Name: calorespirometry: a powerful, noninvasive approach to investigate cellular energy metabolism
Uploaded: 2018-05-31T14:30:00
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이 작품은 메리 E. Konkle와 마이클 A. Menze 국립 과학 재단 교부 금 체-160944에 의해 부분적으로 투자 되었다.

1. 세포 배양
<ol><li>인간의 간세포 암 (HepG2) 셀 셀 문화 인큐베이터에서 37 ° C에서 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS)와 추가 기판 (10 mM 포도 당, 2 mM 글루타민 그리고 1 mM pyruvate)를 포함 하는 Dulbecco의 수정이 글의 중간 (DMEM) 유지 (5% CO 2 , 95% 공기, 습도 100%). 주: DMEM respirometry와 열 량에 대 한 이후 단계에서 참조 되는 경우 위의 DMEM 배합을 사용 합니다.</li>
	<li>1 x 106 세포 격판덮개 세포 1...

<ol>
	<li>Gnaiger, E., Kemp, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaerobic+metabolism+in+aerobic+mammalian+cells:+information+from+the+ratio+of+calorimetric+heat+flux+and+respirometric+oxygen+flux.">Anaerobic metabolism in aerobic mammalian cells: information from the ratio of calorimetric heat flux and respirometric oxygen flux.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1016, 328-332 (1990).</li><li>Barros, N., Gallego, M., Feijoo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calculation+of+the+specific+rate+of+catabolic+activity+(Ac)+from+the+heat+flow+rate+of+soil+microbial+reactions+measured+by+calorimetry:+significance+and+applications.">Calculation of the specific rate of catabolic activity (Ac) from the heat flow rate of soil microbial reactions measured by calorimetry: significance and applications.</a> Chemistry &amp; Biodiversity. 1, 1560-1568 (2004).</li><li>Cheney, M. A., Fiorillo, R., Criddle, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herbicide+and+estrogen+effects+on+the+metabolic+activity+of+Elliptio+complanata+measured+by+calorespirometry.">Herbicide and estrogen effects on the metabolic activity of Elliptio complanata measured by calorespirometry.</a> Comparative Biochemistry and Physiology - Part C: Pharmacology, Toxicology and Endocrinology. 118, 159-164 (1997).</li><li>Wadso, L., Hansen, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calorespirometry+of+terrestrial+organisms+and+ecosystems.">Calorespirometry of terrestrial organisms and ecosystems.</a> Methods. 76, 11-19 (2015).</li><li>Gnaiger, E., Woakes, A. J., Grieshaber, M. K., Bridges, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+energetics+at+very+low+oxygen:+information+from+calorimetry+and+respirometry.">Animal energetics at very low oxygen: information from calorimetry and respirometry.</a> Strategies for Gas Exchange and Metabolism. , 149-171 (1991).</li><li>Barros, N., Hansen, L. D., Pineiro, V., Perez-Cruzado, C., Villanueva, M., Proupin, J., Rodriguez-Anon, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+influencing+the+calorespirometric+ratios+of+soil+microbial+metabolism.">Factors influencing the calorespirometric ratios of soil microbial metabolism.</a> Soil Biology and Biochemistry. 92, 221-229 (2016).</li><li>Menze, M. A., Chakraborty, N., Clavenna, M., Banerjee, M., Liu, X. H., Toner, M., Hand, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+preconditioning+of+cells+with+AICAR-riboside:+improved+cryopreservation+and+cell-type+specific+impacts+on+energetics+and+proliferation.">Metabolic preconditioning of cells with AICAR-riboside: improved cryopreservation and cell-type specific impacts on energetics and proliferation.</a> Cryobiology. 61, 79-88 (2010).</li><li>Webb, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Human Calorimetry. , (1985).</li><li>Neven, L. G., Lehrman, N. J., Hansen, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+temperature+and+modified+atmospheres+on+diapausing+5th+instar+codling+moth+metabolism.">Effects of temperature and modified atmospheres on diapausing 5th instar codling moth metabolism.</a> Journal of Thermal Biology. 42, 9-14 (2014).</li><li>Brueckner, D., Solokhina, A., Krahenbuhl, S., Braissant, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+combined+application+of+tunable+diode+laser+absorption+spectroscopy+and+isothermal+micro-calorimetry+for+calorespirometric+analysis.">A combined application of tunable diode laser absorption spectroscopy and isothermal micro-calorimetry for calorespirometric analysis.</a> Journal of Microbiological Methods. 139, 210-214 (2017).</li><li>Hasan, S. M. K., Manzocco, L., Morozova, K., Nicoli, M. C., Scampicchio, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+ascorbic+acid+and+light+on+reactions+in+fresh-cut+apples+by+microcalorimetry.">Effects of ascorbic acid and light on reactions in fresh-cut apples by microcalorimetry.