Name: protocol to create chronic wounds in diabetic mice
Uploaded: 2019-09-25T13:30:00
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Die Autoren haben keine Bestätigungen.

Alle Experimente wurden in Übereinstimmung mit den Bundesbestimmungen und der Politik der University of California und Verfahren abgeschlossen und wurden von der University of California, Riverside IACUC genehmigt.
1. Tier
<ol><li>Verwenden Sie diabetische und fettleibige B6. BKS(D)-Leprdb/J Mäuse für das chronische Wundmodell. Kaufoptionen umfassen entweder Heterozygoten für die Zucht oder Homozygoten direkt für Experimente.</li>
	<li>Züchte nasch heterozygote Män...

Sobald chronische Wunden an den Mäusen entstehen, kann das Modell verwendet werden, um beeinträchtigte Wundheilungsprozesse zu untersuchen, die an der Initiierung der Chronik beteiligt sind. Das Modell kann auch verwendet werden, um die Wirksamkeit einer breiten Palette von Chemikalien und Medikamenten zu testen, die chronische Wundentwicklung und beeinträchtigungsende Heilung umkehren und zu Wundverschluss und Heilung führen können. Es können verschiedene Zeitpunkte nach Beginn der Chronik untersucht werden: z...

Die Wundheilung umfasst komplexe zelluläre und molekulare Prozesse, die zeitlich und räumlich reguliert sind, in sequenziellen und überlappenden Stadien organisiert sind, die viele verschiedene Zelltypen umfassen, einschließlich, aber nicht beschränkt auf die Immunantwort und die Gefäße. System1. Unmittelbar nachdem die Haut eine Verletzung erlitten hat, aggregieren sich Faktoren und Blutzellen zur Wundstelle und initiieren die Gerinnungskaskade zu einem Gerinnsel. Nachdem die Homöostase erreicht ist, glaudern die Blutgefäße, um Sauerstoff, Nährstoffe, Enzyme, Antikörper und chemotaktische Faktoren, die Polymorphonukleozyten zur Räumung des Wundbettes von fremdem Schutt reinigen und proteolytische Enzyme absondern, in die Wundstelle zu lassen. 2. Aktivierte Blutplättchen sezernieren eine Vielzahl von Wachstumsfaktoren, um die Keratinozyten an der Wundkante zu stimulieren, um den verwundeten Bereich neu zu epithelisieren. Monozyten, die an der Wundstelle rekrutiert werden, differenzieren sich in Makrophagen, die Phagozytosebakterien und tote Neutrophile phagozytosieren und zusätzliche Faktoren absondern, um keratinozyte proliferative und pro-wandernde Signale aufrechtzuerhalten. In der Proliferationsphase, während die Reepithelisierung anhält, setzt neues Granulationsgewebe, bestehend aus Fibroblasten, Monozyten/Makrophagen, Lymphozyten und Endothelzellen, den Wiederaufbauprozess fort2. Die Angiogenese wird durch die Förderung der Endothelzellproliferation und -migration stimuliert, was zu einer neuen Gefäßentwicklung führt. Die Epithelisierung und Remodellierung der extrazellulären Matrix konstruieren eine Barriere gegen die Umwelt. Wenn sich die Wunde heilt und sich granulationsgewebe zu einer Narbe entwickelt, eliminiert Apoptose entzündliche Zellen, Fibroblasten und Endothelzellen, ohne zusätzliche Gewebeschäden zu verursachen. Die Zugfestigkeit des Gewebes wird durch Fibroblasten verstärkt, die verschiedene Komponenten der extrazellulären Matrix wie Kollagen umbauen, so dass das neu gebildete Gewebe fast so stark und flexibel ist wie die unverwundete Haut2.
Jede Abweichung von dieser stark abgestimmten Progression hin zum Wundverschluss führt zu beeinträchtigten und/oder chronischen Wunden3. Chronische Wunden sind gekennzeichnet durch erhöhten oxidativen Stress, chronische Entzündung, beschädigte Mikrovaskulatur und abnorme Kollagenmatrix in der Wunde4. Oxidativer Stress, insbesondere in derWunde, kann den Wundverschluss 2,5verzögern. Wenn in der ersten Phase der Wundheilung die Entzündliche Phase unreguliert wird, geht das Wirtsgewebe aufgrund eines kontinuierlichen Zustroms von Entzündlichen Zellen5, die zytotoxische Enzyme freisetzen, einer Zunahme freier Sauerstoffradikale und unregulierte Entzündungsmediatoren, die zum Zelltod6,7führen.
