Name: fabrication of gradient nanopattern by thermal nanoimprinting technique and screening of the response of human endothelial colony-forming cells
Uploaded: 2018-07-01T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fabrication of Gradient Nanopattern by Thermal Nanoimprinting Technique and Screening of the Response of Human Endothelial Colony-forming Cells at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על-ידי התוכנית מחקר מדעי בסיסי דרך לאומי מחקר קרן של קוריאה (ב- NRF) ממומן על ידי משרד החינוך, המדע, הטכנולוגיה (MEST) [ה-NRF-2015R1D1A1A01060397], ביו & פיתוח טכנולוגיות רפואיות תוכנית של ה-NRF במימון של משרד המדע, ICT ותכנון העתיד [ה-NRF-2017M3A9C6029563].

מחקר זה אושרה על ידי ועדת הבדיקה מוסדיים בבית החולים אלי באוניברסיטה קוריאה (IRB מס ' ED170495). כל ההליכים בוצעו על פי הצהרת הלסינקי תיקונים מאוחר יותר.
1. הכנת המצע אלומיניום (Al) על ידי ליטוש אלקטרוכימי
התראה: אלקטרופוליש הפתרון הוא מאכל רעילים. ללבוש ציוד מ?...

<ol>
	<li>Dalby, M. J., Gadegaard, N., Oreffo, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Harnessing+nanotopography+and+integrin-matrix+interactions+to+influence+stem+cell+fate.">Harnessing nanotopography and integrin-matrix interactions to influence stem cell fate.</a> Nature materials. 13 (6), 558-569 (2014).</li><li>Qian, W., Gong, L., Cui, X., Zhang, Z., Bajpai, A., Liu, C., Castillo, A., Teo, J. C., Chen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotopographic+Regulation+of+Human+Mesenchymal+Stem+Cell+Osteogenesis.">Nanotopographic Regulation of Human Mesenchymal Stem Cell Osteogenesis.</a> ACS Applied Materials &amp; Interfaces. 9 (48), 41794-41806 (2017).</li><li>Naganuma, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+cell+adhesion+force+activation+on+nano/micro-topographical+surfaces+and+temporal+dependence+of+cell+morphology.">The relationship between cell adhesion force activation on nano/micro-topographical surfaces and temporal dependence of cell morphology.</a> Nanoscale. 9 (35), 13171-13186 (2017).</li><li>Han, J., Lin, K. H., Chew, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+the+regulation+of+focal+adesions+and+cortical+actin+by+matrix+nanotopography+in+3D+environment.">Study on the regulation of focal adesions and cortical actin by matrix nanotopography in 3D environment.</a> Journal of Physics: Condensed Matter. 29 (45), 455101 (2017).</li><li>Liu, X., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+nano-biointerface+as+a+new+platform+for+guiding+cell+fate.">Three-dimensional nano-biointerface as a new platform for guiding cell fate.</a> Chemical Society Reviews. 43 (8), 2385-2401 (2014).</li><li>Turner, L. A., Dalby, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotopography-potential+relevance+in+the+stem+cell+niche.">Nanotopography-potential relevance in the stem cell niche.</a> Biomaterials science. 2 (11), 1574-1594 (2014).</li><li>Driscoll, M. K., Sun, X., Guven, C., Fourkas, J. T., Losert, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+contact+guidance+through+dynamic+sensing+of+nanotopography.">Cellular contact guidance through dynamic sensing of nanotopography.</a> ACS nano. 8 (4), 3546-3555 (2014).</li><li>Yim, E. K., Darling, E. M., Kulangara, K., Guilak, F., Leong, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotopography-induced+changes+in+focal+adhesions,+cytoskeletal+organization,+and+mechanical+properties+of+human+mesenchymal+stem+cells.">Nanotopography-induced changes in focal adhesions, cytoskeletal organization, and mechanical properties of human mesenchymal stem cells.</a> Biomaterials. 31 (6), 1299-1306 (2010).</li><li>Davis, G. E., Senger, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+extracellular+matrix.">Endothelial extracellular matrix.</a> Circulation research. 97 (11), 1093-1107 (2005).</li><li>Nakayama, K. H., Surya, V. N., Gole, M., Walker, T. W., Yang, W., Lai, E. S., Ostrowski, M. A., Fuller, G. G., Dunn, A. R., Huang, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoscale+patterning+of+extracellular+matrix+alters+endothelial+function+under+shear+stress.">Nanoscale patterning of extracellular matrix alters endothelial function under shear stress.</a> Nano letters. 16 (1), 410-419 (2015).</li><li>Bettinger, C. J., Zhang, Z., Gerecht, S., Borenstein, J. T., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+in+vitro+capillary+tube+formation+by+substrate+nanotopography.">Enhancement of in vitro capillary tube formation by substrate nanotopography.</a> Advanced materials. 20 (1), 99-103 (2008).</li><li>Katz, B. Z., Zamir, E., Bershadsky, A., Kam, Z., Yamada, K. M., Geiger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+state+of+the+extracellular+matrix+regulates+the+structure+and+molecular+composition+of+cell-matrix+adhesions.">Physical state of the extracellular matrix regulates the structure and molecular composition of cell-matrix adhesions.</a> Molecular biology of the cell. 11 (3), 1047-1060 (2000).</li><li>Deanfield, J. E., Halcox, J. P., Rabelink, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+function+and+dysfunction.">Endothelial function and dysfunction.</a> Circulation. 115 (10), 1285-1295 (2007).