Name: isolation of human endometrial stromal cells for in vitro decidualization
Uploaded: 2018-09-01T12:30:00
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ワシントン大学セントルイス、産科から本研究のために収集するすべてのひと子宮内膜生検が可能し、婦人科制度審査委員会 (IRB) を使用して書面による同意フォームを承認します。
1. 準備
<ol><li>1 x ハンクのバランスの取れた塩ソリューション (HBSS) の 500 mL を準備するには、(さらには HBSS + 媒体として参照される) メディア含むボトルに 100 U/mL ペニシリンおよび 100 μ g...

<ol>
	<li>Maruyama, T., Yoshimura, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+and+cellular+mechanisms+for+differentiation+and+regeneration+of+the+uterine+endometrium.">Molecular and cellular mechanisms for differentiation and regeneration of the uterine endometrium.</a> Endocrine Journal. 55, 795-810 (2008).</li><li>Yu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometrial+Stromal+Decidualization+Responds+Reversibly+to+Hormone+Stimulation+and+Withdrawal.">Endometrial Stromal Decidualization Responds Reversibly to Hormone Stimulation and Withdrawal.</a> Endocrinology. 157, 2432-2446 (2016).</li><li>Ahn, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cAMP-Response+Element-Binding+3-Like+Protein+1+(CREB3L1)+is+Required+for+Decidualization+and+its+Expression+is+Decreased+in+Women+with+Endometriosis.">cAMP-Response Element-Binding 3-Like Protein 1 (CREB3L1) is Required for Decidualization and its Expression is Decreased in Women with Endometriosis.</a> Current Molecular Medicine. 16, 276-287 (2016).</li><li>Gellersen, B., Brosens, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+decidualization+of+the+human+endometrium+in+reproductive+health+and+failure.">Cyclic decidualization of the human endometrium in reproductive health and failure.</a> Endocrine Reviews. 35, 851-905 (2014).</li><li>Telgmann, R., Gellersen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marker+genes+of+decidualization:+activation+of+the+decidual+prolactin+gene.">Marker genes of decidualization: activation of the decidual prolactin gene.</a> Human Reproduction Update. 4, 472-479 (1998).</li><li>Camden, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+regulation+by+estrogen+in+breast+cancer+1+(GREB1)+is+a+novel+progesterone-responsive+gene+required+for+human+endometrial+stromal+decidualization.">Growth regulation by estrogen in breast cancer 1 (GREB1) is a novel progesterone-responsive gene required for human endometrial stromal decidualization.</a> Molecular Human Reproduction. 23, 646-653 (2017).</li><li>Kommagani, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Promyelocytic+Leukemia+Zinc+Finger+Transcription+Factor+Is+Critical+for+Human+Endometrial+Stromal+Cell+Decidualization.">The Promyelocytic Leukemia Zinc Finger Transcription Factor Is Critical for Human Endometrial Stromal Cell Decidualization.</a> PLoS Genetics. 12, e1005937 (2016).</li><li>Large, M. J., DeMayo, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regulation+of+embryo+implantation+and+endometrial+decidualization+by+progesterone+receptor+signaling.">The regulation of embryo implantation and endometrial decidualization by progesterone receptor signaling.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 358, 155-165 (2012).</li><li>Zhang, X. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mesenchymal-epithelial+transition+during+in+vitro+decidualization.">The mesenchymal-epithelial transition during in vitro decidualization.</a> Reproductive Sciences. 20, 354-360 (2013).</li><li>Kommagani, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acceleration+of+the+glycolytic+flux+by+steroid+receptor+coactivator-2+is+essential+for+endometrial+decidualization.">Acceleration of the glycolytic flux by steroid receptor coactivator-2 is essential for endometrial decidualization.</a> PLoS Genetics. 9, e1003900 (2013).</li><li>Ramathal, C. Y., Bagchi, I. C., Taylor, R. N., Bagchi, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometrial+decidualization:+of+mice+and+men.">Endometrial decidualization: of mice and men.</a> Seminars in Reproductive Medicine. 28, 17-26 (2010).</li><li>Tamura, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Function+of+a+Transcription+Factor+WT1+in+Regulating+Decidualization+in+Human+Endometrial+Stromal+Cells+and+Its+Molecular+Mechanism.">Novel Function of a Transcription Factor WT1 in Regulating Decidualization in Human Endometrial Stromal Cells and Its Molecular Mechanism.</a> Endocrinology. 158, 3696-3707 (2017).</li><li>Vinketova, K., Mourdjeva, M., Oreshkova, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Decidual+Stromal+Cells+as+a+Component+of+the+Implantation+Niche+and+a+Modulator+of+Maternal+Immunity.">Human Decidual Stromal Cells as a Component of the Implantation Niche and a Modulator of Maternal Immunity.</a> Journal of Pregnancy. , 8689436 (2016).</li><li>Wu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+endometritis+modifies+decidualization+in+human+endometrial+stromal+cells.">Chronic endometritis modifies decidualization in human endometrial stromal cells.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 15, 16 (2017).</li><li>Garcia-Elias, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+quantification+methods+and+optimizing+protocols+for+microarray+hybridization+of+circulating+microRNAs.">Defining quantification methods and optimizing protocols for microarray hybridization of circulating microRNAs.</a> Scientific Reports. 7, 7725 (2017).</li><li>Brosens, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+endometrial+fibroblasts+immortalized+by+simian+virus+40+large+T+antigen+differentiate+in+response+to+a+decidualization+stimulus.">Human endometrial fibroblasts immortalized by simian virus 40 large T antigen differentiate in response to a decidualization stimulus.</a> Endocrinology. 137, 2225-2231 (1996).</li><li>Koukouritaki, S. B., Margioris, A. N., Gravanis, A., Hartig, R., Stournaras, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dexamethasone+induces+rapid+actin+assembly+in+human+endometrial+cells+without+affecting+its+synthesis.">Dexamethasone induces rapid actin assembly in human endometrial cells without affecting its synthesis.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 65, 492-500 (1997).</li></ol>

