Name: immunostimulatory agent evaluation: lymphoid tissue extraction and injection route-dependent dendritic cell activation
Uploaded: 2018-09-16T14:00:00
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이 연구는 창작 자료 검색 프로그램 통해 국립 연구 재단의 한국 (NRF) 과학의 부, 정보 통신 및 미래 계획 (NRF-2017M3D1A1039421)와 해양 생명 공학 프로그램에 의해 자금을 자금에 의해 지원 되었다는 사역의 바다 수 산업, 한국 및 그랜트 (20150220).

동물 처리, 희생, 및 기관 격리를 포함 하 여 모든 실험 절차는 국제 동물 관리 및 사용 위원회 상하이 보건 임상 센터와 서울 아산 병원의 규칙에 따라 수행 했다. 연구 프로토콜 상하이 보건 임상 센터에서 동물 실험의 윤리에 해당 위원회에 의해 승인 되었다 (마우스 프로토콜 번호: SYXK-2010-0098) 아산 의료 센터 (2016-02-168).
1입니다. 자료의 준비
참고: 나노 ?...

<ol>
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Lab Animal Research. Compound Administration I.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2018).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JoVE+Science+Education+Database.+Lab+Animal+Research.+Compound+Administration+III.">JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Compound Administration III.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2018).</li><li>Mebius, R. E., Kraal, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+the+spleen.">Structure and function of the spleen.</a> Nature Review Immunology. 5 (8), 606-616 (2005).</li></ol>

나노기술과 면역학에서 많은 진보 약물 전달 및 immunostimulation의 치료 연구를 통해 달성 되었습니다. 주입 방법의 주의 깊은 선택이 현재 연구의 초점 이었다 immunostimulation에 대 한 중요 한 것으로 알려져 있다.
다른 주입 경로 자연스럽 게 비-독성 및 생 분해성 DNA 기반 소재에 대 한, INP (immunostimulatory 나노), 최고의 결과 굴복 하는 어떤 경로 확인 평가 했다. 이 접근은 또한 항 ?...

면역학 및 나노 의학, 약물 전달 및 immunostimulation를 포함 하 여 응용 프로그램에 대 한 잠재적인 새로운 치료 전략의 지도 있다. 관리 경로 최적화 immunostimulatory 요원의 효능에 영향을 미치는 중요 한 측면 이다. (INP)로 구성 된 DNA immunostimulatory 나노 자기 조립 microphase 별거에 의해 지질-DNA1amphiphilic 구조 때문에 새로 개발된 된 나노 면역 보조 제 이다. 따라서, INP는 소재1 vivo에서 다른 경로 통해와 같은 사 타 구니 림프절 (iLN), mediastinal LN (mLN), 그리고 비장, 적절 한 조직의 수확에 대 한 세 가지 절차의 관리와 관련 된 프로토콜 설명. 마지막으로,이 조직 면역 시스템에 가장 강력한 항 원 제시 세포 수지상 세포 (DC) 활성화를 위해 분석 되었다. 이 프로토콜은 또한 항 원, 항 체, 또는 다른 면역 adjuvants2평가 하는 데 적용할 수 있습니다.
그것은 위대한 약속 표시는 에이전트 때문에 INP 공식 테스트. INP는 수용 체 통행세 같이 9 (TLR9) immunostimulation의 어떤 평가 대 한 효능은 다른 주입 방법3을 테스트 하는 데 필요한 핵 산을 포함 하는 보조 자료. 이러한 맥락에서 Dc의 자극은 비보에 평가 대 한 강력한 끝점입니다. 항 원 또는 immunostimulatory 분자는 주변 조직이 나 혈액에 DCs에 의해 phagocytosed, 후이 세포 림프 기관 장과 LNs4,5등을 마이그레이션합니다. 따라서, DC 활성화 비장, iLN, 및 주입 된 동물의 mLN에서 분석 했다. 제대로 수확이 조직의입니다 그러므로 또한 새로운 보조 또는 병원 체5에 면역 반응을 평가 하기 위한 중요 한. 이러한 조직 수확도 암 치료로 서 소설 면역학 방법론을 개발 하기 위해 중요 하다. 또한,이 프로토콜 안티 인간 면역 결핍 바이러스 치료제6같은 다른 약물의 효율성을 확인 하기 위해 사용할 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:707px;" width="707">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:325px;">Material</td>
			<td style="width:96px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">phosphate buffer saline</td>
			<td rowspan="2" style="width:96px;">Corning</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">21-040-CVR</td>
			<td rowspan="2">Washing organs</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">(PBS, pH 7.4)</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">isoflurane solution&#160;</td>
			<td style="width:96px;">Aesica Queenborough limited</td>
			<td style="width:119px;">26675-46-7</td>
			<td>Anesthesia process</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tuberculin 1mL syringe -</td>
			<td style="width:96px;">Junglim</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td>Injection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50 mL conical tube&#160;</td>
			<td style="width:96px;">S.P.L</td>
			<td style="width:119px;">50050</td>
			<td>Anesthesia process</td>
		</tr>
		<tr height="67">
			<td height="67" style="height:67px;">1mL Insulin Syringe&#160;</td>
			<td style="width:96px;">(BD Ultra-FineTM&#173;II)_short needle</td>
			<td style="width:119px;">324826</td>
			<td>Intramuscular Injection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM High Glucose</td>
			<td style="width:96px;">Hyclone</td>
			<td style="width:119px;">SH30081.01</td>
			<td>Storing organs</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Histopaque</td>
			<td style="width:96px;">&#160;Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">10771</td>
			<td>FACS analysis</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Ethyl alcohol anhydrous 99.5 %&#160;</td>
			<td style="width:96px;">Daejung</td>
			<td style="width:119px;">4022-4110</td>
			<td>Disinfectant</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:325px;">Equipments</td>
			<td style="width:96px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:325px;">FineCycler C100 (Thermocycler)</td>
			<td style="width:96px;">Ssufine</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td>Anealing</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:325px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:96px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FACS tube&#160;</td>
			<td style="width:96px;">FALCON</td>
			<td style="width:119px;">2052</td>
			<td>FACS analysis</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:325px;">Automated High-performance Flow Cytometer</td>
			<td style="width:96px;">BD (USA), FACSVerse</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td>FACS analysis</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