</li><li>Tajima, S., Chu, J., Li, S., Komvopoulos, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+regulation+of+endothelial+cell+adhesion,+spreading,+and+cytoskeleton+on+low-density+polyethylene+by+nanotopography+and+surface+chemistry+modification+induced+by+argon+plasma+treatment.">Differential regulation of endothelial cell adhesion, spreading, and cytoskeleton on low-density polyethylene by nanotopography and surface chemistry modification induced by argon plasma treatment.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 84 (3), 828-836 (2008).</li><li>Mohiuddin, M., Pan, H. A., Hung, Y. C., Huang, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+growth+and+inflammatory+response+of+macrophages+and+foam+cells+with+nanotopography.">Control of growth and inflammatory response of macrophages and foam cells with nanotopography.</a> Nanoscale research letters. 7 (1), 394 (2012).</li><li>Kyle, D. J., Oikonomou, A., Hill, E., Bayat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+functional+evaluation+of+biomimetic+silicone+surfaces+with+hierarchical+micro/nano-topographical+features+demonstrates+favourable+in+vitro+foreign+body+response+of+breast-derived+fibroblasts.">Development and functional evaluation of biomimetic silicone surfaces with hierarchical micro/nano-topographical features demonstrates favourable in vitro foreign body response of breast-derived fibroblasts.</a> Biomaterials. 52, 88-102 (2015).</li><li>Seo, H. R., Joo, H. J., Kim, D. H., Cui, L. H., Choi, S. C., Kim, J. H., Cho, S. W., Lee, K. B., Lim, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanopillar+Surface+Topology+Promotes+Cardiomyocyte+Differentiation+through+Cofilin-Mediated+Cytoskeleton+Rearrangement.">Nanopillar Surface Topology Promotes Cardiomyocyte Differentiation through Cofilin-Mediated Cytoskeleton Rearrangement.</a> ACS Applied Materials &amp; Interfaces. 9 (20), 16803-16812 (2017).</li><li>Hwang, J. H., Lee, D. H., Byun, M. R., Kim, A. R., Kim, K. M., Park, J. I., Oh, H. T., Hwang, E. S., Lee, K. B., Hong, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotopological+plate+stimulates+osteogenic+differentiation+through+TAZ+activation.">Nanotopological plate stimulates osteogenic differentiation through TAZ activation.</a> Scientific Reports. 7 (1), 3632 (2017).</li><li>Bae, D., Moon, S. H., Park, B. G., Park, S. J., Jung, T., Kim, J. S., Lee, K. B., Chung, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotopographical+control+for+maintaining+undifferentiated+human+embryonic+stem+cell+colonies+in+feeder+free+conditions.">Nanotopographical control for maintaining undifferentiated human embryonic stem cell colonies in feeder free conditions.</a> Biomaterials. 35 (3), 916-928 (2014).</li><li>Cui, L. H., Joo, H. J., Kim, D. H., Seo, H. R., Kim, J. S., Choi, S. C., Huang, L. H., Na, J. E., Lim, I. R., Kim, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manipulation+of+the+response+of+human+endothelial+colony-forming+cells+by+focal+adhesion+assembly+using+gradient+nanopattern+plates.">Manipulation of the response of human endothelial colony-forming cells by focal adhesion assembly using gradient nanopattern plates.</a> Acta biomaterialia. 65, 272-282 (2017).</li><li>Lee, W., Park, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Porous+anodic+aluminum+oxide:+anodization+and+templated+synthesis+of+functional+nanostructures.">Porous anodic aluminum oxide: anodization and templated synthesis of functional nanostructures.</a> Chemical reviews. 114 (15), 7487-7556 (2014).</li><li>Masuda, H., Fukuda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ordered+metal+nanohole+arrays+made+by+a+two-step+replication+of+honeycomb+structures+of+anodic+alumina.">Ordered metal nanohole arrays made by a two-step replication of honeycomb structures of anodic alumina.</a> science. 268 (5216), 1466 (1995).</li><li>Masuda, H., Satoh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fabrication+of+gold+nanodot+array+using+anodic+porous+alumina+as+an+evaporation+mask.">Fabrication of gold nanodot array using anodic porous alumina as an evaporation mask.</a> Japanese Journal of Applied Physics. 35 (1B), L126 (1996).</li><li>Zaraska, L., Sulka, G. D., Jasku&#322;a, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+n-alcohols+on+porous+anodic+alumina+formed+by+self-organized+two-step+anodizing+of+aluminum+in+phosphoric+acid.">The effect of n-alcohols on porous anodic alumina formed by self-organized two-step anodizing of aluminum in phosphoric acid.</a> Surface and Coatings Technology. 204 (11), 1729-1737 (2010).</li><li>Yang, K. Y., Kim, J. W., Byeon, K. J., Lee, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+deposition+of+the+silver+nano-particles+using+patterned+the+hydrophobic+self-assembled+monolayer+patterns+and+zero-residual+nano-imprint+lithography.">Selective deposition of the silver nano-particles using patterned the hydrophobic self-assembled monolayer patterns and zero-residual nano-imprint lithography.</a> Microelectronic engineering. 84 (5), 1552-1555 (2007).</li><li>Park, B. G., Lee, W., Kim, J. S., Lee, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superhydrophobic+fabrication+of+anodic+aluminum+oxide+with+durable+and+pitch-controlled+nanostructure.">Superhydrophobic fabrication of anodic aluminum oxide with durable and pitch-controlled nanostructure.</a> Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects. 370 (1), 15-19 (2010).</li></ol>

