Name: protocol to create chronic wounds in diabetic mice
Uploaded: 2019-09-25T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Protocol to Create Chronic Wounds in Diabetic Mice at JoVE.com

وليس لدى أصحاب البلاغ أي اعتراف.

وقد أُنجزت جميع التجارب وفقاً للأنظمة الاتحادية، وقد وافقت جامعة كاليفورنيا، ريفرسايد IACUC على سياسة وإجراءات جامعة كاليفورنيا.
1. الحيوان
<ol><li>استخدام مرض السكري والسمنة B6. BKS (D) -Leprdb/ J الفئران لنموذج الجرح المزمن. وتشمل خيارات الشراء إما heterozygotes لتربية أو homozygotes م...

بمجرد إنشاء الجروح المزمنة على الفئران، يمكن استخدام النموذج لدراسة عمليات التئام الجروح المعاقة التي تنطوي عليها بداية المزمنة. ويمكن أيضا استخدام النموذج لاختبار فعالية مجموعة واسعة من المواد الكيميائية والأدوية التي يمكن أن تعكس تطور الجروح المزمنة وضعف الشفاء ويؤدي إلى إغلاق الجرو...

يتضمن التئام الجروح العمليات الخلوية والجزيئية المعقدة التي يتم تنظيمها زمنياً ومكانياً، وتنظم في مراحل متتابعة ومتداخلة تشمل العديد من أنواع الخلايا المختلفة بما في ذلك على سبيل المثال لا الحصر الاستجابة المناعية والأوعية الدموية النظام1. مباشرة بعد الجلد يعاني من إصابة، والعوامل وخلايا الدم تتجمع إلى موقع الجرح والشروع في تتالي تخثر لتشكيل جلطة. بعد تحقيق التوازن، تمدد الأوعية الدموية للسماح للأكسجين في موقع الجرح، والمواد الغذائية، والأنزيمات، والأجسام المضادة والعوامل الكيميائية التي تجذب الخلايا المتعددة الأشكال إلى إزالة الجرح من الحطام الأجنبي وإفراز الإنزيمات البروتيوليتيك 2.تفرز الصفائح الدموية المنشطة مجموعة متنوعة من عوامل النمو لتحفيز الخلايا الكيراتينية على حافة الجرح لإعادة epitheliliize المنطقة المصابة. الخلايا الأحادية التي تم تجنيدها إلى موقع الجرح تميز في الضامة التي البكتيريا phagocytose والعدلات الميتة وتفرز عوامل إضافية للحفاظ على إشارات الكيراتينية التكاثرية والمؤيدة للهجرة. في مرحلة الانتشار ، في حين تستمر إعادة الظهارة ، تستمر أنسجة التحبيب الجديدة المكونة من الخلايا الليفية ، والخلايا الأحادية /الضامة ، والخلايا الليمفاوية ، والخلايا البطانية في عملية إعادة البناء2. يتم تحفيز تكوين الأوعية الدموية من خلال تعزيز انتشار الخلايا البطانية والهجرة، مما يؤدي إلى تطوير سفينة جديدة. Epithelialization وإعادة تشكيل المصفوفة خارج الخلية بناء حاجز ضد البيئة. كما يشفي الجرح وتحبيب الأنسجة يتطور إلى ندبة، والمبرمج يزيل الخلايا الالتهابية، والخلايا الليفية، والخلايا البطانية دون التسبب في تلف الأنسجة إضافية. يتم تعزيز قوة الشد من الأنسجة عن طريق الخلايا الليفية إعادة عرض مكونات مختلفة من المصفوفة خارج الخلية، مثل الكولاجين، بحيث الأنسجة شكلت حديثا هو تقريبا قوية ومرنة مثل الجلد غير المصاب2.
أي انحراف عن هذا التقدم المتضافر للغاية نحو إغلاق الجرح يؤدي إلى ضعف و / أو الجروح المزمنة3. وتتميز الجروح المزمنة بزيادة الإجهاد التأكسدي، والتهاب مزمن، وmicrovasculature التالفة، ومصفوفة الكولاجين غير طبيعية في الجرح4. الإجهاد التأكسدي، وخاصة في الجرح، يمكن أن يؤخر إغلاق الجرح2،5. عندما، في المرحلة الأولى من التئام الجروح، تصبح المرحلة الالتهابية غير منظمة، والأنسجة المضيفة يفترض ضررا كبيرا بسبب التدفق المستمر للخلايا الالتهابية5 التي تطلق الإنزيمات السامة للخلايا، وزيادة في الجذور الأكسجين الحرة، و الوسطاء الالتهابية غير المنظمة، مما أدى إلى وفاة الخلية6،7.
في هذه البيئة الدقيقة المدمرة، البكتيريا التي تشكل biofilm الاستفادة من المواد الغذائية المضيفة والمساهمة في تلف الأنسجة المضيفة2. هذه biofilms من الصعب السيطرة عليها وإزالتها لأن المواد البوليمرية خارج الخلية رطبة تتكون من البروتينات، الحمض النووي، RNA، والسكريات يسمح البكتيريا التي تأوي داخل لتكون متسامحة مع العلاجات المضادات الحيوية التقليدية والتهرب من استجابة المناعة الفطريةوالتكيفية 2،8،9.
