Name: modeling osteosarcoma using li-fraumeni syndrome patient-derived induced pluripotent stem cells
Uploaded: 2018-06-13T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

ר צ נתמך על ידי חדשנות UTHealth עבור סרטן מניעה מחקר הכשרה תוכנית Pre-Doctoral לאגודה (מניעת סרטן, טקסס של מכון המחקר להעניק RP160015). ג'יי. טי נתמך על-ידי התוכנית לין הקי של האוניברסיטה הראשונה המזוהה עם בית החולים של סון יאט-סן. ד-F.L. המלומד CPRIT בחקר הסרטן, נתמך על ידי NIH השביל המוביל אל העצמאות פרס R00 CA181496 ו- CPRIT פרס RR160019.

עבודה זו אושרה על ידי אוניברסיטת טקסס למדעי הבריאות במרכז יוסטון (UTHealth) חיה ועדת הרווחה. הניסויים מתבצעים בהתאמה קפדנית עם אמות המידה שנקבעו על-ידי המרכז UTHealth עבור רפואה מעבדתית חיה & טיפול (CLAMC) אשר הוסמך על ידי האגודה האמריקנית על מעבדה חיה על עצמך (AAALAC הבינלאומי). הנושאים האנושי במחקר זה נ?...

<ol>
	<li>Takahashi, K., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+mouse+embryonic+and+adult+fibroblast+cultures+by+defined+factors.">Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors.</a> Cell. 126 (4), 663-676 (2006).</li><li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+adult+human+fibroblasts+by+defined+factors.">Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors.</a> Cell. 131 (5), 861-872 (2007).</li><li>Yu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cell+lines+derived+from+human+somatic+cells.">Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells.</a> Science. 318 (5858), 1917-1920 (2007).</li><li>Yagi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+familial+Alzheimer's+disease+with+induced+pluripotent+stem+cells.">Modeling familial Alzheimer's disease with induced pluripotent stem cells.</a> Hum Mol Genet. 20 (23), 4530-4539 (2011).</li><li>Dimos, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells+generated+from+patients+with+ALS+can+be+differentiated+into+motor+neurons.">Induced pluripotent stem cells generated from patients with ALS can be differentiated into motor neurons.</a> Science. 321 (5893), 1218-1221 (2008).</li><li>Moretti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-specific+induced+pluripotent+stem-cell+models+for+long-QT+syndrome.">Patient-specific induced pluripotent stem-cell models for long-QT syndrome.</a> N Engl J Med. 363 (15), 1397-1409 (2010).</li><li>Itzhaki, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+the+long+QT+syndrome+with+induced+pluripotent+stem+cells.">Modelling the long QT syndrome with induced pluripotent stem cells.</a> Nature. 471 (7337), 225-229 (2011).</li><li>Carvajal-Vergara, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-specific+induced+pluripotent+stem-cell-derived+models+of+LEOPARD+syndrome.">Patient-specific induced pluripotent stem-cell-derived models of LEOPARD syndrome.</a> Nature. 465 (7299), 808-812 (2010).</li><li>Lee, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+familial+cancer+with+induced+pluripotent+stem+cells.">Modeling familial cancer with induced pluripotent stem cells.</a> Cell. 161 (2), 240-254 (2015).</li><li>Mulero-Navarro, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloid+Dysregulation+in+a+Human+Induced+Pluripotent+Stem+Cell+Model+of+PTPN11-Associated+Juvenile+Myelomonocytic+Leukemia.">Myeloid Dysregulation in a Human Induced Pluripotent Stem Cell Model of PTPN11-Associated Juvenile Myelomonocytic Leukemia.</a> Cell Rep. 13 (3), 504-515 (2015).</li><li>Kotini, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+analysis+of+a+chromosomal+deletion+associated+with+myelodysplastic+syndromes+using+isogenic+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Functional analysis of a chromosomal deletion associated with myelodysplastic syndromes using isogenic human induced pluripotent stem cells.</a> Nat Biotechnol. 33 (6), 646-655 (2015).</li><li>Kotini, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stage-Specific+Human+Induced+Pluripotent+Stem+Cells+Map+the+Progression+of+Myeloid+Transformation+to+Transplantable+Leukemia.">Stage-Specific Human Induced Pluripotent Stem Cells Map the Progression of Myeloid Transformation to Transplantable Leukemia.</a> Cell Stem Cell. 20 (3), 315-328 (2017).</li><li>Crespo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colonic+organoids+derived+from+human+induced+pluripotent+stem+cells+for+modeling+colorectal+cancer+and+drug+testing.">Colonic organoids derived from human induced pluripotent stem cells for modeling colorectal cancer and drug testing.</a> Nat Med. 23 (7), 878-884 (2017).</li><li>Gingold, J., Zhou, R., Lemischka, I. R., Lee, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+Cancer+with+Pluripotent+Stem+Cells.">Modeling Cancer with Pluripotent Stem Cells.</a> Trends Cancer. 2 (9), 485-494 (2016).</li><li>Lin, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteosarcoma:+Molecular+Pathogenesis+and+iPSC+Modeling.">Osteosarcoma: Molecular Pathogenesis and iPSC Modeling.</a> Trends Mol Med. 23 (8), 737-755 (2017).</li><li>Zhou, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Li-Fraumeni+Syndrome+Disease+Model:+A+Platform+to+Develop+Precision+Cancer+Therapy+Targeting+Oncogenic+p53.">Li-Fraumeni Syndrome Disease Model: A Platform to Develop Precision Cancer Therapy Targeting Oncogenic p53.</a> Trends Pharmacol Sci. 38 (10), 908-927 (2017).</li><li>Lian, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+clinically+compliant+MSCs+from+CD105+,+CD24-+differentiated+human+ESCs.">Derivation of clinically compliant MSCs from CD105+, CD24- differentiated human ESCs.</a> Stem Cells. 25 (2), 425-436 (2007).</li><li>Zhou, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+homozygous+p53+R282W+mutant+human+embryonic+stem+cell+line+generated+using+TALEN-mediated+precise+gene+editing.">A homozygous p53 R282W mutant human embryonic stem cell line generated using TALEN-mediated precise gene editing.</a> Stem Cell Res. 27, 131-135 (2018).</li></ol>