</a> Thermochimica Acta. 649, 63-68 (2017).</li><li>Criddle, R. S., Fontana, A. J., Rank, D. R., Paige, D., Hansen, L. D., Breidenbach, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+measurement+of+metabolic+heat+rate,+CO2+production,+and+O2+consumption+by+microcalorimetry.">Simultaneous measurement of metabolic heat rate, CO2 production, and O2 consumption by microcalorimetry.</a> Analytical Biochemistry. 194, 413-417 (1991).</li><li>Criddle, R. S., Breidenbach, R. W., Rank, D. R., Hopkin, M. S., Hansen, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+calorimetric+and+respirometric+measurements+on+plant-tissues.">Simultaneous calorimetric and respirometric measurements on plant-tissues.</a> Thermochimica Acta. 172, 213-221 (1990).</li><li>Pesta, D., Gnaiger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+respirometry:+OXPHOS+protocols+for+human+cells+and+permeabilized+fibers+from+small+biopsies+of+human+muscle.">High-resolution respirometry: OXPHOS protocols for human cells and permeabilized fibers from small biopsies of human muscle.</a> Methods in Molecular Biology. 810, 25-58 (2012).</li><li>Grimm, D., Altamirano, L., Paudel, S., Welker, L., Konkle, M. E., Chakraborty, N., Menze, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+cellular+energetics+by+galactose+and+pioglitazone.">Modulation of cellular energetics by galactose and pioglitazone.</a> Cell and Tissue Research. , (2017).</li><li>Hansen, L. D., Macfarlane, C., McKinnon, N., Smith, B. N., Criddle, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+calorespirometric+ratios,+heat+per+CO2+and+heat+per+O2,+to+quantify+metabolic+paths+and+energetics+of+growing+cells.">Use of calorespirometric ratios, heat per CO2 and heat per O2, to quantify metabolic paths and energetics of growing cells.</a> Thermochimica Acta. 422, 55-61 (2004).</li><li>Chinet, A., Clausen, T., Girardier, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcalorimetric+determination+of+energy+expenditure+due+to+active+sodium-potassium+transport+in+the+soleus+muscle+and+brown+adipose+tissue+of+the+rat.">Microcalorimetric determination of energy expenditure due to active sodium-potassium transport in the soleus muscle and brown adipose tissue of the rat.</a> The Journal of Physiology. 265, 43-61 (1977).</li><li>Paul, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+and+biochemical+energy+balance+during+an+isometric+tetanus+and+steady+state+recovery+in+frog+sartorius+at+0+degree+C.">Physical and biochemical energy balance during an isometric tetanus and steady state recovery in frog sartorius at 0 degree C.</a> Journal of General Physiology. 81, 337-354 (1983).</li><li>Warburg, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+origin+of+cancer+cells.">On the origin of cancer cells.</a> Science. 123, 309-314 (1956).</li><li>Kemp, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importance+of+the+calorimetric-respirometric+ratio+in+studying+intermediary+metabolism+of+cultured+mammalian+cells.">Importance of the calorimetric-respirometric ratio in studying intermediary metabolism of cultured mammalian cells.</a> Thermochimica Acta. 172, 61-73 (1990).</li><li>Kola, I., Landis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+the+pharmaceutical+industry+reduce+attrition+rates?.">Can the pharmaceutical industry reduce attrition rates?.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 3, 711-715 (2004).</li><li>Kamalian, L., Chadwick, A. E., Bayliss, M., French, N. S., Monshouwer, M., Snoeys, J., Park, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+utility+of+HepG2+cells+to+identify+direct+mitochondrial+dysfunction+in+the+absence+of+cell+death.">The utility of HepG2 cells to identify direct mitochondrial dysfunction in the absence of cell death.</a> Toxicology in Vitro. 29, 732-740 (2015).</li><li>Rossignol, R., Gilkerson, R., Aggeler, R., Yamagata, K., Remington, S. J., Capaldi, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Energy+substrate+modulates+mitochondrial+structure+and+oxidative+capacity+in+cancer+cells.">Energy substrate modulates mitochondrial structure and oxidative capacity in cancer cells.</a> Cancer Research. 64, 985-993 (2004).</li><li>Fontana, A. J., Hansen, L. D., Breidenbach, R. W., Criddle, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcalorimetric+measurement+of+aerobic+cell-metabolism+in+unstirred+cell-cultures.">Microcalorimetric measurement of aerobic cell-metabolism in unstirred cell-cultures.</a> Thermochimica Acta. 172, 105-113 (1990).</li></ol>