immunostimulatory agent evaluation: lymphoid tissue extraction and injection route-dependent dendritic cell activation

Immunotherapy 또는 예방 접종에 대 한 새로운 치료 대리인의 평가, 대 한 림프 조직에서 면역 세포 활성화의 분석은 필수적입니다. 여기, 우리는 마우스에서 다른 관리 경로에서 나노 입자 형태로 소설 지질-DNA immunostimulant의 면역 효과 조사: 구강, intranasal, 피하, 노상 강도, 복, 그리고 정 맥. 이러한 주사 직접 영향을 미치는 면역 반응, 그리고 수확 하는 림프 조직 하 고 조직에 수지상 세포 (DC) 활성화의 분석은 이러한 평가의 중요 한 부분. Mediastinal 림프 노드 (mLNs)의 추출은 크기와이 오르간의 위치 때문에 중요 하 그러나 매우 복잡 한. 사 타 구니 림프절 (iLN)만 대, 그리고 비장을 수확 cytometry에 의해 DC 활성화를 분석 하기 위한 단계적 절차를 설명 합니다.

INP 림프 조직 DC 활성화에 대 한 적절 한 주입 경로 평가 하려면 혈통으로 DC 인구는 -로 정의 된 CD11c+ , iLN, 장과 mLN에서 세포 및 co-stimulatory 분자의 식 수준 분석. INP 피하 (사우스 캐롤라이나) 및 정 맥 (i.v.) 주입의 치료 (그림 2B 와 2c) 장과 iLN Dc에 CD40, CD80 그리고 CD86 식에 상당한 증가 승진. 노상 강도 그리고 I...

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Immunostimulatory Agent Evaluation: Lymphoid Tissue Extraction and Injection Route-Dependent Dendritic Cell Activation

Immunostimulatory 에이전트 평가: 림프 조직 추출 및 주입 경로-종속 수지상 세포 활성화

Immunostimulating 접한의 치료 후 림프 조직의 림프 수지상 세포 활성화 테스트 후속 추출에 대 한 실험 절차를 설명 합니다.

For evaluation of a new therapeutic agent for immunotherapy or vaccination, analysis of immune cell activation in lymphatic tissues is essential. Here, we ...