دراسة الجروح المزمنة أمر بالغ الأهمية لأنها تؤثر على ~ 6.5 مليون شخص وتكلف ~ 40 مليار دولار سنويا في الولايات المتحدة وحدها10. المرضى الذين يعانون من مرض السكري قد زادت من مخاطر الإصابة بالجروح المزمنة التي تتطلب بتر الأطراف من أجل احتواء انتشار العدوى. هؤلاء المرضى لديهم خطر الوفاة 50٪ في غضون 5 سنوات من البتر الذي يعزى إلى آلية الفيزيولوجيا المرضية لمرض السكري11. العلاقة بين الجهاز المناعي للمضيف والميكروبيوم في التئام الجروح هو موضوع حيوي من البحوث الجارية لأن عواقب الجروح المزمنة، إذا لم يتم حلها، وتشمل بتر والوفاة12.
على الرغم من أنه تم بذل جهد كبير في فهم كيفية تطور الجروح المزمنة في البشر، فإنه لا يزال من غير الواضح كيف ولماذا تشكل الجروح المزمنة. من الصعب إجراء تجارب لدراسة آليات ضعف الشفاء في البشر، ولا يرى أخصائيو التئام الجروح سوى المرضى الذين يعانون من الجروح المزمنة التي وصلت بالفعل إلى المزمنة لأسابيع إلى أشهر. وهكذا، فإن المتخصصين غير قادرين على دراسة ما هي العمليات التي ذهبت خطأ التي تؤدي إلى تطور الجرح لتصبح مزمنة2. هناك نقص في النماذج الحيوانية التي تلخص تعقيد الجروح البشرية المزمنة. وحتى تم تطوير نموذجنا، لم يكن هناك نموذج لدراسات الجروح المزمنة.
تم تطوير نموذج الجرح المزمن في الفئران التي لديها طفرة في مستقبلات اللبتين(db/db-/-)13. هذه الفئران هي السمنة والسكري، وتعاني من ضعف الشفاء ولكن لا تتطور الجروح المزمنة14. متوسط مستويات الجلوكوز في الدم حول 200 ملغ / دل, ولكن يمكن أن تكون عالية مثل 400 ملغ / دل15. عندما يتم حث مستويات عالية من الإجهاد التأكسدي (OS) في أنسجة الجرح مباشرة بعد الجرح ، يصبح الجرحمزمنا 16. وتعتبر الجروح المزمنة لمدة 20 يوما ً وتبقى مفتوحة لمدة 60 يوماً أو أكثر. ويمكن رؤية Biofilm التي تنتجها البكتيريا النامية بداية ثلاثة أيام بعد الجرح. يمكن رؤية فيلم حيوي ناضج بعد 20 يوما من الإصابة ويستمر حتى إغلاق أي من الجرح. البكتيريا التي تشكل biofilm نجد في هذه الفئران وجدت أيضا في الجروح المزمنة السكري الإنسان.
يتم تحفيز الإجهاد التأكسدي عن طريق علاج الجروح مع اثنين من مثبطات الإنزيمات المضادة للأكسدة، كاتالاز والجلوتاثيون بيروكسيداز، وهما إنزيمان مع القدرة على كسر بيروكسيد الهيدروجين. بيروكسيد الهيدروجين هو نوع من الأكسجين التفاعلي ويمكن أن يسبب تلف الخلايا من خلال أكسدة البروتينات والدهون والحمض النووي. كاتالاز يحفز تحلل بيروكسيد الهيدروجين إلى مواد كيميائية أقل ضررا الأكسجين والماء. 3-أمينو-1,2,4-تريازول (ATZ) يمنع الكاتالاز عن طريق ربط على وجه التحديد وبشكل مشترك إلى المركز النشط للإنزيم، وتعطيله17،18،19. وقد استخدمت ATZ لدراسة آثار الإجهاد التأكسدي على حد سواء في المختبر وفي الجسم الحي من خلال تثبيط catalase20،21،22،23،24. الجلوتاثيون بيروكسيداز يحفز الحد من بيروكسيد الهيدروجين من خلال مضادات الأكسدة، الجلوتاثيون، وهو إنزيم مهم يحمي الخلية من الإجهاد التأكسدي25. حمض ميركابتوسوتشيك (MSA) يمنع الجلوتاثيون بيروكسيداز عن طريق ربط الموقع النشط سيلينوسيستين للإنزيم مع ثيول، وتعطيل ه26. وقد استخدمت MSA لدراسة آثار الإجهاد التأكسدي في المختبر وفي الجسم الحي وكذلك20،27،28.
هذا النموذج الجديد من الجروح المزمنة هو نموذج قوي للدراسة لأنه يشارك العديد من نفس الميزات التي لوحظت في الجروح المزمنة السكري البشري، بما في ذلك التهاب لفترات طويلة من زيادة نظام التشغيل وتشكيل biofilm الطبيعية من ميكروبيوم الجلد. وقد ضعفت الجروح التفاعل الجلدي والبشرة، وترسب المصفوفة غير الطبيعية، وضعف تكوين الأوعية الدموية والأوعية الدموية التالفة. سوف تتطور الجروح المزمنة في كل من الفئران الذكور والإناث، بحيث يمكن استخدام كلا الجنسين لدراسة الجروح المزمنة. ولذلك، فإن نموذج الجرح المزمن يمكن أن يسهم بشكل كبير في تعزيز الفهم الأساسي لكيفية بدء هذه الجروح. استخدام هذا النموذج الجروح المزمنة يمكن أن توفر إجابات على الأسئلة الأساسية حول كيفية بدء المزمنة / تحقيقها من خلال مساهمات من علم وظائف الأعضاء من ضعف التئام الجروح والميكروبيوم من المضيف.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:795px;" width="794">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:308px;">B6.BKS(D)-Leprdb/J&#160;</td>