In dieser zerstörerischen Mikroumgebung nutzen biofilmbildende Bakterien wirtsnährstoffe und tragen zur Schädigung des Wirtsgewebesbei 2. Diese Biofilme sind schwer zu kontrollieren und zu entfernen, da die hydratisierten extrazellulären polymeren Substanzen, die aus Proteinen, DNA, RNA und Polysacchariden bestehen, es Bakterien, die im Inneren leben, ermöglichen, gegenüber konventionellen Antibiotikatherapien tolerant zu sein und sich der angeborene und adaptive Immunantwort des Wirts2,8,9.
Das Studium chronischer Wunden ist von entscheidender Bedeutung, da sie 6,5 Millionen Us-Dollar betreffen und allein in den USA 40 Milliarden DOLLAR pro Jahr kosten10. Patienten mit Diabetes haben ein erhöhtes Risiko für die Entwicklung chronischer Wunden, die einer Amputation bedürfen, um die Ausbreitung der Infektion einzudämmen. Diese Patienten haben ein Sterblichkeitsrisiko von 50 % innerhalb von 5 Jahren nach der Amputation, das dem Pathophysiologiemechanismus von Diabetes11zugeschrieben wird. Die Beziehung zwischen dem Immunsystem des Wirts und dem Mikrobiom in der Wundheilung ist ein wichtiges Thema der laufenden Forschung, da die Folgen chronischer Wunden, wenn ungelöst, Amputation und Tod12umfassen.
Obwohl erhebliche Anstrengungen unternommen wurden, um zu verstehen, wie sich chronische Wunden beim Menschen entwickeln, ist es immer noch unklar, wie und warum sich chronische Wunden bilden. Experimente zur Untersuchung der Mechanismen der beeinträchtigungen Heilung sind beim Menschen schwierig durchzuführen, und Wundheilungsspezialisten sehen nur Patienten mit chronischen Wunden, die bereits seit Wochen bis Monaten die Chronik erreicht haben. So sind Spezialisten nicht in der Lage zu untersuchen, welche Prozesse schief gelaufen sind, die die Wunde zu entwickeln, um chronisch zu werden2. Es fehlt an Tiermodellen, die die Komplexität menschlicher chronischer Wunden rekapitulieren. Bis zur Entwicklung unseres Modells gab es kein Modell für chronische Wundstudien.
Das chronische Wundmodell wurde bei Mäusen entwickelt, die eine Mutation im Leptinrezeptor haben (db/db-/-) 13. Diese Mäuse sind fettleibig, diabetisch, und haben beeinträchtigte Heilung, aber entwickeln keine chronischen Wunden14. Der Blutzuckerspiegel liegt im Durchschnitt bei 200 mg/dL, kann aber bis zu 400 mg/dL15betragen. Wenn ein hoher oxidativer Stress (OS) im Wundgewebe unmittelbar nach der Wundverwundung induziert wird, wird die Wunde chronisch16. Die db/db-/- Wunden gelten von 20 Tagen als chronisch und bleiben 60 Tage oder mehr geöffnet. Biofilm, der von Bakterien produziert wird, entwickelt sich ab drei Tagen nach der Verwundung; ein ausgereifter Biofilm ist 20 Tage nach der Verwundung zu sehen und besteht bis zum Wundenverschluss. Die biofilmbildenden Bakterien, die wir in diesen Mäusen finden, finden sich auch in menschlichen diabetischen chronischen Wunden.
Oxidativer Stress wird induziert, indem die Wunden mit zwei Inhibitoren antioxidativer Enzyme, Kataalase und Glutathionperoxidase, zwei Enzymen mit der Fähigkeit, Wasserstoffperoxid abzubauen, behandelt werden. Wasserstoffperoxid ist eine reaktive Sauerstoffspezies und kann durch die Oxidation von Proteinen, Lipiden und DNA zelluläre Schäden verursachen. Kataase katalysiert die Zersetzung von Wasserstoffperoxid in weniger schädliche Chemikalien Sauerstoff und Wasser. 3-Amino-1,2,4-Triazol (ATZ) hemmt die Kataalase durch spezifische und kovalente Bindung an das aktive Zentrum des Enzyms und inaktiviert es17,18,19. ATZ wurde verwendet, um die Auswirkungen von oxidativem Stress sowohl in vitro als auch in vivo durch die Hemmung der Kataalase20,21,22,23,24zu untersuchen. Glutathionperoxidase katalysiert die Reduktion von Wasserstoffperoxid durch das Antioxidans Glutathion und ist ein wichtiges Enzym, das die Zelle vor oxidativem Stress schützt25. Mercaptosuccinsäure (MSA) hemmt Glutathionperoxidase durch Bindung an die Selenocystein-aktive Stelle des Enzyms mit Thiol, inaktiviert es26. MSA wurde verwendet, um die Auswirkungen von oxidativem Stress in vitro und in vivo sowie20,27,28zu untersuchen.