女性の月経周期は、それによって分泌細胞が上皮のようにラウンド、3、8に ESC のエストロージェンを誘導中黄体期のプロゲステロンのレベルの上昇によって特徴付けられます。エストロージェンの開始は、依存する生物です。ヒトでは、エストロージェンは、自発的にプロゲステロン濃度の上昇マウス胚盤胞の存在10,<sup ...

生殖年齢の女性がホルモンによって調節される子宮内膜の増殖・分化・月経1 として知られているプロセスで妊娠の準備のためにその後放出の毎月のサイクルを受ける初潮の段階と月経閉止期の間 ,2。ひと子宮内膜のような物理的な変更が必要1子宮壁に適切な胚移植です。形態学的および生化学的適応を含む子宮内膜の変化は卵巣性ステロイド ホルモンのエストロゲンとプロゲステロン (P4) を介して月経サイクルを通して仲介される3,4,5。増殖 (または卵胞) フェーズの中で排卵エストロゲン レベルが高く、子宮内膜肥厚を開始します。次の排卵、分泌 (または黄体) 相は丸め、上皮のような脱落膜細胞線維芽細胞のような外観から子宮内膜間質細胞 (ESC) の形態学的変化を誘導する P4 濃度の大幅な上昇を促進します。エストロージェン4,6として知られているプロセス。注入の失敗とその後初期流産胚4,7,8根本原因として不適切なエストロージェンを設置します。したがって、エストロージェン分子機構の解明、診断と妊娠初期の損失の治療に有利であります。
現在、子宮内膜間質細胞のエストロージェンの根本的な影響を探検するいくつかの手法が利用されています。生体内で、マウス子宮機械的刺激 (すなわち、, 傷) を介してエストロージェンの人工的に誘導することができますまたは油ホルモン プライミング子宮9で注入。人間とは異なる、この合成の刺激は、胚盤胞の存在、齧歯動物の10、11エストロージェンの開始のために必要なステップの外観を提供することで子宮内腔の分化を促進します。したがって、並進合併症の動物モデルと人間の生体内で調査を囲む倫理的なジレンマに関連するのためエストロージェン ベース モデルはほとんどが正常に研究体外。
本研究では被験者は両方のローカル英語とスペイン語の新聞広告の配置によって募集しています。この研究に適した候補として識別される科目は、研究コーディネーター、潜在的なリスクの完全な情報開示の説明に会うため持って来られます。潜在的なリスクの完全な理解の確認後、被験者の同意は書面と口頭の両方の形態で得られます。被写体の同意には、(1) 今後の研究目的のための組織の瀉血 (2) 長期的なストレージを受けるし、(3) 収集した組織標本から初代培養の作成に同意する権限が含まれています。同意、次科目は、人種/民族および/または機密保持のための権利を許可された自己で完了するフォームを与えられています。その後の訪問は、サブジェクトの月経周期に基づく子宮内膜生検を達成する予定です。この研究に募ったボランティア 2012年国勢調査によって文書化されたセントルイス都市圏の民族、人種的な人口を反映し、妊娠中の女性、胎児、胚を含む任意の脆弱な人口の参加を伴わない18 歳未満の年齢、または他の弱者の子供。生検サンプル コレクションに参加するための資格要件は、(1) 歳の 18-45 年 (2) (3) を持たない現在の妊娠や避妊薬ホルモン/子宮内のデバイスの使用規則的な月経周期 (25-32 日) を持つが現在膣感染症や性感染症 (5) ない現在の抗生物質治療と (6) を持たない登録 (4) 前 30 日間ないこと現在の異常な Pap 汚れ。
この研究では、ひと子宮内膜間質細胞 (HESC) を培養し、人工的に誘導した体外ホルモン (エストラジ オール (E2)、酢酸メドロキシプロゲステロン (MPA)、および環状アデノシンのサプリメントからエストロージェンを受けることに一リン酸塩 (キャンプ)) 媒体に。このメソッドは、エストロージェンの程度は、ホルモン治療日数の合計数に基づいて変更されます。細胞骨格再配置に伴い、ホルモン補充は脱落膜細胞が分泌のような資質2,4を発生生化学的適応を誘発します。プロラクチン (PRL) とインスリン様成長因子結合蛋白質 1 (IGFBP1) などの認刻極印の遺伝子の表現を活用して、確認、HESC エストロージェン5,12,の程度を定量化すること13,14します。 重要なことは、遺伝子の特定の打撃を行うこのプロトコルの生存性も実証されています。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:935px;" width="934">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Opti-MEM I (1X) Reduced Serum Medium</td>
			<td style="width:167px;">Gibco</td>
			<td style="width:131px;">31985-070</td>
			<td style="width:271px;">For decidualization media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">DMEM / F12 (1:1) (1X)</td>
			<td style="width:167px;">Gibco</td>
			<td style="width:131px;">11330-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Trypan Blue Stain (0.4%)</td>
			<td style="width:167px;">Gibco</td>
			<td style="width:131px;">15250-061</td>
			<td>For cell count</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">PureLink RNA Mini Kit</td>
			<td style="width:167px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:131px;">12183018A</td>
			<td>For RNA Isolation/Purification</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">TaqMan 2X Universal PCR Master Mix</td>
			<td style="width:167px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:131px;">4304437</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit</td>
			<td style="width:167px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:131px;">4374967</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Eukaryotic 18S rRNA Endogenous Control</td>
			<td style="width:167px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:131px;">4319413E</td>
			<td>For qPCR internal control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">TaqMan Gene Expression Assay Prolactin Probe</td>
			<td style="width:167px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:131px;">4331182</td>
			<td>For qPCR internal control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">TaqMan Gene Expression Assay IGFBP1 Probe</td>
			<td style="width:167px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:131px;">4331182</td>
			<td>For qPCR internal control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Phalloidin-iFluor 488 Reagent - CytoPainter</td>
			<td style="width:167px;">Abcam</td>
			<td style="width:131px;">ab176753</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Human Prolactin ELISA Kit</td>