			<td style="width:176px;">The Jackson Laboratory&#160;</td>
			<td style="width:107px;">00697</td>
			<td style="width:204px;">Homozygotes and heterozygotes available&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:308px;">Nair Hair Remover Lotion with Soothing Aloe and Lanolin</td>
			<td style="width:176px;">Nair</td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;">a chemical depilatory</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:308px;">Buprenex (buprenorphine HCl)</td>
			<td style="width:176px;">Henry Stein Animal Health</td>
			<td style="width:107px;">059122</td>
			<td style="width:204px;">0.3 mg/ml, Class 3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">3-Amino-1,2,4-triazole (ATZ)</td>
			<td style="width:176px;">TCI</td>
			<td style="width:107px;">A0432</td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Mercaptosuccinic acid (MSA)</td>
			<td style="width:176px;">Aldrich</td>
			<td style="width:107px;">88460</td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Phosphate buffer solution (PBS)</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;">autoclave steriled</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:308px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:176px;">Henry Schein Animal Health</td>
			<td style="width:107px;">029405</td>
			<td style="width:204px;">NDC 11695-6776-2</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:308px;">Oxygen</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;">Tank must be compatible with vaporizing system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Isoflurane vaporizer</td>
			<td style="width:176px;">JA Baulch &#38; Associates&#160;</td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Wahl hair clipper</td>
			<td style="width:176px;">Wahl</td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;">Lithium Ion Pro</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Acu Punch 7mm skin biopsy punches</td>
			<td style="width:176px;">Acuderm Inc.</td>
			<td style="width:107px;">P750</td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:308px;">Tegaderm&#160;</td>
			<td style="width:176px;">3M</td>
			<td style="width:107px;">Ref: 1624W</td>
			<td style="width:204px;">Transparent film dressing (6 cm x 7 cm)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Heating pad</td>
			<td style="width:176px;">Conair</td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;">Moist Dry Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:308px;">Insulin syringes</td>
			<td style="width:176px;">BD</td>
			<td style="width:107px;">329461</td>
			<td style="width:204px;">0.35 mm (28G) x 12.7 mm (1/2&#34;)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">70% ethanol</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Kimwipes</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Tweezers</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Sharp surgical scissors</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Thin metal spatula</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Tubing</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Mouse nose cone</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Gloves</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">small plastic containers</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protocol to create chronic wounds in diabetic mice

