Name: a droplet-based microfluidic approach and microsphere-pcr amplification for single-stranded dna amplicons
Uploaded: 2018-11-14T13:45:00
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Cette étude est soutenue par un projet intitulé « Programme coopératif recherche pour l’Agriculture Science & Technology Development (projet no PJ0011642) » financé par l’Administration du développement Rural, République de Corée. Cette recherche a été en partie financée par une subvention (FRO-2017R1A2B4012253) le programme de recherche scientifique fondamentale grâce à la Fondation de recherche National (NRF) financé par le ministère de la Science, TIC & planification Future, République de Corée. Cette recherche a été également soutenue par une subvention (N0000717) du programme d’enseignement pour les créatives et Convergence industrielle financé par le ministère du commerce, l’industrie et de l’énergie, République de Corée.

1. fabrication d’une plate-forme de microfluidique PDMS
<ol><li>Préparer 20 mL de liquide prépolymère de PDMS en mélangeant à base de polymères et de catalyseur dans un rapport de volume de 10:1. Verser 10 mL du liquide PDMS sur un moule de SU-8 préparé sur une plaquette de silicium pour la partie supérieure du réseau microfluidique. Pour la partie inférieure plate, versez le même volume de liquide PDMS sur la plaquette de silicium sans une structure de moule. Note : Le réseau microfluidique est con?...

<ol>
	<li>Smith, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+exonuclease+III+for+preparing+single+stranded+DNA+for+use+as+a+template+in+the+chain+terminator+sequencing+method.">The use of exonuclease III for preparing single stranded DNA for use as a template in the chain terminator sequencing method.</a> Nucleic Acids Research. 6 (3), 831-848 (1979).</li><li>Sekhon, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aptabody-aptatope+interactions+in+aptablotting+assays.">Aptabody-aptatope interactions in aptablotting assays.</a> Nanoscale. 9 (22), 7464-7475 (2017).</li><li>Ng, J. K., Ajikumar, P. K., Stephanopoulos, G., Too, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profiling+RNA+polymerase-promoter+interaction+by+using+ssDNA-dsDNA+probe+on+a+surface+addressable+microarray.">Profiling RNA polymerase-promoter interaction by using ssDNA-dsDNA probe on a surface addressable microarray.</a> Chembiochem. 8 (14), 1667-1670 (2007).</li><li>Sekhon, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+copper+binding+aptamotif+and+aptamer+integrated+recovery+platform+(AIRP).">Defining the copper binding aptamotif and aptamer integrated recovery platform (AIRP).</a> Nanoscale. 9 (8), 2883-2894 (2017).</li><li>Mikhailov, V. S., Bogenhagen, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Xenopus+laevis+mitochondrial+single-stranded+DNA-binding+protein+on+primer-template+binding+and+3'--&gt;5'+exonuclease+activity+of+DNA+polymerase+gamma.">Effects of Xenopus laevis mitochondrial single-stranded DNA-binding protein on primer-template binding and 3'--&gt;5' exonuclease activity of DNA polymerase gamma.</a> Journal of Biological Chemistry. 271 (31), 18939-18946 (1996).</li><li>Yu, X., Cheng, G., Zhou, M. D., Zheng, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On-demand+one-step+synthesis+of+monodisperse+functional+polymeric+microspheres+with+droplet+microfluidics.">On-demand one-step synthesis of monodisperse functional polymeric microspheres with droplet microfluidics.</a> Langmuir. 31 (13), 3982-3992 (2015).</li><li>Akamatsu, K., Kanasugi, S., Nakao, S., Weitz, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane-Integrated+Glass+Capillary+Device+for+Preparing+Small-Sized+Water-in-Oil-in-Water+Emulsion+Droplets.">Membrane-Integrated Glass Capillary Device for Preparing Small-Sized Water-in-Oil-in-Water Emulsion Droplets.</a> Langmuir. 31 (25), 7166-7172 (2015).</li><li>Lee, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On-Flow+Synthesis+of+Co-Polymerizable+Oligo-Microspheres+and+Application+in+ssDNA+Amplification.">On-Flow Synthesis of Co-Polymerizable Oligo-Microspheres and Application in ssDNA Amplification.</a> PLoS One. 11 (7), e0159777 (2016).</li><li>Anna, S. L., Bontoux, N. B., Stone, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+dispersions+using+&amp;#34;flow+focusing&amp;#34;+in+microchannels.">Formation of dispersions using &amp;#34;flow focusing&amp;#34; in microchannels.</a> Applied Physics Letters. 82 (3), 364-366 (2003).</li><li>Gupta, A., Matharoo, H. S., Makkar, D., Kumar, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Droplet+formation+via+squeezing+mechanism+in+a+microfluidic+flow-focusing+device.">Droplet formation via squeezing mechanism in a microfluidic flow-focusing device.</a> Computers &amp; Fluids. 100, 218-226 (2014).</li><li>McDonald, J. C., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly(dimethylsiloxane)+as+a+material+for+fabricating+microfluidic+devices.">Poly(dimethylsiloxane) as a material for fabricating microfluidic devices.</a> Accounts of Chemical Research. 35 (7), 491-499 (2002).</li><li>Haubert, K., Drier, T., Beebe, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDMS+bonding+by+means+of+a+portable,+low-cost+corona+system.">PDMS bonding by means of a portable, low-cost corona system.</a> Lab on a Chip. 6 (12), 1548-1549 (2006).</li><li>Olsen, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrated+Microfluidic+Selex+Using+Free+Solution+Electrokinetics.">Integrated Microfluidic Selex Using Free Solution Electrokinetics.</a> Journal of the Electrochemical Society. 164 (5), B3122-B3129 (2017).</li><li>Dorris, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oligodeoxyribonucleotide+probe+accessibility+on+a+three-dimensional+DNA+microarray+surface+and+the+effect+of+hybridization+time+on+the+accuracy+of+expression+ratios.">Oligodeoxyribonucleotide probe accessibility on a three-dimensional DNA microarray surface and the effect of hybridization time on the accuracy of expression ratios.</a> BMC Biotechnology. 3, 6 (2003).</li><li>Heiat, M., Ranjbar, R., Latifi, A. M., Rasaee, M. J., Farnoosh, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+strategies+to+optimize+asymmetric+PCR+conditions+as+a+reliable+method+to+generate+large+amount+of+ssDNA+aptamers.">Essential strategies to optimize asymmetric PCR conditions as a reliable method to generate large amount of ssDNA aptamers.</a> Biotechnology and Applied Biochemistry. 64 (4), 541-548 (2017).</li></ol>

