 193-201 (2012).</li><li>Maffulli, N., Wong, J., Almekinders, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Types+and+epidemiology+of+tendinopathy.">Types and epidemiology of tendinopathy.</a> Clinical Sports Medicine. 22 (4), 675-692 (2003).</li><li>Lui, P. P., Chan, L. S., Fu, S. C., Chan, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+sensory+neuropeptides+in+tendon+is+associated+with+failed+healing+and+activity-related+tendon+pain+in+collagenase-induced+tendon+injury.">Expression of sensory neuropeptides in tendon is associated with failed healing and activity-related tendon pain in collagenase-induced tendon injury.</a> American Journal of Sports Medicine. 38 (4), 757-764 (2010).</li><li>Han, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+corticosteroid+on+the+expressions+of+neuropeptide+and+cytokine+mRNA+and+on+tenocyte+viability+in+lateral+epicondylitis.">Effects of corticosteroid on the expressions of neuropeptide and cytokine mRNA and on tenocyte viability in lateral epicondylitis.</a> Journal of Inflammation (London). 9 (1), 40 (2012).</li><li>Uchio, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+neuropeptides+and+cytokines+at+the+extensor+carpi+radialis+brevis+muscle+origin.">Expression of neuropeptides and cytokines at the extensor carpi radialis brevis muscle origin.</a> Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 11 (6), 570-575 (2002).</li><li>Lieber, R. L., Loren, G. J., Friden, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+measurement+of+human+wrist+extensor+muscle+sarcomere+length+changes.">In vivo measurement of human wrist extensor muscle sarcomere length changes.</a> Journal of Neurophysiology. 71 (3), 874-881 (1994).</li><li>Regan, W., Wold, L. E., Coonrad, R., Morrey, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopic+histopathology+of+chronic+refractory+lateral+epicondylitis.">Microscopic histopathology of chronic refractory lateral epicondylitis.</a> American Journal of Sports Medicine. 20 (6), 746-749 (1992).</li><li>Sharma, P., Maffulli, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tendon+injury+and+tendinopathy:+healing+and+repair.">Tendon injury and tendinopathy: healing and repair.</a> Journal of Bone and Joint Surgery American volume. 87 (1), 187-202 (2005).</li><li>Lui, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+technology+for+tendon+regeneration:+current+status,+challenges,+and+future+research+directions.">Stem cell technology for tendon regeneration: current status, challenges, and future research directions.</a> Stem Cells Cloning. 8, 163-174 (2015).</li><li>Dahlgren, L. A., van der Meulen, M. C., Bertram, J. E., Starrak, G. S., Nixon, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin-like+growth+factor-I+improves+cellular+and+molecular+aspects+of+healing+in+a+collagenase-induced+model+of+flexor+tendinitis.">Insulin-like growth factor-I improves cellular and molecular aspects of healing in a collagenase-induced model of flexor tendinitis.</a> Journal of Orthopedic Research. 20 (5), 910-919 (2002).</li><li>Schnabel, L. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells+and+insulin-like+growth+factor-I+gene-enhanced+mesenchymal+stem+cells+improve+structural+aspects+of+healing+in+equine+flexor+digitorum+superficialis+tendons.">Mesenchymal stem cells and insulin-like growth factor-I gene-enhanced mesenchymal stem cells improve structural aspects of healing in equine flexor digitorum superficialis tendons.</a> Journal of Orthopedic Research. 27 (10), 1392-1398 (2009).</li><li>Durgam, S. S., Stewart, A. A., Sivaguru, M., Wagoner Johnson, A. J., Stewart, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tendon-derived+progenitor+cells+improve+healing+of+collagenase-induced+flexor+tendinitis.">Tendon-derived progenitor cells improve healing of collagenase-induced flexor tendinitis.</a> Journal of Orthopedic Research. 34 (12), 2162-2171 (2016).</li><li>Titan, A., Andarawis-Puri, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tendinopathy:+Investigating+the+Intersection+of+Clinical+and+Animal+Research+to+Identify+Progress+and+Hurdles+in+the+Field.">Tendinopathy: Investigating the Intersection of Clinical and Animal Research to Identify Progress and Hurdles in the Field.</a> Journal of Bone and Joint Surgery Review. 4 (10), (2016).</li><li>Dirks, R. C., Warden, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+for+the+study+of+tendinopathy.">Models for the study of tendinopathy.</a> Journal of Musculoskeletal Neuronal Interaction. 11 (2), 141-149 (2011).</li><li>de Mos, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+platelet-rich+plasma+enhance+tendon+repair?