Name: making conjugation-induced fluorescent pegylated virus-like particles by dibromomaleimide-disulfide chemistry
Uploaded: 2018-05-27T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Making Conjugation-induced Fluorescent PEGylated Virus-like Particles by Dibromomaleimide-disulfide Chemistry at JoVE.com

J.J.G. מאשר את הקרן הלאומית למדע (DMR-1654405) ואת סרטן מניעה מחקר מכון טקסס (CPRIT) (RP170752s) לתמיכה שלהם.

1. הכנה
<ol><li>להפוך Lysogeny מרק (LB) אגר ויוצקים צלחות12.</li>
	<li>
בעקבות BL21(DE3) פלסמיד pET28 המכיל את רצף החלבון של המעיל wtQβ.
	<ol>
<li>הפשרת e. coli BL21(DE3) תאים המוסמכת באמבט קרח. במקום 50 μL של תאים צינור microcentrifuge.</li>
		<li>להוסיף 2 μL של פלסמיד לתוך שפופרת אחת וחבוט בעדינות את הצינור. ואז ת?...

<ol>
	<li>Pokorski, J., Breitenkamp, K., Liepold, L., Qazi, S., Finn, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+Virus-Based+Polymer-Protein+Nanoparticles+by+Atom+Transfer+Radical+Polymerization.">Functional Virus-Based Polymer-Protein Nanoparticles by Atom Transfer Radical Polymerization.</a> J. Am. Chem. Soc. 133 (24), 9242-9245 (2011).</li><li>Capehart, S., Coylet, M., Glasgow, J., Francis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+Integration+of+Gold+Nanoparticles+and+Organic+Fluorophores+Using+Synthetically+Modified+MS2+Viral+Capsids.">Controlled Integration of Gold Nanoparticles and Organic Fluorophores Using Synthetically Modified MS2 Viral Capsids.</a> J. Am. Chem. Soc. 135 (8), 3011-3016 (2013).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Template-Directed+Synthesis+of+Porous+and+Protective+Core-Shell+Bionanoparticles.">Template-Directed Synthesis of Porous and Protective Core-Shell Bionanoparticles.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 55 (36), 10691-10696 (2016).</li><li>Chen, Z., Li, N., Li, S., Dharmarwardana, M., Schlimme, A., Gassensmith, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+Chemistry:+The+Chemical+Functionalization+of+Viral+Architectures+to+Create+New+Technology.">Viral Chemistry: The Chemical Functionalization of Viral Architectures to Create New Technology.</a> WIREs. Nanomed. Nanobiotechnol. 8 (4), 512-534 (2015).</li><li>Chalker, J. M., Bernardes, G. J. L., Lin, Y. A., Davis, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+modification+of+proteins+at+cysteine:+opportunities+in+chemistry+and+biology.">Chemical modification of proteins at cysteine: opportunities in chemistry and biology.</a> Chem. - Asian J. 4 (5), 630-640 (2009).</li><li>Le, D. H., Lee, K. L., Shukla, S., Commandeur, U., Steinmetz, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potato+Virus+X,+a+Filamentous+Plant+Viral+Nanoparticle+for+Doxorubicin+Delivery+in+Cancer+Therapy.">Potato Virus X, a Filamentous Plant Viral Nanoparticle for Doxorubicin Delivery in Cancer Therapy.</a> Nanoscale. 9 (6), 2348-2357 (2017).</li><li>Chen, L., Wu, Y., Yuan, L., Wang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-templated+FRET+Platform+for+the+Rational+Design+of+Ratiometric+Fluorescent+Nanosensors.">Virus-templated FRET Platform for the Rational Design of Ratiometric Fluorescent Nanosensors.</a> Chem. Comm. 51 (50), 10190-10193 (2015).</li><li>Lee, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymer+Structure+and+Conformation+Alter+the+Antigenicity+of+Virus-like+Particle-Polymer+Conjugates.">Polymer Structure and Conformation Alter the Antigenicity of Virus-like Particle-Polymer Conjugates.</a> J. Am. Chem. Soc. 139 (9), 3312-3315 (2017).</li><li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymer-Protein+Core-Shell+Nanoparticles+for+Enhanced+Antigen+Immunogenicity.">Polymer-Protein Core-Shell Nanoparticles for Enhanced Antigen Immunogenicity.</a> ACS Macro Lett. 6 (4), 442-446 (2017).</li><li>Brown, S. D., Fielder, J. D., Finn, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assembly+of+Hybrid+Bacteriophage+Qbeta+virus-like+particles.">Assembly of Hybrid Bacteriophage Qbeta virus-like particles.</a> Biochemistry. 48 (47), 11155-11157 (2009).</li><li>Chen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+Functionalization+across+Quaternary+Structure+in+a+Virus-+like+Particle.">Fluorescent Functionalization across Quaternary Structure in a Virus- like Particle.</a> Bioconjugate Chem. 28 (9), 2277-2283 (2017).</li><li>. Pouring LB Agar Plates Available from: <a target="_blank" href="https://www.addgene.org/protocols/pouring-lb-agar-plates/">https://www.addgene.org/protocols/pouring-lb-agar-plates/</a> (2016)</li><li>Smith, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+Modification,+Bioconjugation,+and+Disulfide+Bridging+Using+Bromomaleimides.">Protein Modification, Bioconjugation, and Disulfide Bridging Using Bromomaleimides.</a> J. Am. Chem. Soc. 132 (6), 1960-1965 (2010).</li><li>Castaneda, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Mild+Synthesis+of+N-functionalised+Bromomaleimides,+Thiomaleimides+and+Bromopyridazinediones.">A Mild Synthesis of N-functionalised Bromomaleimides, Thiomaleimides and Bromopyridazinediones.</a> Tetrahedron Lett. 54 (27), 3493-3495 (2013).</li><li>Fiedler, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+Mutations+Change+the+Structure+and+Stability+of+a+Virus-+Like+Particle.">Engineered Mutations Change the Structure and Stability of a Virus- Like Particle.</a> Biomacromolecules. 13 (8), 2339-2348 (2012).</li><li>Manzenrieder, F., Luxenhofer, R., Retzlaff, M., Jordan, R., Finn, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stabilization+of+Virus-like+Particles+with+Poly(2-oxazoline)s.">Stabilization of Virus-like Particles with Poly(2-oxazoline)s.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 50 (11), 2601-2605 (2011).</li><li>Chen, Z., Li, N., Chen, L., Lee, J., Gassensmith, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual+Functionalized+Bacteriophage+Q&#946;+as+a+Photocaged+Drug+Carrier.">Dual Functionalized Bacteriophage Q&#946; as a Photocaged Drug Carrier.</a> Small. 12 (33), 4563-4571 (2016).</li></ol>