ייצור של AAO לעיתים קרובות סובל פגמים כגון סדקים, צורות לא סדיר של הנקבוביות, וצריבה. הסיבה העיקרית פגמים אלה, נקרא פירוק אלקטרוליטי, אשר מושפע בחוזקה את אופי סובסטרטים מתכת להיות anodized, את resistivity של ה אלקטרוליט21. מאז resistivity של האלקטרוליט משתנה בהתאם לטמפרטורה שלה, סילוק חום ברציפ?...

לאחרונה, התגובה של התאים על ידי גירוי פיזי של הטופוגרפיה משטח יש כבר לווק בתחום של תא הנדסה1,2,3,4. לכן, יותר תשומת לב התמקדו nanostructures תלת מימדי-התא מצורף משטח5. בעבר דווח כי אינטגרין, אשר המכשיר זיהוי פני השטח של התא, מעביר את הגירוי הפיזי מונע על ידי מבנה מיקרו-ננו ECM עד mechano-התמרה חושית6. גירוי מכני זה מסדיר בהתנהגות התא באמצעות הדרכה קשר7 ומשרה רה-ארגון cytoskeletal כדי לשנות את הצורה, בנוסף הדבקויות מוקד וקשיחות של תאים8.
האדם אנדותל ובתאים (hEPCs) בגוף מקרוב אינטראקציה עם microenvironment של ה-ECM שמסביב9. אפשרות זו מציינת כי המצב הפיסי של ECM משמש פרמטר חשוב עבור תאים ספציפיים-מטריקס אדהזיה היווצרות מורכבות כמו גזירה נגזר זרימת דם10. הוא דיווח כי nanotopography פני שטח משפר את היווצרות במבחנה של רשתות צינור קפילרי נרחב של hEPCs11 , כך גורם מסיסים ECM/ביו בשילוב המערכת מאפשרת hEPCs לזהות סובסטרטים לקוי ומקדם פצע ריפוי12,13. למרות זאת, היחס בין ה-ECM, hEPCs הוא לא הבין היטב.
אף על פי חוקרים רבים ניסו להבהיר את הקשר בין תא תגובות גופניות רמזים סובסטרטים14,15,16, מחקרים אלה נעשה שימוש רק בגודל קבוע של ננו-מבנה או nanopatterns עם כל הסידורים חריג שיש מגבלה להבהיר את הקשר בין הגודל של ההתנהגות ננו-מבנה ותא. הבעיה כאן היא חוסר כלים מתאימים לסינון תגובות סלולרית שיכולה להחליף קיימות גישות מייגע איטרטיבי כדי למצוא את הגודל האופטימלי של ננו-מבנה. לכן, טכניקה פשוטה נדרש לסינון תגובות תאים על stimulations פיזי ללא חזרה.
כאן, אנו מתארים שיטה המשמשת שלנו הקודם דוחות17,18,19 כדי לייצר nanopattern הדרגה שבה הקוטר של nanopillars מסודרים עולה בהדרגה. בנוסף, אנו גם תיאר כיצד לטפח ולנתח את אופן הפעולה של hECFCs על צלחות nanopattern מעבר צבע כדי לקבוע את ההשפעה של גירוי פיזי על התאים. Anodization מתון, תחריט הדרגתית, שיטת ציפוי שכבה אנטי בלטה שימשו ליצור הדרגתיות AAO עובש. על ידי אימוץ תרמית החתמה טכניקת הדפס אבן, זהה nanopatterns הדרגתיות פוליסטירן יוצרו באופן חסכוני נתיישב. שימוש nanopatterns מעבר הצבע, זה ריאלי כדי לקבוע איזה גודל של ננו-מבנה יש השפעה גדולה על התנהגות התא בסט אחד של הניסוי. אנו מצפים כי nanopattern מעבר צבע זה יהיה מועיל להבנת מנגנוני אינטראקציה בין דם, נגזר hECFC או תאים אחרים גדלים שונים של nanostructures.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Perchloric acid 60%</td>
			<td>Daejung Chemicals &#38; Metals</td>
			<td>6512-4100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl alcohol, absolute 99.9%</td>
			<td>Daejung Chemicals &#38; Metals</td>
			<td>4118-4100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphoric acid 85%</td>
			<td>Daejung Chemicals &#38; Metals</td>
			<td>6532-4400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methyl alcohol 99.5%</td>
			<td>Daejung Chemicals &#38; Metals</td>
			<td>5558-4400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chromium(VI) oxide</td>
			<td>Daejung Chemicals &#38; Metals</td>
			<td>2558-4400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sulfuric acid 95%</td>
			<td>Daejung Chemicals &#38; Metals</td>
			<td>7781-4100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen peroxide 30%</td>
			<td>Daejung Chemicals &#38; Metals</td>
			<td>4104-4400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>n-hexane 95%</td>
			<td>Daejung Chemicals &#38; Metals</td>
			<td>4081-4400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluene 99.5%</td>
			<td>Daejung Chemicals &#38; Metals</td>
			<td>8541-4400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(heptadecafluoro-1,1,2,2,-tetrahydrodecyl)dimethylchlorosilane</td>
			<td>Gelest</td>
			<td>SIH5840.4</td>
			<td>Moisture sensitive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methoxynonafluorobutane 99%</td>
			<td>Sigma aldrich</td>
			<td>464309</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen solution</td>
			<td>Stemcell</td>
			<td>#4902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Sigma aldrich</td>
			<td>G1890</td>
			<td>Protein coating solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll-Paque</td>
			<td>GE Heathcare</td>
			<td>17-1440-03</td>
			<td>Hydrophilic polysaccharide solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGM-2MV</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-3202</td>
			<td>Endothelial cell expansion medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12483-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma aldrich</td>
			<td>G5882-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium tetroxide</td>
