Name: protocol to create chronic wounds in diabetic mice
Uploaded: 2019-09-25T13:30:00
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लेखकों की कोई अभिस्वीकृति नहीं है।

सभी प्रयोगों के अनुसार और संघीय नियमों और कैलिफोर्निया नीति और प्रक्रियाओं के विश्वविद्यालय के अनुपालन में पूरा किया गया कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय, Riverside IACUC द्वारा अनुमोदित किया गया है.
1. प?...

एक बार चूहों पर पुराने घाव बनाए जाते हैं, मॉडल का उपयोग पुरानी ताने की शुरुआत में शामिल बिगड़ा घाव भरने की प्रक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है। मॉडल भी रसायनों और दवाओं है कि पुरानी घाव विक?...

घाव भरने जटिल सेलुलर और आणविक प्रक्रियाओं है कि लौकिक और स्थानिक विनियमित कर रहे हैं शामिल है, अनुक्रमिक और ओवरलैपिंग चरणों में आयोजित किया है कि सहित कई अलग अलग सेल प्रकार शामिल है, लेकिन प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया और संवहनी तक ही सीमित नहीं प्रणाली1| इसके तुरंत बाद त्वचा एक चोट को बनाए रखती है, कारकों और रक्त कोशिकाओं घाव साइट के लिए कुल और एक थक्का बनाने के लिए जमावट झरना आरंभ. homeostasis प्राप्त करने के बाद, रक्त वाहिकाओं घाव साइट ऑक्सीजन, पोषक तत्वों, एंजाइमों, एंटीबॉडी और chemotactic कारक है कि chemoattract polymorphonucleocytes विदेशी मलबे के घाव बिस्तर को साफ करने के लिए और स्रावित proteolytic एंजाइमों में जाने के लिए फैलाने के लिए 2. सक्रिय प्लेटलेट्स घायल क्षेत्र को फिर से epithelialize करने के लिए घाव के किनारे पर keratincytes को प्रोत्साहित करने के लिए विकास कारकों की एक किस्म स्रावित करता है। घाव स्थल पर भर्ती किए गए मोनोसाइट्स मैक्रोफेज में अंतर करते हैं जो फागोसाइटोज बैक्टीरिया और मृत न्यूट्रोफिल और केराटिनोसाइट प्रोलाइफरी और प्रो-माइग्रेट सिग्नल बनाए रखने के लिए अतिरिक्त कारकों को स्रावित करते हैं। प्रसार चरण में, जबकि पुन: एपिथेलाइजेशन जारी रहता है, नए दानेदार ऊतक फाइब्रोब्लास्ट्स से बना, मोनोसाइट्स/मैक्रोफेज, लिम्फोसाइटों, और एंडोथेलियल कोशिकाओं के पुनर्निर्माण की प्रक्रिया2जारी है। एंजियोजेनेसिस एंडोथेलियल सेल प्रसार और प्रवास को बढ़ावा देने के द्वारा प्रेरित है, जिसके परिणामस्वरूप नए पोत विकास में होती है। Epithelialization और extracellular मैट्रिक्स के remodeling पर्यावरण के खिलाफ एक बाधा का निर्माण. के रूप में घाव भर देता है और दानेदार ऊतक एक निशान में विकसित, apoptosis अतिरिक्त ऊतक क्षति के कारण के बिना भड़काऊ कोशिकाओं, फाइब्रोब्लास्ट, और endothelial कोशिकाओं को समाप्त. ऊतक की तन्य शक्ति फाइब्रोब्लास्ट्स द्वारा बढ़ाया जाता है जो कोलेजन की तरह एक्स्ट्राकोल्यूलर मैट्रिक्स के विभिन्न घटकों को फिर से तैयार करता है, ताकि नवगठित ऊतक लगभग उतना ही मजबूत और लचीला हो जितना कि unwounded त्वचा2।
घाव बंद करने की दिशा में इस अत्यधिक ठोस प्रगति सेकोई विचलन बिगड़ा और / पुराने घावों में बढ़ते ऑक्सीडेटिव तनाव, पुरानी सूजन, क्षतिग्रस्त माइक्रोवास्कुल्चर, और घाव4में असामान्य कोलेजन मैट्रिक्स की विशेषता है। ऑक्सीडेटिव तनाव, विशेष रूप से घाव में, घाव बंदकरने मेंदेरी कर सकता है 2,5. जब, घाव भरने के पहले चरण में, सूजन चरण अनियमित हो जाता है, मेजबान ऊतक सूजन कोशिकाओं की निरंतर प्रवाह के कारण व्यापक क्षति मानता है5 जो साइटोटॉक्सिक एंजाइमों को रिलीज करता है, मुक्त ऑक्सीजन कण में वृद्धि, और अनियमित भड़काऊ मध्यस्थों, सेल मौत6,7में जिसके परिणामस्वरूप .
इस विनाशकारी सूक्ष्म पर्यावरण में, बायोफिल्म बनाने वाले बैक्टीरिया मेजबान पोषक तत्वों का लाभ उठाते हैं और मेजबान ऊतक2के नुकसान में योगदान देते हैं। इन biofilms को नियंत्रित करने और हटाने के लिए मुश्किल है क्योंकि हाइड्रेटेड extracellular बहुलक प्रोटीन से बना पदार्थ, डीएनए, आरएनए, और polysaccharides बैक्टीरिया के भीतर आश्रय पारंपरिक एंटीबायोटिक चिकित्सा के लिए सहिष्णु होने के लिए और बचने की अनुमति देता है मेजबान की सहज और अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया2,8,9.