כדי להשיג יעילות גבוהה יותר של בידול MSC, מספר היבטים הם קריטיים. אחת היא התנאי התרבות של iPSCs לפני ביצוע MSC בידול. פרוטוקול שהוצג בחוברת מתבסס על מחקרים קודמים 9,17. iPSCs צריך להיות בתרבית על MEFs לפחות 2 שבועות. שמירה על iPSCs טובים תנאים על MEFs הם קריטיים עבור תאים לצרף ?...

בין 2006 ו 2007, מספר ממצאים פריצת דרך המעבדות של ד"ר Shinya יאמאנאקה, ג'יימס א. תומסון הוביל את הפיתוח של pluripotent המושרה בתאי גזע (iPSCs)1,2,3. על ידי התכנות תאים סומטיים עם גורמים תעתיק מוגדר שיש טופס iPSCs, החוקרים הצליחו לייצר תאים בעלי מאפיינים מרכזיים כלומר, pluripotency, התחדשות עצמית, אשר נחשב בעבר רק קיימים תאי גזע עובריים (hESCs). iPSCs יכולים להיווצר מכל אדם או חולה, לא היו צריכים להיגזר עוברי, במידה רבה להרחיב את הרפרטואר של מחלות זמין ורקעים לצורך המחקר. מאז, החולה, נגזר iPSCs שימשו כדי לסכם את פנוטיפ של מחלות אנושיות שונות, מחלת אלצהיימר4 ו נוירודגנרטיביות5 זמן QT תסמונת6,7, 8.
ההתפתחויות הללו במחקר iPSC גם נפתחו דרכים חדשות לחקר הסרטן. מספר קבוצות לאחרונה השתמשו iPSCs החולה מודל לפיתוח סרטן תחת הרקע הגנטי רגישים9,10,11, עם יישום מוצלח הפגינו לתאריך אוסטאוסרקומה9, לוקמיה10,11,12, סרטן המעי הגס13. למרות סרטן נגזר iPSC מודלים בחיתוליהם, הדגים פוטנציאל גדול ב phenocopying הקשורים למחלות ממאירות, שחקרתי מנגנונים פתולוגי, וזיהוי תרכובות טיפולית14.
תסמונת לי-פראומני, היא תורשתית (הסימולטור) היא הפרעת אוטוזומלית דומיננטית סרטן תורשתית הנגרמת על ידי מוטציה germline TP53 15. חולים עם הסימולטור נטייה סוג שונים של ממאירות כולל אוסטאוסרקומה, שהופך iPSCs הסימולטור תאי נגזר שלהם במיוחד מתאים היטב ללמוד זה גידול ממאיר16. מודל מבוסס iPSC אוסטאוסרקומה הוקם לראשונה בשנת 2015 באמצעות הסימולטור החולה נגזר iPSCs9 לאחר מכן הבדיל לתוך גזע mesenchymal (MSCs), ואז על תאי העצם, שמקורם תאים של אוסטאוסרקומה. אלו תאי העצם הסימולטור מסכם את הדברים הקשורים אוסטאוסרקומה בידול osteogenic פגמים ומאפיינים oncogenic, הדגמת המודל פוטנציאליים כפלטפורמה "סרטן העצמות בצלחת". מעניין, ניתוחים ברמת הגנום transcriptome להציג היבטים של חתימה ג'ין אוסטאוסרקומה בתוך הסימולטור תאי העצם, זה תכונות של פרופיל ביטוי גנטי זה הסימולטור נמצאים בקורלציה עם פרוגנוזה גרועה אצל אוסטאוסרקומה9, המציין הפוטנציאל של הסימולטור iPSCs המחלה מודלים כדי לחשוף את התכונות של הרלוונטיות הקלינית.
כתב יד זה מספק תיאור מפורט של אופן השימוש הסימולטור החולה נגזר iPSCs כדי אוסטאוסרקומה מודל. זה מפרט את הדור של הסימולטור iPSCs, הבידול של iPSCs MSCs ולאחר מכן על תאי העצם, ושימוש ויוו xenograft מודל באמצעות הסימולטור תאי העצם. המודל המחלה הסימולטור כוללת מספר יתרונות, ובראשם את היכולת לייצר תאים ללא הגבלה בכל שלבי ההתפתחות אוסטאוסרקומה מחקרים מכניסטית, סמן זיהוי של סמים הקרנת9,14, 16.
לסיכום, המודל מבוסס iPSC אוסטאוסרקומה הסימולטור מציע מערכת משלים אטרקטיבי לקידום המחקר אוסטאוסרקומה. פלטפורמה זו מספקת גם הוכחה-של-קונספט דוגמנות סרטן באמצעות החולה נגזר iPSCs. אסטרטגיה זו המתוארת להלן ניתן להרחיב בקלות את מודל ממאירות הקשורות סרטן נטיות גנטיות אחרות.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:828px;" width="828">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Plastic ware</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:208px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">100 mm Dish</td>
			<td style="width:157px;">Corning</td>
			<td style="width:136px;">430107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">60 mm Dish</td>
			<td style="width:157px;">Corning</td>
			<td style="width:136px;">430166</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">6-well Plate</td>
			<td style="width:157px;">Falcon</td>
			<td style="width:136px;">353046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">12-well Plate</td>
			<td style="width:157px;">Falcon</td>
			<td style="width:136px;">353043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">48-well Plate</td>
			<td style="width:157px;">Falcon</td>
			<td style="width:136px;">353078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">1 mL Pipet Tip</td>
			<td style="width:157px;">USA Scientific</td>
			<td style="width:136px;">1111-2721</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">200 &#181;L Pipet Tip</td>
			<td style="width:157px;">USA Scientific</td>
			<td style="width:136px;">1111-0706</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">10 &#181;L Pipet Tip</td>
			<td style="width:157px;">USA Scientific</td>
			<td style="width:136px;">1111-3700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">5 mL Serological Pipette</td>
			<td style="width:157px;">SARSTEDT</td>
			<td style="width:136px;">86.1253.001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">10 mL Serological Pipette</td>
			<td style="width:157px;">SARSTEDT</td>
			<td style="width:136px;">86.1254.001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">25 mL Serological Pipette</td>
			<td style="width:157px;">SARSTEDT</td>