+A+cell+culture+study.">Can platelet-rich plasma enhance tendon repair? A cell culture study.</a> American Journal of Sports Medicine. 36 (6), 1171-1178 (2008).</li><li>Scherb, M. B., Han, S. H., Courneya, J. P., Guyton, G. P., Schon, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+bupivacaine+on+cultured+tenocytes.">Effect of bupivacaine on cultured tenocytes.</a> Orthopedics. 32 (1), 26 (2009).</li><li>Wong, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+dexamethasone+on+cultured+human+tenocytes+and+its+reversibility+by+platelet-derived+growth+factor.">Effect of dexamethasone on cultured human tenocytes and its reversibility by platelet-derived growth factor.</a> Journal of Bone and Joint Surgery American Volume. 85 (10), 1914-1920 (2003).</li><li>Tempfer, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+crystalline+glucocorticoid+triamcinolone+acetonide+on+cultered+human+supraspinatus+tendon+cells.">Effects of crystalline glucocorticoid triamcinolone acetonide on cultered human supraspinatus tendon cells.</a> Acta Orthopaedics. 80 (3), 357-362 (2009).</li><li>Menon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+in+extracellular+matrix+remodeling+and+collagen+turnover+related+pathways+in+cultured+human+tenocytes+after+ciprofloxacin+administration.">New insights in extracellular matrix remodeling and collagen turnover related pathways in cultured human tenocytes after ciprofloxacin administration.</a> Muscles Ligaments Tendons J. 3 (3), 122-131 (2013).</li><li>Backman, L. J., Fong, G., Andersson, G., Scott, A., Danielson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substance+P+is+a+mechanoresponsive,+autocrine+regulator+of+human+tenocyte+proliferation.">Substance P is a mechanoresponsive, autocrine regulator of human tenocyte proliferation.</a> PLoS One. 6 (11), 27209 (2011).</li><li>Backman, L. J., Eriksson, D. E., Danielson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substance+P+reduces+TNF-alpha-induced+apoptosis+in+human+tenocytes+through+NK-1+receptor+stimulation.">Substance P reduces TNF-alpha-induced apoptosis in human tenocytes through NK-1 receptor stimulation.</a> Britich Journal of Sports Medicine. 48 (19), 1414-1420 (2014).</li><li>Rolf, C. G., Fu, B. S., Pau, A., Wang, W., Chan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+cell+proliferation+and+associated+expression+of+PDGFRbeta+causing+hypercellularity+in+patellar+tendinosis.">Increased cell proliferation and associated expression of PDGFRbeta causing hypercellularity in patellar tendinosis.</a> Rheumatology (Oxford). 40 (3), 256-261 (2001).</li><li>Hoppe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tenocytes+of+chronic+rotator+cuff+tendon+tears+can+be+stimulated+by+platelet-released+growth+factors.">Tenocytes of chronic rotator cuff tendon tears can be stimulated by platelet-released growth factors.</a> Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 22 (3), 340-349 (2013).</li><li>Schipper, O. N., Dunn, J. H., Ochiai, D. H., Donovan, J. S., Nirschl, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nirschl+surgical+technique+for+concomitant+lateral+and+medial+elbow+tendinosis:+a+retrospective+review+of+53+elbows+with+a+mean+follow-up+of+11.7+years.">Nirschl surgical technique for concomitant lateral and medial elbow tendinosis: a retrospective review of 53 elbows with a mean follow-up of 11.7 years.</a> American Journal of Sports Medicine. 39 (5), 972-976 (2011).</li><li>Cook, J. L., Feller, J. A., Bonar, S. F., Khan, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+tenocyte+morphology+is+more+prevalent+than+collagen+disruption+in+asymptomatic+athletes'+patellar+tendons.">Abnormal tenocyte morphology is more prevalent than collagen disruption in asymptomatic athletes' patellar tendons.</a> Journal of Orthopedic Research. 22 (2), 334-338 (2004).</li><li>Yuan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Creating+an+Animal+Model+of+Tendinopathy+by+Inducing+Chondrogenic+Differentiation+with+Kartogenin.">Creating an Animal Model of Tendinopathy by Inducing Chondrogenic Differentiation with Kartogenin.</a> PLoS One. 11 (2), 0148557 (2016).</li><li>Lui, P. P., Maffulli, N., Rolf, C., Smith, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+are+the+validated+animal+models+for+tendinopathy.">What are the validated animal models for tendinopathy.</a> Scandinavian Journal of Medical Scientific Sports. 21 (1), 3-17 (2011).</li><li>Wilhelm, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lateral+epicondylitis+review+and+current+concepts.">Lateral epicondylitis review and current concepts.</a> Journal of Hand Surgery American Volume. 34 (7), 1359-1360 (2009).</li></ol>