בהשוואה טיהור חלבון קטן, צעד ייחודי לטיהור bacteriophage Qβ הוא צנטריפוגה הדרגתי סוכרוז. לאחר השלב כלורופורם/n-butanol החילוץ, Qβ עוד יותר מטוהרים באמצעות 5-40% סוכרוז מעברי צבע. במהלך צנטריפוגה, חלקיקים מופרדים בהתאם לגודלן. חלקיקים גדולים יותר לנסוע לאזור צפיפות גבוהה יותר, בעוד חלקיקים קטנים יותר לה?...

שימוש בגודל ננו capsids ויראלי התפתחה שדה מרגש, שמטרתה להרחיב את טווח יישומי מחקר ביו1,2,3. חלקיקים דמויי וירוס ביטוי recombinantly (האח מים) נגזרות מבנית וירוסים, אך הם חסרים את החומר הגנטי הנגיפי המקורי שהופך אותם חלקיקים proteinaceous שאינן זיהומיות. תכונות פני השטח הם programed גנטית, כל capsid מתבטא באופן זהה לאלה לפני ואחרי זה, זה אפשרי לדעת את המיקום ואת מספר שרשראות צד תגובתי חומצות אמינו בדייקנות קואורדינטות. במקרים רבים, הן פנים וחוץ המשטחים בעלי סוגים רבים של שאריות ממס חומצת אמינו חשוף, אשר יתכן כבניין יכול להיות functionalized דרך bioconjugation תגובות - תגובות היוצרים קשרים הדדיים בין של biomolecule סינתטיים מולקולה4,5.
תגובות Bioconjugation לעזור מולקולות של עניין יש פונקציות יותר מגוונת בצורה פשוטה יחסית. מולקולות של עניין, כגון תרופות טיפוליות6, תגיות פלורסנט7 ופולימרים8,9 יכול להיות טרום מסונתז והוא מאופיין לפני הן מצורפות על-פני האח מים. . אח נפוץ במיוחד בביו biomaterials המחקר היה האיש החשוב בהתבסס על Bacteriophage Qβ, אשר, כפי recombinantly ביטוי, הוא capsid ויראלי icosahedral 28 nm10. האתרים התגובה הנפוצה ביותר על Qβ הם lysines על ידי מרווח רחב, אבל לנו יש לאחרונה תקשרו את ההטיה מוצלחת11 של תרכובות dibromomaleimide disulfides מופחת המרפדים את הנקבוביות של Qβ באמצעות תגובה Haddleton-בייקר. התגובה ממשיך עם טוב תשואות, לא פחות חשוב, בלי לאבד את יציבות תרמית של החלקיקים. במקביל, התגובה הזו יוצרת ההטיה-induced פלורסצנטיות, בו ניתן להשתמש כדי לעקוב אחר את ספיגת חלקיקי האלה לתוך התאים. בעבודה זאת, נדגים את ההטיה של פוליאתילן גליקול (PEG) על פני Qβ דרך התגובה Haddleton-בייקר, כשהתוצאה fluorophore צהוב בהיר. לאחר מכן ניתנים למעקב חלקיקים אלה כאשר הם נלקחים ידי תאים. פרוטוקול בזאת יסייע החוקרים ליצור חדש PEGylated פלורסנט חלקיקים proteinaceous בהתבסס על Qβ, על פי עקרונותיה חלים אחד רבים אחרים האח מים המכיל disulfides חשוף הממס.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">LB Broth (Miller)&#160;</td>
			<td style="width:71px;">EMD Millipore</td>
			<td style="width:119px;">1.10285.0500</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Tryptone, Poweder</td>
			<td style="width:71px;">Research Products International</td>
			<td style="width:119px;">T60060-1000.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Yeast Extract, Poweder</td>
			<td style="width:71px;">Research Products International</td>
			<td style="width:119px;">Y20020-1000.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Anhydrous magnesium sulfate</td>
			<td style="width:71px;">P212121</td>
			<td style="width:119px;">CI-06808-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sodium Chloride (Crystalline/Certified ACS)</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">S271-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Potassium Chloride</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP366-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Elga PURELAB Flex 3 Water Purification System</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">4474524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Potassium Phosphate Monobasic</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP362-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Potassium Phosphate Dibasic Anhydrous</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">P288-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sucrose</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">S25590B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ethanol</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP2818500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Isopropyl &#946;-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td style="width:71px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">I6758-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Fiberlite F10-4x1000 LEX rotor&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">096-041053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ammonium Sulfate</td>
			<td style="width:71px;">P212121</td>
			<td style="width:119px;">KW-0066-5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Chloroform</td>
			<td style="width:71px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:119px;">32614-M6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">1-Butanol</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">A399-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">SW 28 Ti Rotor, Swinging Bucket, Aluminum</td>
			<td style="width:71px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:119px;">342204: SW 28 Ti Rotor/ 342217: Bucket Set</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Type 70 Ti Rotor, Fixed Angle, Titanium, 8 x 39 mL,</td>
			<td style="width:71px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:119px;">337922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Coomassie (Bradford) Protein Assay</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">PI23200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">TRIS Hydrochloride</td>
			<td style="width:71px;">Research Products International</td>
			<td style="width:119px;">T60050-1000.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Tetramethylethylenediamine</td>
			<td style="width:71px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:119px;">J63734-AC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride</td>
			<td style="width:71px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">C4706-2G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">2 3-Dibromomaleimide 97%</td>
			<td style="width:71px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">553603-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Polythylene Glycol</td>