पुराने घावों का अध्ययन करना महत्वपूर्ण है क्योंकि वे केवल10वर्ष में अमेरिका में 6.5 मिलियन डॉलर और $ 40 बिलियन प्रति वर्ष की लागत को प्रभावित करते हैं . मधुमेह के रोगियों को पुराने घावों को विकसित करने के लिए जोखिम बढ़ गया है जिसके लिए संक्रमण के प्रसार को रोकने के लिए विच्छेदन की आवश्यकता होती है। इन रोगियों को विच्छेदन के 5 वर्षों के भीतर 50% मृत्यु का खतरा होता है जो मधुमेह11के पैथोफिजियोलॉजी तंत्र के कारण होता है . मेजबान की प्रतिरक्षा प्रणाली और घाव भरने में microbiome के बीच संबंध चल रहे अनुसंधान का एक महत्वपूर्ण विषय है क्योंकि पुराने घावों के परिणाम, अगर अनसुलझे, विच्छेदन और मौत12शामिल हैं.
हालांकि एक महत्वपूर्ण प्रयास को समझने में निवेश किया गया है कि कैसे पुराने घाव मनुष्यों में विकसित, यह अभी भी स्पष्ट नहीं है कैसे और क्यों पुराने घाव फार्म. बिगड़ा चिकित्सा के तंत्र का अध्ययन करने के लिए प्रयोगों मनुष्यों में आचरण करने के लिए मुश्किल है, और घाव चिकित्सा विशेषज्ञों केवल पुराने घाव है कि पहले से ही महीनों के लिए सप्ताह के लिए पुरानी पनाह तक पहुँच चुके हैं के साथ रोगियों को देखते हैं. इस प्रकार, विशेषज्ञ यह अध्ययन करने में असमर्थ हैं कि कौन सी प्रक्रियाएं गलत हुई ं हैं जिससे घाव को पुरानी2बनने के लिए विकसित किया जा सकता है। वहाँ पशु मॉडल है कि मानव पुराने घावों की जटिलता recapitulate की कमी है. जब तक हमारे मॉडल विकसित किया गया था, पुरानी घाव अध्ययन के लिए कोई मॉडल अस्तित्व में.
पुरानी घाव मॉडल चूहों कि लेप्टिन रिसेप्टर में एक उत्परिवर्तन है में विकसित किया गया था (db/db-/-)13. इन चूहों मोटापे से ग्रस्त हैं, मधुमेह, और बिगड़ा उपचार है, लेकिन पुराने घाव विकसित नहीं14. रक्त शर्करा का स्तर औसत लगभग 200 मिलीग्राम/डीएल, लेकिन 400 मिलीग्राम/डीएल15के रूप में उच्च हो सकता है। जब घाव के ऊतकों में ऑक्सीडेटिव तनाव (ओएस) के उच्च स्तर को घाव करने के तुरंत बाद प्रेरित किया जाता है, घाव पुरानी16हो जाता है। db/db-/- घावों को 20 दिनों तक पुरानी माना जाता है और 60 दिनों या उससे अधिक के लिए खुला रहता है। बैक्टीरिया द्वारा उत्पादित बायोफिल्म को घाव के तीन दिन बाद विकसित होते देखा जा सकता है; एक परिपक्व biofilm घाव के बाद 20 दिन देखा जा सकता है और या तो घाव बंद होने तक बनी रहती है. इन चूहों में हम पाते हैं biofilm बनाने बैक्टीरिया भी मानव मधुमेह पुराने घावों में पाए जाते हैं.
ऑक्सीडेटिव तनाव एंटीऑक्सीडेंट एंजाइमों, कैटालेस और ग्लूटाथिओन पेरोक्सिडेज के दो अवरोधकों के साथ घावों के इलाज से प्रेरित होता है, हाइड्रोजन पेरोक्साइड को तोड़ने की क्षमता के साथ दो एंजाइम। हाइड्रोजन पेरोक्साइड एक प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजाति है और प्रोटीन, लिपिड, और डीएनए के ऑक्सीकरण के माध्यम से सेलुलर नुकसान पैदा कर सकता है। कैटालेस हाइड्रोजन पेरोक्साइड के अपघटन को कम हानिकारक रसायनों ऑक्सीजन और पानी में उत्प्रेरित करता है। 3-एमिनो-1,2,4-त्रिजोल (एटीजेड) विशेष रूप से और सहसंयोजक रूप से एंजाइम के सक्रिय केंद्र के लिए बाध्यकारी द्वारा कैटालेस को रोकता है, यह17,18,19inactivating. एटीजेड का उपयोग इन विट्रो और विवो दोनों में कैटालेस20,21,22,23,24के निषेध के माध्यम से ऑक्सीडेटिव तनाव के प्रभावों का अध्ययन करने के लिए किया गया है . ग्लूटाथियोन पेरोक्सिडेज एंटीऑक्सीडेंट, ग्लूटाथियोन के माध्यम से हाइड्रोजन पेरोक्साइड की कमी को उत्प्रेरित करता है, और एक महत्वपूर्ण एंजाइम है जो कोशिका को ऑक्सीडेटिव तनाव से बचाता है25. Mercaptosuccinic एसिड (एमएसए) थायोल के साथ एंजाइम के सेलेनोसिस्टीन सक्रिय साइट के लिए बाध्यकारी द्वारा glutathione peroxidase रोकता है, यह26inactivatating. एमएसए का प्रयोग विट्रो और विवो में ऑक्सीडेटिव तनाव के प्रभावों का अध्ययन करने के लिए किया गया है , साथ ही20,27,28.
पुरानी घावों के इस उपन्यास मॉडल का अध्ययन करने के लिए एक शक्तिशाली मॉडल है क्योंकि यह मानव मधुमेह पुराने घावों में मनाया एक ही सुविधाओं के कई शेयरों, वृद्धि हुई ओएस और त्वचा microbiome से प्राकृतिक biofilm गठन से लंबे समय तक सूजन सहित. घावों में त्वचा-एपिडर्मल इंटरैक्शन, असामान्य मैट्रिक्स जमाव, खराब एंजियोजेनेसिस और क्षतिग्रस्त वास्कुलेचर खराब हो गया है। पुराने घाव दोनों पुरुष और महिला चूहों में विकसित होगा, तो दोनों लिंगों पुराने घावों का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. इसलिए, पुरानी घाव मॉडल इस तरह के घावों के शुरू होने के मौलिक समझ को आगे बढ़ाने में महत्वपूर्ण योगदान कर सकता है। इस पुरानी घाव मॉडल का उपयोग कैसे पुरानीता शुरू की है के बारे में मौलिक सवालों के जवाब प्रदान कर सकते हैं /