Dieses neuartige Modell chronischer Wunden ist ein mächtiges Modell zu studieren, weil es viele der gleichen Merkmale in menschlichen diabetischen chronischen Wunden beobachtet teilt, einschließlich längerer Entzündung entzeln von erhöhten OS und natürliche Biofilmbildung aus Hautmikrobiom. Die Wunden haben eine beeinträchtigte dermal-epidermale Wechselwirkung, abnormale Matrixablagerung, schlechte Angiogenese und beschädigte Vaskulatur. Chronische Wunden entwickeln sich sowohl bei männlichen als auch bei weiblichen Mäusen, so dass beide Geschlechter verwendet werden können, um chronische Wunden zu untersuchen. Daher kann das chronische Wundmodell wesentlich dazu beitragen, das grundlegende Verständnis dessen, wie solche Wunden beginnen, zu fördern. Mit diesem chronischen Wundmodell können Antworten auf grundlegende Fragen darüber gegeben werden, wie Die Chronik durch Beiträge aus der Physiologie der beeinträchtigten Wundheilung und dem Mikrobiom des Wirts initiiert/erreicht wird.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:795px;" width="794">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:308px;">B6.BKS(D)-Leprdb/J&#160;</td>
			<td style="width:176px;">The Jackson Laboratory&#160;</td>
			<td style="width:107px;">00697</td>
			<td style="width:204px;">Homozygotes and heterozygotes available&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:308px;">Nair Hair Remover Lotion with Soothing Aloe and Lanolin</td>
			<td style="width:176px;">Nair</td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;">a chemical depilatory</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:308px;">Buprenex (buprenorphine HCl)</td>
			<td style="width:176px;">Henry Stein Animal Health</td>
			<td style="width:107px;">059122</td>
			<td style="width:204px;">0.3 mg/ml, Class 3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">3-Amino-1,2,4-triazole (ATZ)</td>
			<td style="width:176px;">TCI</td>
			<td style="width:107px;">A0432</td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Mercaptosuccinic acid (MSA)</td>
			<td style="width:176px;">Aldrich</td>
			<td style="width:107px;">88460</td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Phosphate buffer solution (PBS)</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;">autoclave steriled</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:308px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:176px;">Henry Schein Animal Health</td>
			<td style="width:107px;">029405</td>
			<td style="width:204px;">NDC 11695-6776-2</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:308px;">Oxygen</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;">Tank must be compatible with vaporizing system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Isoflurane vaporizer</td>
			<td style="width:176px;">JA Baulch &#38; Associates&#160;</td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Wahl hair clipper</td>
			<td style="width:176px;">Wahl</td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;">Lithium Ion Pro</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Acu Punch 7mm skin biopsy punches</td>
			<td style="width:176px;">Acuderm Inc.</td>
			<td style="width:107px;">P750</td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:308px;">Tegaderm&#160;</td>
			<td style="width:176px;">3M</td>
			<td style="width:107px;">Ref: 1624W</td>
			<td style="width:204px;">Transparent film dressing (6 cm x 7 cm)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Heating pad</td>
			<td style="width:176px;">Conair</td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;">Moist Dry Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:308px;">Insulin syringes</td>
			<td style="width:176px;">BD</td>
			<td style="width:107px;">329461</td>
			<td style="width:204px;">0.35 mm (28G) x 12.7 mm (1/2&#34;)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">70% ethanol</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Kimwipes</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Tweezers</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Sharp surgical scissors</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Thin metal spatula</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Tubing</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Mouse nose cone</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Gloves</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">small plastic containers</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protocol to create chronic wounds in diabetic mice