			<td style="width:136px;">86.1685.001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">50 mL Tube, PP</td>
			<td style="width:157px;">SARSTEDT</td>
			<td style="width:136px;">62.547.100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">15 mL Tube, PP</td>
			<td style="width:157px;">SARSTEDT</td>
			<td style="width:136px;">62.554.100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Culture materials and Reagents</td>
			<td style="width:157px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:327px;">CytoTune- iPS 2.0 Sendai Reprogramming Kit</td>
			<td style="width:157px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:136px;">A16517</td>
			<td style="width:208px;">Commercial Sendai virus reprogramming kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Corning hESC-Qualified Matrix</td>
			<td style="width:157px;">Corning</td>
			<td style="width:136px;">354277</td>
			<td style="width:208px;">Basement membrane matrix</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">CF1 MEFs, irradiated</td>
			<td style="width:157px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:136px;">A34180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">DMEM</td>
			<td style="width:157px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:136px;">D5671</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">DMEM/F12</td>
			<td style="width:157px;">Corning</td>
			<td style="width:136px;">10-090-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#945;MEM</td>
			<td style="width:157px;">Corning</td>
			<td style="width:136px;">10-022-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">StemMACS iPS-Brew XF</td>
			<td style="width:157px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:136px;">130-104-368</td>
			<td>Commercial iPSC medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">KnockOut DMEM/F-12</td>
			<td style="width:157px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:136px;">12660012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">FBS Opti-Gold</td>
			<td style="width:157px;">GenDEPOT</td>
			<td style="width:136px;">F0900-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">KnockOut Serum Replacement</td>
			<td style="width:157px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:136px;">A3181502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:157px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:136px;">P4333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">MEM Nonessential Amino Acids</td>
			<td style="width:157px;">Corning</td>
			<td style="width:136px;">25-025-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">L-Glutamine Solution</td>
			<td style="width:157px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:136px;">G7513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">2-Mercaptoethanol</td>
			<td style="width:157px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:136px;">M3148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Human FGF-basic (bFGF)</td>
			<td style="width:157px;">PEPROTECH</td>
			<td style="width:136px;">100-18B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Recombinant Human PDGF-AB</td>
			<td style="width:157px;">PEPROTECH</td>
			<td style="width:136px;">100-00AB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">&#946;-Glycerophosphate</td>
			<td style="width:157px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:136px;">G9422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Dexamethasone</td>
			<td style="width:157px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:136px;">A4902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:327px;">Ascorbic Acid</td>
			<td style="width:157px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:136px;">A5960</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:327px;">Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Saline, 1x (DPBS)</td>
			<td style="width:157px;">Corning</td>
			<td style="width:136px;">21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">StemMACS Passaging Solution XF</td>
			<td style="width:157px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:136px;">130-104-688</td>
			<td>Commercial passaging solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Accutatse Cell Detachment Solution</td>
			<td style="width:157px;">Corning</td>
			<td style="width:136px;">25-058-CI</td>
			<td>Cell detachment solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Thiazovivin (ROCK Inhibitor)</td>
			<td style="width:157px;">Calbiochem</td>
			<td style="width:136px;">420220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">0.25% Trypsin-EDTA Solution</td>
