Name: a neurosphere assay to evaluate endogenous neural stem cell activation in a mouse model of minimal spinal cord injury
Uploaded: 2018-09-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Neurosphere Assay to Evaluate Endogenous Neural Stem Cell Activation in a Mouse Model of Minimal Spinal Cord Injury at JoVE.com

이 작품은 Krembil 재단 (운영 보조금 CMM)에 의해 자금을. WX 칼튼 마가렛 스미스 학생 상 받는 했다. NL는 온타리오 대학원 장학금을 받았다.

이 프로토콜 토론토 대학에서 동물 관리 위원회에 의해 승인 되었다 하 고 "가이드에는 관리 및 사용의 실험 동물"은 (2차 버전, 동물 관리에 캐나다 위원회 2017).
1. 최소한의 척수 상해 수술
참고: 수술 전에 있는지 확인 하십시오 모든 수술 기구와 자료 (그림 1A)는 적절 한 방법으로 살 균 된다.
<ol><li>거 즈의 4-5 사각형을 고...

<ol>
	<li>Johansson, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+neural+stem+cell+in+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Identification of a neural stem cell in the adult mammalian central nervous system.</a> Cell. 96 (1), 25-34 (1999).</li><li>McKay, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+in+the+central+nervous+system.">Stem cells in the central nervous system.</a> Science. 276 (5309), 66-71 (1997).</li><li>Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+neural+stem+cells.">Mammalian neural stem cells.</a> Science. 287 (5457), 1433-1438 (2000).</li><li>Temple, S., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+in+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Stem cells in the adult mammalian central nervous system.</a> Current Opinion in Neurology. 9 (1), 135-141 (1999).</li><li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activated+neural+stem+cells+contribute+to+stroke-induced+neurogenesis+and+neuroblast+migration+toward+the+infarct+boundary+in+adult+rats.">Activated neural stem cells contribute to stroke-induced neurogenesis and neuroblast migration toward the infarct boundary in adult rats.</a> Journal Of Cerebral Blood Flow And Metabolism. 24 (4), 441-448 (2004).</li><li>Komitova, M., Mattsson, B., Johansson, B. B., Eriksson, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enriched+environment+increases+neural+stem/progenitor+cell+proliferation+and+neurogenesis+in+the+subventricular+zone+of+stroke-lesioned+adult+rats.">Enriched environment increases neural stem/progenitor cell proliferation and neurogenesis in the subventricular zone of stroke-lesioned adult rats.</a> Stroke. 36 (6), 1278-1282 (2005).</li><li>Faiz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+neural+stem+cells+from+the+subventricular+zone+give+rise+to+reactive+astrocytes+in+the+cortex+after+stroke.">Adult neural stem cells from the subventricular zone give rise to reactive astrocytes in the cortex after stroke.</a> Cell Stem Cell. 17 (5), 624-634 (2015).</li><li>Ren, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ependymal+cell+contribution+to+scar+formation+after+spinal+cord+injury+is+minimal,+local+and+dependent+on+direct+ependymal+injury.">Ependymal cell contribution to scar formation after spinal cord injury is minimal, local and dependent on direct ependymal injury.</a> Science Reports - UK. 7, (2017).</li><li>Mothe, A. J., Tator, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation,+migration,+and+differentiation+of+endogenous+ependymal+region+stem/progenitor+cells+following+minimal+spinal+cord+injury+in+the+adult+rat.">Proliferation, migration, and differentiation of endogenous ependymal region stem/progenitor cells following minimal spinal cord injury in the adult rat.</a> Neuroscience. 131 (1), 177-187 (2005).</li><li>Thuret, S., Moon, L. D., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+interventions+after+spinal+cord+injury.">Therapeutic interventions after spinal cord injury.</a> Nature Reviews Neuroscience. 7 (8), 628-643 (2006).</li><li>Bethea, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemically+administered+interleukin-10+reduces+tumor+necrosis+factor-alpha+production+and+significantly+improves+functional+recovery+following+traumatic+spinal+cord+injury+in+rats.">Systemically administered interleukin-10 reduces tumor necrosis factor-alpha production and significantly improves functional recovery following traumatic spinal cord injury in rats.</a> Journal of Neurotrauma. 16 (10), 851-863 (1999).</li><li>Donnelly, D. J., Popovich, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+its+role+in+neuroprotection,+axonal+regeneration+and+functional+recovery+after+spinal+cord+injury.">Inflammation and its role in neuroprotection, axonal regeneration and functional recovery after spinal cord injury.</a> Experimental Neurology. 209 (2), 378-388 (2008).</li><li>Cummings, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+neural+stem+cells+differentiate+and+promote+locomotor+recovery+in+spinal+cord-injured+mice.">Human neural stem cells differentiate and promote locomotor recovery in spinal cord-injured mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 102 (39), 14069-14074 (2005).