			<td>Sigma aldrich</td>
			<td>201030-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexamethyldisilazane</td>
			<td>Sigma aldrich</td>
			<td>440191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma aldrich</td>
			<td>X100-100ML</td>
			<td>Octylphenol ethoxylate&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26050-088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-human vinculin primary antibody&#160;</td>
			<td>Sigma aldrich</td>
			<td>V9131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F-actin probe</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>A12379</td>
			<td>Fluorescence-conjugated phalloidin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488-conjugated anti-mouse&#160;IgG antibody</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>A11001</td>
			<td>Fluorescence-conjugated secondary antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4&#39;,6-diamidino-2-phenylindole&#160;</td>
			<td>Sigma aldrich</td>
			<td>D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>S3023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human vWF primary antibody&#160;</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>A0082</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human&#160;CD144 primary antibody&#160;</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>#555661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eponate 12&#8482; Embedding Kit, with BDMA</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>18012</td>
			<td>Epoxy resin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uranyl Acetate, 25g</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>19481</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead Citrate, Trihydrate, 10g</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>19312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra pure aluminum plate</td>
			<td>Goodfellow</td>
			<td>26050-088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene sheet</td>
			<td>Goodfellow</td>
			<td>ST313120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8.0&#34; silicon wafer</td>
			<td>Siltron</td>
			<td>29-01024-03</td>
			<td>Single side polished, 725 &#181;m thick</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum desiccator, 4.4 L</td>
			<td>Kartell</td>
			<td>KA.230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum pump</td>
			<td>Vacuumer</td>
			<td>V3.VOP100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power supply</td>
			<td>Unicorntech</td>
			<td>UDP-3003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic stirrer</td>
			<td>Daihan scientific</td>
			<td>SL.SMS03022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Overhead stirrer</td>
			<td>Daihan scientific</td>
			<td>HT120DX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circulator</td>
			<td>Daihan scientific</td>
			<td>WCR-P12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Linear moving stage</td>
			<td>Zaber</td>
			<td>A-LSQ300A-E01-KT07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angle bracket, 90 degrees</td>
			<td>Zaber</td>
			<td>AB90M</td>
			<td>Accessory of the linear moving stage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMP forcep, 145 mm</td>
			<td>Vitlab</td>
			<td>67995</td>
			<td>Nonmetallic tweezer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PTFE beaker, 250 mL</td>
			<td>Cowie</td>
			<td>CW007.25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleaner</td>
			<td>Branson</td>
			<td>B2510MTH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCB cutter</td>
			<td>Hozan Tool Industrial</td>
			<td>K-110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanoimprint device</td>
			<td>Nanonex</td>
			<td>NX-2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen plasma generator</td>
			<td>Femto Science</td>
			<td>CUTE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low temperature sterilizer</td>
			<td>Lowtem</td>
			<td>Crystal 50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>MCO-18AC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confoal laser scanning microscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>LSM700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning electron microscope</td>
			<td>JEOL</td>
			<td>JSM6701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transmission electron microscope</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>H-7500</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fabrication of gradient nanopattern by thermal nanoimprinting technique and screening of the response of human endothelial colony-forming cells