Chronische Wunden entwickeln sich als Folge einer fehlerhaften Regulation in einem oder mehreren komplexen zellulären und molekularen Prozessen, die an der richtigen Heilung beteiligt sind. Sie wirken sich auf 6,5 Millionen US-Dollar aus und kosten allein in den USA 40 Milliarden US-Dollar pro Jahr. Obwohl erhebliche Anstrengungen unternommen wurden, um zu verstehen, wie sich chronische Wunden beim Menschen entwickeln, bleiben grundlegende Fragen unbeantwortet. Kürzlich haben wir ein neuartiges Mausmodell für diabetische chronische Wunden entwickelt, die viele Merkmale menschlicher chronischer Wunden aufweisen. Mit db/db-/- Mäusen können wir chronische Wunden erzeugen, indem wir unmittelbar nach der Wundwunde hohe Konzentrationen von oxidativem Stress (OS) im Wundgewebe induzieren, wobei eine einmalige Behandlung mit Inhibitoren speziell für die antioxidativen Enzyme Catalase und Glutathionperoxidase. Diese Wunden haben ein hohes OS-Niveau, entwickeln Biofilm natürlich, werden innerhalb von 20 Tagen nach der Behandlung vollständig chronisch und können mehr als 60 Tage offen bleiben. Dieses neuartige Modell hat viele Merkmale diabetischer chronischer Wunden beim Menschen und kann daher wesentlich dazu beitragen, das grundlegende Verständnis davon zu fördern, wie Wunden chronisch werden. Dies ist ein großer Durchbruch, weil chronische Wunden beim Menschen erhebliche Schmerzen und Leiden für Patienten verursachen und zu einer Amputation führen, wenn sie ungelöst sind. Darüber hinaus sind diese Wunden sehr teuer und zeitaufwändig zu behandeln und führen zu erheblichen Einkommensverlusten für die Patienten. Fortschritte in diesem Studienbereich durch die Verwendung unseres chronischen Wundmodells können die Gesundheitsversorgung von Millionen von Menschen, die unter diesem schwächenden Zustand leiden, erheblich verbessern. In diesem Protokoll beschreiben wir ausführlich das Verfahren, um akute Wunden chronisch zu werden, was bisher nicht geschehen ist.