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:795px;" width="794">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:308px;">B6.BKS(D)-Leprdb/J&#160;</td>
			<td style="width:176px;">The Jackson Laboratory&#160;</td>
			<td style="width:107px;">00697</td>
			<td style="width:204px;">Homozygotes and heterozygotes available&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:308px;">Nair Hair Remover Lotion with Soothing Aloe and Lanolin</td>
			<td style="width:176px;">Nair</td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;">a chemical depilatory</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:308px;">Buprenex (buprenorphine HCl)</td>
			<td style="width:176px;">Henry Stein Animal Health</td>
			<td style="width:107px;">059122</td>
			<td style="width:204px;">0.3 mg/ml, Class 3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">3-Amino-1,2,4-triazole (ATZ)</td>
			<td style="width:176px;">TCI</td>
			<td style="width:107px;">A0432</td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Mercaptosuccinic acid (MSA)</td>
			<td style="width:176px;">Aldrich</td>
			<td style="width:107px;">88460</td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Phosphate buffer solution (PBS)</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;">autoclave steriled</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:308px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:176px;">Henry Schein Animal Health</td>
			<td style="width:107px;">029405</td>
			<td style="width:204px;">NDC 11695-6776-2</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:308px;">Oxygen</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;">Tank must be compatible with vaporizing system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Isoflurane vaporizer</td>
			<td style="width:176px;">JA Baulch &#38; Associates&#160;</td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Wahl hair clipper</td>
			<td style="width:176px;">Wahl</td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;">Lithium Ion Pro</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Acu Punch 7mm skin biopsy punches</td>
			<td style="width:176px;">Acuderm Inc.</td>
			<td style="width:107px;">P750</td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:308px;">Tegaderm&#160;</td>
			<td style="width:176px;">3M</td>
			<td style="width:107px;">Ref: 1624W</td>
			<td style="width:204px;">Transparent film dressing (6 cm x 7 cm)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Heating pad</td>
			<td style="width:176px;">Conair</td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;">Moist Dry Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:308px;">Insulin syringes</td>
			<td style="width:176px;">BD</td>
			<td style="width:107px;">329461</td>
			<td style="width:204px;">0.35 mm (28G) x 12.7 mm (1/2&#34;)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">70% ethanol</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Kimwipes</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Tweezers</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Sharp surgical scissors</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Thin metal spatula</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Tubing</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Mouse nose cone</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">Gloves</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:308px;">small plastic containers</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protocol to create chronic wounds in diabetic mice