Calorespirometry의 목적은 양적 호 기성 및 혐 기성 경로 신진 대사 활동에의 기여를 평가 하 고 세포 에너지 플럭스의 복합 보기를 얻을 것입니다. 이것은 방열 및 산소 유량 상응 이론 oxycaloric와 계산 된 CR 비율의 비교에서 뒤의 동시 측정에 의해 수행 됩니다. 재현 가능 하 고 신뢰할 수 있는 데이터에 대 한 몇 가지 중요 한 단계를 고려해 야 합니다. 살 균, 건강 한 세포 배양의 정비는 중요 한 이다. ...

생물 학적 시스템, 물질 대사 도중 열 릴리스 또는 엔 탈피 변화는 일반적으로 중 하나를 직접 모니터링 (통해 직접 열 량) 또는 O2 소비 및 CO2 생산 (respirometry)를 통해 통해 간접적으로. 불행히도,이 기술은 격리에 사용 되는 경우 중요 한 정보 혐 기성 경로 세포질 물질 대사에의 기여 등 손실 됩니다. Calorespirometry 열 분산 및 호흡의 동시 측정에 의존 하는 강력한 기술입니다. 완전히 산소 포유류 세포에 있는 혐 기성 물질 대사를 조사 하 고 호 기성 및 혐 기성 경로 변형된 세포에도 불구 하 고 에너지 항상성의 동시 기여 시연 calorespirometric 작업을 개척 한 완전히 산소 환경1. Calorespirometry 이후 다양 한 생물학 질문에 적용 되었습니다. 몇 가지 예로 동물 너 지론 낮은 산소 수준에서의 연구, bivalves, 지구 생물의 물질 대사 그리고 유기 토양 문제2, 의 미생물 분해의 아가미에 제 초 제와 에스트로겐의 효과 3 , 4 , 5 , 6. 또한, calorespirometry는7세포 동결 전에 계시 어떻게 대사 늘어진 포유류의 cryopreservation 향상. 각 접근, 열 량 및 respirometry는 독립적으로 세포질 organismal 생체의 우리의 지식을 증가. 그러나, calorespirometry를 사용 하 여 응답 될 수 있다 기본적인 생물 학적 질문 상대적으로 미개척 남아 있습니다.
헤스의 법칙 반응의 총 엔 탈피 변화는 초기 및 최종 상태 사이의 통로의 독립을 주장 한다. 예를 들어, 생 화 확 적인 통로 총 엔 탈피 변화 통로 내의 모든 반응의 엔 탈피 변화의 합계입니다. 열 량 둘 다 호 기성 및 혐 기성 경로 감지 하는 무차별 세포 열 생산을 측정 하기 위한 실시간 방식을 제공 합니다. 이것은 에너지가 실험 용액8의 벽을 통해 서를 제외 하 고 시스템에서 교환 되는 재단을 기반으로 합니다. 방열에 변화는 변화는 용액에서 모든 대사 반응에서 발표 하는 엔 탈피와 동일. 따라서, 부정적인 엔 탈피는 시스템에서의 열 손실에 상관 한다. 지난 4 년간 철저 한 연구 놓을 anabolism의 열역학 풍경을 특징 있다. 이것은 꾸준한 상승 검색어 "생물학" 및 "열 량"으로 여는 미국 국립 도서관 의학 (NLM) 건강의 국가 학회 (PubMed)에서 색인 아래 연구 기사에 의해 표시 됩니다. 검색 계시는 1970 년 이전 총 27 간행물 참조 생물학적 주사; 한편, 2016 년 혼자, 546 간행물 기술을 활용.
열 메서드는 열 생산을 결정 하기 위해 설립. 그러나, 더 많은 유연성은 respirometric 값을 확인 하기 위해 부여 됩니다. Respirometric 측정 O2, CO2또는 O2 와 CO2모두 구성할 수 있습니다. 또한, O2 또는 CO2 의 측정 optrodes, 클라크-유형 전극, 가변 다이오드 레이저 흡수 분광학7,,910 등 다양 한 기법에 의해 달성 될 수 있다 11. CO2 생산은 많은 respirometric 연구에 귀중 한 통계, 경작된 한 세포에 대 한 중간 종종 pH 제어12,13bicarbonic 버퍼 시스템을 사용 합니다. 합병증을 피하기 위해 CO2 측정의 중 탄산염 시스템에서 문화에 있는 세포의 calorespirometry에 대 한 다음과 같은 프로토콜 respirometric 매개 변수는 단독으로 O2 를 사용 합니다.
산소 유량을 측정 하 여 동시, 특정 respirometers ( 재료의 표참조)는 미토 콘 드 리아 기능의 상세한 평가 대 한 설계 되었습니다. 기판-uncoupler-억제제-titrations (정장) 프로토콜 잘 설립 하 고 실험 막 잠재적인 또는 반응성 산소 종 (선생님) 형성14를 측정 하도록 설계 되어와 호환 됩니다. 그대로 셀의 calorespirometry에 대 한 제시 프로토콜 카보닐기 시안-p-trifluoromethoxyphenylhydrazone (FCCP) 등 F0F1-ATP synthase 억제제 oligomycin 화학 uncouplers의 소개와 호환 됩니다. FCCP의 추가 통해 산소 소비 미토 콘 드 리아 성능15에 잠재적인 치료의 영향을 평가 하기 위해 유용한 ATP 생산에서 결합 수 있습니다. 또한, oligomycin의 추가 누출 호흡의 정도 조명 했다. 따라서, calorespirometry 동안 수행 respirometric 측정 더 미토 콘 드리 아 생리학을 명료 하 게 하도록 설계 된 광범위 한 프로토콜와 호환 됩니다.