Ett antal tidigare studier har rapporterat hur du skapar kronisk tendinopathic djurmodeller med olika procedurer som kollagenas eller kartogenin injektion, löpband kör och mer26,27. Även om många studier visade lovande terapeutiska effekter utifrån dessa djurmodeller, skulle experiment med den mänskliga degenerativa tenocyte vara avgörande i fältet av tendinopathy för att återskapa effekten av behandling. I denna artikel etablerat vi ett protokoll för ...

Tendinopathy är en kroniska degenerativa muskuloskeletala tillstånd som utvecklas i olika delar av kroppen. Nyligen, har antalet fall av tendinopathy ökat kraftigt i den utvecklade världen på grund av växande deltagande i fritidsaktiviteter och ökad förväntad livslängd1,2. Tendinopathy orsaken anses vara multifaktoriell och dessa orsaker är ischemi, syre fria radikaler skador, en obalans mellan vasokonstriktor och vasodilaterande innervations, inre mikro-tårar och ändringar till neuro-förordningen3 ,4,5,6,7,8. De flesta behandlingar för tendinopathy endast lindra dess symptom. Dessutom behandlingar utan vävnadsregeneration kräver lång tid för rehabilitering och uppnå ett begränsat svar från skadade senor, som ålägger en klinisk utmaning för läkare9.
Inkompetens av nuvarande behandlingsalternativ tillsammans med avsaknaden av degenerativa Senans förmåga att självläka har bly forskare att intressera sig för att utforska alternativa behandlingsstrategier. Nyligen nya studier rapporterade många lovande resultat för att förbättra helande effekten av tendinopathy senor med tillväxtfaktorer, stem cell baserad terapi och gene therapy10,11,12.
Genom en litteraturstudie, Vi hittade att de inblandade studierna kan delas in i två kategorier utifrån deras analys material: djur modeller som en råtta, en mus eller en kanin; och mänskliga modeller. När det gäller animaliska modellen, för närvarande finns det två populära tekniker för att generera tendinopathy: kemisk inducering av skada eller mekanisk överbelastning modellen. Varje djurmodell begränsades dock reproducera den komplexa mänskliga tendinopathy patologi13,14.
De flesta tidningar använder mänskliga prover analyserades histologiskt eller utförs av in vitro- experiment baserat på en hälsosam mänskliga tenocyte i stället för en degenerativ tenocyte15,16,17,18 , 19 , 20 , 21. endast ett fåtal tidningar rapporterade att de använde en mänsklig degenerativa tenocyte, men de inte beskriva i detalj det protokoll som används för att få den degenerativa tenocyte från den mänskliga22,23. I detta sammanhang bör det noteras att framgångsrika resultat från antingen animaliskt modellen eller den friska vävnaden/tenocyte nödvändigtvis inte kan förutsäga mänsklig effekt eller effektiv dosering eftersom senan degeneration är en komplicerad process och patogenesen är fortfarande inte helt klarlagt.
Sammantaget är det nödvändigt att beskriva standardprotokollet för att erhålla den degenerativa tenocyte från mänsklig vävnad utan att orsaka negativa effekter för givaren. Denna artikel beskriver ett protokoll på hur förvärva den mänskliga degenerativa tenocyte. För att validera protokollet, analyserades skördade vävnader histologiskt. Sedan bekräftades odlade cellen som den degenerativa tenocyte med hjälp av immuncytokemi (ICC), en kvantitativ realtid-polymeras-kedjereaktion (qRT-PCR) och en lönsamhet analysen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:719px;" width="718">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Scalpel</td>
			<td style="width:199px;">Kisanbio</td>
			<td style="width:119px;">KS-Q0306-15</td>
			<td style="width:167px;">No. 15</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Mini-blade</td>
			<td style="width:199px;">Beaver</td>
			<td style="width:119px;">374769</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:235px;">Dulbecco&#39;s modified Eagle&#39;s medium (DMEM)</td>
			<td style="width:199px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11995065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Collagenase &#8545;</td>
			<td style="width:199px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">C6885</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td style="width:119px;">14190250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td style="width:119px;">16000044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50 mM ascorbic acid-2-phosphate</td>
			<td style="width:199px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A5960</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Antibiotic-Antimycotic solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td style="width:119px;">15240062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">4% formaldehyde</td>
			<td style="width:199px;">Bio-solution</td>
			<td style="width:119px;">BP031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Triton X-100&#160;</td>
			<td style="width:199px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">X100-100ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">BSA</td>
			<td style="width:199px;">Rdtech</td>
			<td style="width:119px;">C0082</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">TWEEN 20</td>
			<td style="width:199px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P9416-100ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">MKX (C-5)</td>
			<td style="width:199px;">Santa cruz biotechnology</td>
			<td style="width:119px;">sc-515878</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Tenomodulin (N-14)</td>
			<td style="width:199px;">Santa cruz biotechnology</td>
			<td style="width:119px;">sc-49325</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Fluorescence Mounting Medium</td>
			<td style="width:199px;">DAKO</td>