			<td style="width:71px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:119px;">41561-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sodium Phosphate</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">AC424375000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Acrylamide/bis-Acrylamide</td>
			<td style="width:71px;">P212121</td>
			<td style="width:119px;">RP-A11310-500.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sodium dodecyl sulfate</td>
			<td style="width:71px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">L3771-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ammonium Persulfate</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP179-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">FV3000 confocal laser scanning microscope</td>
			<td style="width:71px;">Olympus&#160;</td>
			<td>FV3000&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Labnet Revolver Adjustable Rotator&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Thomas Scientific&#160;</td>
			<td>1190P25&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">1000 mL Sorvall High Performance Bottle, PC, with Aluminum Cap&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">010-1459</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Nalgene Centrifuge Bottles with Caps, Polypropylene Copolymer</td>
			<td style="width:71px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">3141-0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Nunc Round-bottom tubes; 38 mL; PC</td>
			<td style="width:71px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">3117-0380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">2 L Narrow Mouth Erlenmeyer Flasks with Heavy Duty Rim</td>
			<td style="width:71px;">Pyrex</td>
			<td style="width:119px;">4980-2L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Amicon Ultra-4 Centrifugal Filter Units</td>
			<td style="width:71px;">Millipore Sigma</td>
			<td style="width:119px;">UFC801024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">M-110P Microfluidizer Materials Processor</td>
			<td style="width:71px;">Microfluidics</td>
			<td style="width:119px;">M-110P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Nalgene High-Speed Polycarbonate Round Bottom Centrifuge Tubes</td>
			<td style="width:71px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">3117-0380PK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Bottle, with Cap Assembly, Polycarbonate</td>
			<td style="width:71px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:119px;">41121703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Cylinder, Graduated - Polypropylene 250 mL</td>
			<td style="width:71px;">PolyLab</td>
			<td style="width:119px;">80005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">533LS-E Series Steam Sterilizers</td>
			<td style="width:71px;">Getinge</td>
			<td style="width:119px;">533LS-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">TrueLine, Cell Culture Plate, Treated, PS, 96 Well, with Lid</td>
			<td style="width:71px;">LabSource</td>
			<td style="width:119px;">D36-313-CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Falcon 15 mL Conical Centrifuge Tube</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-959-53A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Microcentifuge Tube: 1.5mL</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">05-408-129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">VWR Os-500 Orbital Shaker</td>
			<td style="width:71px;">VWR Scientifc Products</td>
			<td style="width:119px;">14005-830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tetra Handcast systems</td>
			<td style="width:71px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:119px;">1658000FC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Polypropylene, 250 mL</td>
			<td style="width:71px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:119px;">41121703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Spectrofluorometer NanoDrop</td>
			<td style="width:71px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">3300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Long Needle&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Hamilton&#160;</td>
			<td style="width:119px;">7693</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Exel International 5 to 6 cc Syringes Luer Lock</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-841-46</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">P1000 Pipetman</td>
			<td style="width:71px;">Gilson</td>
			<td style="width:119px;">F123602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">P200 Pipetman</td>
			<td style="width:71px;">Gilson</td>
			<td style="width:119px;">F123601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">P100 Pipetman</td>
			<td style="width:71px;">Gilson</td>
			<td style="width:119px;">F123615</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">P20 Pipetman</td>
			<td style="width:71px;">Gilson</td>
			<td style="width:119px;">F123600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">P10 Pipetman</td>
			<td style="width:71px;">Gilson</td>
			<td style="width:119px;">F144802</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="126">
			<td height="126" style="height:126px;width:216px;">Intel Weighing PM-100 Laboratory Classic High Precision Laboratory Balance</td>
			<td style="width:71px;">Intelligent Weighting Technology</td>
			<td style="width:119px;">IWT_PM100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Falcon 50 mL Conical Centrifuge Tube</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-432-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">4&#8211;15% Mini-PROTEAN TGX Gel, 10 well, 50 &#181;l</td>
			<td style="width:71px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:119px;">456-1084</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