Contaminants des ADN double brin sont un enjeu majeur pour l’amplification de l’ADN simple brin. Il reste difficile d’amplification ADN double brin dans les classiques de l’amplification PCR asymétrique15de minimiser. En outre, bien que des améliorations techniques pour générer des ADN simple brin nous ont permis d’accroître l’efficacité du débit de l’échantillon, isolement de l’ADN simple brin est toujours problématique en raison de ses coûts élevés et des rendements d...

ADN simple brin (ssDNA) a été largement considéré comme un élément de reconnaissance moléculaire (MRE) en raison de ses propriétés intrinsèques d’hybridation de l’ADN1,2. Le développement de systèmes synthétiques ADNsb peut conduire à des applications biologiques telles que l’ADN microarrays3, oligotherapeutics, diagnostic et détection moléculaire intégrée basée sur des interactions complémentaires4,5.
A ce jour, les particules de polymère-l’échelle du micromètre ont fait leur preuve à l’aide de dispositifs microfluidiques. Plusieurs techniques de microfluidique sont est avérés pour être puissant pour produire des microsphères très homogènes sur le flux continu du microchannel environnement6,7.
Dans l’étude de Lee et al. 8, une plate-forme microfluidique axée sur les gouttelettes de synthèse microfluidique de polymérisables oligo-microsphères et ADNsb amplification a été signalé. La plate-forme microfluidique se compose de deux couches PDMS (diméthylsiloxane) : une partie supérieure avec un réseau de canaux microfluidiques pour générer des microsphères et un fond plat partie. Ceux-ci se composent de trois types de canaux fluidiques PDMS : 1) un débit en se concentrant channel pour la production de gouttelettes, 2) une chaîne serpentine pour mélanger les deux solutions et 3) un canal de polymérisation séquentiel pour la solidification de microsphères. Une fois que les deux flux non miscibles sont introduits dans un seul canal fluidique de PDMS, le flux peut être forcé à travers la structure de l’orifice étroit. Les comportements de flux tels que la géométrie du canal, débit et viscosité affectent la taille et la morphologie de la microsphère. Par conséquent, le flux de liquid principal peut être divisé en microscale monospheres9,10.
Ici, un protocole détaillé microsphères-PCR est fourni pour l’amplification de l’ADN simple brin. Tout d’abord, un processus de conception de dispositif microfluidique axée sur la gouttelette est décrite. Ensuite, la façon dans laquelle polyacrylamide microsphères peuvent être fonctionnalisés avec matrice aléatoire d’ADN de manière complémentaire est expliquée. Enfin, un protocole de microsphères-PCR pour amplifier l’ADN simple brin est montré.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>liquid polydimethylsiloxane, PDMS</td>
			<td>Dow Corning Inc.</td>
			<td>Sylgard 184</td>
			<td>Components of chip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40% Acrylamide:bis solution (19:1)</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>1610140</td>
			<td>Components of Copolymerizable oligo-microsphere</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium persulfate, APS</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A3678</td>
			<td>Hardener of acrylamide:bis solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N,N,N&#8242;,N&#8242;-Tetramethylethylenediamine, TEMED</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T9281</td>
			<td>Catalyst of ammonium persulfate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M5904</td>
			<td>Table 1. Solution III. Component of microsphere reagents</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cy3 labeled complementary oligonucleotide probes</td>
			<td>Bioneer</td>
			<td>synthesized</td>
			<td>Table 3. Sequence information&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ssDNA acrydite labeled probe</td>