تتطور الجروح المزمنة نتيجة للتنظيم المعيب في واحدة أو أكثر من العمليات الخلوية والجزيئية المعقدة التي تنطوي على الشفاء السليم. أنها تؤثر على ~ 6.5M الناس وتكلفة ~ $40B / سنة في الولايات المتحدة وحدها. على الرغم من أنه تم بذل جهد كبير في فهم كيفية تطور الجروح المزمنة في البشر، لا تزال الأسئلة الأساسية دون إجابة. في الآونة الأخيرة، قمنا بتطوير نموذج فأر جديد للجروح المزمنة السكرية التي لها العديد من خصائص الجروح المزمنة البشرية. باستخدام db/db-/- الفئران، يمكننا توليد الجروح المزمنة عن طريق تحفيز مستويات عالية من الإجهاد التأكسدي (OS) في أنسجة الجرح مباشرة بعد الإصابة، وذلك باستخدام علاج لمرة واحدة مع مثبطات محددة للإنزيمات المضادة للأكسدة catalase وcatalase الجلوتاثيون بيروكسيداز. هذه الجروح لديها مستويات عالية من نظام التشغيل، وتطوير biofilm بشكل طبيعي، وتصبح مزمنة تماما في غضون 20 يوما بعد العلاج، ويمكن أن تبقى مفتوحة أكثر لأكثر من 60 يوما. هذا النموذج الجديد لديه العديد من الميزات من الجروح المزمنة السكري في البشر، وبالتالي يمكن أن تسهم بشكل كبير في تعزيز الفهم الأساسي لكيفية الجروح تصبح مزمنة. وهذا إنجاز كبير لأن الجروح المزمنة في البشر تسبب آلاما وكربا كبيرة للمرضى وتؤدي إلى بتر الأطراف إذا لم تحل. وعلاوة على ذلك، فإن هذه الجروح مكلفة للغاية وتستغرق وقتا طويلا لعلاجها، وتؤدي إلى خسارة كبيرة في الدخل الشخصي للمرضى. التقدم في هذا المجال من الدراسة من خلال استخدام نموذج الجرح المزمن لدينا يمكن أن تحسن بشكل كبير الرعاية الصحية للملايين الذين يعانون في ظل هذه الحالة المنهكة. وفي هذا البروتوكول، نوصف بتفصيل كبير الإجراء الذي يسبب الجروح الحادة لتصبح مزمنة، وهو ما لم يحدث من قبل.