			<td style="width:167px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:131px;">EHIAPRL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">16% Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:167px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:131px;">30525-89-4</td>
			<td>Fixative</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Lipofectamine RNAiMAX</td>
			<td style="width:167px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:131px;">13778150</td>
			<td>Transfection Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">ProLong Gold antifade reagent with DAPI</td>
			<td style="width:167px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:131px;">P36935</td>
			<td>For mounting</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">0.25% Trypsin-EDTA (1X)</td>
			<td style="width:167px;">Gibco</td>
			<td style="width:131px;">25200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Penicillin Streptomycin</td>
			<td style="width:167px;">Gibco</td>
			<td style="width:131px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Charcoal Stripped Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:167px;">Sigma</td>
			<td style="width:131px;">F6765-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Sodium Bicarbonate (7.5%)</td>
			<td style="width:167px;">Gibco</td>
			<td style="width:131px;">25080-094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Ficoll-Paque PLUS Reagent</td>
			<td style="width:167px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:131px;">45001749</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Collagenase from Clostridium histolyticum</td>
			<td style="width:167px;">Sigma</td>
			<td style="width:131px;">C0130-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td style="width:167px;">Sigma</td>
			<td style="width:131px;">DN25-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Medroxyprogesterone 17-acetate</td>
			<td style="width:167px;">Sigma</td>
			<td style="width:131px;">M1629-1G</td>
			<td>For EPC Media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Estradiol</td>
			<td style="width:167px;">Sigma</td>
			<td style="width:131px;">E1024-1G</td>
			<td>For EPC Media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">cAMP</td>
			<td style="width:167px;">Sigma</td>
			<td style="width:131px;">A6885-100MG</td>
			<td>For EPC Media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Fine straight stitch scissors</td>
			<td style="width:167px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:131px;">15396-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">TaqMan Gene Expression Assay NCOA2 Probe</td>
			<td style="width:167px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:131px;">4351372</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Fetal Bovine Serum, heat inactivated</td>
			<td style="width:167px;">Gibco</td>
			<td style="width:131px;">10-082-147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Antibiotic-antimycotic</td>
			<td style="width:167px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:131px;">15240062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Hank&#8217;s Balanced Salt Solution&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Corning</td>
			<td style="width:131px;">21-021-cv</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50 mL conical polypropylene Falcon tube</td>
			<td style="width:167px;">Corning</td>
			<td style="width:131px;">352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Dumont #5/45 Forceps</td>
			<td style="width:167px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:131px;">11251-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">100 x 15 mm Glass Petri dish</td>
			<td style="width:167px;">VWR</td>
			<td style="width:131px;">75845-546</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">40 micron cell strainer</td>
			<td style="width:167px;">Midsci</td>
			<td style="width:131px;">229481</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Isotemp 215 Water bath</td>
			<td style="width:167px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:131px;">FS-215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">LSE Centrifuge&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Corning</td>
