Name: making conjugation-induced fluorescent pegylated virus-like particles by dibromomaleimide-disulfide chemistry
Uploaded: 2018-05-27T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Making Conjugation-induced Fluorescent PEGylated Virus-like Particles by Dibromomaleimide-disulfide Chemistry at JoVE.com

J.J.G. признает Национальный научный фонд (DMR-1654405) и Институт исследования профилактики рака штата Техас (CPRIT) (RP170752s) за их поддержку.

1. Подготовка
<ol><li>Сделать Lysogeny бульон (LB) агар и залить12пластин.</li>
	<li>
Преобразование BL21(DE3) с pET28 плазмиды, содержащих последовательности белка wtQβ пальто.
	<ol>
<li>Оттепель E. coli BL21(DE3) сведущие клетки в ледяной бане. Место 50 мкл клеток в пробки microcentrifuge.</li>
		<li>Добав?...

<ol>
	<li>Pokorski, J., Breitenkamp, K., Liepold, L., Qazi, S., Finn, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+Virus-Based+Polymer-Protein+Nanoparticles+by+Atom+Transfer+Radical+Polymerization.">Functional Virus-Based Polymer-Protein Nanoparticles by Atom Transfer Radical Polymerization.</a> J. Am. Chem. Soc. 133 (24), 9242-9245 (2011).</li><li>Capehart, S., Coylet, M., Glasgow, J., Francis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+Integration+of+Gold+Nanoparticles+and+Organic+Fluorophores+Using+Synthetically+Modified+MS2+Viral+Capsids.">Controlled Integration of Gold Nanoparticles and Organic Fluorophores Using Synthetically Modified MS2 Viral Capsids.</a> J. Am. Chem. Soc. 135 (8), 3011-3016 (2013).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Template-Directed+Synthesis+of+Porous+and+Protective+Core-Shell+Bionanoparticles.">Template-Directed Synthesis of Porous and Protective Core-Shell Bionanoparticles.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 55 (36), 10691-10696 (2016).</li><li>Chen, Z., Li, N., Li, S., Dharmarwardana, M., Schlimme, A., Gassensmith, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+Chemistry:+The+Chemical+Functionalization+of+Viral+Architectures+to+Create+New+Technology.">Viral Chemistry: The Chemical Functionalization of Viral Architectures to Create New Technology.</a> WIREs. Nanomed. Nanobiotechnol. 8 (4), 512-534 (2015).</li><li>Chalker, J. M., Bernardes, G. J. L., Lin, Y. A., Davis, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+modification+of+proteins+at+cysteine:+opportunities+in+chemistry+and+biology.">Chemical modification of proteins at cysteine: opportunities in chemistry and biology.</a> Chem. - Asian J. 4 (5), 630-640 (2009).</li><li>Le, D. H., Lee, K. L., Shukla, S., Commandeur, U., Steinmetz, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potato+Virus+X,+a+Filamentous+Plant+Viral+Nanoparticle+for+Doxorubicin+Delivery+in+Cancer+Therapy.">Potato Virus X, a Filamentous Plant Viral Nanoparticle for Doxorubicin Delivery in Cancer Therapy.</a> Nanoscale. 9 (6), 2348-2357 (2017).