			<td style="width:157px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:136px;">T4049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Collagenase, Type II&#160;&#160;</td>
			<td style="width:157px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:136px;">17101015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Human NANOG Antibody</td>
			<td style="width:157px;">R&#38;D System</td>
			<td style="width:136px;">AF1997</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">OCT4 Antibody (H-134)</td>
			<td style="width:157px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:136px;">sc-9081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Human/Mouse SSEA-4 PE-conjugated Antibody</td>
			<td style="width:157px;">R&#38;D System</td>
			<td style="width:136px;">FAB1435P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:327px;">Alexa Fluor 555 Mouse Anti-Human TRA-1-81 Antigen</td>
			<td style="width:157px;">DB Biosciences</td>
			<td style="width:136px;">560123</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:327px;">Alexa Fluor 488 Donkey Anti-Goat IgG (H+L)</td>
			<td style="width:157px;">Jackson ImmunoResearch</td>
			<td style="width:136px;">705-545-003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:327px;">Alexa Fluor 488 Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)</td>
			<td style="width:157px;">Jackson ImmunoResearch</td>
			<td style="width:136px;">111-545-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">PE Mouse Anti-Human CD105</td>
			<td style="width:157px;">eBioscience</td>
			<td style="width:136px;">12-1057-42</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">FITC Mouse Anti-Human CD44</td>
			<td style="width:157px;">DB Biosciences</td>
			<td style="width:136px;">555478</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">PE Mouse Anti-Human CD73</td>
			<td style="width:157px;">DB Biosciences</td>
			<td style="width:136px;">550257</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">PE Mouse Anti-Human CD166</td>
			<td style="width:157px;">DB Biosciences</td>
			<td style="width:136px;">560903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">FITC Mouse Anti-Human CD24</td>
			<td style="width:157px;">DB Biosciences</td>
			<td style="width:136px;">555427</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:327px;">Donkey Serum</td>
			<td style="width:157px;">Jackson ImmunoResearch</td>
			<td style="width:136px;">017-000-121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:327px;">Goat Serum</td>
			<td style="width:157px;">Jackson ImmunoResearch</td>
			<td style="width:136px;">005-000-121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Alkaline Phosphatase Staining Kit II</td>
			<td style="width:157px;">Stemgent</td>
			<td style="width:136px;">00-0055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Alizarin Red S</td>
			<td style="width:157px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:136px;">A5533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">TRIzol Reagent</td>
			<td style="width:157px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:136px;">15596018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Chloroform</td>
			<td style="width:157px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:136px;">C298-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">2-Propanol</td>
			<td style="width:157px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:136px;">A416-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Ethanol, Absolute, Molecular Biology Grade</td>
			<td style="width:157px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:136px;">BP28184</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">DNase I, RNase-free (1 U/&#181;L)</td>
			<td style="width:157px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:136px;">EN0521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">iScript cDNA Synthesis Kit</td>
			<td style="width:157px;">BioRad</td>
			<td style="width:136px;">1708891BUN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">iQ SYBR Green Supermix</td>
			<td style="width:157px;">BioRad</td>
			<td style="width:136px;">1708884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:327px;">Matrigel Matrix High Concentration (HC), Phenol-Red Free</td>
			<td style="width:157px;">Corning</td>
			<td style="width:136px;">354262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">1 mL Slip Tip Syringe, 26 Gauge x 5/8 Inch</td>
			<td style="width:157px;">DB Biosciences</td>
			<td style="width:136px;">309597</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling osteosarcoma using li-fraumeni syndrome patient-derived induced pluripotent stem cells