방열 및 산소 유량의 동시 측정 calorespirometric (CR) 비율의 계산에 대 한 수 있습니다. 이 비율은 손 튼의 상수 또는 이론적인 oxycaloric,-430-480 kJ mol-1 셀 선 또는 관심의 조직에 따라 하 고 보충된 탄소 기판1, 사이 범위에 비해 다음은 16. 따라서, 더 많은 부정적인 CR 비율 전반적인 신진 대사 활동을 증가 기여 혐 기성 경로에서 보여준다. 예를 들어 작업의 활성 성능 없이 일상적인 근육 조직 호흡에 대 한 CR 비율-468 kJ mol-1 범위 내에 이론적인 oxycaloric 동등한17,18의-448에서 배열 한다. 한편, 높은 포도 당에 있는 매체에서 경작 된 포유류 세포 분해를 수행 하는 향상 된 젖 산 발효를 표시 하 고 상대적으로 낮은 미토 콘 드 리아 참여19. -800 kJ mol-1, 더 많은 부정적인 CR 비율1,7에 의해 표시 된 세포질 물질 대사에 혐 기성 경로의 높게 한 참여를 보여주는에-490의 범위에서 CR 비율에서이 표현 형 결과 16,20.
상업 기도 하 고 비영리 세포 및 조직 유통 업체 현재 약 4000 셀 라인 150 종 이상 제공 셀 라인에서에서 파생 된 인간. 불멸 하 게 세포는 신속 하 게 많은 방해할 수 있습니다 직접 또는 간접적으로 미토 콘 드 리아 기능 잠재적인 치료제의 독성을 평가 하기 위한 편리한 도구입니다. 약물 검사 하는 동안 변환 된 셀을 사용 하 여 있을 수 있습니다 제한 된 예측 값의 부분에 바르 부르 크 효과, 많은 암의 특징 때문에. 종종, 암 기질 수준 인 산화에서 ATP를 생성 하 고 완벽 하 게 호 기성 조건19mitochondrion 종사 하지 않고 젖 산의 생산을 통해 산화 환 원 균형을 유지. 제약 개발 악명 비용이 많이 드는 이며 비효율적 시장 승인21달성에 실패 하는 인간 임상 시험에서 테스트 9 화합물에서 약 8. 잠재적인 치료제는 셀 라인에서 낮은 세포 독성으로 인해 초기 심사를 통과할 수 있습니다, 하는 동안 이러한 화합물 중 일부 mitotoxic는 가능 하다. 어떻게 이러한 독 소는 바르 부르 크 효과 표시 하지 않는 1 차 셀의 에너지 균형을 손상 할 수 있다을 감지 하는 적합 한 메서드, 없이 중요 한 정보는 종종 bottlenecking 초기 단계에 치료 개발-보였다.
Calorespirometry 생물 학적 샘플, 세포와 조직 등의 다양 한 신진 대사 활동을 분석 하는 실용적, 비 침 투 적인 접근 이다. 제시 프로토콜의 핵심 응용 프로그램의 범위와 호환 됩니다. 그러나 한 합병증,, 발견 되었습니다. 불멸 하 게 세포 보충 잠재적인 mitotoxins22, 세포를 민감하게 하기 위하여 에너지 생산을 위한 산화 인 산화 (OXPHOS)의 기여를 증가 시키는 갈 락 토스와 포도 당 자유로운 매체에 자주 교양 23. 이 대사 프로그래밍 샘플15열 량 계 사용 하는 스테인리스 ampules에 놓으면 분석을 보이지 않게 하기 위해 나타납니다. 세포 포도 당 매체에 경작 몇 시간 동안 높은 신진 대사 활동에 종사 계속 합니다. 한편, 갈 락 토스 매체에 경작 된 세포 용액, 초기 실험 시간 포인트를 제한 하는 측정에 그들의 배치의 30 분 이내 열 생산 감소. 이 문제는 불행 하 게도, 그들의 세포질 확산을 평가 하기 위해 기회를 방해. 이 특정 제한에도 불구 하 고 대부분 응용 프로그램은 호환 calorespirometric 분석 하 고이 접근을 통해 상세한 변화 정보를 얻을 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="627">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">HepG2 Cells</td>
			<td style="width:125px;">American Type Culture Collection</td>
			<td style="width:119px;">HB-8065</td>
			<td style="width:167px;">Cells used for calorespirometry</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">O2k-Respirometer</td>
			<td style="width:125px;">Oroboros Instruments</td>
			<td style="width:119px;">10022-02</td>