पुराने घाव उचित उपचार में शामिल एक या एक से अधिक जटिल सेलुलर और आणविक प्रक्रियाओं में दोषपूर्ण विनियमन का एक परिणाम के रूप में विकसित. वे अकेले अमेरिका में $ 6.5M लोगों और लागत $ 40B/वर्ष को प्रभावित करते हैं। हालाँकि इंसानों में पुराने घाव कैसे विकसित होते हैं, यह समझने में एक खास मेहनत का निवेश किया गया है, लेकिन बुनियादी सवाल अनुत्तरित हैं। हाल ही में, हम मधुमेह पुराने घावों के लिए एक उपन्यास माउस मॉडल विकसित की है कि मानव पुराने घावों के कई विशेषताओं है. db/db-/- चूहों का उपयोगकरके, हम घाव के तुरंत बाद घाव के ऊतकों में ऑक्सीडेटिव तनाव (ओएस) के उच्च स्तर को प्रेरित करके पुराने घाव उत्पन्न कर सकते हैं, एंटीऑक्सीडेंट एंजाइमों कैटालेस के लिए विशिष्ट अवरोधकों के साथ एक बार के उपचार का उपयोग करके और ग्लूटाथिओन पेरोक्सिडस। इन घावों में ओएस का उच्च स्तर होता है, स्वाभाविक रूप से बायोफिल्म विकसित होता है, उपचार के बाद 20 दिनों के भीतर पूरी तरह से पुरानी हो जाती है और 60 से अधिक दिनों के लिए खुला रह सकता है। इस उपन्यास मॉडल मनुष्य में मधुमेह के पुराने घावों के कई विशेषताएं हैं और इसलिए कैसे घाव पुरानी हो की मौलिक समझ को आगे बढ़ाने के लिए महत्वपूर्ण योगदान कर सकते हैं. यह एक बड़ी सफलता है क्योंकि मनुष्यों में पुराने घाव रोगियों के लिए महत्वपूर्ण दर्द और संकट का कारण बनते हैं और यदि अनसुलझे विच्छेदन होते हैं। इसके अलावा, इन घावों का इलाज करने के लिए बहुत महंगा है और समय लेने वाली हैं, और रोगियों को व्यक्तिगत आय का महत्वपूर्ण नुकसान होता है। हमारे पुराने घाव मॉडल के उपयोग के माध्यम से अध्ययन के इस क्षेत्र में प्रगति काफी लाखों जो इस दुर्बल हालत के तहत पीड़ित के लिए स्वास्थ्य देखभाल में सुधार कर सकते हैं. इस प्रोटोकॉल में, हम तीव्र घाव ों को पुरानी बनने के लिए कारण प्रक्रिया के विस्तार में वर्णन करते हैं, जो पहले नहीं किया गया है।

चित्र 5 में घाव बंद करने की ओर प्रगति करने वाले अवरोधकों के उपचार के बिना घाव का एक उदाहरण दर्शाया गया है और अवरोधकों के उपचार के साथ एक घाव पुरानी ताने की ओर प्रगति कर रहा है। पारद...