תסמונת לי-פראומני, היא תורשתית (הסימולטור) היא הפרעת סרטן תורשתית אוטוזומלית דומיננטית. חולים עם הסימולטור הן נטייה סוג שונים של גידולים, כולל אוסטאוסרקומה--אחד הראשית בתדירות הגבוהה ביותר-המטולוגיות ממאירות ב הילדות וההתבגרות. לכן, הסימולטור מספק מודל אידיאלי ללמוד זה גידול ממאיר. ניצול של מתודולוגיות iPSC, אוסטאוסרקומה הסימולטור-הקשורים שניתן למדל בהצלחה על ידי הבחנה הסימולטור החולה iPSCs גזע mesenchymal (MSCs), ולאחר מכן תאי העצם, תאי המוצא לכל osteosarcomas. אלו תאי העצם הסימולטור מסכם את הדברים oncogenic מאפייני אוסטאוסרקומה, מתן מערכת מודל אטרקטיבי עבור בהתוויית בפתוגנזה של אוסטאוסרקומה. כתב יד זה מדגים את פרוטוקול לדור של iPSCs של הסימולטור fibroblasts החולה, הבידול של iPSCs כדי MSCs, הבידול של MSCs תאי העצם, ויוו tumorigenesis באמצעות הסימולטור תאי העצם. ניתן להרחיב מודל המחלה זה iPSC לזיהוי סמנים ביולוגיים פוטנציאליים או מטרות טיפוליות הקשורות הסימולטור אוסטאוסרקומה.