ويبين الشكل 5 مثالاً على جرح دون علاج مثبطات تتقدم نحو إغلاق الجرح وجرح مع علاج مثبطات تتقدم نحو المزمنة. وقد تركت خلع الملابس شفافة في مكان على الجرح المزمن بحيث يمكن رؤية biofilm وتراكم السوائل.
يتم بدء الجروح المزمنة في أقل ...

Watch this Scientific Journal Video about Protocol to Create Chronic Wounds in Diabetic Mice at JoVE.com

Protocol to Create Chronic Wounds in Diabetic Mice

يتم تطوير الجروح المزمنة من الجروح الحادة على نموذج الماوس السكري عن طريق تحفيز مستويات عالية من الإجهاد التأكسدي بعد جرح جلدي كامل السماكة. يتم علاج الجرح مع مثبطات للكاتالاز والجلوتاثيون بيروكسيداز، مما أدى إلى ضعف الشفاء وتطوير biofilm من قبل البكتيريا الموجودة في ميكروبيوم الجلد.

بروتوكول لخلق الجروح المزمنة في الفئران السكري

Chronic wounds develop as a result of defective regulation in one or more complex cellular and molecular processes involved in proper healing. They impact ...

يمكن لهذا النموذج الماوس تساعد في الإجابة على الأسئلة في المجال الطبي من مزمنة الجرح. الميزة الرئيسية لهذا النموذج هو أن الجروح المزمنة في الفئران تحاكي العديد من جوانب الجروح المزمنة في البشر. للبدء ، ضع الماوس على سطح نظيف والاحتفاظ به في مكانه عن طريق قرص قاعدة ذيله.ثم إعداد مقصات الشعر وتكون على استعداد لسحب بسرعة بعيدا إذا كان الماوس يجعل أي حركات مفاجئة. حلق كامل الظهر من الرقبة إلى الذيل بما في ذلك جميع أنحاء الذيل. تشغيل طفيفة شفرة ضد اتجاه نمو الشعر لقطع الأكثر كفاءة.لا تضغط على المقصات في عمق الجلد لأن هذا يمكن أن كدمة أو قطع. المقبل، وإعداد الجلد لتطبيق محلول إزالة الشعر. تبلّل الجلد بمنشفة ورقية منقوقة بالماء لمنع الحروق الكيميائية.اضغط بخفة مع ما يكفي من الضغط لتبلل قص الشعر إلى أسفل ضد الجلد. ثم في حين أن الجلد الرطب، فرك dollop صغيرة من محلول مزيل في المنطقة حلق لمدة 15 إلى 20 ثانية. بمجرد تطبيقها، دع محلول يتفاعل مع الجلد لمدة 20 إلى 45 ثانية.قبل الشطف قبالة محلول، مسح طفيفة بعيدا بعض محلول في مواقع مختلفة للتحقق من رد فعل. إذا كان الجلد ورديًا وبلا شعر ، فإن رد الفعل يكون كاملًا. ثم قبضة الماوس لغسله.استخدام اليد nondominant مع الإبهام اضغط أسفل قاعدة ذيله ضد النخيل وإغلاق الأصابع الأخرى. ثم مع أنف الفأر صعودا وبعيدا عن الماء، والسماح للمياه تشغيل أكثر من ظهر الحيوان. ثم بسرعة، ولكن بلطف، فرك الجزء الخلفي من الماوس مع اليد الأخرى لغسل غسول.بعد إزالة كل كريم إزالة الشعر، وتجفيف الجلد بمنشفة ورقية. من المهم عدم تطبيق محلول على الأذنين أو الذيل أو أي مكان بالقرب من الوجه. إذا كان هذا ينبغي أن يحدث، على الفور مسح محلول مع منشفة مبللة ثم تشغيل المياه فوق الماوس لمنع الأضرار التي لحقت هذه المناطق.إذا لاحظت أي بقع داكنة بعد استخدام كريم، إعادة تطبيق كريم لتلك المناطق. سوف تنمو بقع داكنة من الجلد الشعر أسرع طوال مدة التجربة. حتى مقطع الشعر القصير كل ثلاثة إلى خمسة أيام عند الضرورة.