Abbildung 5 zeigt ein Beispiel für eine Wunde ohne Behandlung von Inhibitoren, die sich in Richtung Wundverschluss bewegen, und eine Wunde mit der Behandlung von Inhibitoren, die in Richtung Chronik voranschreiten. Der transparente Verband wurde auf der chronischen Wunde belassen, so dass Biofilm und Flüssigkeitsansammlung sichtbar sind.
Chronische Wundinitiation findet in weniger als 6 Stunden st...

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Protocol to Create Chronic Wounds in Diabetic Mice

Chronische Wunden werden aus akuten Wunden auf einem diabetischen Mausmodell entwickelt, indem sie nach einer schweren Kutanwunde einen hohen Grad an oxidativem Stress induzieren. Die Wunde wird mit Inhibitoren für Katathase und Glutathionperoxidase behandelt, was zu einer beeinträchtigungen Heilung und Biofilmentwicklung durch Bakterien im Hautmikrobiom führt.

Protokoll zur Herstellung chronischer Wunden bei diabetischen Mäusen

Chronic wounds develop as a result of defective regulation in one or more complex cellular and molecular processes involved in proper healing. They impact ...

Dieses Mausmodell kann helfen, Fragen im medizinischen Bereich der Wundchronik zu beantworten. Der große Vorteil dieses Modells ist, dass die chronischen Wunden bei Mäusen viele Aspekte der chronischen Wunden beim Menschen imitieren. Um zu beginnen, legen Sie die Maus auf eine saubere Oberfläche und halten Sie sie an Ort und Stelle, indem Sie die Basis ihres Schwanzes kneifen.Dann bereiten Sie die Haarschneider vor und sind bereit, sie schnell wegzuziehen, wenn die Maus plötzliche Bewegungen macht. Rasieren Sie den ganzen Rücken vom Hals bis zum Schwanz einschließlich rund um den Schwanz. Führen Sie die Klinge leicht gegen die Richtung des Haarwachstums für den effizientesten Schnitt.Drücken Sie die Clippers nicht tief in die Haut, da dies prellungen oder schneiden kann. Als nächstes bereiten Sie die Haut für eine Anwendung der Enthaarungslotion. Befeuchten Sie die Haut mit einem wassergetränkten Papiertuch, um chemische Verbrennungen zu verhindern.Drücken Sie leicht mit genügend Druck, um die geschnittenen Haare auf die Haut zu befeuchten. Dann, während die Haut nass ist, reiben Sie eine kleine Puppe op der Enthaarungslotion in den rasierten Bereich für 15 bis 20 Sekunden. Nach dem Auftragen lassen Sie die Lotion 20 bis 45 Sekunden lang mit der Haut reagieren.Vor dem Abspülen der Lotion, leicht wischen einige Lotion an verschiedenen Stellen, um die Reaktion zu überprüfen. Wenn die Haut rosa und haarlos ist, ist die Reaktion vollständig. Greifen Sie dann die Maus, um sie abzuwaschen.Drücken Sie mit der nicht dominanten Hand mit dem Daumen die Basis ihres Schwanzes gegen die Handfläche und schließen Sie die anderen Finger. Dann mit der Nase der Maus auf und weg vom Wasser, lassen Sie Wasser über den Rücken des Tieres laufen. Dann schnell, aber sanft, reiben Sie die Rückseite der Maus mit der anderen Hand, um die Lotion wegzuwaschen.Nach dem Entfernen der enthaarten Creme die Haut mit einem Papiertuch trocknen. Es ist wichtig, keine Lotion auf die Ohren, den Schwanz oder irgendwo in der Nähe des Gesichts aufzutragen. Wenn dies geschehen sollte, wischen Sie sofort die Lotion mit einem nassen Handtuch weg und laufen Sie dann Wasser über die Maus, um Schäden an diesen Bereichen zu verhindern.Wenn dunkle Flecken nach der Verwendung der Creme bemerkt werden, wenden Sie die Creme erneut auf diese Bereiche an. Die dunklen Flecken der Haut wachsen Haare schneller während der Dauer des Experiments. Also schneiden Sie die Haare kurz alle drei bis fünf Tage, wenn nötig.Ein oder zwei