			<td style="width:131px;">6755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Human NCOA2 siRNA&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Dharmacon</td>
			<td style="width:131px;">L-020159-00</td>
			<td>Gene specific qPCR probe</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Steri-cycle i160 CO2 Incubator&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:131px;">51030301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">NanoDrop 2000</td>
			<td style="width:167px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:131px;">ND-2000</td>
			<td>For RNA quantification</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Phosphate Buffered Saline&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:131px;">50146771</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">75 cm Canted Neck Cell Culture flask</td>
			<td style="width:167px;">Corning</td>
			<td style="width:131px;">430641U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">6 well Non-Pyrogenic Cell Culture Plate</td>
			<td style="width:167px;">Corning</td>
			<td style="width:131px;">3506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Pipet Controller Ultra</td>
			<td style="width:167px;">Corning</td>
			<td style="width:131px;">4099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Photoshop</td>
			<td style="width:167px;">Adobe</td>
			<td style="width:131px;">19.0.1.334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">25 cm Canted Neck Cell Culture flask</td>
			<td style="width:167px;">Corning</td>
			<td style="width:131px;">7200876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:167px;">Sigma</td>
			<td style="width:131px;">X100-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">15 mL conical polypropylene Falcon tube</td>
			<td style="width:167px;">Corning</td>
			<td style="width:131px;">352099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">10 mL Syringe</td>
			<td style="width:167px;">BD</td>
			<td style="width:131px;">302995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">1300 Series A2 Biological Safety Hood</td>
			<td style="width:167px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:131px;">1377</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">accuspin Micro17 centrifuge</td>
			<td style="width:167px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:131px;">13100675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">7500 Fast real time PCR system</td>
			<td style="width:167px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:131px;">3052632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">EVOS FL Immunofluorescence Microscope</td>
			<td style="width:167px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:131px;">01414-155G-291</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Leica Inverted Light Microscope</td>
			<td style="width:167px;">Leica</td>
			<td style="width:131px;">DMi1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Illrustrator</td>
			<td style="width:167px;">Adobe</td>
			<td style="width:131px;">22.0.1.253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Excel Spreadsheets</td>
			<td style="width:167px;">Microsoft</td>
			<td style="width:131px;">2016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Deckglaser 18 mm cover glasses</td>
			<td style="width:167px;">NeuVitro</td>
			<td style="width:131px;">GG-18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Reichert Bright-Line Hemacytometer</td>
			<td style="width:167px;">Sigma</td>
			<td style="width:131px;">Z359629-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">2-mercaptoethanol</td>
			<td style="width:167px;">Fisher Bioreagents</td>
			<td style="width:131px;">BP176-100</td>
			<td>For RNA lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:367px;">1.2mL External Threaded Polypropylene Cryogenic Vial</td>
			<td style="width:167px;">Corning</td>
			<td style="width:131px;">430658</td>
			<td>For freezing HESC cells&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Dimethyl Sulfoxide (DMSO)</td>
			<td style="width:167px;">Sigma</td>
			<td style="width:131px;">D2650-100mL</td>
			<td>For freezing media</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of human endometrial stromal cells for in vitro decidualization