making conjugation-induced fluorescent pegylated virus-like particles by dibromomaleimide-disulfide chemistry

העלייה האחרונה חלקיקים דמויי וירוס (האח מים) בביו, מחקר בנושא החומרים ניתן לייחס שלהם קלות ביוסינטזה, דיסקרטית, תיכנות גנטי בגודל biodegradability. בזמן שהם לבצע bioconjugation תגובות עבור הוספת ליגנדים סינתטי אל פני השטח שלהם, הטווח ב bioconjugation מתודולוגיות על אלה capsids נולד מימית מצומצמת יחסית. כדי להקל על הכיוון של biomaterials פונקציונלי מחקר, יש לקחת בחשבון תגובות bioconjugation לא מסורתיות. התגובה שמתואר פרוטוקול זה משתמש dibromomaleimides כדי להציג את הפונקציונליות החדשה של הממס דיסולפידי חשוף חוב של מישהו מיוחד המבוסס על Bacteriophage Qβ. יתר על כן, המוצר הסופי הוא פלורסנט, אשר יש ערך מוסף של יצירת החללית מאתריהם במבחנה באמצעות ערכת מסנן זמינים מסחרית.

יכול להיות מסונתז נגזרים dibromomaleimide דרך תגובת דחיסה בין אנהידריד dibromomaleimide אמינים ראשי15. לחלופין, שיטה סינתטית מתון16 באמצעות הפעלת N-methoxycarbonyl 3,4-dibromomaleimide נוצל כאן מגיבים methoxypolyethylene גליקול (PEG) כדי התשואה DB-יתד (איור 1). NMR שימש כדי לזהו?...