Nanotopography ניתן למצוא מטריצה חוץ-תאית שונים (ECMs) סביב הגוף וידוע שיש פעולות רגולטוריות חשובות על תגובות הסלולר. עם זאת, קשה לקבוע את היחס בין גודל ננו-מבנה את התגובות של תאים בשל העדר כלים ההקרנה נאותה. כאן, אנו מראים את התפתחות nanopattern מעבר צבע חסכונית הדירים עומדי המניפולציה של תגובות הסלולר. באמצעות אנודי אלומיניום אוקסיד (AAO) כתבנית הבסיס, צלחות nanopattern מעבר צבע עם nanopillars של הגדלת טווחי קוטר [120-200 ננומטר (GP 120/200), 200-280 ננומטר (GP 200/280) ו- 280-360 nm (GP 280/360)] היו מפוברק על ידי תרמית החתמה טכניקה. הצלחות nanopattern הדרגתיות האלה נועדו לחקות את המידות השונות של nanotopography ב- ECM ושימשו למסך את התגובות של אנדותל המושבה יוצרי תאים אנושיים (hECFCs). ב פרוטוקול זה, אנו מתארים את התהליך צעד אחר צעד של בדיית nanopattern הדרגתיות לוחות עבור תא הנדסה, טכניקות של טיפוח hECFCs מדם היקפי אנושי, culturing hECFCs על צלחות nanopattern.

איור 1 מציג תמונות SEM של התבניות מפוברק AAO הדרגתיות בהתאם לסוג ולמיקום שלהם. איור 2 מציג תמונות SEM של צלחות nanopattern מעבר צבע עם nanopillars רגיל, מעוגל, איור 3 כימות הנתונים של הקוטר nanopillar. טבלה 1 מציגה את מאפייני nanopillars מפו?...