			<td style="width:119px;">S3023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:235px;">DAPI (4&#39;,6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td>
			<td style="width:199px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:235px;">WST-1</td>
			<td style="width:199px;">Dojindo Molecular Technologies</td>
			<td style="width:119px;">CK04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">BrdU Cell Proliferation Assay Kit</td>
			<td style="width:199px;">Cell Signaling Technology</td>
			<td style="width:119px;">#6813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:235px;">TRIzol Reagent</td>
			<td style="width:199px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">15596018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:235px;">iScript cDNA Synthesis Kit&#160;</td>
			<td style="width:199px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:119px;">170-8891</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:235px;">TaqMan Gene Expression Master Mix</td>
			<td style="width:199px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:119px;">4369016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">GAPDH</td>
			<td style="width:199px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Hs02786624_g1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">COL3A1</td>
			<td style="width:199px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Hs00943809_m1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">ACTA2</td>
			<td style="width:199px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Hs00426835_g1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">TAC1</td>
			<td style="width:199px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Hs00243225_m1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">TACR1</td>
			<td style="width:199px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Hs00185530_m1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">PTGS2</td>
			<td style="width:199px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Hs00153133_m1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">ACTB</td>
			<td style="width:199px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Hs99999903_m1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Cell Strainers (100 &#181;m)&#160;</td>
			<td style="width:199px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">352360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">100mm culture dish</td>
			<td style="width:199px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">8188207</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">8-well Chamber Slide</td>
			<td style="width:199px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">154534</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:235px;">96 Well Clear Flat Bottom Polystyrene TC-Treated Microplates</td>
			<td style="width:199px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3596</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Nikon Eclipse 50i Microscope&#160;</td>
			<td style="width:199px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">VERSA max microplate reader&#160;</td>
			<td style="width:199px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:235px;">CFX96 Real-Time PCR Detection System</td>
			<td style="width:199px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:235px;">Formalin solution, neutral buffered, 10%</td>
			<td style="width:199px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Paraffins</td>
			<td style="width:199px;">Leica Biosystems</td>
			<td style="width:119px;">3801340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Ethanol</td>
			<td style="width:199px;">JUNSEI CHEMICAL</td>
			<td style="width:119px;">90303-2185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Hematoxylin</td>
			<td style="width:199px;">DAKO</td>
			<td style="width:119px;">CS70030-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Eosin</td>
			<td style="width:199px;">DAKO</td>
			<td style="width:119px;">CS70130-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Alcian blue</td>
			<td style="width:199px;">DAKO</td>
			<td style="width:119px;">AR16011-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Citric acid</td>
			<td style="width:199px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">251275</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Xylene</td>
			<td style="width:199px;">JUNSEI CHEMICAL</td>
			<td style="width:119px;">25165-0430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Endogenous peroxidases&#160;</td>
			<td style="width:199px;">DAKO</td>
			<td style="width:119px;">S200380-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Canada balsam</td>
			<td style="width:199px;">JUNSEI CHEMICAL</td>
			<td style="width:119px;">23255-1210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Microtome Blade</td>
			<td style="width:199px;">FEATHER</td>
			<td style="width:119px;">A35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Slide glass</td>
			<td style="width:199px;">SUPERIOR</td>
			<td style="width:119px;">1000612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Cover glass</td>
			<td style="width:199px;">Marienfeld-Superior</td>
			<td style="width:119px;">101050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">VEGF</td>
			<td style="width:199px;">Santa cruz biotechnology</td>
			<td style="width:119px;">sc-7269</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">SPSS Software</td>
			<td style="width:199px;">IBM</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Ver. 18.0</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Multi-purpose Centrifuge</td>
			<td style="width:199px;">LABOGENE</td>
			<td style="width:119px;">1248R</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a protocol to acquire the degenerative tenocyte from humans