			<td>Bioneer</td>
			<td>synthesized</td>
			<td>Table 1. Solution I. Component of microsphere reagents</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Biosesang</td>
			<td>&#160;T1016</td>
			<td>Components of TE buffer, pH buffer solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>EDS</td>
			<td>Components of TE buffer, removal of ion (Ca2+)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ex taq</td>
			<td>Takara</td>
			<td>RR001A</td>
			<td>ssDNA amplification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope&#160;</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>LSM 510</td>
			<td>Identifying oligonucleotides expossure of microsphere surface</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light Microscope</td>
			<td>Nikon Instruments Inc.</td>
			<td>eclipse 80i</td>
			<td>Caculating number of microspheres</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T100 Thermal Cycler</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>1861096</td>
			<td>ssDNA amplification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hand-held Corona Treater</td>
			<td>Electro-Technic</td>
			<td>BD-20AC Laboratory Corona Treater</td>
			<td>Hydrophilic surface treatment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>As one</td>
			<td>HI-1000</td>
			<td>heating plate for curing of liquid PDMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe pump</td>
			<td>kd Scientific</td>
			<td>78-1100</td>
			<td>Uniform flow of Solution I and Solution II</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compressor</td>
			<td>Kohands</td>
			<td>KC-250A</td>
			<td>Flow control of Solution III</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bright-Line Hemacytometer</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z359629</td>
			<td>Caculating number of microspheres</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a droplet-based microfluidic approach and microsphere-pcr amplification for single-stranded dna amplicons

Axée sur les gouttelettes microfluidics permettent la production fiable des microsphères homogènes dans le canal de la microfluidique, fournissant contrôlé de taille et de la morphologie de la microsphère obtenu. Une microsphère copolymérisé avec une sonde d’ADN-acrydite a été fabriqué avec succès. Différentes méthodes telles que la PCR asymétrique, digestion exonucléase et l’isolation sur streptavidine des billes magnétiques permet de synthétiser l’ADN simple brin (ADN simple brin). Cependant, ces méthodes ne peut pas utiliser efficacement de grandes quantités d’ADN simple brin hautement purifiée. Nous décrivons ici un protocole de PCR-microsphères détaillant comment ADNsb peut être efficacement amplifié et séparé du dsDNA simplement par pipetage à partir d’un tube de réaction PCR. L’amplification de l’ADN simple brin peut être appliquée comme réactifs possibles pour les biopuces et ADN-SELEX (évolution systématique des ligands par enrichissement exponentiel).

La plate-forme fabriqué polymériques axée sur les gouttelettes microfluidique se compose de deux couches PDMS (Figure 1 a). Trois types de réseaux de canaux microfluidiques sont utilisés pour générer des microsphères : géométrie 1) flux de mise au point comme illustré dans la Figure 1 bet 2) une chaîne serpentine pour mélanger la solution solution II et j’ai 3) un canal de polymérisation des microsphères solidif...

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A Droplet-Based Microfluidic Approach and Microsphere-PCR Amplification for Single-Stranded DNA Amplicons

Cet ouvrage fournit une méthode pour la fabrication de plateformes microfluidiques axée sur la goutte et l’application des microsphères de polyacrylamide pour l’amplification PCR-microsphères. La méthode PCR-microsphères permet d’obtenir des amplicons ADN monocaténaire sans séparer l’ADN bicaténaire.