تصحيح أو اثنين التي ليست على مدى الجرح الموقع هو مقبول، ولكن إذا كان الجزء الخلفي من الماوس لديه بقع أكثر داكنة، لا تستخدم لنموذج الجرح المزمن. بعد إزالة الشعر، منزل الماوس وحده ليوم واحد على الأقل قبل الجرح لأن الجلد سوف تكون حساسة جدا من محلول إزالة الشعر. قبل 30 دقيقة من الجراحة، حقن الماوس مع 120 ميكرولتر من البوبرينورفين intraperitoneally في برنامج تلفزيوني عقيمة.تفترض كافة وحدات التخزين في هذا الإجراء ماوس 60 غرام. قبل 20 دقيقة من الجراحة، حقن الماوس مع 480 ميكرولترات من ATZ intraperitoneally في برنامج تلفزيوني عقيمة. تقسيم وحدة التخزين على جانبي البطن.بعد إدارة ATZ، ضع الماوس في حاوية بلاستيكية صغيرة فوق وسادة تدفئة دافئة حتى تبدأ الجراحة. غطي الحاوية الصغيرة بمنشفة ورقية للمساعدة في احتواء الحرارة. يجب أن تهدئة الماوس كما أنه يدفأ.بعد التأكد من حالة تخدير، المضي قدما في الجرح. لبدء الإجراء الجرح، رش مسحة كيمية مع 70٪ الإيثانول لمسح الجزء الخلفي من الماوس لتنظيف موقع الجرح وسطح الجلد. لا يمسح بشكل مفرط أو سيكون هناك خطر قتل البكتيريا الموجودة على الجلد.يعتمد نجاح نموذج الجرح المزمن على الظروف غير العقيمة. هذه الفئران ليست خالية من الجراثيم ويتم وضعها في فيفاريوم التقليدية. الميكروبيوم البكتيرية التي توجد على الجلد أمر بالغ الأهمية لبدء وتطوير الجروح المزمنة اللاحقة عند العلاج مع مثبطات الانزيمات المضادة للأكسدة.الآن النظر في مكان المكان الجرح. من الناحية المثالية، استخدم الجانب الظهري من الماوس مركزة وبعيدا عن بقع داكنة من الجلد. الآن تنفيذ الجرح إلى إجراء خلع الملابس في 30 إلى 45 ثانية.أولا اضغط بخفة على لكمة خزعة الجلد سبعة ملليمتر على موقع الجرح المطلوب وتحريف لكمة حول عميقة بما يكفي لترك انطباع من لكمة. ثم قم باستئصال الجلد المحدد عن طريق سحب ما يصل إلى مركز لكمة مع ملاقط وقطع على طول الخطوط العريضة مع مقص الجراحية. بمجرد الانتهاء، تغطية الجرح بحزم مع نصف قطعة من صلصة الفيلم شفافة.في غضون 10 دقائق من الجرح، وتطبيق 60 ميكرولتر aliquot من MSA في برنامج تلفزيوني عقيمة وإيداع MSA موضعيا على الجرح. في وقت لاحق، ست ساعات بعد الجراحة، وإدارة آخر يفعل من البوبرينورفين. ويمكن إعطاء جرعات إضافية حسب الحاجة.يحدث بدء الجروح المزمنة في أقل من ست ساعات ويتم تغيير هامش الجرح بشكل واضح من الإجهاد التأ المؤاكس. الجرح المزمن هو الجرح الذي لا يزال مفتوحا، الموسع مقارنة بالجرح الأولي ويحتوي على بيو فيلم. بعد 20 يوما، الجرح هو في كامل المزمنة.بيو فيلم تشكيل البكتيريا التي تهيمن على موقع الجرح وتشمل Pseudomonas aeruginosa، Enterobacter cloacae، ومختلف أنواع المكورات العنقودية وكورينباكتيريوم. وتوجد هذه البكتيريا أيضا في الجروح المزمنة البشرية. بعد مشاهدة هذا الفيديو يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية خلق الجروح المزمنة في الفئران.بمجرد أن تكون قد أنشأت هذه الجروح المزمنة ، يمكنك استخدامها بعد ذلك للتحقيق في العديد من الآليات الجزيئية الخلوية المشاركة في بدء مزمنة الجرح.