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Protocol to Create Chronic Wounds in Diabetic Mice

क्रोनिक घाव एक पूर्ण thickness त्वचीय घाव के बाद ऑक्सीडेटिव तनाव के उच्च स्तर को प्रेरित करके एक मधुमेह माउस मॉडल पर तीव्र घावों से विकसित कर रहे हैं। घाव कैटालेस और ग्लूटाथिओन peroxidase के लिए inhibitors के साथ इलाज किया जाता है, त्वचा microbiome में मौजूद बैक्टीरिया द्वारा बिगड़ा चिकित्सा और biofilm विकास में जिसके परिणामस्वरूप.

डायबिटीसे चूहे में पुराने घाव बनाने के लिए प्रोटोकॉल

Chronic wounds develop as a result of defective regulation in one or more complex cellular and molecular processes involved in proper healing. They impact ...

यह माउस मॉडल घाव पुरानीता के चिकित्सा क्षेत्र में सवालों के जवाब देने में मदद कर सकता है। इस मॉडल का बड़ा फायदा यह है कि चूहों में पुराने घाव मनुष्यों में पुराने घावों के कई पहलुओं की नकल करते हैं। शुरू करने के लिए, माउस को एक साफ सतह पर रखें और इसकी पूंछ के आधार को चुटकी बजाकर इसे जगह में रखें।फिर बालों को तैयार करें और यदि माउस अचानक कोई आंदोलन करता है तो उन्हें जल्दी से खींचने के लिए तैयार रहें। पूंछ के चारों ओर सहित गर्दन से पूंछ तक पूरी पीठ को शेव करें। सबसे कुशल कट के लिए बालों के विकास की दिशा के खिलाफ ब्लेड को हल्के से चलाएं।कतरनी को त्वचा में गहराई से न दबाएं क्योंकि यह खरोंच या कट सकता है। इसके बाद, त्वचा को डिपिलेटरी लोशन के आवेदन के लिए तैयार करें। रासायनिक जलने को रोकने के लिए पानी से लथपथ कागज तौलिया के साथ त्वचा को गीला करें।त्वचा के खिलाफ कटे हुए बालों को गीला करने के लिए पर्याप्त दबाव के साथ हल्के से दबाएं। फिर जबकि त्वचा गीली होती है, तो 15 से 20 सेकंड के लिए मुंडा क्षेत्र में डिपिलेटरी लोशन के एक छोटे दोकलम को रगड़ें। एक बार लागू होने के बाद, लोशन को 20 से 45 सेकंड तक त्वचा के साथ प्रतिक्रिया दें।लोशन को धोने से पहले, प्रतिक्रिया की जांच करने के लिए विभिन्न स्थानों पर कुछ लोशन को हल्के से मिटा दें। अगर त्वचा गुलाबी और गंजी है तो रिएक्शन पूरा होता है। फिर, इसे धोने के लिए माउस को पकड़ें।अंगूठे के साथ गैर-डोमिनेंट हाथ का उपयोग करके हथेली के खिलाफ अपनी पूंछ के आधार को दबाएं और अन्य उंगलियों को बंद करें। फिर माउस की नाक के साथ और पानी से दूर, पानी जानवर की पीठ पर चलाने दें। फिर जल्दी से, लेकिन धीरे से, लोशन को धोने के लिए दूसरे हाथ से माउस के पीछे रगड़ें।सभी डिपिलेटरी क्रीम को हटाने के बाद, त्वचा को एक पेपर तौलिया से सुखा लें। कान, पूंछ या चेहरे के पास कहीं भी लोशन न लगाएं। यदि ऐसा होना चाहिए, तो तुरंत गीले तौलिया के साथ लोशन को मिटा दें और फिर इन क्षेत्रों को नुकसान से रोकने के लिए माउस पर पानी चलाएं।यदि क्रीम का उपयोग करने के बाद किसी भी काले पैच को देखा जाता है, तो उन क्षेत्रों में क्रीम को फिर से लागू करें। प्रयोग की अवधि के दौरान त्वचा के काले धब्बे बालों को तेजी से विकसित करेंगे। इसलिए जरूरत पड़ने पर हर तीन से पांच दिन में बालों को शॉर्ट क्लिप करें।