Une approche fondée sur les gouttelettes de microfluidique et microsphères-PCR Amplification d’ADN monocaténaire Amplicons

Droplet-based microfluidics enable the reliable production of homogeneous microspheres in the microfluidic channel, providing controlled size and ...

Cette méthode peut aider à répondre aux questions clés de la technique combinatoire du système microfluidique et du domaine de la biotechnologie moléculaire, tels que les dispositifs microfluidiques et la méthode PCR d’asymétrie. Les principaux avantages de cette technique sont la production efficace de microsphériques hautement homogénéisés et la production d’ADN à brin unique sans aucune étape de séparation supplémentaire. Les implications de cette technique s’étendent vers le diagnostic ou la thérapie de diverses maladies.Parce que la génération d’ADN à brin unique est la clé pour les analyses ap-ta-mo-sis, il peut être utilisé pour la détection et le traitement. Bien que cette méthode puisse fournir un aperçu du système microfluidique tridimensionnel dans MEMS, elle peut également être appliquée à d’autres systèmes utilisés pour la détection et le traitement de la maladie. En général, les personnes nouvelles à cette méthode auront du mal à contrôler correctement les fluides de s’écouler dans la direction inverse.La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle pour observer la formation de microsphère dans la géométrie de focalisation du flux et la solidification des microsphériques générées. Tout d’abord, préparer 20 millilitres de prémère PDMS liquide en mélangeant le polymère de base et le catalyseur dans un rapport de 10 pour un. Verser 10 millilitres de PDMS liquide sur un moule SU-8 préparé sur une plaquette de silicium pour la partie supérieure du réseau microfluidique.Pour la partie inférieure plate, versez le même volume de PDMS liquide sur la plaquette de silicium sans structure de moule. Déposer deux plaquettes de silicium recouvertes d’un prémère PDMS liquide sur une plaque chauffante préchauffée et les guérir à 75 degrés Celsius pendant 30 minutes. Par la suite, retirez manuellement la couche PDMS guérie du moule SU-8.Alignez un outil rond de perforation de trou de 1,5 millimètre de diamètre au port pétrolier sur le réseau microfluidique répliqué pour l’interfaçage des canaux d’écoulement à l’échelle micron avec les échantillons macro-fluides. Puis frappez manuellement le trou à travers. Après avoir répété le processus de poinçonnage à trois reprises, effectuez un traitement de surface hydrophilique sur les couches supérieures et inférieures du PDMS à l’aide d’un traitement coronaire portatif pendant plusieurs secondes par échantillon.Empilez deux couches PDMS traitées au plasma et chauffez à 90 degrés Celsius pendant 30 minutes sur une plaque chauffante pour le processus de liaison PDMS-PDMS. Vortex et brièvement centrifugeuse une sonde standard mono-échouée acrydite d’ADN-étiquetée et une solution de stock d’acrylamide bis 19-to-one. Préparez la solution une en mélangeant 25 microlitres de solution bis à 40 % d’acrylamide bis, 10 microlitres d’ADN unifaillé, 10 microlitres de tampon TBE 5X et cinq microlitres d’eau.Préparez la solution deux avec 50 microlitres de 20% de persulfate d’ammonium. Préparez deux seringues remplies individuellement de la solution une et de la solution deux et montez-les sur la pompe à seringues pour introduire des flux de solution dans la plate-forme microfluidique. Préparer l’huile minérale mélangée avec 0,4% TEMED pour la solidification de surface de la microsphère.Après avoir rempli une bouteille en verre avec l’huile minérale, insérez deux tubes dans les ports pneumatiques et fluides dans le bouchon de la bouteille en verre comme réservoir microfluidique. Connectez les tubes entre la bouteille en verre et le port d’huile dans le dispositif microfluidique. Connectez les tubes aux deux ports de solution de l’appareil microfluidique afin de fournir les deux solutions à partir des pompes à seringues.Insérez ensuite les tubes au port de sortie afin de transférer la microsphère générée dans le bécher. Ensuite, réglez le débit de la pompe à seringues à 0,4 à 0,7 millilitres par heure. Réglez la pression d’air comprimé du compresseur à l’aide d’un régulateur.Placez un bécher en verre avec une barre magnétique sur une plaque chauffante et réglez la vitesse de rotation. Actionner la pompe à seringues et fournir l’air comprimé généré par un compresseur externe dans la bouteille en verre en utilisant le contrôle on-off d’une valve électromagnétique. À l’aide d’un microscope numérique, observez la formation de microsphériques dans la géométrie de focalisation du flux et la solidification des microsphériques générées dans le bécher en verre.L’observation