			<td>Respirometer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">LKB 2277 thermal activity monitor (TAM)</td>
			<td style="width:125px;">Thermometric AB</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Thermometric was purchased by TA Instruments</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td style="width:125px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">11360070</td>
			<td>100x solution added to DMEM medium</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Fetal Bovine Serum - Premiuim Select</td>
			<td style="width:125px;">Atlanta Biologicals</td>
			<td style="width:119px;">S11550</td>
			<td>Added to 10% in DMEM medium</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Trypsn-EDTA (0.25%)</td>
			<td style="width:125px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">25200072</td>
			<td>Cell dissociation reagent</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Oligomycin from Streptomyces diastatochromogenes</td>
			<td style="width:125px;">Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:119px;">O4876</td>
			<td>Mitochondrial Inhibitor</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone</td>
			<td style="width:125px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">C2920</td>
			<td>Mitochondrial Uncoupler</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Corning 100 mm TC-Treated Culture Dish</td>
			<td style="width:125px;">Corning Corporation</td>
			<td style="width:119px;">430167</td>
			<td>Tissue culture dish</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Glucose, powder</td>
			<td style="width:125px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15023021</td>
			<td>Glucose for DMEM medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Galactose, powder</td>
			<td style="width:125px;">Fischer Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP656500</td>
			<td>Galactose for DMEM medium</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">L-Glutamine (200 mM)</td>
			<td style="width:125px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">25030081</td>
			<td>Glutamine for DMEM medium</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">DMEM, no glucose</td>
			<td style="width:125px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">11966025</td>
			<td>Cell culture medium</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