</li><li>Chen, L., Wu, Y., Yuan, L., Wang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-templated+FRET+Platform+for+the+Rational+Design+of+Ratiometric+Fluorescent+Nanosensors.">Virus-templated FRET Platform for the Rational Design of Ratiometric Fluorescent Nanosensors.</a> Chem. Comm. 51 (50), 10190-10193 (2015).</li><li>Lee, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymer+Structure+and+Conformation+Alter+the+Antigenicity+of+Virus-like+Particle-Polymer+Conjugates.">Polymer Structure and Conformation Alter the Antigenicity of Virus-like Particle-Polymer Conjugates.</a> J. Am. Chem. Soc. 139 (9), 3312-3315 (2017).</li><li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymer-Protein+Core-Shell+Nanoparticles+for+Enhanced+Antigen+Immunogenicity.">Polymer-Protein Core-Shell Nanoparticles for Enhanced Antigen Immunogenicity.</a> ACS Macro Lett. 6 (4), 442-446 (2017).</li><li>Brown, S. D., Fielder, J. D., Finn, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assembly+of+Hybrid+Bacteriophage+Qbeta+virus-like+particles.">Assembly of Hybrid Bacteriophage Qbeta virus-like particles.</a> Biochemistry. 48 (47), 11155-11157 (2009).</li><li>Chen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+Functionalization+across+Quaternary+Structure+in+a+Virus-+like+Particle.">Fluorescent Functionalization across Quaternary Structure in a Virus- like Particle.</a> Bioconjugate Chem. 28 (9), 2277-2283 (2017).</li><li>. Pouring LB Agar Plates Available from: <a target="_blank" href="https://www.addgene.org/protocols/pouring-lb-agar-plates/">https://www.addgene.org/protocols/pouring-lb-agar-plates/</a> (2016)</li><li>Smith, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+Modification,+Bioconjugation,+and+Disulfide+Bridging+Using+Bromomaleimides.">Protein Modification, Bioconjugation, and Disulfide Bridging Using Bromomaleimides.</a> J. Am. Chem. Soc. 132 (6), 1960-1965 (2010).</li><li>Castaneda, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Mild+Synthesis+of+N-functionalised+Bromomaleimides,+Thiomaleimides+and+Bromopyridazinediones.">A Mild Synthesis of N-functionalised Bromomaleimides, Thiomaleimides and Bromopyridazinediones.</a> Tetrahedron Lett. 54 (27), 3493-3495 (2013).</li><li>Fiedler, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+Mutations+Change+the+Structure+and+Stability+of+a+Virus-+Like+Particle.">Engineered Mutations Change the Structure and Stability of a Virus- Like Particle.</a> Biomacromolecules. 13 (8), 2339-2348 (2012).</li><li>Manzenrieder, F., Luxenhofer, R., Retzlaff, M., Jordan, R., Finn, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stabilization+of+Virus-like+Particles+with+Poly(2-oxazoline)s.">Stabilization of Virus-like Particles with Poly(2-oxazoline)s.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 50 (11), 2601-2605 (2011).</li><li>Chen, Z., Li, N., Chen, L., Lee, J., Gassensmith, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual+Functionalized+Bacteriophage+Q&#946;+as+a+Photocaged+Drug+Carrier.">Dual Functionalized Bacteriophage Q&#946; as a Photocaged Drug Carrier.</a> Small. 12 (33), 4563-4571 (2016).</li></ol>