</li><li>Beattie, M. S., Hermann, G. E., Rogers, R. C., Bresnahan, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+death+in+models+of+spinal+cord+injury.">Cell death in models of spinal cord injury.</a> Progress in Brain Research. 137, 37-47 (2002).</li><li>Metz, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+the+weight-drop+contusion+model+in+rats:+a+comparative+study+of+human+spinal+cord+injury.">Validation of the weight-drop contusion model in rats: a comparative study of human spinal cord injury.</a> Journal of Neurotrauma. 17 (1), 1-17 (2000).</li><li>Faulkner, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+astrocytes+protect+tissue+and+preserve+function+after+spinal+cord+injury.">Reactive astrocytes protect tissue and preserve function after spinal cord injury.</a> Journal of Neuroscience. 24 (9), 2143-2155 (2004).</li><li>Cheriyan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+cord+injury+models:+a+review.">Spinal cord injury models: a review.</a> Spinal Cord. 52 (8), 588-595 (2014).</li><li>Deleyrolle, L. P., Reynolds, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+expansion,+and+differentiation+of+adult+Mammalian+neural+stem+and+progenitor+cells+using+the+neurosphere+assay.">Isolation, expansion, and differentiation of adult Mammalian neural stem and progenitor cells using the neurosphere assay.</a> Neural Cell Transplantation: Methods and Protocols. , 91-101 (2009).</li><li>Singec, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+actual+sensitivity+and+specificity+of+the+neurosphere+assay+in+stem+cell+biology.">Defining the actual sensitivity and specificity of the neurosphere assay in stem cell biology.</a> Nature Methods. 3 (10), (2006).</li><li>Mignone, J. L., Kukekov, V., Chiang, A. S., Steindler, D., Enikolopov, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+and+progenitor+cells+in+nestin-GFP+transgenic+mice.">Neural stem and progenitor cells in nestin-GFP transgenic mice.</a> The Journal of Comparative Neurology. 469 (3), 311-324 (2004).</li><li>Xu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelin+basic+protein+regulates+primitive+and+definitive+neural+stem+cell+proliferation+from+the+adult+spinal+cord.">Myelin basic protein regulates primitive and definitive neural stem cell proliferation from the adult spinal cord.</a> Stem Cells. 35 (2), 485-496 (2017).</li><li>Sachewsky, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primitive+neural+stem+cells+in+the+adult+mammalian+brain+give+rise+to+GFAP-expressing+neural+stem+cells.">Primitive neural stem cells in the adult mammalian brain give rise to GFAP-expressing neural stem cells.</a> Stem Cell Reports. 2 (6), 810-824 (2014).</li><li>Mothe, A., Tator, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+neural+stem/progenitor+cells+from+the+periventricular+region+of+the+adult+rat+and+human+spinal+cord.">Isolation of neural stem/progenitor cells from the periventricular region of the adult rat and human spinal cord.</a> Journal of Visualized Experiments. (99), (2015).</li><li>Absher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemocytometer+counting.">Hemocytometer counting.</a> Tissue Culture. , 395-397 (1973).</li><li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., Reynolds, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+expansion+of+the+adult+mouse+neural+stem+cells+using+the+neurosphere+assay.">Isolation and expansion of the adult mouse neural stem cells using the neurosphere assay.</a> Journal of Visualized Experiments. (45), (2010).</li><li>Xiong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preconditioning+with+isoflurane+produces+dose-dependent+neuroprotection+via+activation+of+adenosine+triphosphate-regulated+potassium+channels+after+focal+cerebral+ischemia+in+rats.">Preconditioning with isoflurane produces dose-dependent neuroprotection via activation of adenosine triphosphate-regulated potassium channels after focal cerebral ischemia in rats.</a> Anesthesia and Analgesia. 96 (1), 233-237 (2003).</li><li>Metz, G. A., Merkler, D., Dietz, V., Schwab, M. E., Fouad, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+testing+of+motor+function+in+spinal+cord+injured+rats.">Efficient testing of motor function in spinal cord injured rats.</a> Brain Research. 883 (2), 165-177 (2000).</li><li>Hamers, F. P., Koopmans, G. C., Joosten, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CatWalk-assisted+gait+analysis+in+the+assessment+of+spinal+cord+injury.">CatWalk-assisted gait analysis in the assessment of spinal cord injury.</a> Journal of Neurotrauma. 23 (3-4), 537-548 (2006).</li></ol>