Research

JoVE Journal

Medicine

Protocol for Long Duration Whole Body Hyperthermia in Mice

بروتوكول لونغ ارتفاع الحرارة المدة الجسم الجامع في الفئران

Hyperthermia is a general term used to define the increase in core body temperature above normal. It is often used to describe the increased core body ...

Neo-Islet Formation in Liver of Diabetic Mice by Helper-dependent Adenoviral Vector-Mediated Gene Transfer

الجدد في جزيرة تشكيل الكبد من الفئران من السكري من مساعد التي تعتمد على الغدانية نقل الجينات بوساطة ناقلات

Type 1 diabetes is caused by T cell-mediated autoimmune destruction of insulin-producing cells in the pancreas. Until now insulin replacement is still the ...

Collecting And Measuring Wound Exudate Biochemical Mediators In Surgical Wounds

جمع وقياس وسطاء الافرازات الكيميائية الحيوية في الجرح الجروح الجراحية

We describe a methodology by which we are able to collect and measure biochemical inflammatory and nociceptive mediators at the surgical wound site. ...

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

تقييم إفراغ المعدة في الفئران من السكري غير البدناء باستخدام [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-الأوكتانويك اختبار التنفس حمض

Gastric emptying studies in mice have been limited by the inability to follow gastric emptying changes in the same animal since the most commonly used ...

Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol

تعايش التصاقي في الفئران: بروتوكول مفصل

Parabiosis is a surgical union of two organisms allowing sharing of the blood circulation. Attaching the skin of two animals promotes formation of ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

الردود المثانة البولية انتفاخ مستدعى الحشوي الحركي نموذجا لألم المثانة في الفئران

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

Slow-release Drug Delivery through Elvax 40W to the Rat Retina: Implications for the Treatment of Chronic Conditions

بطء الإفراج تسليم المخدرات من خلال Elvax 40W إلى الجرذ الشبكية: الآثار المترتبة على علاج الحالات المزمنة

Diseases of the retina are difficult to treat as the retina lies deep within the eye. Invasive methods of drug delivery are often needed to treat these ...

A Simple Mechanical Procedure to Create Limbal Stem Cell Deficiency in Mouse

إجراء ميكانيكي بسيط لإنشاء الحوفي نقص الخلايا الجذعية في الفأر

Limbal stem cell deficiency (LSCD) is a state of malfunction or loss of limbal epithelial stem cells, after which the corneal epithelium is replaced with ...

Two Techniques to Create Hypoparathyroid Mice: Parathyroidectomy Using GFP Glands and Diphtheria-Toxin-Mediated Parathyroid Ablation

اثنين من التقنيات لخلق الفئران قصور الدريقات: استئصال جارات الدرق عن طريق GFP الغدد والخناق-السمية بوساطة الغدة الدرقية تذرية

Hypoparathyroidism (HP) is a disorder characterized by low levels of PTH which lead to hypocalcemia, hyperphosphatemia, and low bone turnover. The most ...

Generation of a Chronic Obstructive Pulmonary Disease Model in Mice by Repeated Ozone Exposure

جيل طراز انسداد الشعب الهوائية المزمن في الفئران بالتعرض للأوزون المتكررة

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is characterized by persistent airflow limitation and lung parenchymal destruction. It has a very high ...