एक पैच या दो जो घायल साइट पर नहीं हैं, स्वीकार्य है, लेकिन यदि माउस के पीछे अधिक काले पैच हैं, तो पुराने घाव मॉडल के लिए इसका उपयोग न करें। बालों को हटाने के बाद, घायल होने से कम से कम एक दिन पहले माउस को अकेले घर दें क्योंकि त्वचा डिपिलेटरी लोशन से बहुत संवेदनशील होगी। सर्जरी से 30 मिनट पहले, बाँझ पीबीएस में बुप्रेनोरफिन इंट्रापेरिटोनली के 120 माइक्रोलीटर के साथ माउस इंजेक्ट करें।इस प्रक्रिया में सभी मात्रा एक 60 ग्राम माउस मान। सर्जरी से 20 मिनट पहले, बाँझ पीबीएस में एटूजेड के 480 माइक्रोलीटर के साथ माउस इंजेक्ट करें। पेट के दोनों ओर वॉल्यूम को विभाजित करें।एटूजेड को प्रशासित करने के बाद, माउस को एक गर्म हीटिंग पैड के शीर्ष पर एक छोटे प्लास्टिक कंटेनर में रखें जब तक कि सर्जरी शुरू न हो जाए। गर्मी को नियंत्रित करने में मदद करने के लिए एक कागज तौलिया के साथ छोटे कंटेनर को कवर करें। माउस को गर्म होते ही शांत हो जाना चाहिए।एक एनेस्थेटाइज्ड राज्य की पुष्टि करने के बाद, घायल के साथ आगे बढ़ें। घाव प्रक्रिया शुरू करने के लिए, घाव साइट और त्वचा की सतह को साफ करने के लिए माउस के पीछे पोंछने के लिए 70% इथेनॉल के साथ एक केम पोंछ स्प्रे करें। जरूरत से ज्यादा पोंछ न लें वरना त्वचा पर मौजूद बैक्टीरिया को मारने का खतरा रहेगा।पुराने घाव मॉडल की सफलता गैर बाँझ स्थितियों पर निर्भर करता है। ये चूहे रोगाणु मुक्त नहीं हैं और एक पारंपरिक विवरियम में रखे जाते हैं। बैक्टीरियल माइक्रोबायोम जो त्वचा पर रहता है, एंटीऑक्सीडेंट एंजाइमों के अवरोधकों के उपचार पर पुराने घावों के बाद की शुरुआत और विकास के लिए महत्वपूर्ण है।अब विचार करें कि घाव की जगह कहां है। आदर्श रूप से, त्वचा के काले पैच से केंद्रित और दूर माउस के पृष्ठीय पक्ष का उपयोग करें। अब 30 से 45 सेकंड में ड्रेसिंग प्रक्रिया के लिए घायल प्रदर्शन करते हैं।पहले हल्के से वांछित घाव साइट पर एक सात मिलीमीटर त्वचा बायोप्सी पंच प्रेस और बस काफी गहरी पंच की एक छाप छोड़ने के आसपास पंच मोड़ । फिर चिमटी के साथ पंच के केंद्र को खींचकर और सर्जिकल कैंची के साथ रूपरेखा के साथ काटने के द्वारा उल्लिखित त्वचा को उत्पादित करें। एक बार पूरा हो जाने के बाद, घाव को पारदर्शी फिल्म ड्रेसिंग के आधे टुकड़े के साथ मजबूती से कवर करें।घायल होने के 10 मिनट के भीतर, बाँझ PBS में एमएसए के एक ६० माइक्रोलीटर aliquot लागू होते है और घाव पर सामयिक एमएसए जमा । बाद में, सर्जरी के छह घंटे बाद, बुप्रेनोरफिन का एक और करता है। जरूरत के हिसाब से अतिरिक्त खुराक दी जा सकती है।पुराने घाव दीक्षा से भी कम छह घंटे में जगह लेता है और घाव मार्जिन ऑक्सीडेटिव तनाव से बदल दिख रहा है । एक पुराना घाव एक घाव है जो प्रारंभिक घाव की तुलना में खुला, बढ़ा हुआ रहता है और इसमें बायोफिल्म होता है। 20 दिनों के बाद, घाव पूरी तरह से पुरानी है।घाव स्थल पर हावी बैक्टीरिया बनाने वाले बायोफिल्म में स्यूडोमोनास एरुगिनोसा, एंटेरोबैक्टर क्लोएके, और विभिन्न स्टेफिलोकोकस और कोरिनेबैक्टीरियम प्रजातियां शामिल हैं। ये बैक्टीरिया इंसान के पुराने घावों में भी पाए जाते हैं। इस वीडियो को देखने के बाद आपको चूहों में पुराने घावों को बनाने के तरीके की अच्छी समझ होनी चाहिए।एक बार जब आप इन पुराने घावों को स्थापित कर लेते हैं, तो आप घाव की पुरानीता की शुरुआत में शामिल कई सेलुलर आणविक तंत्र की जांच करने के लिए उनका उपयोग कर सकते हैं।