외과 절차 동안 어디 연구원 동물 사이 가변성을 최소화 하 고 최적의 결과 얻기에 특히 주의 기울여야 한다 몇 가지 중요 한 단계가 있다. 해야 합니다 주의 (isoflurane) 흡입된 마 취와 수술 중 마 취 장기간된 노출27와 신경 보호 효과를 표시 되었습니다로. 따라서, 부상에 따라 척수의 재생 능력, 공부를 할 때 신속 하 고 혼란 변수를 방지 하기 위해 가능한 한 효율적으로 수술을 ?...

중앙 신 경계 모든 다른 성숙한 신경 세포 유형1,2,,34를 수 있는 자체 갱신, multipotent 줄기 세포의 부분 모집단을 포함 되어 있습니다. 이러한 신경 줄기 세포 (NSCs) 뇌와 척수에서 전문된 틈새에 있으며 증식, 마이그레이션, 성숙한 신경 세포로 분화 하는 부상에 따라 활성화 될 수 있다. NSCs 및 그들의 자손 대뇌 피 질의 부상 모델5,6부상 사이트로 마이그레이션할 표시 되었습니다. 두뇌에 있는 NSCs 측면 심에서 그들은 이다 glial 흉터 대형7을에 분화 상해의 사이트에 마이그레이션할 표시 되었습니다. 그러나 척수,, 몇 가지 연구 수행 되었습니다 다음 척수 상해 회복을 촉진 하이 같은 생 NSCs를 다룰 수 있습니다 경우에 게. 실제로, 현재 논쟁이 있다 활성화는 척수에 줄기 세포 수영장의 중앙 운하8 안 감 뇌 틈새의 직접적인 물리적 손상에 필요한 지 여부 또는 경우는 척추에 손상을 코드 실질 (줄기를 떠나 그대로 셀 틈새)은 생 NSCs9활성화 충분 합니다.
척수 상해 (SCI) 모델의 수는 급성과 만성 부상의 병 태 생리학을 공부 하 이용 되었다. 이 모델 또한 neuroprotection, immunomodulation, 개발 세포 이식/대체 전략10,,1113를 통해 SCI를 치료에 잠재적인 치료를 테스트에 사용 되었습니다. 현재 모델에는 코드14,15에서 대규모 기능적인 적자 뿐 아니라 광범위 한 병 변 및 현상을 일으킬 압축 및 타 박상 부상 포함 됩니다. 결과 glial 흉터는 대부분 척수16의 너비/둘레의 함께 여러 척추 세그먼트를 확장할 수 있습니다. 따라서, 이러한 모델은 임상 관련, 그들은 줄 부상 다음 생 NSCs의 응답을 공부 하 고 중요 한 과제. 중앙 채널17을 마련할 수 있는 상해의 온화한 형태를 적용할 수 있습니다 부상의 화학 모델을 확인 하 고 있습니다. 그러나, 이러한 유형의 부상 demyelination SCI와 관련 된에 초점을 하 고 하지 임상 관련 모델 외상 문화와 관련 된 물리적 또는 기계적 손상에 대 한
현재 부상 모델의 한계를 해결 하기 위해 우리는 바늘 트랙 최소한의 과학 모델, 원래는 쥐9, 성인 마우스 모델에서 응용 프로그램에 대 한 개발을 적응 시켰다. 우리의 적응된 부상 모델 마우스 척수의 dorsolateral 지역의 일관 된 병 변을 만들 수 있으며 상해의 수준에 중앙 운하 예비. 이 모델의 장점은 NSC 속도 론 연구 허가 상해 및 그들의 잠재적인 방사형 마이그레이션 상해의 사이트에 다음. 마우스 모델의 사용 또한 생 NSCs와 부상에 따라 그들의 자손의 혈통 추적을 허용 하는 유전자 변형 마우스의 사용을 허용 합니다. 생체 외에서 neurosphere 분석 결과이 프로토콜에 도입의 수정 된 양식을 사용 하 여 NSCs의 속성 평가 추가 수 있습니다.
Neurosphere 분석 결과 생체 외에서 식민지 형성 분석 결과 mitogens 존재 NSCs의 격리를 허용 하는. 클론 도금 밀도에서 개별 NSCs NSCs의 작은 부분 모집단 및 창시자18,19의 대부분의 구성 하는 셀의 부동성 구형 식민지를 확산. 우리의 프로토콜에서 척수의 뇌 영역에서 두 개의 별개, 직계 관련 NSCs의 설명-초기 조건 하에서 그리고 우리의 최소한의 과학 모델에 따라. 확실 한 신경 줄기 세포 (dNSCs) 익스프레스 nestin 및 폐해 fibrillary 산 성 단백질 (GFAP)와 표 피 성장 인자 (EGF), 섬유 아 세포 성장 인자 (FGF) 및 헤 파 린 (함께 불리 EFH)20의 성장 된다. 이러한 dNSCs 거의 neurospheres에 시험관에게 상승을 주는 순진한 척수에 드물다. 그러나, 우리는 dNSCs 다음 최소한의 과학, 뇌 지역21에서 분리 된 neurospheres의 숫자를 확대 활성화 됩니다 보여줍니다. 기본 신경 줄기 세포 (pNSCs)은 신경 줄기 세포 계보에서 dNSCs의 업스트림. pNSCs의 pluripotency 마커 Oct4, 상당히 드문, 익스프레스 저급 고 백혈병 금지 요인 (LiF) 응답22. pNSCs neurospheres 주 문화;에 있는 myelin 기본적인 단백질 (MBP)의 존재로 인해 성인 마우스 척수에서 격리 때 형성 하지 않는다 그러나, pNSC neurospheres MBP 결핍 생쥐에서 격리 될 수 있습니다 및 그들의 숫자는 확장된 다음 부상-dNSCs21비슷합니다. 마지막으로, 우리 보여 dNSC에서 파생 된 neurospheres 일찍 최소한의 영향은 다음 번에 상해에의 사이트에서 고립 될 수 있다 이러한 결과 우리의 부상 모델 및 분석 실험 그들의 능력을 확산 하 고 부상에 대 한 응답에서 마이그레이션할 같은 뇌 NSCs의 활성화 특성을 평가할 수 있습니다 보여 줍니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="815">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">Agricola Retractor</td>
			<td style="width:201px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:197px;">17005-04</td>
			<td style="width:215px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:203px;">Moria Vannas-Wolff Spring Scissors (Curved)</td>
			<td style="width:201px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:197px;">15370-50</td>
			<td style="width:215px;">Customize when ordering to get blunted tips</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:203px;">Graefe Forceps (Straight, 1x2 Teeth)</td>
			<td style="width:201px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:197px;">11053-10</td>
			<td style="width:215px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:203px;">Extra Fine Graefe Forceps (Curved, Serrated)</td>
			<td style="width:201px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:197px;">11152-10</td>
			<td style="width:215px;">Or any other forceps for suturing</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:203px;">Hartman Hemostats (Straight)</td>
			<td style="width:201px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:197px;">13002-10</td>
			<td style="width:215px;">Or any other appropriate for suturing</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">Scalpel Handle #3</td>
			<td style="width:201px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:197px;">10003-12</td>
			<td style="width:215px;">Or any other appropriate</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:203px;">Hair clippers</td>
			<td style="width:201px;">amazon.ca</td>
			<td style="width:197px;">https://www.amazon.ca/Wahl-Professional-8685-Classic-Clipper/dp/B00011K2BA</td>
			<td style="width:215px;">or any other appropriate</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">Stereotaxic instrument</td>
			<td style="width:201px;">Stoeling</td>
			<td align="right">51500</td>
			<td style="width:215px;">or any other appropriate</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">Buprenorphine</td>