Tendinopathy, ett smärtsamt tillstånd som utvecklar svar på senan degeneration, är på uppgång i den utvecklade världen på grund av ökad fysisk aktivitet och längre förväntad livslängd. Trots dess ökande prevalens, underliggande patogenesen är fortfarande oklart och behandlingen är vanligtvis symtomatisk. Nyligen har undersöktes många terapeutiska alternativ, inklusive tillväxtfaktorer, stamceller och genterapi, i hopp om att förbättra den helande potensen av degenerativa senan. Majoriteten av dessa studier genomfördes dock endast på djurmodeller eller friska mänskliga tenocytes. Trots några studier med patologiska tenocytes, till bäst av vår kunskap finns det för närvarande inget protokoll som beskriver hur du skaffar mänskliga degenerativa tenocytes. Syftet med denna studie är att beskriva ett standardprotokoll för att förvärva mänskliga degenerativa tenocytes. Inledningsvis var senan vävnaden skördas från en patient med lateral epicondylitis under operation. Sedan togs biopsiprover från extensor carpi radialis brevis senan motsvarande strukturella förändringar som observerats vid tidpunkten för kirurgi. Alla skördade senor föreföll vara tråkig, grå, spröda och edematous, som gjorde dem visuellt skiljer sig från friska. Tenocytes odlade och användes för experiment. Samtidigt hälften av de skördade vävnaderna analyserades histologiskt, och det visades att de delade samma nyckel dragen av tendinopathy (angiofibroblastic dysplasi eller hyperplasi). En sekundär analys av immuncytokemi bekräftade att de odlade cellerna var tenocytes med majoriteten av de celler som har positiva fläckar för mohawk och tenomodulin proteiner. Kvaliteterna av degenerativa naturen av tenocytes bestämdes sedan genom att jämföra cellerna med frisk kontroll med hjälp av en proliferation assay eller qRT-PCR. Den degenerativa tenocyte visas en högre spridning och liknande gen uttrycksmönster av tendinopathy som matchade tidigare rapporter. Sammantaget kan detta nya protokoll ger ett användbart verktyg för framtida studier av tendinopathy.