calorespirometry: a powerful, noninvasive approach to investigate cellular energy metabolism

기본적인 생물 학적 및 생물 의학 연구에 사용 하는 많은 세포 선 둘 다 호 기성 및 혐 기성 호흡의 결합을 통해 에너지 항상성을 유지 합니다. 그러나,는 두 경로 세포 에너지 생산의 풍경에 기여 하는 정도 지속적으로 간과. 변형 된 세포 포도 당 레벨을 자주 포화에 교양 산화 인 산화 기질 수준 인 산화의 증가 의해 보상 된다 ATP 생산에 감소 종속성을 표시 합니다. 대사 균형에 있는이 교대는 미토 콘 드 리아 독 소의 존재에도 불구 하 고 증식 하는 세포 수 있습니다. 변환 된 셀의 변경 된 대사 균형, 무시에 제약 심사 결과 이후는 잘못 해석 될 수 있는 잠재적으로 mitotoxic 효과 수 있습니다 감지 되지 않을 높은 포도 당 존재 교양된 모델 셀 라인을 사용 하 여 농도입니다. 이 프로토콜은 두 개의 강력한 기술, respirometry 및 세포질 ATP 생산을 둘 다 호 기성 및 혐 기성 공헌의 양적 및 비 침 투 적인 평가 대 한 허용 하는 열 량의 페어링 설명 합니다. 호 기성 및 혐 기성 호흡 모니터링 을 통해 주사 될 수 있는 열을 생성 합니다. 한편, 산소 소비 속도 측정 하는 것은 호 기성 호흡의 정도 평가할 수 있습니다. 열 소비, 산소 소비와 동시에 측정은 때 calorespirometric 비율을 확인할 수 있습니다. 실험적으로 얻은 값 상응 이론 oxycaloric에 비해 다음 수 그리고 혐 기성 호흡의 정도 재판 될 수 있다. 따라서, calorespirometry 다양 한 약물 개발, 미생물 성장, 및 normoxic 및 hypoxic 조건 모두에서 기본적인 생체를 포함 하 여 생물학 질문을 분석 하는 독특한 방법을 제공 합니다.

Calorespirometric 측정의 재현성은 적절 하 고 일관 된 샘플 준비에 따라 달라 집니다. 샘플에서 세포 배양 준비 해야 사용할 수 없습니다 경우 접시는 자란 셀 카운트 응집으로 인해 정확 하지 않은 될 수 있습니다. 또한, 감소 된 열 흐름 이멀전의 셀에 제한 된 기판 확산으로 인해 발생할 수 있습니다. 따라서, 부착 셀을 사용 하 여, 60-80% 사이 confluency와 접시를 선택 하 고 매체 실험 전에 24 h 변경 긴?...