			<td style="width:201px;"></td>
			<td style="width:197px;"></td>
			<td>or any appropirate sanctioned my animal care facility</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:203px;">Meloxicam</td>
			<td style="width:201px;"></td>
			<td style="width:197px;"></td>
			<td style="width:215px;">or any appropriate sanctioned by animal care facility</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:203px;">Tears Naturale P.M.</td>
			<td style="width:201px;">Alcon</td>
			<td style="width:197px;">https://www.amazon.ca/Alcon-Tear-Gel-Liquid-Eye-Gel/dp/B00HHXGUXE</td>
			<td style="width:215px;">or any other appropriate</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:203px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:201px;">Baxter International Inc</td>
			<td style="width:197px;">DIN 02225875</td>
			<td style="width:215px;">or any other appropriate for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="168">
			<td height="168" style="height:168px;width:203px;">Q-tips Cottom Swabs</td>
			<td style="width:201px;">amazon.ca</td>
			<td style="width:197px;">https://www.amazon.ca/Q-Tips-Cotton-Swabs-500-Count/dp/B003M5UO6U/ref=pd_lpo_vtph_194_bs_tr_img_1/140-7113119-8364127?_encoding=UTF8&#38;psc=1&#38;refRID=JC16N542KVRF2N62N3DS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">Cotton Gauze</td>
			<td style="width:201px;">Fisher Scientific</td>
			<td>13-761-52</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">30G Needles</td>
			<td style="width:201px;">Becton Dickinson</td>
			<td align="right" style="width:197px;">305106</td>
			<td>For Injury</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">25G Needles</td>
			<td style="width:201px;">Becton Dickinson</td>
			<td align="right" style="width:197px;">305122</td>
			<td>For Drug injections</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">1mL Syringes</td>
			<td style="width:201px;">Becton Dickinson</td>
			<td align="right" style="width:197px;">3090659</td>
			<td>for drug injections</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">3mL Syringes</td>
			<td style="width:201px;">Becton Dickinson</td>
			<td align="right" style="width:197px;">309657</td>
			<td>for fluid injections</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:203px;">4-0 Suture</td>
			<td style="width:201px;">uoftmedstore.com</td>
			<td>2297-VS881</td>
			<td>for skin suturing</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:203px;">6-0 Suture</td>
			<td style="width:201px;">uoftmedstore.com</td>
			<td>VS889</td>
			<td>for muscle suturing</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">Polysporin ointment</td>
			<td style="width:201px;">amazon.ca</td>
			<td align="right">102051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">Isoflurane Vaporizer</td>
			<td style="width:201px;">VetEquip</td>
			<td align="right" style="width:197px;">901806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">15mL conical tubes</td>
			<td style="width:201px;">ThermoFisher</td>
			<td></td>
			<td>Any appropriate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">Petri Dishes</td>
			<td style="width:201px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:197px;"></td>
			<td>any appropriate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">Trypan Blue</td>
			<td style="width:201px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:197px;"></td>
			<td>Any</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">Hemocytometer</td>
			<td style="width:201px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:197px;"></td>
			<td>Any appropriate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:201px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:197px;"></td>
			<td>Any appropriate</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">Standard Dissection Tools</td>
			<td style="width:201px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:197px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">Dissection Microscope</td>
			<td style="width:201px;">Zeiss</td>
			<td style="width:197px;">Stemi 2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">Counting Microscope</td>
			<td style="width:201px;">Olympus</td>
			<td style="width:197px;">CKX41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">Neural Basal-A Medium</td>
			<td style="width:201px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:197px;">10888-022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">B27</td>
			<td style="width:201px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:197px;">17404-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">Penicillin- Streptomycin</td>