פרוטוקול זה מציג את ההליכים לרבות הסימולטור iPSC הדור, MSC בידול, בידול אוסטאובלסט ויוו tumorigenesis assay באמצעות הסימולטור MSC-derived תאי העצם.
ערכת לדור של הסימולטור iPSCs מ fibroblasts באמצעות וירוס סנדאי זמינים מסחרית התכנות ערכת מוצג איור ...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לדור של pluripotent המושרה בתאי גזע (iPSCs) מ תסמונת לי-פראומני, היא תורשתית (הסימולטור) החולה נגזר fibroblasts, הבידול של iPSCs באמצעות גזע mesenchymal (MSCs) תאי העצם, מידול vivo tumorigenesis באמצעות תאי העצם של החולה-derived הסימולטור.

מידול אוסטאוסרקומה באמצעות תאי גזע Pluripotent נגזר החולה המושרה תסמונת לי-פראומני, היא תורשתית

Li-Fraumeni syndrome (LFS) is an autosomal dominant hereditary cancer disorder. Patients with LFS are predisposed to a various type of tumors, including ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Establishment of Cancer Stem Cell Cultures from Human Conventional Osteosarcoma

הקמת סרטן גזע תא תרבויות מן האדם הקונבנציונלי אוסטאוסרקומה

The current improvements in therapy against osteosarcoma (OS) have prolonged the lives of cancer patients, but the survival rate of five years remains ...

A Preclinical Mouse Model of Osteosarcoma to Define the Extracellular Vesicle-mediated Communication Between Tumor and Mesenchymal Stem Cells

דגם פרה העכבר של אוסטאוסרקומה כדי להגדיר את התקשורת חוץ-תאית שלפוחית בתיווך בין גידול בתאי גזע Mesenchymal

Within the tumor microenvironment, resident or recruited mesenchymal stem cells (MSCs) contribute to malignant progression in multiple cancer types. Under ...

Flow Cytometry to Estimate Leukemia Stem Cells in Primary Acute Myeloid Leukemia and in Patient-derived-xenografts, at Diagnosis and Follow Up

Flow Cytometry להעריך לוקמיה תאי גזע ראשי לוקמיה מיאלואידית חריפה, החולה-נגזר-xenografts, אבחון, מעקב.

Acute myeloid leukemia (AML) is a heterogeneous, and if not treated, fatal disease. It is the most common cause of leukemia-associated mortality in ...

Isolation and Characterization of Tumor-initiating Cells from Sarcoma Patient-derived Xenografts

בידוד ואפיון של הגידול-ליזום תאים מחולה סרקומה-Xenografts נגזרים

The existence and importance of tumor-initiating cells (TICs) have been supported by increasing evidence during the past decade. These TICs have been ...

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

מלנומה מטופלת-נגזר מודל Xenograft

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

Physiologic Patient Derived 3D Spheroids for Anti-neoplastic Drug Screening to Target Cancer Stem Cells

החולה הפיזיולוגי הנגזרות 3D Spheroids עבור הקרנת תרופות אנטי-נאופלסטית כדי למקד את תאי גזע הסרטן

In this protocol, we outline the procedure for generation of tumor spheroids within 384-well hanging droplets to allow for high-throughput screening of ...

Using Human Induced Pluripotent Stem Cells for the Generation of Tumor Antigen-specific T Cells

שימוש בתאי גזע של האדם המושרה Pluriפוטנטי עבור הדור של אנטיגן גידולים-תאים T ספציפיים

The generation and expansion of functional T cells in vitro can lead to a broad range of clinical applications. One such use is for the treatment of ...

Testing Targeted Therapies in Cancer using Structural DNA Alteration Analysis and Patient-Derived Xenografts

בדיקת טיפולים ייעודיים בסרטן באמצעות ניתוח שינוי DNA מבנית והמטופל נגזר Xenografts

We present here an integrative approach for testing efficacy of targeted therapies that combines the next generation sequencing technolo-gies, therapeutic ...

Combined Conditional Knockdown and Adapted Sphere Formation Assay to Study a Stemness-Associated Gene of Patient-derived Gastric Cancer Stem Cells

נוק-דאון מותנה משולב ואסא היווצרות כדור מותאם כדי ללמוד גן הקשורים לגזע של תאי גזע נגזר סרטן הקיבה נגזר

Cancer stem cells (CSCs) are implicated in tumor initiation, development and recurrence after treatment, and have become the center of attention of many ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

זרימת עבודה מהירה של סינון לזיהוי טיפול משולב פוטנציאלי עבור GBM באמצעות תאי גזע גליומה שמקורם במטופל

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...