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Calorespirometry: A Powerful, Noninvasive Approach to Investigate Cellular Energy Metabolism

Calorespirometry:에 대 한 강력 하 고, 비 침 투 적인 접근 세포 에너지 대사를 조사

이 프로토콜 calorespirometry, 방열 및 에너지 대사를 평가 하는 비 침범 성 접근을 제공 하는 호흡의 직접 및 동시 측정에 설명 합니다. 이 기술은 총 세포 에너지 흐름을 모니터링 하 여 호 기성 및 혐 기성 경로 에너지 사용률에의 기여를 평가 하는 데 사용 됩니다.

Many cell lines used in basic biological and biomedical research maintain energy homeostasis through a combination of both aerobic and anaerobic ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

The Three-Dimensional Human Skin Reconstruct Model: a Tool to Study Normal  Skin and Melanoma Progression

3 차원의 인간 피부 모델을 재구성 : 도구는 일반 피부와 흑색증의 진행을 공부하기

Most in vitro studies in experimental skin biology have been done in 2-dimensional (2D) monocultures, while accumulating evidence suggests that cells ...

연구

생체공학

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

의 순환 압력 생물 반응기 설계 예 VIVO</em대동맥 심장 밸브> 학습

The aortic valve, located between the left ventricle and the aorta, allows for unidirectional blood flow, preventing backflow into the ventricle. Aortic ...

Directed Cellular Self-Assembly to Fabricate Cell-Derived Tissue Rings for Biomechanical Analysis and Tissue Engineering

자기 조립 셀룰러이 Biomechanical 분석 및 조직 공학을위한 셀 유래 조직 반지를 조작하는 감독

Each year, hundreds of thousands of patients undergo coronary artery bypass surgery in the United States.1 Approximately one third of these patients do ...

Cellular Lipid Extraction for Targeted Stable Isotope Dilution Liquid Chromatography-Mass Spectrometry Analysis

타겟 안정 동위 원소 희석 액체 크로마 토그래피 - 질량 분광법 분석을위한 세포 지질 추출

The metabolism of fatty acids, such as arachidonic acid (AA) and linoleic acid (LA), results in the formation of oxidized bioactive lipids, including ...

Establishment of a Surgically-induced Model in Mice to Investigate the Protective Role of Progranulin in Osteoarthritis

관절염에 Progranulin의 보호 역할을 조사하기 위해 마우스의 수술로 유발 된 모델 구축

Destabilization of medial meniscus (DMM) model is an important tool for studying the pathophysiological roles of numerous arthritis associated molecules ...

FIBS-enabled Noninvasive Metabolic Profiling

비 침습 대사 프로파일 링에게 FIBS 지원

In the era of computational biology, new high throughput experimental systems are necessary in order to populate and refine models so that they can be ...

From Voxels to Knowledge: A Practical Guide to the Segmentation of Complex Electron Microscopy 3D-Data

복셀에서 지식 : 복잡한 전자 현미경 3D-데이터의 분할에 대한 실용 가이드

Modern 3D electron microscopy approaches have recently allowed unprecedented insight into the 3D ultrastructural organization of cells and tissues, ...

Planar Gradient Diffusion System to Investigate Chemotaxis in a 3D Collagen Matrix

평면 그라데이션 확산 시스템은 3D 콜라겐 매트릭스에 화성을 조사하기 위해

The importance of cell migration can be seen through the development of human life. When cells migrate, they generate forces and transfer these forces to ...

An Experimental and Finite Element Protocol to Investigate the Transport of Neutral and Charged Solutes across Articular Cartilage

실험적 및 유한 요소 의정서는 관절 연골에서 중립 및 충전 용질의 운송을 조사하기 위해

Osteoarthritis (OA) is a debilitating disease that is associated with degeneration of articular cartilage and subchondral bone. Degeneration of articular ...

Workflow Based on the Combination of Isotopic Tracer Experiments to Investigate Microbial Metabolism of Multiple Nutrient Sources

여러 영양소 소스의 미생물 대사를 조사 하기 위해 동위 원소 추적 실험의 조합에 따라 워크플로

Studies in the field of microbiology rely on the implementation of a wide range of methodologies. In particular, the development of appropriate methods ...