			<td style="width:201px;">Gibco</td>
			<td align="right" style="width:197px;">15070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">L- Glutamine</td>
			<td style="width:201px;">Gibco</td>
			<td align="right" style="width:197px;">25030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">DMEM</td>
			<td style="width:201px;">Invitrogen</td>
			<td align="right" style="width:197px;">12100046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">F12</td>
			<td style="width:201px;">Invitrogen</td>
			<td align="right" style="width:197px;">12700075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">30% Glucose</td>
			<td style="width:201px;">Sigma</td>
			<td style="width:197px;">G6152</td>
			<td>1M- 9.01g in 100mL dH2O</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">1M Glucose</td>
			<td style="width:201px;"></td>
			<td style="width:197px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">7.5% NaHCO3</td>
			<td style="width:201px;">Sigma</td>
			<td style="width:197px;">S5761</td>
			<td>155mM- 1.30g in 100mL dH2O</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">155mM NaHCO3</td>
			<td style="width:201px;"></td>
			<td style="width:197px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:203px;">1M HEPES</td>
			<td style="width:201px;">Sigma</td>
			<td style="width:197px;">H3375</td>
			<td>23.83 g in 100mL dH2O</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">Apo-Transferrin</td>
			<td style="width:201px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:197px;">3188-AT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">Putrescine&#160;</td>
			<td style="width:201px;">Sigma</td>
			<td style="width:197px;">P7505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">Insulin</td>
			<td style="width:201px;">Sigma</td>
			<td style="width:197px;">I5500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">Selenium</td>
			<td style="width:201px;">Sigma</td>
			<td style="width:197px;">S9133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">Progesterone</td>
			<td style="width:201px;">Sigma</td>
			<td style="width:197px;">P6149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:203px;">Papain Dissociation System&#160;</td>
			<td style="width:201px;">Worthington Biochemical Corporation</td>
			<td style="width:197px;">PDS</td>
			<td>1 vial of papain can be used for 2 samples</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">Epidermal Growth Factor</td>
			<td style="width:201px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:197px;">PMG8041</td>
			<td>Powder reconstituted with 1mL Hormone Mix and aliquoted into 20uL vials to be stored in freezer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">Fibroblast Growth Factor</td>
			<td style="width:201px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:197px;">PHG0226</td>
			<td>Powder reconstituted with 0.5mL Hormone Mix and aliquoted into 20uL vials to be stored in freezer</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">Heparin</td>
			<td style="width:201px;">Sigma</td>
			<td style="width:197px;">H3149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">Leukemia Inhibitory Factor</td>
			<td style="width:201px;">In House</td>
			<td style="width:197px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">Trypan Blue</td>
			<td style="width:201px;"></td>
			<td style="width:197px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">Hemocytometer</td>
			<td style="width:201px;"></td>
			<td style="width:197px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">24 well Plates</td>
			<td style="width:201px;">NUNC</td>
			<td style="width:197px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">2M NaCl</td>
			<td style="width:201px;">Sigma</td>
			<td style="width:197px;">S5886</td>
			<td>11.69g in 100mL dH2O</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">1M KCL</td>
			<td style="width:201px;">Sigma</td>
			<td style="width:197px;">P5405</td>
			<td>7.46g in 100mL dH2O</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">1M MgCl2</td>
			<td style="width:201px;">Sigma</td>
			<td style="width:197px;">M2393</td>
			<td>20.33g in 100mL dH2O</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">108mM CaCl2</td>
			<td style="width:201px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:197px;">C7902</td>
			<td>1.59g in 100mL dH2O</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a neurosphere assay to evaluate endogenous neural stem cell activation in a mouse model of minimal spinal cord injury