이 절차의 전반적인 목표는 마우스에서 내선 림프절을 격리하는 데 필요한 독특한 기술을 숙지하는 것입니다. 수술은 마우스의 6개의 다른 경로에 면역 자극제 물질을 주입한 후에 수행되었습니다. 이 연구에서는 나노 크기의 구조를 형성하는 새로운 종류의 물질을 사용했습니다.계면활성제는 친성모성 헤드 그룹과 소수성 꼬리로 구성됩니다. 그 형태 구형 미셀 또는 microphage 분리로 인해 다른 이차 구조. 우리는 DNA인 생체 거대 분자에 이 속성을 이용했습니다.여기에 나타난 DNA 수륙양용은, A, C, G, T와 같은 일반 뉴클레오티드로서, 지질 변형 신경세포 뉴클레오베이스가 소수성 단위로 작용하는 동안 소수성 블록을 가지고 있다. 수정된 올리고는 대규모 옥토그램에서 DNA 신디사이저에 의해 합성되었다. 양용성 지질 DNA는 나노 크기의 구형 미켈을 자발적으로 형성한다.미셀이 형성되면 DNA는 직경이 약 10 나노미터인 빈 운반체로 단일 좌초 상태로 유지됩니다. 면역 자극제를 가진 담체를 장착하기 위하여는, 전화와 같은 수용체 9 부관 즉 eCpG로 DNA 순서를 확장하는 간단한 문제입니다. 지질 DNA 및 eCpG 염기는 여기에 그러므로 미셀의 외부 표면은 CpG 서열로 저하됩니다.그런 다음 이 면역 자극 나노 입자를 INP로 지정합니다. 면역 반응을 위한 INP의 적절한 방법을 결정하기 위해 우리는 64개의 주사 경로에서 마우스에 INP를 주입하고 결과적으로 적절한 림프절 조직을 분석하였다. 자세한 주입 지침은 2012년 찰스 리버가 발행한 JOB 기사를 찾아보시기 바랍니다.이 비디오의 주요 장점은 심강절을 얻는 방법을 시각적으로 보여주는 것입니다. 비디오는 많은 사람들이 장기를 고립시키는 데 어려움을 발견하는 중질 림프절의 위치를 명시적으로 보여줍니다. 모든 실험은 상하이 공중 보건 임상 센터 또는 울산 의과 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 지침에 따라 수행되었습니다.이 부분은 면역 분석에 중요한 기관 또는 조직의 특정 위치를 보여줍니다. 비장과 두 개의 림프절이 격리됩니다. 우선, 생쥐는 이산화탄소 흡입 안락사에 의해 희생되었고, 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 지도에 따라 고통을 최소화하기 위한 모든 노력이 이루어졌습니다.지금부터 장기를 찾아 그들을 격리합시다. 먼저 작동 데스크의 마우스를 마우스 손바닥에 4개의 핀으로 올바르게 고정합니다. 해부 부위를 알코올로 살균합니다.마우스 복부의 바닥을 큰 크기의 가위로 바깥쪽 덮개를 해부합니다. 집게를 사용하여 부착의 양면을 열고 작동 테이블에 핀으로 고정합니다. 잉구인 림프절의 위치는 왼쪽 다리를 향해 내려가는 혈관의 결합을 찾아서 노출됩니다.혈관의 모양은 기울어진 알파벳 문자 Y.가 집게로 층을 발견하고 피부에서 당겨 처럼 보입니다. 내부 장기를 노출하기 위해 작은 가위로 회중을 잘라냅니다. 집게를 사용하여 창자를 오른쪽으로 이동한 다음 복부의 왼쪽, 왼쪽 상단에 표시되는 모양의 비장으로 감쌉니다.비장은 쉽게 방해하기 쉽기 때문에 시술 중에 추가주의가 필요합니다. 마지막으로이 비디오의 핵심 포인트 : 중간 림프절을 수확. 그것은 그것의 작은 크기와 다소 숨겨진 위치 때문에 보기 어려운 폐의 상부 아래에 위치 하 고 있습니다.작은 가위와 집게를 사용하여 부위를 조심스럽게 노출시합니다. 갈비뼈와 다이어프램의 양면을 잘라냅니다. 가슴 위에 갈비뼈를 잘라.절차 도중 반투명 한 중질 림프절을 찾아 사이트를 장님수 있기 때문에 손상 심장과 혈관을 피하십시오. 우연히 혈관이 터지면 거즈로 혈액을 부드럽게 닦아냅니다. 폐의 왼쪽을 잡고 부드럽게 폐 아래를 볼 수있는 다른 쪽으로 뒤집어.집게를 사용하여 중간 림프절을 당깁니다. 중간 림프절을 수확 한 후 원치 않는 조직이 분석에 영향을 줄 수 있기 때문에 림프절을 둘러싼 모든 지방과 혈액을 완벽하게 제거해야합니다. 마지막으로, 미디어로 가득 페트리 접시에 있는 모든 고립된 장기.총 0.1배 10에서 제6세포까지 이 흐름 세포측정에 대해 분석하였다. 힘 게터와 크기 게터 백혈구 인구에 기초하여 문이 있었고 그 세포는 어두운 염색에 의해 배제되었다. INP 주입 후 24시간 후 64개의 사출 경로, 비장, 잉구인림프절 및 중질 림프절은 유동 세포측정에 의한 DC 활성화를 수확하고 분석했다.유동 세포측정 DC 모집단의 전략에 기초하여 살아있는 백혈구에서 CD11C 양성 및 계보 음성 세포로 정의하였다. 특히, INP의 비강 내 분사는 대조군PBS에 비해 중간 림프절에서 CD40, 80, 86 발현에서 상당한 증가를 촉진시켰다. 따라서, 이 데이터는 INP의 비강 내 주입이 폐내 면역의 향상을 위한 점막 보조로 사용될 수 있다는 것을 건의했습니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Optimized Protocol for Efficient Transfection of Dendritic Cells without Cell Maturation