分泌脱落膜に線維芽細胞のような外観からひと子宮内膜間質細胞 (HESC) の分化は、母親の子宮の子宮内に胚移植に必要な変換です。着床障害とそれに続く初期胚流産の根本的な原因として不適切なエストロージェンを設置します。したがって、エストロージェンの分子機構を理解することは成功した出生率向上に有利であります。人工エストロージェンの生体内研究は人間研究として動物モデル内での並進運動合併症に関連付けられている倫理的なジレンマのためしばしば制限しています。その結果、一次電池文化を通しての in vitroアッセイがホルモンを介してエストロージェンの変調を探るにしばしば用いられます。この研究は、悪名高くの分離と培養の培地にホルモンの補充によるその後の人工エストロージェンの詳しいプロトコルを提供します。さらに、この研究は、siRNA の脂質ベースの transfections を利用してノックダウンするうまく設計された方法興味の任意の遺伝子を提供します。このプロトコルにより、文化純度としてエストロージェンとの後の定量化の基礎となる分子機構を理解するための信頼性の高い方法としてこのモデルを活用する能力を最大化する製品の歩留まりの最適化decidualized 子宮内膜間質細胞因子を分泌します。

HESC 文化エストロージェン
次の分離、ひと子宮内膜間質細胞は 80-90% の confluency による単分子膜形成に培養し、体外エストロージェンの 10 nM E2、1 μ M MPA、50 μ M のキャンプと治療による (EPC)。エストロージェン体外に関連付けられている形態学的変化は、図 1 aに, 可視化さ?...