По сравнению с небольших очищение протеина, уникальный шаг в очищающий бактериофага Qβ — сахароза градиентного центрифугирования. После извлечения хлороформ/н бутанолом шага Qβ далее очищается с помощью 5-40% сахарозы градиентов. Во время центрифугирования частицы разделяются на их раз...

С помощью нано размера вирусного capsids стала возбуждающего поля, которая направлена на расширение сферы применения биомедицинских исследований в1,2,3. Recombinantly выразил вирусоподобных частиц (VLP) структурно являются производными от вирусов, но им не хватает оригинальных вирусного генетического материала, делая их неинфекционных белковых наночастиц. Как особенности поверхности генетически запрограммирован и каждый капсид выражается одинаково на те до и после него, это можно узнать местонахождение и количество реактивных боковых цепей аминокислот с атомистическим точностью. Во многих случаях наружных и внутренних поверхностей обладают многие виды растворителей подвергаются аминокислотных остатков, которые реально могут быть функционализированных через bioconjugation реакции - реакции, которые образуют ковалентные связи между биомолекулы и синтетические молекула4,5.
Bioconjugation реакции помогают биомолекул интерес у более разнообразных функций в относительно простой моды. Молекулы интереса, таких как лечебных препаратов6, флуоресцентные метки7 и полимеров8,9 могут быть предварительно синтезируется и характеризуется, прежде чем они крепятся на поверхности VLP. Особенно распространены VLP в биомедицинских и биоматериалов исследования был ВЛП, основанные на бактериофага Qβ, который, как recombinantly выраженным, является 28 Нм икосаэдра вирусного капсида10. Наиболее распространенные реакции сайты на Qβ являются lysines с большим отрывом, хотя недавно мы общались успешного сопряжения11 dibromomaleimide соединений для снижения дисульфиды, которые выстилают поры Qβ через Haddleton-Бейкер реакции. Реакция идёт с хорошим доходность и, что не менее важно, без потери термостабильности частиц. В то же время эта реакция генерирует спряжение индуцированной флуоресценции, который может использоваться для отслеживания поглощение этих частиц в клетки. В этой работе мы демонстрируем спряжение полиэтиленгликоля (PEG) на поверхность Qβ через Haddleton-Бейкер реакцию, которая приводит яркий желтый Флюорофор. Эти частицы затем могут быть отслежены, как они принимаются клетки. Протокол здесь поможет генерировать новые люминесцентные Пегилированный белковых наночастиц на основе Qβ, хотя его принципы применяются к одному из многих других VLP, содержащие растворитель подвергаются дисульфиды исследователей.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">LB Broth (Miller)&#160;</td>
			<td style="width:71px;">EMD Millipore</td>
			<td style="width:119px;">1.10285.0500</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Tryptone, Poweder</td>
			<td style="width:71px;">Research Products International</td>
			<td style="width:119px;">T60060-1000.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Yeast Extract, Poweder</td>
			<td style="width:71px;">Research Products International</td>
			<td style="width:119px;">Y20020-1000.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Anhydrous magnesium sulfate</td>
			<td style="width:71px;">P212121</td>
			<td style="width:119px;">CI-06808-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sodium Chloride (Crystalline/Certified ACS)</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">S271-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Potassium Chloride</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP366-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Elga PURELAB Flex 3 Water Purification System</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">4474524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Potassium Phosphate Monobasic</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP362-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Potassium Phosphate Dibasic Anhydrous</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">P288-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sucrose</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">S25590B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ethanol</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP2818500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Isopropyl &#946;-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td style="width:71px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">I6758-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Fiberlite F10-4x1000 LEX rotor&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">096-041053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ammonium Sulfate</td>
			<td style="width:71px;">P212121</td>
			<td style="width:119px;">KW-0066-5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Chloroform</td>
			<td style="width:71px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:119px;">32614-M6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">1-Butanol</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">A399-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">SW 28 Ti Rotor, Swinging Bucket, Aluminum</td>
			<td style="width:71px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:119px;">342204: SW 28 Ti Rotor/ 342217: Bucket Set</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Type 70 Ti Rotor, Fixed Angle, Titanium, 8 x 39 mL,</td>
			<td style="width:71px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:119px;">337922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Coomassie (Bradford) Protein Assay</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">PI23200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">TRIS Hydrochloride</td>
			<td style="width:71px;">Research Products International</td>
			<td style="width:119px;">T60050-1000.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Tetramethylethylenediamine</td>
			<td style="width:71px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:119px;">J63734-AC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride</td>