세포 성숙없이 돌기 세포의 효율적인 Transfection을 위해 최적화된 프로토콜

Dendritic cells (DCs) can be considered sentinels of the immune system which play a critical role in its initiation and response to infection1. Detection ...

연구

면역학 및 감염병학

Generation and Labeling of Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells with Qdot Nanocrystals for Tracking Studies

추적 연구 Qdot Nanocrystals와 Murine 골수 파생 돌기 세포의 생성 및 라벨링

Dendritic cells (DCs) are professional antigen presenting cells (APCs) found in peripheral tissues and in immunological organs such as thymus, bone ...

Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation

알레르기기도 염증 동안 폐 돌기 세포 성숙과 마이 그 레이션 분석

Dendritic cells (DCs) are the key players involved in initiation of adaptive immune response by activating antigen-specific T cells. DCs are present in ...

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

사용 모니터링 수지상 세포 이동<sup&gt; 19</sup&gt; F /<sup&gt; 1</sup&gt; H 자기 공명 영상

Continuous  advancements in noninvasive imaging modalities such as magnetic resonance  imaging (MRI) have greatly improved our ability to study ...

Activation and Measurement of NLRP3 Inflammasome Activity Using IL-1&#946; in Human Monocyte-derived Dendritic Cells

활성화 및 인간 단핵구 유래 수지상 세포에서 IL-1β를 사용하여 NLRP3 inflammasome을 활동의 측정

Inflammatory processes resulting from the secretion of Interleukin (IL)-1 family cytokines by immune cells lead to local or systemic inflammation, tissue ...

In Vitro Generation of Murine Plasmacytoid Dendritic Cells from Common Lymphoid Progenitors using the AC-6 Feeder System

In Vitro Generation of Murine Plasmacytoid Dendritic Cells from Common Lymphoid Progenitors using the AC-6 Feeder System

AC-6 공급 시스템을 사용하여 일반 림프 전구 세포에서 쥐 형질 수지상 세포의 체외 세대

Plasmacytoid dendritic cells (pDCs) are powerful type I interferon (IFN-I) producing cells that are activated in response to infection or during ...

Generation of Immature, Mature and Tolerogenic Dendritic Cells with Differing Metabolic Phenotypes

대사 표현형을 각기 다른 미성숙, 성숙 및 Tolerogenic 수지상 세포의 생성

Immune response results from a complex interplay between the antigen non-specific innate immune system and the antigen specific adaptive immune system. ...

Ex Vivo Infection of Human Lymphoid Tissue and Female Genital Mucosa with Human Immunodeficiency Virus 1 and Histoculture

Ex Vivo Infection of Human Lymphoid Tissue and Female Genital Mucosa with Human Immunodeficiency Virus 1 and Histoculture

전 비보 인간 면역 결핍 바이러스 1와 Histoculture 인간 림프 조직 및 여성 생식 기 점 막의 감염

Histocultures allow studying intercellular interactions within human tissues, and they can be employed to model host-pathogen interactions under ...

An In Vivo Mouse Model to Measure Na&#239;ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells

Vivo에서 마우스 모델을 측정 순진한 CD4 T 세포 활성화, 확산 및 골 수 유래 수지상 세포에 의해 유도 된 Th1 차별화

Quantification of na&#239;ve CD4 T cell activation, proliferation, and differentiation to T helper 1 (Th1) cells is a useful way to assess the role played ...