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Isolation of Human Endometrial Stromal Cells for In Vitro Decidualization

本稿ではエストロージェンの in vitroアッセイを行うひと子宮内膜間質細胞の分離文化の検証と最適化されたプロシージャ。さらに、この研究では、ひと子宮内膜間質細胞で Sirna を使用して特定の遺伝子の効率的にノックダウンする詳細な方法が提供します。

エストロージェン体外用ひと子宮内膜間質細胞の分離

The differentiation of human endometrial stromal cells (HESC) from fibroblast-like appearance into secretory decidua is a transformation required for ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation of Human Endometrial Stromal Cells for In Vitro Decidualization

Isolation and Enrichment of Human Adipose-derived Stromal Cells for Enhanced Osteogenesis

強化された骨形成のためのヒト脂肪由来間質細胞の単離および濃縮

Bone marrow-derived mesenchymal stromal cells (BM-MSCs) are considered the gold standard for stem cell-based tissue engineering applications. However, the ...

Isolation and Expansion of Mesenchymal Stem/Stromal Cells Derived from Human Placenta Tissue

単離およびヒト胎盤組織由来の間葉系幹/間質細胞の増殖

Mesenchymal stem/stromal cells (MSC) are promising candidates for use in cell-based therapies. In most cases, therapeutic response appears to be cell-dose ...

Rapid Isolation of BMPR-IB+ Adipose-Derived Stromal Cells for Use in a Calvarial Defect Healing Model

頭蓋冠欠損治癒モデルで使用するためのBMPR-IB +脂肪由来間質細胞の迅速な単離

Invasive cancers, major injuries, and infection can cause bone defects that are too large to be reconstructed with preexisting bone from the patient's own ...

Isolation of Mouse Endometrial Epithelial and Stromal Cells for In Vitro Decidualization

Isolation of Mouse Endometrial Epithelial and Stromal Cells for In Vitro Decidualization

マウス子宮内膜上皮と間質細胞の単離のために<em&gt;インビトロ</em&gt;脱落膜化

Decidualization is a progesterone-dependent differentiation process of endometrial stromal cells and is a prerequisite for successful embryo implantation. ...

Isolation and Characterization of Mesenchymal Stromal Cells from Human Umbilical Cord and Fetal Placenta

ヒト臍帯及び胎児胎盤由来間葉系間質細胞の単離および特徴付け

The human umbilical cord (UC) and placenta are non-invasive, primitive and abundant sources of mesenchymal stromal cells (MSCs) that have increasingly ...

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

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ヒト多能性幹細胞のin vitro分化における絨毛細胞へ

The placenta is the first organ to develop during embryogenesis and is required for the survival of the developing embryo. The placenta is comprised of ...

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

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体外ヒト間葉系幹細胞の心筋細胞のような細胞への分化

Myocardial infarction and the subsequent ischemic cascade result in the extensive loss of cardiomyocytes, leading to congestive heart failure, the leading ...

Corneal Tissue Engineering: An In Vitro Model of the Stromal-nerve Interactions of the Human Cornea

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角膜組織工学: In Vitroのモデル人間の角膜の神経間質相互作用

Tissue engineering has gained substantial recognition due to the high demand for human cornea replacements with an estimated 10 million people worldwide ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

体節誘導体誘導される人間からの体外世代多能性幹細胞します。

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

Generation of Multicellular Human Primary Endometrial Organoids

多細胞ヒト初等子宮内膜オルガノイドの生成

The human endometrium is one of the most hormonally responsive tissues in the body and is essential for the establishment of pregnancy. This tissue can ...