Watch this Scientific Journal Video about Fabrication of Gradient Nanopattern by Thermal Nanoimprinting Technique and Screening of the Response of Human Endothelial Colony-forming Cells at JoVE.com

Fabrication of Gradient Nanopattern by Thermal Nanoimprinting Technique and Screening of the Response of Human Endothelial Colony-forming Cells

כאן, אנו מציגים עבור הזיוף של צלחות nanopattern מעבר צבע באמצעות nanoimprinting תרמי ואת שיטת הקרנה התגובות של האדם ובתאים אנדותל nanostructures פרוטוקול. באמצעות הטכנולוגיה המתואר, זה אפשרי לייצר לפיגום שיכול להשפיע על התנהגות התא על ידי הגירויים הפיזיים.

ייצור של מעבר צבע Nanopattern על ידי טכניקת Nanoimprinting תרמית והקרנת התגובה של תאים אנושיים המושבה יוצרי אנדותל

Nanotopography can be found in various extracellular matrices (ECMs) around the body and is known to have important regulatory actions upon cellular ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Fabrication of Micro-tissues using Modules of Collagen Gel Containing Cells

ייצור של מיקרו-רקמות באמצעות מודולים של קולגן ג&#39;ל התאים המכילים

This protocol describes the fabrication of a type of micro-tissues called modules.  The module approach generates uniform, scalable and vascularized ...

Human Cartilage Tissue Fabrication Using Three-dimensional Inkjet Printing Technology

ייצור רקמת סחוס אנושי באמצעות שלושה ממדי הזרקת דיו טכנולוגיית הדפסה

Bioprinting, which is based on thermal inkjet printing, is one of the most attractive enabling technologies in the field of tissue engineering and ...

Polymeric Microneedle Array Fabrication by Photolithography

ייצור מערך microneedle פולימרית יתוגרפיה

This manuscript describes the fabrication of polymeric microneedle (MN) arrays by photolithography. It involves a simple mold-free process by using a ...

Biomembrane Fabrication by the Solvent-assisted Lipid Bilayer (SALB) Method

Biomembrane Fabrication by the Solvent-assisted Lipid Bilayer SALB Method

ייצור Biomembrane ידי השומנים bilayer (SALB) השיטה בסיוע מרכך

In order to mimic cell membranes, the supported lipid bilayer (SLB) is an attractive platform which enables in vitro investigation of membrane-related ...

Fabrication of Decellularized Cartilage-derived Matrix Scaffolds

ייצור של מטריקס הסחוס, נגזר Decellularized פיגומים

Osteochondral defects lack sufficient intrinsic repair capacity to regenerate functionally sound bone and cartilage tissue. To this extent, cartilage ...

Standardized and Scalable Assay to Study Perfused 3D Angiogenic Sprouting of iPSC-derived Endothelial Cells In Vitro

שיטת הלימוד הסטנדרטית והמדמדית למחקר בלבלוב אנגיוגנטית בתלת-ממד של התאים הנגזרים מתוך מבחנה

Pre-clinical drug research of vascular diseases requires in vitro models of vasculature that are amendable to high-throughput screening. However, current ...

Applications for Open Source Microplate-Compatible Illumination Panels

יישומים ללוחות תאורה בקוד פתוח מיקרופלייט

Microplates are commonly used in the modern laboratory environment for a wide variety of tasks both in small-scale laboratory benchtop operations as well ...

Growth of Human and Sheep Corneal Endothelial Cell Layers on Biomaterial Membranes

צמיחת הקרנית של האדם והכבשים שכבות של תאי-על ביומטריה

Corneal endothelial cell cultures have a tendency to undergo epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) after loss of cell-to-cell contact. EMT is ...

Preclinical Cardiac Electrophysiology Assessment by Dual Voltage and Calcium Optical Mapping of Human Organotypic Cardiac Slices

מיפוי אופטי של הערכת החשמל לניתוחי לב באמצעות מתח כפול וסידן

Human cardiac slice preparations have recently been developed as a platform for human physiology studies and therapy testing to bridge the gap between ...

Scalable Generation of Mature Cerebellar Organoids from Human Pluripotent Stem Cells and Characterization by Immunostaining

דור מדרגי של אורגנואידים המוח הקטן בוגר מתאי גזע פלורופוטנטיים אנושיים ואפיון על ידי אימונוסטיין

The cerebellum plays a critical role in the maintenance of balance and motor coordination, and a functional defect in different cerebellar neurons can ...