성인 포유류 척수에서 신경 줄기 세포 (NSCs)는 공부 생체 외에서 neurosphere 분석 결과 사용 하 여 될 수 있는 뇌 세포의 상대적으로 mitotically 무부하 인구. 이 식민지 형성 분석 결과 접시;에 외 인 요인 NSCs의 반응을 하는 강력한 도구 그러나,이 또한 힘의 적당 한 이해 및 분석 결과의 한계 vivo에서 조작의 효과 연구를 사용할 수 있습니다. 임상 관심의 한 조작 생 NSC 활성화에 상해의 영향 이다. 척수 상해의 현재 모델 제공이 줄기 세포가 있는 상해의 사이트에 NSC 틈새의 파괴를 일으킬 하는 일반적인 타 박상, 압축, 및 transection 모델의 심각도 공부에 대 한 도전. 여기, 우리는 성인 마우스 척수의 낮은 흉부 수준 (t 7/8)의 표면 dorsolateral 표면에 지역화 된 손상을 초래 하는 최소한의 부상 모델을 설명 합니다. 이 부상 모델 상해의 수준에서 중앙 운하를 예비 하 고 부상에 따라 다양 한 시간 지점에서 병 변의 수준에 있는 NSCs의 분석 합니다. 여기, 우리가 어떻게 neurosphere 분석 결과 척수 뇌 영역-기본 및 최종 NSCs에 있는 NSCs의 두 개의 별개, 직계-관련, 인구의 활성화 연구에 이용 될 수 있다 표시 (pNSCs와 dNSCs, 각각). 상해 및 백색 질 부상 사이트의 수준에서 뇌 영역에서 이러한 NSCs 문화를 격리 하는 방법을 보여 줍니다. 수술 후 척수 해 우리의 pNSC 및 부상된 코드 컨트롤, 상해를 통해 그들의 활성화를 말하기에 비해 뇌 영역에서 dNSC에서 파생 된 neurospheres의 증가 수 보여줍니다. 또한, 부상, 다음 dNSC에서 파생 된 neurospheres 격리 될 수 있습니다 부상 사이트에서-상해의 사이트에 그들의 뇌 틈새에서 마이그레이션할 NSCs의 능력을 보여주는.