Pflaster, die sich nicht über der Wundstelle befinden, ist akzeptabel, aber wenn die Rückseite der Maus mehr dunkle Flecken hat, verwenden Sie sie nicht für das chronische Wundmodell. Nach dem Entfernen der Haare, hausieren Sie die Maus allein für mindestens einen Tag vor der Wundung, weil die Haut zu empfindlich von der Enthaarungslotion sein wird. 30 Minuten vor der Operation die Maus mit 120 Mikroliter Buprenorphin intraperitoneal in steriles PBS injizieren.Alle Volumes in diesem Verfahren gehen von einer 60-Gramm-Maus aus. 20 Minuten vor der Operation die Maus mit 480 MikroliterAT ATZ intraperitoneal in steriles PBS injizieren. Teilen Sie das Volumen auf beiden Seiten des Bauches.Nach der Verabreichung des ATZ, legen Sie die Maus in einem kleinen Kunststoffbehälter auf einem warmen Heizkissen, bis die Operation beginnt. Bedecken Sie den kleinen Behälter mit einem Papiertuch, um die Hitze einzudämmen. Die Maus sollte sich beruhigen, wenn sie sich erwärmt.Nach Bestätigung eines anästhesierten Zustands, fahren Sie mit der Verwundung fort. Um den Wundvorgang zu beginnen, sprühen Sie ein Chemisches mit 70% Ethanol, um die Rückseite der Maus zu wischen, um die Wundstelle und die Hautoberfläche zu reinigen. Wischen Sie nicht übermäßig ab, oder es besteht die Gefahr, dass die auf der Haut vorhandenen Bakterien abgetötet werden.Der Erfolg des chronischen Wundmodells beruht auf nicht-sterilen Bedingungen. Diese Mäuse sind nicht keimfrei und befinden sich in einem konventionellen Vivarium. Das bakterielle Mikrobiom, das sich auf der Haut befindet, ist entscheidend für die spätere Einleitung und Entwicklung chronischer Wunden bei der Behandlung mit Inhibitoren antioxidativer Enzyme.Betrachten Sie nun, wo die Wunde. Im Idealfall verwenden Sie die dorsale Seite der Maus zentriert und weg von dunklen Flecken der Haut. Führen Sie nun die Verwundung sanieren, um in 30 bis 45 Sekunden zu kleiden.Drücken Sie zunächst leicht einen sieben Millimeter großen Hautbiopsie-Punch auf die gewünschte Wundstelle und drehen Sie den Schlag gerade tief genug um, um einen Eindruck vom Schlag zu hinterlassen. Dann verbrauchen Sie die skizzierte Haut, indem Sie die Mitte des Stempels mit einer Pinzette hochziehen und den Umriss mit einer chirurgischen Schere entlang schneiden. Nach fertigstellung, bedecken Sie die Wunde fest mit einem halben Stück transparenten Filmverband.Innerhalb von 10 Minuten nach der Verwundung, wenden Sie einen 60 Mikroliter Aliquot von MSA in sterilen PBS und legen Sie MSA topisch auf die Wunde. Später, sechs Stunden nach der Operation, verabreichen Sie eine weitere Tutvon Buprenorphin. Zusätzliche Dosen können bei Bedarf gegeben werden.Chronische Wundinitiation findet in weniger als sechs Stunden statt und der Wundrand wird sichtbar von oxidativem Stress verändert. Eine chronische Wunde ist eine Wunde, die offen bleibt, im Vergleich zur ersten Wunde vergrößert und Biofilm enthält. Nach 20 Tagen ist die Wunde in voller Chronizität.Biofilm bildende Bakterien, die die Wundstelle dominieren, sind Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter cloacae, und verschiedene Staphylococcus und Corynebacterium Arten. Diese Bakterien sind auch in menschlichen chronischen Wunden gefunden. Nachdem Sie sich dieses Video angeschaut haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man chronische Wunden bei Mäusen erzeugt.Sobald Sie diese chronischen Wunden festgestellt haben, können Sie sie verwenden, um viele zelluläre molekulare Mechanismen zu untersuchen, die an der Initiierung der Wundchronik beteiligt sind.

Research

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