Histologiska analyser visade att de skördade vävnaden från laterala epikondylit hade kännetecknen av en tendinopathic senan. H & E avsnitt av tendinopathy degenerativa senan avslöjade ett oorganiserat kollagen paket med en förlust av polaritet och fina raka, starkt packade parallellt fiber strukturer. Histologiska tecken tyder på degeneration som högre cellularitet och förstorade kärnor utan formen typiska spindeln var vanliga i prover. Dessutom kollagen buntar av degenererade s...

Watch this Scientific Journal Video about A Protocol to Acquire the Degenerative Tenocyte from Humans at JoVE.com

A Protocol to Acquire the Degenerative Tenocyte from Humans

In vitro -användning av degenerativa tenocytes är väsentlig när undersökt effekten av ny behandling på tendinopathy. Men använder de flesta forskningsstudier endast animaliska modellen eller en hälsosam tenocyte. Vi föreslår följande protokoll för att isolera mänskliga degenerativa tenocytes under kirurgi.

Ett protokoll för att förvärva den degenerativa Tenocyte från människor

Tendinopathy, a painful condition that develops in response to tendon degeneration, is on the rise in the developed world due to increasing physical ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Intra-Operative Behavioral Tasks in Awake Humans Undergoing Deep Brain Stimulation Surgery

Intraoperativ Behavioral Uppgifter i Vakna Människan genomgår en genomgripande Kirurgi Brain Stimulation

Deep brain stimulation (DBS) is a surgical procedure that directs chronic, high frequency electrical stimulation to specific targets in the brain through ...

The Trier Social Stress Test Protocol for Inducing Psychological Stress

Den Trier Social Stress Test protokoll för att framkalla psykisk stress

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting.  Protocols that allow researchers to study the biological ...

Spectral Karyotyping to Study Chromosome Abnormalities in Humans and Mice with Polycystic Kidney Disease

Spectral karyotypering att studera kromosomavvikelser hos människor och möss med polycystisk njursjukdom

Conventional method to identify and classify individual chromosomes depends on the unique banding pattern of each chromosome in a specific species being ...

Heterotopic Renal Autotransplantation in a Porcine Model: A Step-by-Step Protocol

Heterotopisk Renal auto i en grismodell: En steg-för-steg protokoll

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality ...

A Model to Simulate Clinically Relevant Hypoxia in Humans

En modell för att simulera kliniskt relevanta Hypoxi i människor

In case of apnea, arterial partial pressure of oxygen (pO2) decreases, while partial pressure of carbon dioxide (pCO2) increases. To avoid damage to ...

A Clinical Trial Assessing the Safety, Efficacy, and Delivery of Olive-Oil-Based Three-Chamber Bags for Parenteral Nutrition

En klinisk prövning som bedömer säkerhet, effekt och leverans av Olivoljebaserade tre kammar påsar för parenteral nutrition

Limited evidence exists to precisely estimate efficacy and safety differences between parenteral nutrition (PN) prepared using olive-oil-based ...

Conducting Maximal and Submaximal Endurance Exercise Testing to Measure Physiological and Biological Responses to Acute Exercise in Humans

Bedriva Maximal och Submaximal uthållighetsträning tester för att mäta fysiologiska och biologiska Svaren till akut övning i människor

Regular physical activity has a positive effect on human health, but the mechanisms controlling these effects remain unclear. The physiologic and biologic ...

A Proinflammatory, Degenerative Organ Culture Model to Simulate Early-Stage Intervertebral Disc Disease.

En proinflammatorisk, degenerativ organkulturmodell för att simulera intervertebral disc disease i ett tidigt skede.

Symptomatic intervertebral disc (IVD) degeneration (IDD) is a major socioeconomic burden and is characterized by inflammation and tissue degradation. Due ...

Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

Retinal Pigment Epithelium Transplantation i en icke-mänsklig primatmodell för degenerativa retinala sjukdomar

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These ...

Quantification of Optic Nerve Cross Sectional Area on MRI: A Novel Protocol using Fiji Software

Kvantifiering av optisk nerv tvärsnittsområde på MRI: Ett nytt protokoll med Fiji-programvara

Optic nerve assessment is an important aspect of glaucoma diagnosis and follow-up. This project describes a protocol for a unified methodology of optic ...