			<td style="width:71px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">C4706-2G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">2 3-Dibromomaleimide 97%</td>
			<td style="width:71px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">553603-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Polythylene Glycol</td>
			<td style="width:71px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:119px;">41561-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sodium Phosphate</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">AC424375000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Acrylamide/bis-Acrylamide</td>
			<td style="width:71px;">P212121</td>
			<td style="width:119px;">RP-A11310-500.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sodium dodecyl sulfate</td>
			<td style="width:71px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">L3771-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ammonium Persulfate</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP179-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">FV3000 confocal laser scanning microscope</td>
			<td style="width:71px;">Olympus&#160;</td>
			<td>FV3000&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Labnet Revolver Adjustable Rotator&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Thomas Scientific&#160;</td>
			<td>1190P25&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">1000 mL Sorvall High Performance Bottle, PC, with Aluminum Cap&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">010-1459</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Nalgene Centrifuge Bottles with Caps, Polypropylene Copolymer</td>
			<td style="width:71px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">3141-0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Nunc Round-bottom tubes; 38 mL; PC</td>
			<td style="width:71px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">3117-0380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">2 L Narrow Mouth Erlenmeyer Flasks with Heavy Duty Rim</td>
			<td style="width:71px;">Pyrex</td>
			<td style="width:119px;">4980-2L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Amicon Ultra-4 Centrifugal Filter Units</td>
			<td style="width:71px;">Millipore Sigma</td>
			<td style="width:119px;">UFC801024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">M-110P Microfluidizer Materials Processor</td>
			<td style="width:71px;">Microfluidics</td>
			<td style="width:119px;">M-110P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Nalgene High-Speed Polycarbonate Round Bottom Centrifuge Tubes</td>
			<td style="width:71px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">3117-0380PK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Bottle, with Cap Assembly, Polycarbonate</td>
			<td style="width:71px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:119px;">41121703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Cylinder, Graduated - Polypropylene 250 mL</td>
			<td style="width:71px;">PolyLab</td>
			<td style="width:119px;">80005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">533LS-E Series Steam Sterilizers</td>
			<td style="width:71px;">Getinge</td>
			<td style="width:119px;">533LS-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">TrueLine, Cell Culture Plate, Treated, PS, 96 Well, with Lid</td>
			<td style="width:71px;">LabSource</td>
			<td style="width:119px;">D36-313-CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Falcon 15 mL Conical Centrifuge Tube</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-959-53A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Microcentifuge Tube: 1.5mL</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">05-408-129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">VWR Os-500 Orbital Shaker</td>
			<td style="width:71px;">VWR Scientifc Products</td>
			<td style="width:119px;">14005-830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tetra Handcast systems</td>
			<td style="width:71px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:119px;">1658000FC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Polypropylene, 250 mL</td>
			<td style="width:71px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:119px;">41121703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Spectrofluorometer NanoDrop</td>
			<td style="width:71px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">3300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Long Needle&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Hamilton&#160;</td>
			<td style="width:119px;">7693</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Exel International 5 to 6 cc Syringes Luer Lock</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-841-46</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">P1000 Pipetman</td>
			<td style="width:71px;">Gilson</td>
			<td style="width:119px;">F123602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">P200 Pipetman</td>
			<td style="width:71px;">Gilson</td>
			<td style="width:119px;">F123601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">P100 Pipetman</td>
			<td style="width:71px;">Gilson</td>
			<td style="width:119px;">F123615</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">P20 Pipetman</td>
			<td style="width:71px;">Gilson</td>
			<td style="width:119px;">F123600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">P10 Pipetman</td>
			<td style="width:71px;">Gilson</td>
			<td style="width:119px;">F144802</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="126">
			<td height="126" style="height:126px;width:216px;">Intel Weighing PM-100 Laboratory Classic High Precision Laboratory Balance</td>
			<td style="width:71px;">Intelligent Weighting Technology</td>
			<td style="width:119px;">IWT_PM100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Falcon 50 mL Conical Centrifuge Tube</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-432-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">4&#8211;15% Mini-PROTEAN TGX Gel, 10 well, 50 &#181;l</td>
			<td style="width:71px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:119px;">456-1084</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