Research

JoVE Journal

Medicine

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Neo-Islet Formation in Liver of Diabetic Mice by Helper-dependent Adenoviral Vector-Mediated Gene Transfer

हेल्पर निर्भर adenoviral वेक्टर की मध्यस्थता जीन स्थानांतरण द्वारा नव आइलेट मधुमेह चूहों के लिवर में गठन

Type 1 diabetes is caused by T cell-mediated autoimmune destruction of insulin-producing cells in the pancreas. Until now insulin replacement is still the ...

Collecting And Measuring Wound Exudate Biochemical Mediators In Surgical Wounds

इकट्ठा करने और मापने सर्जिकल घाव में घाव पीब बायोकेमिकल मध्यस्थों

We describe a methodology by which we are able to collect and measure biochemical inflammatory and nociceptive mediators at the surgical wound site. ...

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

खाली पेट के गैर मोटे मधुमेह का उपयोग कर एक चूहे में मूल्यांकन [<sup13&gt;</sup&gt; सी] octanoic एसिड सांस परीक्षण

Gastric emptying studies in mice have been limited by the inability to follow gastric emptying changes in the same animal since the most commonly used ...

Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol

चूहे में Parabiosis: एक विस्तृत प्रोटोकॉल

Parabiosis is a surgical union of two organisms allowing sharing of the blood circulation. Attaching the skin of two animals promotes formation of ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

चूहे में मूत्राशय दर्द के लिए एक मॉडल के रूप में मूत्राशय फैलावट पैदा Visceromotor प्रतिक्रियाएँ

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

Slow-release Drug Delivery through Elvax 40W to the Rat Retina: Implications for the Treatment of Chronic Conditions

चूहा रेटिना को Elvax 40W के माध्यम से धीमी गति से जारी दवा वितरण: पुरानी शर्तों के उपचार के लिए निहितार्थ

Diseases of the retina are difficult to treat as the retina lies deep within the eye. Invasive methods of drug delivery are often needed to treat these ...

A Simple Mechanical Procedure to Create Limbal Stem Cell Deficiency in Mouse

एक सरल यांत्रिक प्रक्रिया माउस में Limbal स्टेम सेल की कमी से बनाएँ करने के लिए

Limbal stem cell deficiency (LSCD) is a state of malfunction or loss of limbal epithelial stem cells, after which the corneal epithelium is replaced with ...

Two Techniques to Create Hypoparathyroid Mice: Parathyroidectomy Using GFP Glands and Diphtheria-Toxin-Mediated Parathyroid Ablation

Hypoparathyroid चूहे बनाने के लिए दो तकनीक: Parathyroidectomy GFP ग्रंथियों और डिप्थीरिया विष की मध्यस्थता पैराथाइरॉइड पृथक का उपयोग

Hypoparathyroidism (HP) is a disorder characterized by low levels of PTH which lead to hypocalcemia, hyperphosphatemia, and low bone turnover. The most ...

Generation of a Chronic Obstructive Pulmonary Disease Model in Mice by Repeated Ozone Exposure

दोहराया ओजोन जोखिम से चूहों में एक जीर्ण प्रतिरोधी फुफ्फुसीय रोग मॉडल की पीढ़ी

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is characterized by persistent airflow limitation and lung parenchymal destruction. It has a very high ...