수술, 다음 쥐 꼬리와 최대 24 h에 대 한 가능한 뒷 다리 사지 paresis 포함할 수 있는 최소 모터 적자를 경험 한다. 이 시간 후 쥐 뒷 다리 사지 마비 또는 paresis 없고 걸음 걸이에서 최소한의 변화를 경험 한다.
그림 3 에서 5 일 최소한의 척수 상해 neurosphere 분석 결과에서 대표적인 결과 보여줍니다. DNSC에서 ?...

Watch this Scientific Journal Video about A Neurosphere Assay to Evaluate Endogenous Neural Stem Cell Activation in a Mouse Model of Minimal Spinal Cord Injury at JoVE.com

A Neurosphere Assay to Evaluate Endogenous Neural Stem Cell Activation in a Mouse Model of Minimal Spinal Cord Injury

최소한의 척수 상해의 마우스 모델에서 내 인 성 신경 줄기 세포 활성화 평가 Neurosphere 분석 결과

여기, 예비 중앙 운하 틈새 주택 내 인 성 신경 줄기 세포 (NSCs) 성인 마우스에서 최소한의 척수 상해 모델의 성능을 보여 줍니다. 우리는 활성화 및 마이그레이션 고 원시적인 NSCs 부상 다음의 척도를 neurosphere 분석 실험을 사용 하는 방법을 보여줍니다.

Neural stem cells (NSCs) in the adult mammalian spinal cord are a relatively mitotically quiescent population of periventricular cells that can be studied ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

배아 척수에서 뉴런의 Commissural 해부와 문화

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

연구

신경과학

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

절연 및 Neurosphere 어세를 사용하여 성인 마우스 신경 줄기 세포의 확장

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Neurosphere 분석을 사용하여 마우스 배아 신경 줄기 세포 문화 구축

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

세포 어세를 형성 신경 콜로니 : 신경 전구 세포로부터 타고난 신경 줄기 세포를 차별 어세이

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Lateral Fluid Percussion: Model of Traumatic Brain Injury in Mice

측면 유체 타악기 : 마우스의 외상성 뇌 손상 모델

Traumatic brain injury (TBI) research has attained renewed momentum due to the increasing awareness of head injuries, which result in morbidity and ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

배아 Murine 신경 튜브에서 신경 크레스트 세포의 분리 및 문화

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 레이저에 의한 척수 손상 모델은 실시간으로 축삭 변성의 메커니즘을 평가하기 위해

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

Thy1를 사용 하 여 기본 Somatosensory 피 질에서 신경 활동을 이미징-GCaMP6s 유전자 변형 쥐

The mammalian brain exhibits marked symmetry across the sagittal plane. However, detailed description of neural dynamics in symmetric brain regions in ...

Laminectomy and Spinal Cord Window Implantation in the Mouse

마우스에 있는 Laminectomy 및 척수 창 이식

This protocol describes a method for spinal cord laminectomy and glass window implantation for in vivo imaging of the mouse spinal cord. An integrated ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

쥐와 마우스 두뇌에 신경 줄기 세포의 동맥 내 납품: 대뇌 허혈에 응용 프로그램

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...