making conjugation-induced fluorescent pegylated virus-like particles by dibromomaleimide-disulfide chemistry

Недавний рост вирусоподобных частиц (VLP) в биомедицинских и материалы исследований можно отнести их простота биосинтез, дискретных размер, генетическое программирование и способность к биологическому разложению. Хотя они очень поддаются реакции bioconjugation для добавления синтетическими лигандами на их поверхность, диапазон в методологии bioconjugation на эти водные родился capsids относительно ограничен. Чтобы облегчить направление исследований функциональные биоматериалы, должны рассматриваться нетрадиционных bioconjugation реакций. Реакции, указанных в настоящем Протоколе использует dibromomaleimides ввести новую функциональность в растворителе, подвергаются дисульфидными облигаций VLP основе бактериофага Qβ. Кроме того конечный продукт флуоресцентные, которая имеет дополнительное преимущество генерации отслеживаются в vitro зонд, с помощью набора коммерчески доступных фильтров.

Dibromomaleimide производные могут быть синтезированы посредством реакции конденсации между dibromomaleimide ангидрид и первичных аминов15. Кроме того мягкий синтетический метод16 , с использованием N-метоксикарбонил активированный 3,4-dibromomaleimide эксплуатиров...

Watch this Scientific Journal Video about Making Conjugation-induced Fluorescent PEGylated Virus-like Particles by Dibromomaleimide-disulfide Chemistry at JoVE.com

Making Conjugation-induced Fluorescent PEGylated Virus-like Particles by Dibromomaleimide-disulfide Chemistry

Делая спряжение индуцированной флуоресцентные Пегилированный вирус типа частиц по химии Dibromomaleimide дисульфида

Здесь мы представляем процедура дневно functionalize дисульфиды на Qβ VLP с dibromomaleimide. Мы описываем выражение Qβ и очистки, Синтез функционализированных dibromomaleimide молекул и спряжение реакции между dibromomaleimide и Qβ. Результате желтый флуоресцентный конъюгированных частиц может использоваться как флуоресценции зонда внутрь клетки.

The recent rise in virus-like particles (VLPs) in biomedical and materials research can be attributed to their ease of biosynthesis, discrete size, ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

A Microfluidic-based Hydrodynamic Trap for Single Particles

Микрожидкостных основе гидродинамической Ловушка для одиночных частиц

The ability to confine and manipulate single particles in free solution is a key enabling technology for fundamental and applied science.  Methods for ...

Thermodynamics of Membrane Protein Folding Measured by Fluorescence Spectroscopy

Термодинамика Мембранные белки Складные Измеряется флуоресцентной спектроскопии

Membrane protein folding is an emerging topic with both fundamental and health-related significance.  The abundance of membrane proteins in cells ...

Imaging of Biological Tissues by Desorption Electrospray Ionization Mass Spectrometry

Изображений биологических тканей десорбцией Электроспрей ионизации масс-спектрометрии

Mass spectrometry imaging (MSI) provides untargeted molecular information with the highest specificity and spatial resolution for investigating biological ...

Intra-lymph Node Injection of Biodegradable Polymer Particles

Внутримямфотовая инъекция узлов биоразлагаемых полимерных частиц

Generation of adaptive immune response relies on efficient drainage or trafficking of antigen to lymph nodes for processing and presentation of these ...

Circulating MicroRNA Quantification Using DNA-binding Dye Chemistry and Droplet Digital PCR

Циркулирующие микроРНК Количественное Использование ДНК-связывающих Dye Химия и дроплет Digital PCR

Circulating (of cell-free) microRNAs (miRNAs) are released from cells into the blood stream. The amount of specific microRNAs in the circulation has been ...

Determination of Zeta Potential via Nanoparticle Translocation Velocities through a Tunable Nanopore: Using DNA-modified Particles as an Example

Определение дзета-потенциала через наночастицу транслокации через скоростей перестраиваемого нанопор: Использование ДНК-модифицированных частиц, как в примере

Nanopore technologies, known collectively as Resistive Pulse Sensors (RPS), are being used to detect, quantify and characterize proteins, molecules and ...

Microfluidic Platform with Multiplexed Electronic Detection for Spatial Tracking of Particles

Микрожидкостных Платформа с уплотненными электронным детектором для пространственного слежения частиц

Microfluidic processing of biological samples typically involves differential manipulations of suspended particles under various force fields in order to ...

Trapping of Micro Particles in Nanoplasmonic Optical Lattice

Треппинг микро частиц в Nanoplasmonic оптической решетки

The plasmonic optical tweezer has been developed to overcome the diffraction limits of the conventional far field optical tweezer. Plasmonic optical ...

Site-Directed Immobilization of Bone Morphogenetic Protein 2 to Solid Surfaces by Click Chemistry

Сайт направлен иммобилизации костных морфогенетических белка 2 для твердых поверхностей по химии нажмите

Different therapeutic strategies for the treatment of non-healing long bone defects have been intensively investigated. Currently used treatments present ...

Engineering 'Golden' Fluorescence by Selective Pressure Incorporation of Non-canonical Amino Acids and Protein Analysis by Mass Spectrometry and Fluorescence

Инжиниринг «Золотой» флуоресценции путем селективного давления включения неканонических аминокислот и белков анализ по масс-спектрометрии и флуоресценции