Watch this Scientific Journal Video about Making Conjugation-induced Fluorescent PEGylated Virus-like Particles by Dibromomaleimide-disulfide Chemistry at JoVE.com

Making Conjugation-induced Fluorescent PEGylated Virus-like Particles by Dibromomaleimide-disulfide Chemistry

ביצוע הנוצרות על-ידי ההטיה של חלקיקים דמויי וירוס PEGylated פלורסנט מאת כימיה Dibromomaleimide-דיסולפידי

כאן, אנו מציגים את הליך כדי fluorescently functionalize את disulfides על האח מים Qβ עם dibromomaleimide. אנו מתארים Qβ ביטוי טיהור, הסינתזה של מולקולות dibromomaleimide-functionalized, ואת התגובה ההטיה בין dibromomaleimide לבין Qβ. וכתוצאה מכך צהוב הניאון מצומדת החלקיק יכול לשמש מכשיר בדיקה קרינה פלואורסצנטית בתוך תאים.

The recent rise in virus-like particles (VLPs) in biomedical and materials research can be attributed to their ease of biosynthesis, discrete size, ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

A Microfluidic-based Hydrodynamic Trap for Single Particles

Microfluidic מבוססי הידרודינמית מלכודת חלקיקים יחיד

The ability to confine and manipulate single particles in free solution is a key enabling technology for fundamental and applied science.  Methods for ...

Thermodynamics of Membrane Protein Folding Measured by Fluorescence Spectroscopy

תרמודינמיקה של קיפול חלבונים ממברנה נמדד על ידי הקרינה ספקטרוסקופיה

Membrane protein folding is an emerging topic with both fundamental and health-related significance.  The abundance of membrane proteins in cells ...

Imaging of Biological Tissues by Desorption Electrospray Ionization Mass Spectrometry

הדמיה של רקמות ביולוגיות על ידי Desorption electrospray יינון המוני ספקטרומטריית

Mass spectrometry imaging (MSI) provides untargeted molecular information with the highest specificity and spatial resolution for investigating biological ...

Intra-lymph Node Injection of Biodegradable Polymer Particles

הזרקת בלוטות תוך-לימפתיות של חלקיקי פולימר מתכלים

Generation of adaptive immune response relies on efficient drainage or trafficking of antigen to lymph nodes for processing and presentation of these ...

Circulating MicroRNA Quantification Using DNA-binding Dye Chemistry and Droplet Digital PCR

במחזור כימות MicroRNA שימוש DNA מחייבת כימיה דיי PCR דיגיטלי אגל

Circulating (of cell-free) microRNAs (miRNAs) are released from cells into the blood stream. The amount of specific microRNAs in the circulation has been ...

Determination of Zeta Potential via Nanoparticle Translocation Velocities through a Tunable Nanopore: Using DNA-modified Particles as an Example

קביעת פוטנציאל זטה באמצעות Nanoparticle טרנסלוקציה מהירויות באמצעות nanopore מתכוונן: באמצעות חלקיקים שונה-DNA כמשל

Nanopore technologies, known collectively as Resistive Pulse Sensors (RPS), are being used to detect, quantify and characterize proteins, molecules and ...

Microfluidic Platform with Multiplexed Electronic Detection for Spatial Tracking of Particles

פלטפורמת microfluidic עם איתור Multiplexed אלקטרוני למערכות מעקב מרחבית של חלקיקים

Microfluidic processing of biological samples typically involves differential manipulations of suspended particles under various force fields in order to ...

Trapping of Micro Particles in Nanoplasmonic Optical Lattice

השמנה של חלקיקי מיקרו סריג אופטי Nanoplasmonic

The plasmonic optical tweezer has been developed to overcome the diffraction limits of the conventional far field optical tweezer. Plasmonic optical ...

Site-Directed Immobilization of Bone Morphogenetic Protein 2 to Solid Surfaces by Click Chemistry

האתר מכוון הנייח של עצם Morphogenetic חלבון 2 משטחים מוצקים על ידי לחץ על כימיה

Different therapeutic strategies for the treatment of non-healing long bone defects have been intensively investigated. Currently used treatments present ...

Engineering 'Golden' Fluorescence by Selective Pressure Incorporation of Non-canonical Amino Acids and Protein Analysis by Mass Spectrometry and Fluorescence