de la formation de microsphériques est l’une des étapes les plus critiques car il s’agit d’un processus majeur dans cette étude pour produire des microsphériques et un système microfluidique. Par la suite, transférer 100 microlitres des microsphériques dans un tube de micro-centrifugeuse de 1,5 millilitre. Retirez ensuite le supernatant par centrifugeuse douce et pipetting.Resuspendez la cyanine-3 modifiée par sonde gratuite à l’aide de 100 microlitres de tampon 1X TE afin d’atteindre une concentration finale de 100 micromolaires. Ensuite, ajoutez 100 micromolaires de cyanine-3 modifiée par sonde complémentaire à un tube stérile de micro-centrifugeuse de 1,5 millilitre contenant des microsphères copolymérisés AP. Appuyez sur le tube à quelques reprises pour mélanger et incuber à température ambiante dans l’obscurité pendant une heure.Après l’incubation, jeter le surnatant et retirer le tampon résiduel par pipetting. Rincez ensuite trois fois avec 500 microlitres de tampon TE. Déposer les microsphères sur une glissière en verre de 75 x 50 millimètres et couvrir de papier d’aluminium avant l’imagerie.Obtenez environ 25 microsphériques grâce au comptage microscopique à l’aide d’un microscope léger avec grossissement 40X. Par la suite, combinez tous les reagents tels que décrits dans le protocole texte. Placez les échantillons dans un thermocycleur et démarrez le PCR asymétrique dans les conditions appropriées.La collecte d’un supernatant après PCR asymétrique est l’une des étapes les plus critiques parce qu’il s’agit d’un processus majeur pour générer de l’ADN à brin unique avec des microsphère. Après amplification, ajouter huit microlitres de tampon de chargement 6X à chaque échantillon. Chargez 15 microlitres de chaque échantillon en gel agarose de 2 %.Ensuite, effectuez l’électrophorèse à 100 volts pendant 35 minutes dans le tampon 1X TAE. Placez les microsphères hybridés dans un support et fixez le support au stade d’un microscope confocal. Sélectionnez le laser et allumez-le dans le contrôle laser.Sélectionnez l’objectif dans le contrôle du microscope. Sélectionnez ensuite le filtre désiré pour la cyanine-3 et le canal dans le contrôle de configuration. Enfin, commencez l’expérience et observez l’échantillon.La plate-forme microfluidique polymérique fabriquée à base de gouttelettes se compose de deux couches PDMS. Trois types de réseaux de canaux microfluidiques sont utilisés pour générer des microsphères, qui sont la géométrie focalisée sur le flux, un canal serpentin pour mélanger les solutions une et deux, et un canal de polymérisation pour la solidification des microsphères. Un système de contrôle pneumatique en laboratoire pour le flux continu de l’huile minérale et deux pompes à seringues pour le flux de solution ont été utilisés pour générer des microsphériques dans la plate-forme microfluidique.Si les microsphères sont correctement fonctionnalisés avec la sonde d’ADN acrydite à cinq premiers, ils devraient entraîner une couverture de l’activité fluorescente à la surface pendant l’expérience d’hybridation comme le montrent ces images fluorescentes. Si la copolymérisation ne se produit pas correctement, l’image de la microsphère optique présenterait une contamination interne à l’intérieur des microsphériques. La manipulation de la surface 3D des microsphériques à l’aide d’une sonde oligo-oligo d’ADN est un processus beaucoup plus rapide et une plate-forme de synthèse de la microsphère à débit unique peut fournir un outil d’amplification et de purification de l’ADN à brin unique.L’AP à cinq premiers initialement copolymérisé fournit une extrémité hydroxyle à trois premiers pour la polymérisation de l’ADN après annealing à son modèle complémentaire. Des contaminants d’ADN à double brin ont été observés dans l’expérience asymétrique de PCR. L’ADN mono-échoué résultant accumulé de PCR de microsphère a été démontré par comparaison aux marqueurs synthétiques de taille par l’analyse d’électrophoresis de gel.Tout en essayant cette procédure, il est important de se rappeler que la connaissance préalable des protocoles et des ajustements qui sont généralement nécessaires pour optimiser les expériences PCR sont nécessaires pour obtenir le cycle d’amplification, la température d’annealage, et la séquence de sonde dans cette méthode. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine du diagnostic et de la thérapie pour relier deux régions en biotechnologie moléculaire et en biomédecine. N’oubliez pas que travailler avec la solution d’acrylamide peut être dangereux et que des précautions telles que le port de gants et de blouses de laboratoire doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure.

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